यह लेख माउस मस्तिष्क में वायरल वैक्टर microinject और उसके बाद एक अधिग्रहण, विलुप्त होने और बहाली चरण शामिल है कि एक वातानुकूलित जगह वरीयता प्रतिमान में परीक्षण करने के लिए कैसे करें.
ब्याज की चुनिंदा पीटकर जीन को अलग माउस मस्तिष्क क्षेत्रों में Cre recombinase व्यक्त पुनः संयोजक adenoassociated वायरल (rAAV) वैक्टर Microinjecting मौजूदा तरीकों की तुलना में, जीन विलोपन का बढ़ाया अस्थायी और क्षेत्रीय स्तर पर विशिष्ट नियंत्रण के लिए अनुमति देता है. सशर्त विलोपन भी एक floxed जीन ले चूहों के साथ विशिष्ट जीन प्रमोटरों के नियंत्रण में व्यक्त Cre recombinase, stereotaxic microinjection के हित के प्रयोगकर्ता निर्धारित समय बिंदुओं पर असतत मस्तिष्क क्षेत्रों को निशाना बनाने के लिए अनुमति देता है कि संभोग चूहों द्वारा प्राप्त किया जा सकता है. कोकीन वातानुकूलित जगह वरीयता, और इस तरह के आत्म – प्रशासन या वापसी, विलुप्त होने और / या बहाली के चरणों में शामिल कर सकते हैं कि मनोप्रेरणा संवेदीकरण के रूप में अन्य कोकीन व्यवहार मानदंड के संदर्भ में, इस तकनीक के इन अलग करने के लिए लक्ष्य जीन का अद्वितीय योगदान की खोज में विशेष रूप से उपयोगी है कोकीन प्रेरित plasticity के व्यवहार मॉडल के चरणों. विशेष रूप से,इस तकनीक समय में व्यवहार करने के लिए उनके योगदान का परीक्षण करने के लिए एक व्यवहार की असतत चरणों के दौरान लक्ष्य जीन के चुनिंदा पृथक के लिए अनुमति देता है. अंत में, यह समझ नशे की लत व्यवहार के प्रत्येक चरण के दौरान स्वयं उपस्थित कि सबसे शक्तिशाली जोखिम कारकों का पता करने के लिए सबसे अच्छा सक्षम हैं कि अधिक लक्षित चिकित्सा के लिए अनुमति देता है.
कोकीन एक बेहद मजबूत psychostimulant है. कई बार प्रदर्शन के बाद, कई आणविक और सेलुलर रूपांतरों बाध्यकारी में परिणाम माना जाता है कि इनाम प्रासंगिक मस्तिष्क circuitry में होते दवा की मांग की एक गंभीर नैदानिक समस्या 1 ढोंग जो पतन की उच्च दर के उत्साह, व्यवहार. कोकीन जीन की अभिव्यक्ति को विनियमित करने से इन लंबे समय से स्थायी व्यवहार प्रभाव डाल रही है. पुरानी कोकीन के इस्तेमाल से पैदा होती है कि रूपांतरों का अध्ययन करने के लिए, पूर्व नैदानिक कृंतक मॉडल बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है. ऐसा ही एक मॉडल वातानुकूलित जगह वरीयता (सीपीपी) प्रतिमान है. यह मॉडल एक पहले से तटस्थ पर्यावरण और कोकीन से पुरस्कृत गुणों के बीच एक सीखा संघ का विकास शामिल है. एक विशेष कक्ष के साथ कोकीन के कई pairings के बाद, जानवरों आज़ादी कोकीन बनती और गैर कोकीन बनती वातावरण का पता लगाने के लिए अनुमति दी जाती है और वे दवा बनती डिब्बे पसंद करते हैं, वे एक कोकीन प्रेरित plac प्राप्त कर लिया है करने के लिए कहा जाता हैई वरीयता. इसके अलावा, एक विलुप्त होने के प्रशिक्षण अवधि के बाद, इस प्रतिमान कोकीन व्यवहार की मांग के संदर्भ विशेष बहाली का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
इस तरह के नशे की लत नकल अधिक सही माना जाता है कि लंबे समय तक कोकीन प्रेरित व्यवहार और आणविक plasticity के 2,3 और आत्म – प्रशासन (एसए) का अध्ययन करने के लिए प्रयोग किया जाता है जो मनोप्रेरणा संवेदीकरण,, के रूप में नशे की लत की तरह व्यवहार के अन्य व्यवहार मॉडल की तुलना में, जैसे मनुष्यों में पाया व्यवहार, सीपीपी प्रतिमान कोकीन प्रासंगिक सीखने 4 अध्ययन करने के लिए एक सरल प्रक्रिया है. सीपीपी प्रोटोकॉल आसानी इसी तरह दवा लालसा और पतन 5-7 और जो मानव में होता है के पहलुओं पुनरावृत्ति माना जाता है दवा व्यवहार की मांग और दवा अंतर्निहित तंत्र की जांच के लिए अनुमति देते हैं जो एसए करने, विलुप्त होने और बहाली के चरणों में शामिल करने के लिए बढ़ाया जा सकता है – और क्यू प्रेरित पतन 8-10.
