Summary
Чтобы продемонстрировать молекулярной визуализации рака MR с небольшим пептидом целевой MRI контрастный агент, специфичную для сгустками белками плазмы в строме опухоли в мышиной модели рака простаты.
Abstract
Опухоль внеклеточный матрикс имеет множество связанных с раком белков, которые могут быть использованы в качестве маркеров для молекулярной визуализации рака. В этой работе мы продемонстрировали эффективное рака MR молекулярное воображение с небольшой молекулярной пептида целевой моноамид комплекс Б-г-DOTA как целевой МРТ контрастного вещества, характерные для сгустками плазмы белков в опухоли стромы. Мы провели эксперимент оценки эффективности агента для неинвазивного обнаружения опухоли простаты с МРТ в мышиной ортотопического ПК-3 модели рака простаты. Целевое контрастное вещество было эффективным для получения значительное повышение контрастности опухоли при низкой дозе 0,03 ммоль Gd / кг. Пептид целевой МРТ контрастное вещество является перспективным для MR молекулярной визуализации опухоли предстательной железы.
Introduction
Эффективная визуализация, связанных с раком молекулярных мишеней имеет большое значение для повышения точности ранней диагностики рака и диагностики. Магнитно-резонансная томография (МРТ) является мощным клиническим методом визуализации с высоким пространственным разрешением и без ионизирующего излучения 1. Тем не менее, не нацелено контрастное вещество не доступен для молекулярной визуализации клиническая рака MR. Инновационный дизайн и разработка целевых контрастных агентов способствовала бы дальнейшему развитию применения молекулярной визуализации рака MR. Значительные усилия были предприняты для разработки целевых контрастных агентов для МР томографии биомаркеров, выраженных на поверхности раковых клеток. Из-за относительно низкой чувствительности МРТ и низкой концентрации этих биомаркеров, это вызов для генерации достаточного повышение контрастности для эффективного MR молекулярной визуализации с использованием небольших молекулярных целевых контрастные вещества 2,3. Для того чтобы получить достаточное усиление, различные системы доставки успеч как липосомы, наночастицы и полимерных конъюгатов с высокой полезной нагрузкой парамагнитных Gd (III) хелатов были подготовлены для увеличения локальной концентрации контрастных агентов на целевых сайтах 4,5. Хотя эти системы доставки были способны генерировать значительное улучшение опухоли на животных моделях, их большие размеры привело к медленной и неполной выведения из организма, что приводит к длительной накопления токсичных Gd (III) ионов, которые могут вызвать серьезные проблемы безопасности 6. В последнее время некоторые исследования показали, что ограничения МРТ для молекулярной визуализации можно преодолеть, выбрав соответствующие молекулярные биомаркеры с высокой локальной выражения в очагах поражения и с помощью небольших молекул вещества, которые могут быть легко выводятся из организма 7,8. Ключевой особенностью этих агентов в том, что они ориентированы на молекулярных маркеров обильно присутствующие в больные ткани с небольшим присутствием в нормальных тканях. Высокая концентрация контрастных агентов может связываться с этих целей, в результате чего достаточно больдостаточные повышение контрастности для эффективного MR молекулярной визуализации. С их размер меньше, чем порог почечной фильтрации, несвязанные контрастные вещества могут быть легко выводится из организма с уменьшенной фонового шума. Мы выбрали универсальную связанную с раком биомаркеров, со сгустками белки плазмы, которые в изобилии существуют в опухолевой стромы, и редко присутствуют в нормальных тканях 9. Мы синтезировали целевой контрастное вещество, содержащее небольшое ориентации пептид CGLIIQKNEC (CLT1), который показал сильное специфическое связывание с PC3 простаты модели опухоли 10 и четыре Б-г-DOTA моноамид хелаты. Здесь мы предоставляем методологию рака MR молекулярной визуализации для выявления опухолей у мышей.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Протокол взято из предыдущего исследования 11.
