Bu protokol mantar entomopatojenin tanıtmak için iki aşılama yöntemleri gösterilmektedir<em> Beauveria bassiana'nın</em> Ortak fasulye bir endophyte olarak (<em> Phaseolus vulgaris</em>), Endofitik biyolojik kontrol daha sonraki değerlendirmeler için hazırlık.
Beauveria bassiana'nın endophytically bitkileri kolonize etme yeteneğine sahip bir mantar entomopatojenin olduğunu. Bir endophyte, B. gibi bassiana herbivory ve hastalıktan bitkilerin korunmasında rol oynayabilir. Bu protokol B. kurmak için iki aşılama yöntemleri gösterilmektedir endofitik biyolojik kontrol daha sonraki değerlendirmeler için hazırlık sık fasulye (Phaseolus vulgaris), içinde endophytically bassiana. Bitkiler bir B. almadan önce iki hafta boyunca yüzeye sterilize tohumlardan yetiştirilen 10 8 Konidyumların / ml (veya su) bassiana tedavisi bir yapraktan sprey veya toprak ıslatma olarak da uygulanır. İki hafta sonra, bitkiler hasat edilir ve onların yaprakları, sapları ve kökleri endofitik fungal kolonizasyon değerlendirmek için numune alınır. Bunun için, numuneler ayrı ayrı birçok parçaya kesilir, sterilize yüzey ve 20 gün boyunca patates dekstroz agar ortamında bekletilen. Medya olarak mantar üremesi gözlemlemek 2-3 günde denetlenirbitki bölümleri ile sociated ve B. oluşumu kaydetmek bassiana onun endofitik kolonizasyon ölçüde tahmin etmek. Aşılama başarı analizleri B. oluşumu karşılaştırmak tedaviler ve kontroller arasında belirli bir bitki parçası içinde bassiana (yani yaprakları, sapları veya kökleri). Aşılama yöntem ek olarak, deney Belirli bir sonucu hedef mahsul türleri ya da farklı bağlı olabilir, mantar entomopatojenin tür zorlanma veya kullanılan ayırma ve bitki yetiştirme koşulları.
Mantar Entomopatojenlerin mycopesticides 1 olarak önemli bir potansiyele sahip böcek populasyonları önemli düzenleyiciler vardır. Ancak son zamanlarda, ancak, mantar Entomopatojenlerin endophytes, hem de doğal ve çeşitli aşılama yöntemleri 2 yanıt olarak meydana gösterilmiştir. Endofitik mantar Entomopatojenlerin ve ekolojik işlevleri büyük ölçüde bilinmemektedir, ancak bazı çalışmalar bitki büyüme 3,4, otobur direnci 5-8 ve hastalık direnci 9,10 bunları koymaktadır. Burada sunulan yöntemlerin genel amacı endofitik biyolojik kontrolü müteakip değerlendirmeler için hazırlık, bir endophyte olarak bir mantar entomopatojenin tanıtmaktır.
Beauveria bassiana'nın (Balsamo) Vullemin (Ascomycota: Hypocreales) iyi okudu endofitik mantar entomopatojenin 5-9,11-19 olduğunu ve ticari mycopesticide olarak kullanılabilir. Aşılama yöntemleri kurmak için test <em> B. Bir endophyte olarak bassiana toprak drenches 14,17, tohum kaplama 18 ve immersiyonlar 14, radikula sosları 13,15, kök ve köksap immersiyonlar 11,16,18, kök enjeksiyonlar 17, yaprak spreyleri 14,17,20 ve çiçek spreyler 19 içerir. Bu yöntemleri kullanarak, araştırmacılar B. girmiştik bassiana muz 11, fasulye 7, kakao 13, kahve 17, mısır 7, pamuk 7, hurma 12, jüt 21, afyon 20, kabak 7 radiata çam 18, sorgum 14, domates 7 ve buğday 7 içine. Son kanıtlar, endofitik B. göstermektedir bassiana sadece eklembacaklı zararlıları 5-7,22-27 bitkileri korumak için bir potansiyele sahip, ama aynı zamanda bazı bitki patojenleri 9.
Ortak fasulye (Phaseolus vulgaris) zararlılara karşı en hassas bitkiler arasında yer alıyorve hastalıklar. Bu kimin krizi bölgelerde 28 genelinde en sınırlayıcı fasulye üretim faktörü olduğu düşünülmektedir 400'den fazla zararlıları ve 200 patojenler, etkilenebilir. Buna göre, ortak fasulye B. tarafından endofitik biyolojik kontrolün tam spektrum incelemek için mükemmel bir model kırpma olabilir bassiana. Bu yönde ilk adım olarak, bu makalede ortak fasulye bir endophyte olarak B.bassiana tanıtmak için aşılama yöntemleri gibi yapraktan sprey ve toprak drenches açıklar.