एक तंत्र है कि underliesअधिग्रहण, विलुप्त होने, और बहाली सहित सीपीपी के अलग चरणों, प्रत्येक की विशेषता है कि कोकीन प्रेरित व्यवहार प्लास्टिसिटी, अलग मस्तिष्क क्षेत्रों के भीतर जीन अभिव्यक्ति की अद्वितीय हस्ताक्षर की सक्रियता है. सीधे व्यवहार में बदलाव कोकीन प्रेरित मध्यस्थता इनाम प्रासंगिक मस्तिष्क क्षेत्रों के भीतर जो जीन का परीक्षण करने के लिए, यह एक क्षेत्रीय स्तर पर विशिष्ट ढंग से चुनिंदा उन्हें हेरफेर करने के लिए सक्षम होने के लिए उपयोगी है. इस को प्राप्त करने का एक तरीका यह व्यक्त Cre recombinase LoxP साइटों (floxed चूहों) द्वारा flanked लक्ष्य जीन है कि चूहों के विशिष्ट मस्तिष्क क्षेत्रों में, stereotaxic सर्जरी का उपयोग कर रहा है कि पुनः संयोजक adenoassociated वायरल (rAAV) वैक्टर microinject है. इस विधि जब और जहां जीन प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया 11-13 उत्प्रेरण के बिना, दोनों विभाजन और गैर विभाजित न्यूरॉन्स में, ablated कर रहे हैं पर बहुत सटीक लौकिक और क्षेत्रीय नियंत्रण के लिए अनुमति देता है. नियंत्रण का यह स्तर floxed चूहों डब्ल्यू प्रजनन के पारंपरिक Cre पर LoxP प्रौद्योगिकी पर एक महत्वपूर्ण लाभ का प्रतिनिधित्व करता हैउस में, एक अंतर्जात जीन प्रमोटर के नियंत्रण में Cre recombinase व्यक्त ith चूहों समय और जीन विलोपन का वितरण अधिक कसकर विनियमित किया जा सकता है. इसके अतिरिक्त, वायरल वेक्टर की मध्यस्थता जीन पीटा पारंपरिक पीटकर रणनीतियों का उपयोग हो सकता है कि संभावित विकास प्रतिपूरक प्रभाव circumvents.
आत्म – प्रशासन और psychomotor संवेदीकरण सहित अलग चरणों, शामिल है कि व्यवहार मानदंड को सर्वत्र लागू किया जा सकता है विशिष्ट जीन की भूमिका का आकलन करने के floxed चूहों के मस्तिष्क में, यहाँ rAAV-Cre के microinjection वर्णन किया गया है जो कोकीन सीपीपी, के अलावा. उदाहरण के लिए, हमारी प्रयोगशाला कोकीन मनोप्रेरणा संवेदीकरण 14 में सीए वी 1.2 एल प्रकार सीए 2 + चैनलों की भूमिका का अध्ययन करने के लिए rAAV-Cre प्रौद्योगिकी का उपयोग किया गया है. विशेष रूप से, rAAV-Cre प्रदर्शित करने के लिए जीन एन्कोडिंग सीए वी 1.2 floxed साथ चूहों के नाभिक accumbens (एनएसी) में microinjected था कि सीए ध् </suख> 1.2 इस क्षेत्र मध्यस्थता में मनोप्रेरणा संवेदीकरण 14,15 की अभिव्यक्ति चरण अभिनय. मनोप्रेरणा संवेदीकरण में सीए वी 1.3 एल प्रकार सीए 2 + चैनलों की भूमिका का आकलन करते समय ब्याज की एक floxed जीन के साथ चूहों मौजूद नहीं है हालांकि, अगर rAAV-Cre रणनीति इस्तेमाल नहीं किया जा सकता है, के रूप में हमारे अनुभव था. सशर्त चूहों ब्याज की एक विशेष जीन के लिए मौजूद नहीं है, इसलिए, अगर rAAV-Cre के उपयोग की एक सीमा में ही प्रस्तुत. हालांकि, हम सीए वी 1.3 चैनल 14,15 की भूमिका की जांच करने के लिए किया है के रूप में व्यक्त है siRNA, पछाड़ना लक्ष्य जीन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि rAAVs.
Floxed चूहों की असतत मस्तिष्क क्षेत्रों में rAAV-Cre Microinjecting और फिर सीपीपी प्रतिमान में उन्हें परीक्षण के विभिन्न नशे की लत की तरह व्यवहार के चरणों और जहां वे अभिनय कर रहे हैं कि मध्यस्थता विशिष्ट जीन की जांच के लिए अनुमति देता है. इस प्रतिमान का प्रयोग सार में दोहराया कोकीन प्रशासन br hijacks कैसे को समझने में हमारी सहायता प्राप्त हैains इनाम circuitry आदी राज्य 1,16,17 के लिए नेतृत्व कि आणविक संकेत पारगमन मार्ग और जीन अभिव्यक्ति में maladaptive परिवर्तन के कारण.
विलुप्त होने और बहाली के चरणों में शामिल है कि सीपीपी के साथ संयुक्त वायरल वैक्टर stereotaxic microinjection के माध्यम से क्षेत्रीय स्तर पर और अस्थायी विशिष्ट जीन पृथक नशे की लत की तरह व्यवहार की तीन अलग चरणों के लिए जी…
The authors have nothing to disclose.
लेखकों विस्तारित वातानुकूलित जगह वरीयता प्रोटोकॉल स्थापित करने में उनकी मदद के लिए Anni ली और मॉरीन बर्न धन्यवाद देना चाहूंगा.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
Conditioned place preference activity chambers | Med Associates, Inc., St. Albans, VT, USA | MED-CPP-MS | |
Stereotaxic alignment system for mouse | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | model 900 | |
Hamilton syringes | Hamilton Company, Reno, Nevada, USA | 7634-01 | |
rAAV2-Cre-GFP | Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA | 7016 | |
rAAV2-GFP | Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA | 7004 |