1. Сопряжение Gd-DOTA для CLT1 пептида
- Использование стандартного твердофазного пептидного синтеза, синтезировать пептид CLT1 (CGLIIQKNEC) из Fmoc-защищенных аминокислот на смоле хлорида 2-хлортритил (1,0 ммоль).
- После добавления окончательное аминокислоту, циклизации линейного пептида на смоле с таллий (III) трифторацетата (1,09 г, 2,0 ммоль, 2 экв) в ДМФ (20 мл) при 0 ° С в течение 2 часов.
- Далее, конъюгат ПЭГ и лизин последовательно с N-конца пептида CLT1 (1,0 ммоль) на смоле путем реакции последовательно с Fmoc-NH-ПЭГ-COOH (3,0 ммоль), ФМОК-Lys (Fmoc)-OH (3,0 ммоль), и вторая партия: ФМОК-Lys (Fmoc)-OH (6 ммоль).
- Удалить Fmoc с пиперидина. Добавить DOTA-трис (трет-Bu) (4,58 г, 8,0 ммоль, 2 эквивалента по отношению к каждой аминогруппы) в реакцию с четырех свободных аминов из лизина дендримера на смоле в течение 2 часов.
- Наконец, расщеплять и снятия защиты с продуктаиз смолы путем обработки с коктейлем трифторуксусной кислоты, воды и triisobutylsilane (ТИС) (20 мл, 95/2.5/2.5) в течение 8 ч при комнатной температуре. Удаление смолы фильтрованием с последующим промыванием трифторуксусной кислотой (ТФУ). Добавить объединенные фильтраты по каплям к холодному этиловым эфиром (200 мл), центрифуге и промывают 4х этиловым эфиром. Сушат в вакууме с получением бесцветного твердого вещества (1,99 г, выход 61%).
- Сырой продукт очищают препаративной ВЭЖХ с использованием градиента 0-40% растворитель В (0,1% ТФУ в ацетонитриле) в растворитель А (0,1% водный раствор TFA) в течение 20 мин и 40-90% растворител В в растворителе А в течение 10 мин .
- Растворить CLT1-DL-(DOTA) 4 (250 мг, 0,077 ммоль) в деионизированной воде (15 мл) и довести рН до 6 с помощью 1 М NaOH. Добавить Б-га (OAc) 3 0,4 H 2 O (472 мг, 0,462 ммоль, 1,5 эквивалента в DOTA моноамида) в частях к решению, при поддержании рН в 6, используя 1М NaOH. Перемешать реакционного раствора при комнатной температуре в течение 48 часов.
- Комплекс остаточная Б-г (III) с еthylenediaminetetraacetic кислота (EDTA) (90 мг, 0,31 ммоль) и очищают сырой продукт на колонке гель для получением конечного продукта CLT1-DL-(GD-DOTA) 4 (169 мг, 57%).
2. Характеристика контрастных веществ
- Измерьте Б-г (III) контент с индуктивно связанной плазмой оптического эмиссионной спектроскопии.
- Получить матричный-лазерной десорбцией / ионизации времени пролета (MALDI-TOF) масс-спектры в линейном режиме с 2,5-дигидроксибензойной кислоты (2,5-DHB) в качестве матрицы.
- Измерение времен релаксации водного раствора контрастных агентов CLT1-DL-(GD-DOTA) 4 и nontargeted управления агента sCLT1-DL-(Gd-DOTA) 4 с различными концентрациями при 60 МГц (1,5 Т) с релаксометра при 37 ° С Используйте последовательность инверсии-восстановления пульса для измерения T 1 и последовательность Карра-Перселла-Meiboom-Gill 500 эхо для измерения T 2. Рассчитать Т 1 и Т 2 релаксивности йе агенты от склонов земельных 1 / T 1 и 1 / Т 2 по сравнению с концентрациями Б-га.