Birçok faktör bir endophyte olarak bir mantar entomopatojenin kurmak için bir denemenin belirli sonucunu etkileyemez. Sonuçlarımız, aşılama yöntemi bunlardan biri olduğunu göstermektedir. Deneme Biyolojik faktörler bitki tür ve çeşidi seçilir ve mantar entomopatojenin türler gerilmesi içeren veya kullanılan izole. Manipülasyonu dikkate alınması gereken diğer faktörler inokulum konsantrasyon, aşılar için tesis yaşı ve bitki yetiştirme koşulları içerir.
Bir mantar entomopatojenin 14,17,18,21 tarafından sistemik bitki kolonizasyon neden bir aşılama yöntemi için ideal olacaktır. Bunun yerine, aşılama yöntemleri, yerel kolonizasyonu belirli bir desen tercih eğilimi belirir. Toprak drenches kökte kolonileşme 17, tercih ise kahve, örneğin, yaprak spreyi yaprak kolonizasyonu lehine. Biz ortak fasulye aynı desen bulundu. Sonuçta, inokülasyon yöntemi tercih edilmelidirmuhtemelen hedef otobur ya da bitki patojen niş eşleşen bir tesis içerisindeki endophyte amaçlanan yere göre yönlendirilmelidir.
Medya kültürünün esas almasına rağmen yaygın olarak kullanılan, endophyte tespiti ve ölçümü, pahalı zor ve hata eğilimli olabilir. Örneğin, 10.800 bitki bölümleri (1.800 Petri kapları üzerine ekildi) toplam B. optimize etmek için bir deney değerlendirildi muz 16 bassiana aşılar. Bunların dışında, 4.496 bölümleri varsayılan bir B. tarafından kolonize edildi bassiana'nın gibi başlıca koloni morfolojisi ile tanımlanır. Açıktır ki, her koloni için türlerinin mikroskobik doğrulama bir arzu ama kalkılamayacağını adım olurdu. Diğer taraftan, 1.176 bölümleri başka mantarlar tarafından kolonize edildi ve atılır ve veriler 16 eksik olarak tedavi edildi. Olasılığı o B. Bununla birlikte, mevcut bassiana fakir bir rakip ya da büyümek için daha yavaş oldu ve sonunda bu bölümleri ortaya olabilirdi eğerllowed yeterli zamanı. Bu nedenle, medya kültürünün esas endophyte algılama yöntemleri yanlış pozitif ve yanlış negatif tabidir. Buna göre, örneğin daha güvenilir bir şekilde tespiti ve ölçümü yöntemleri, gelişme polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) analizlerinin 20,21,24 dayalı olanlar da daha doğrulamıştır.
Inokülasyon deneyler için nihai hedef herbivory ve / veya hastalığa karşı dayanıklı sistemik direnç sağlar etkili bir tedavi geliştirmek olmalıdır. İnandırıcı bir, ama henüz denenmemiş, hipotez endofitik kolonizasyon ölçüde endophyte aracılı direnç derecesi ile pozitif korele gerektiğidir. Aşılama yöntemleri rafine sonra doğal bir sonraki adım, bu nedenle, bu korelasyon incelemek olabilir. Çeşitli Video protokolleri araştırmacılar bir hedef haşere ya da patojen 29-31 için uygun bir direnç testi tasarlamanıza yardımcı olabilir. Sonuçta, bu inokulum başarısını belirleyecek bu ne bir testtirtion, yöntem ve endofitik biyolojik kontrol için ilişkili olması muhtemel.
The authors have nothing to disclose.
Üretim ve deneysel çalışmalar burada Reynaldo Pareja en sadık ve coşkulu yardım yansıtmaktadır sundu. Kolombiya İdari Bilimler Bölümü, Teknoloji ve Yenilik (Colciencias) tarafından ve Bill & Büyük Zorluklar İncelemeler girişimiyle Melinda Gates Vakfı hibe tarafından finanse edilmiştir.
REAGENTS | |||
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | |
Mycotrol SE | Laverlam | 4167 | |
Noble agar | Sigma | A5431-250G | |
Penicillin G sodium salt | Sigma | P3032-25MU | |
Petri dish (100 x 15 mm) | Fisher | 08-757-12 | |
Petri dish (60 x 15 mm) | Fisher | 08-757-13A | |
Potato dextrose agar | Difco | 213400 | |
Regular bleach (NaOCl) | CLOROX | N/A | |
Streptomycin sulfate salt | Sigma | S6501-25G | |
Tetracycline | Sigma | T3258-25G | |
Triple quince (NPK) | ABOCOL | N/A | |
Triton X-100 | Sigma | X-100 | |
EQUIPMENT | |||
Biological safety cabinet | NuAire | NU-425-600 | |
Hemocytometer | Fisher | 02-671-10 | |
Leica DM LB microscope | Leica | N/A |