3. Культура клеток и развитие животной модели с Ортотопическая PC3 опухоли простаты
- Культура PC3 предстательной железы раковые клетки с конститутивной экспрессии зеленого флуоресцентного белка (GFP) в RPMI среде, дополненной 5% фетальной бычьей сыворотки и пенициллин / стрептомицин / Fungizone, сбора обработкой трипсином и ресуспендируют при плотности 2,5 × 10 4 клеток / мкл PBS.
- Поддерживать мужчин NIH бестимусных голых мышей (4-5 недель) в Бестимусным животных Основной фонд, Case Western Reserve University (CWRU) согласно протоколу животных утвержденной институционального комитета CWRU уходу и использованию животных в.
- Хирургические поверхности опрыскивают 2%-ным раствором хлоргексидина и затем покрыта абсорбирующими шторы. Стерильные хирургические перчатки носили во время процедуры. Перед животных хирургии, IP придать Avertin (250 мг / кг), чтобы anesthetizе мышей. Кроме того, кетамин / ксилазин / ацепромазин может быть использован в концентрации 50/5/1 мг / кг. Глазные мази наносили на мыши, чтобы поддерживать адекватную влажность во время анестезии.
- Начало операции путем разрезания небольшой надрез через кожу брюшины и вдоль нижней средней линии при длине около 1 см с помощью стерильным скальпелем. Хирургический стерильный драпировка была покрыта вокруг разреза во время операции выживания.
- Аккуратно экстериоризоваться и стабилизировать простаты спинной доли выставить простату. Введите суспензии PC3-GFP клеток в PBS (20 мкл) в простату с 30 иглы. Наконец закрыть разрез с раны AutoClip 12.
- Для мониторинга после процедуры, следить животных дважды в день в течение 1 недели. Признаки болезни включают в себя отсутствие еды, темно сбора мочи вокруг уретры и неустойчивость походки, которые могли бы указать инфекции или закупорку мочевого пузыря в скоб.
- Через 10 дней, удалить тон скобы с использованием удаления скрепок. Монитор животных ежедневно для оценки размеров опухоли и никаких доказательств боли, таких как потеря веса, поведенческих отклонений, и моторных дефектов. Усыпить животных, которые показали, размер опухоли, превышающей этически допустимый предел или доказательства боли во время роста опухоли.
4. Подтверждение опухоли специфичность связывания пептидов с флуоресцентной визуализации и гистологии
- После инокуляции опухолевых клеток, позволяют приблизительно 4 недель роста опухоли до начала с изображениями. До введения пептидных зондов, приобрести GFP флуоресцентные изображения с живыми мышами на флуоресценции томографа для проверки на наличие опухоли.
- Iv вводить Texas Red меченых пептидов в опухоль мышам в дозе 10 нмоль / мышь.
- Жертвоприношение мышей 2 час спустя смещением шейных позвонков, собирать опухоль и основные органы, и сразу же изображение на флуоресценции тепловизор. Используйте зеленые светофильтры для GFP (возбуждения: 444-490 нм; эмиссия: 515 нм долгосрочной фильтр; настройки сбора: 500-720 в 10 нм шагов) и красный светофильтры для Texas Red (возбуждение: 576-621 нм; выбросов: 635 нм долгосрочной фильтр; приобретение Настройки: 630-800 в 10 нм шагов). 10 мс время экспозиции для GFP и 150 мсек для Texas Red.
- Сразу же после измерения флуоресценции всей ткани, собирать опухолевые ткани, исправить формалином, и cryosection в 5 мкм ломтиками.
- После промывки PBS, крепление с 1 каплей монтажа среде, содержащей 4 ',6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI), изображение сразу на конфокальной лазерной сканирующей микроскопии.
5. Магнитно-резонансная томография (МРТ)
- Приблизительно через 4 недели после инокуляции опухолевых клеток, позволяют опухоли расти до 0,3-0,6 см в диаметре. Используйте сканер 7 Т МРТ с объемной частоты (RF) катушки для исследования МРТ радио.
- Обезболить мышь с 2%-ным раствором изофлюран-кислород в изофлурана индукции камеры. Офелияthalmic мазь наносили на мыши, чтобы поддерживать адекватную влажность во время анестезии.
- Вставьте 30 иглы в 1,0 м в длину трубки, заполненной гепаринизированным физиологическим раствором. Поместите самодельную катетер в хвостовой вену мыши.
- Место мыши в магнит и держать под ингаляционной анестезии с 1,5% изофлуран-кислород через носовой конус.
- Поставьте дыхания датчика, подключаемого к системе мониторинга на животе, чтобы контролировать частоту и глубину дыхания. Поддержание температуры тела при 37 ° С продувкой горячего воздуха во магнита через систему управления с обратной связью.
- Начните с сагиттальной разделе изображений, используя последовательность локализующий определить местоположение опухоли (TR / TE = 200/3.7 мс, FOV = 3,0 см, толщина среза = 2,2 мм, ломтик число = 16, средний = 2, флип угол = 45 °, матрица = 128 х 128).
- Используйте 2D Т1-градиента последовательность жира подавления приобрести 2D осевые изображения для CE-МРТ (TR / TE = 151.2/1.9 мс, FOV = 3,0 см х 3,0 см, сТолщина вши = 1,2 мм, количество ломтик = 12, средний = 1, флип угол = 80 °, матрица = 128 х 128).
- После предварительного впрыска приобретения базовой МР изображении, начинают вводить целевого агента или агента управления в дозе 0,03 ммоль Gd / кг путем промывки 200 мкл физиологического раствора.
- Продолжайте получать изображения CE-МРТ в различные моменты времени до 30 мин.
6. Обработка изображений и анализ
- Используйте для обработки изображений для анализа изображений.
- Нарисуйте регионах, представляющих интерес (Rois) по всей опухоли и почки в двумерной плоскости изображения и измерить среднюю интенсивность сигнала.
- Для количественной оценки данных CE-МРТ, измерить опухоль или почек повышение контрастности (ΔSNR) на расчете увеличением после контрастного SNR над предварительно контрастного SNR, используя следующее уравнение: ΔSNR = (S т / σ т) - (S 0 / σ 0), где S 0 и S т обозначим сигнал в свою очередьили или почки до и после контрастность и σ 0 и σ т являются стандартное отклонение шума измеряется от фонового воздуха до и после контраста.
- Рассчитать значения р, используя двустороннюю т-тест студента, предполагая статистическую значимость при р <0,05.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
На рисунке 1 показана синтез целевого контрастного агента CLT1-DL-(Gd-DOTA) 4 и общей схеме эксперимента. CLT1-DL-(Gd-DOTA) 4 показывает намного выше, чем релаксация клинической Gd-DOTA (табл. 1). В 1,5 Т, T 1 релаксация за гадолиния из CLT1-DL-(GD-DOTA) 4 в PBS (рН 7,4) примерно в 3 раза выше, чем у Gd-DOTA 10. Изображений Maestro подтверждает сильное специфическое связывание Техаса Красная помечены CLT1 (CLT1-TR), чтобы опухоли с немного связывание с нормальных органов и тканей, в то время как неспецифический яичница пептид (sCLT1-TR) показывает очень мало опухоль связывания (рис. 2). На рисунке 3 показан типичный до и после инъекции контраст усиливается (CE) Т 1-взвешенных изображениях. Целевое вещество приводит к большей и более длительный усиления в опухолевой ткани по сравнению с нецелевых скремблированных агентов. Повышение контрастности в мочевом пузыре постепенно увеличивается в течениевремя, указывая, что контрастные вещества были организма через почки фильтрации. Количественный анализ показывает, что сигнал целевой агент произведено более значительное усиление сигнала в опухолевой ткани, чем в контрольной агента (р <0,05) до 30 мин. Исследование биораспределение показывает агент имеет минимальную задержку Gd в главных органах и тканях 2 дня после инъекции. Наши предварительные данные показывают, что CLT1 целевой MRI контрастные агенты могут быть доставлены в частности опухоли при относительно низкой дозе (треть клинической дозы).
| R 2 (мМ -1. с -1) | R 1 (мМ -1. с -1) | Содержание Б-г (ммоль-Б-г / г) | |||
| за Б-г | на одну молекулу | за Б-г | рэ молекула | ||
| CLT1-(Б-г-DOTA) 4 | 10.1 ± 1.0 | 40,4 ± 3,0 | 13,0 ± 3,1 | 52.0 ± 9.6 | 1.05 ± 0.10 |
| sCLT1-(Б-г-DOTA) 4 | 11.5 ± 1.4 | 46,0 ± 5,0 | 12.4 ± 0.3 | 49,6 ± 1,3 | 0,97 ± 0,08 |
| Б-г-DOTA 4 | 2.9 * | 2.9 * | 3.2 * | 3.2 * | |
Таблица 1. Физико-химические свойства целевых и яичницей-контрастных агентов на 1,5 Т, 37 ° C (* релаксивности для Gd-DOTA в воде при температуре 37 ° C являются из ссылки 10).
> Рисунок 1. Графическое изображение процедуры синтеза и общей эксперимента. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .
Рисунок 2. Опухоль связывание CLT1-TR. Целевые CLT1-TR (А) и нецелевой sCLT1-TR (B) вводили внутривенно в бестимусных голых мышей, несущих ортотопической PC3-GFP простаты в дозе 10 нмоль / мышь. Через 2 часа опухоли и различные органы были собраны и образ. Зеленые изображения флуоресценции от PC3-GFP опухолевых клеток. Красные изображения флуоресценции от CLT1-TR (А) и sCLT1-TR (B) зондов. 1. опухоль 2. селезенки; 3. сердца; 4. почек; 5. яичко; 6. печень, 7. легких; 8. мышца; 9. мозг.565fig2highres.jpg "целевых =" _blank "> Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок.
Рисунок 3. Типичные T1-взвешенных осевые 2D градиентные изображения ортотопической PC-3 опухоли простаты человека до и после внутривенной инъекции CLT1-DL-(GD-DOTA) 4 (А) и sCLT1-DL-(Gd-DOTA) 4 (б) по меньшей 0,03 ммоль Gd / кг в ню / ню мышей. опухолевых помечены красным кружком и мочевого пузыря, помеченный зеленым кружком. Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Критические шаги
Выбор надлежащего Biomarker и с прицелом на небольшие пептид
Для успешной разработки целевой контрастное вещество с небольшой размер, два ключевых момента необходимо учитывать. Во-первых, важно выбрать правильный молекулярные биомаркеры, которые в большом количестве присутствуют в больные ткани с небольшим присутствием в нормальных тканях. Наша выбран связанных с раком биомаркеров, со сгустками белки плазмы, удовлетворяет этому требованию. Во-вторых, выбранные целевые низкомолекулярных агенты должны иметь высокую аффинность связывания для биомаркеров, так что достаточный контраст агенты могут связываться с этих целей, в результате чего достаточно контрастным усилением. В этом исследовании, мы выбрали сгустка-связывающий пептид CLT1, который показывает сильное специфическое связывание с запекшейся белками плазмы в опухоли 11.
Контрастное вещество синтеза
Синтез пептида включает волаоксиданты, две тиольные группы в линейной молекулы пептида, чтобы сформировать окончательный циклический CLT1 пептид. Хотя пептид циклизации обычно провод т в растворе при низкой концентрации, чтобы минимизировать потенциальную агрегацию, димеризацию и олигомеризации, на смоле циклизации использует явления псевдо-разбавления, а также удаление реагентов путем простого промывки и фильтрации 13. В нашем процедуры синтеза, получим, что на-смолы циклизации с помощью таллия (III) трифторацетат хорошо работает с высоким выходом и небольшим димеризации, хотя таллия (III) трифторацетат очень токсичен и следует соблюдать осторожность при обращении с ней. Второй подход использует 20% ДМСО в растворе при низкой концентрации пептида. Однако больше шаги необходимы для удаления ДМСО, и лиофилизации большой объем раствора занимает больше времени. Используя любой из методов, очень важно, чтобы убедиться в полной формирования внутримолекулярной дисульфидной связи. Когда в комплексное соединение пептидов лиганд с Б-гом, свободные тиолы может вызватьсущественные скопления, потому что следы металлов в буфере катализировать окисление воздухом, в результате чего overoxidation цистеина с образованием полимеризации 14. Это обычно резко снижает выход и чистоту конечного продукта. Чтобы образование уверенный полный дисульфид полосы, сначала мы должны использовать мягкие условия оксидирования, чтобы избежать образования межмолекулярного дисульфидной связи, в результате чего димера или высшего образования олигомеров. Во-вторых, достаточно долго время реакции следует поддерживать, чтобы убедиться, что все тиоловых групп окисляются до сопряжения шагом Gd.
Животная модель и катетеризации Mouse хвостовую вену
Подготовка животных модели опухоли и хвостовую вену катетеризации также очень важные аспекты этой процедуры. Во время операции, инструменты / скамейки должны быть чистыми и стерильными, чтобы избежать потенциальных заражений, которые могут ранить или убить мышей. Во избежание перемещения мыши до и после инъекТион, надо иглу мыши хвостовую вену. Чтобы подготовить катетер для катетеризации, сломать иглу 30 от ступицы и вставить тупой конец в 1,0 м в длину трубки с, и подключить другой конец трубки в шприц, загруженной с 1% гепаринизированной физиологического раствора. Нажмите шприц, чтобы заполнить трубопровод. Разбавить хвост теплой водой (~ 105 ° F). Вставьте иглу в вену. Кровь обратного потока в трубопроводе указывает на успешное введение катетера. Чтобы убедиться, что игла находится в вене, аккуратно вставьте шприц и физиологический раствор может быть плавно инъекции, вена очищены с введением небольшого количества физиологического раствора. Закрепите катетер в месте с лентой перед перемещением мыши к сканеру.
Ограничения и возможные модификации
Есть несколько ограничений в нашей текущем исследовании. Во-первых, от предварительных результатов мы замечаем, что CLT1 вымывает очень быстро от ориентации на сайты, хотя это шOWS отлично привязки к опухоли. В естественных условиях протеолитической деградации всего вызывает неустойчивость CLT1. Модификация CLT1 для защиты от протеолитической деградации должно улучшить его стабильность и продлить срок его вымывания время в естественных условиях. Использование аминокислоты D-типа для замены натуральных аминокислот L-типа является потенциальная стратегия для достижения этой цели. Во-вторых, данное исследование не уточнить, о каких точных компонентов в запекшейся белков плазмы пептид CLT1 связывается с. Наконец, мы синтезировать контрастных агентов твердофазного синтеза с относительно низким выходом и высокой стоимости, главным образом, использованием. Разработка метода жидкофазного синтеза следует увеличить выход и снизить стоимость.
Применения
Мы разрабатываем методы для точного обнаружения мелких злокачественных опухолей с контрастным усилением МРТ. МРТ с целевым агентом обеспечивает более эффективную и безопасную альтернативу для молекулярной визуализации рака.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Нет конфликта интересов объявлены.
Acknowledgments
Эта работа частично поддержана Американской ассоциации сердца ГРА Весна 09 докторантуру (09POST2250268) и NIH R01 CA097465. Мы высоко ценим доктора Вэнь Ли и д-р Викас Gulani для испытания протокола МРТ и настройки, и г-жу Yvonne Паркер за ее помощь в имплантации опухоли.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| REAGENTS | |||
| Fmoc protected amino acids | EMD Chemicals Inc | ||
| DOTA-tris(t-Bu) | TCI America | ||
| PyBOP, HOBt, HBTU | Nova Biochem | ||
| DIPEA, Thallium(III) trifluoroacetate, TIS | Sigma-Aldrich Corp. | ||
| Texas Red, succinimidyl ester, single isomer | Invitrogen | T20175 | |
| EQUIPMENTS | |||
| Agilent 1100 HPLC system | Agilent | ||
| ZORBAX 300SB-C18 PrepHT column | Agilent | ||
| ICP-–S Optima 3100XL | Perkin-Elmer | ||
| MALDI-TOF mass spectrometer | Bruker | AutoflexTM Speed | |
| Maestro FLEX In Vivo Imaging System | Cambridge Research Instrumentation, Inc. | ||
| Biospec 7T MRI scanner | Bruker | ||
References
- Brown, M. A., Semelka, R. C. MRI Basic Principles and Applications. , 3rd, John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, New Jersey. (2003).
- Artemov, D. Molecular magnetic resonance imaging with targeted contrast agents. J. Cell. Biochem. 90, 518-524 (2003).
- Kalber, T. L., Kamaly, N., et al. A low molecular weight folate receptor targeted contrast agent for magnetic resonance tumor imaging. Mol. Imaging Biol. 13, 653-662 (2011).
- Schmieder, A. H., Winter, P. M., et al. Molecular MR imaging of melanoma angiogenesis with alphanubeta3-targeted paramagnetic nanoparticles. Magn. Reson. Med. 53, 621-627 (2005).
- Mulder, W. J., Strijkers, G. J., et al. MR molecular imaging and fluorescence microscopy for identification of activated tumor endothelium using a bimodal lipidic nanoparticle. FASEB J. 19, 2008-2010 (2005).
- Wang, S. J., Brechbiel, M., Wiener, E. C. Characteristics of a new MRI contrast agent prepared from polypropyleneimine dendrimers, generation 2. Invest. Radiol. 38, 662-668 (2003).
- Amirbekian, V., Aguinaldo, J. G., et al. Atherosclerosis and matrix metalloproteinases: experimental molecular MR imaging in vivo. Radiology. 251, 429-438 (2009).
- Overoye-Chan, K., Koerner, S., et al. EP-2104R: a fibrin-specific gadolinium-Based MRI contrast agent for detection of thrombus. J. Am. Chem. Soc. 130, 6025-6039 (2008).
- Pilch, J., Brown, D. M., et al. Peptides selected for binding to clotted plasma accumulate in tumor stroma and wounds. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 2800-2804 (2006).
- Rohrer, M., Bauer, H., Mintorovitch, J., Requardt, M., Weinmann, H. J. Comparison of magnetic properties of MRI contrast media solutions at different magnetic field strengths. Invest. Radiol. 40, 715-724 (2005).
- Wu, X., Burden-Gulley, S. M., et al. Synthesis and evaluation of a peptide targeted small molecular Gd-DOTA monoamide conjugate for MR molecular imaging of prostate cancer. Bioconjugate Chem. 23, 1548-1556 (2012).
- Burden-Gulley, S. M., Gates, T. J., et al. A novel molecular diagnostic of glioblastomas: detection of an extracellular fragment of protein tyrosine phosphatase mu. Neoplasia. 12, 305-316 (2010).
- McBride, J. D., Birgit, H., Leatherbarrow, R. J. Resin-coupled cyclic peptides as proteinase inhibitors. Protein and Peptide. 3 (3), 193-198 (1996).
- Cline, D. J., Thorpe, C., Schneider, J. P. General method for facile intramolecular disulfide formation in synthetic peptides. Anal. Biochem. 335 (1), 168-170 (2004).
