Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Dithranol som matris för Matrix Assisted Laser Desorption / Ionization Imaging på en Fourier Trans ion Cyclotron Resonance Mäss Spectrometer

Published: November 26, 2013 doi: 10.3791/50733
Automatic Translation
1,2, 1, 1,2
1University of Victoria-Genome BC Proteomics Centre, University of Victoria, 2Department of Biochemistry and Microbiology, University of Victoria

Summary

Ditranol (DT, 1,8-dihydroxi-9 ,10-dihydroanthracen-9-en) har tidigare redovisats som en MALDI matris för vävnads avbildning av små molekyler, protokoll för användning av DT för MALDI avbildning av endogena lipider på ytan av vävnadssnitt genom positiv-jon MALDI-MS på en ultrahög upplösning quadrupol-FTICR instrument finns här.

Abstract

Masspektrometri imaging (MSI) bestämmer den rumsliga lokalisering och distributionsmönster föreningar på ytan av ett avsnitt vävnad, huvudsakligen med hjälp av MALDI (matris assisterad laser desorption / jonisering)-baserad analysteknik. Det behövs nya matriser för små molekyler MSI, som kan förbättra analysen av låg molekylvikt (MW) föreningar. Dessa matriser bör ge ökade analyt signaler samtidigt minska MALDI bakgrundssignaler. Dessutom kan användningen av ultrahög upplösning instrument, såsom Fouriertransformen ion cyklotron resonans (FTICR) masspektrometrar, har förmågan att lösa analytsignaler från matrissignaler, och detta kan delvis övervinna många problem associerade med bakgrunden härrörande från MALDI matris. Minskningen av intensiteterna hos de metastabila matris kluster av FTICR MS kan också bidra till att övervinna några av de störningar i samband med matris toppar på andra instrument. Högupplöstinstrument såsom FTICR masspektrometrar är fördelaktiga eftersom de kan producera distributionsmönster många föreningar samtidigt samtidigt som det finns förtroende för kemiska identifieringar. Ditranol (DT, 1,8-dihydroxi-9 ,10-dihydroanthracen-9-en) har tidigare redovisats som en MALDI matris för vävnadsavbildning. I detta arbete, ett protokoll för användning av DT för MALDI avbildning av endogena lipider från ytan av däggdjursvävnadssnitt, med positiv-jon MALDI-MS, på en ultrahög upplösning hybrid quadrupol FTICR instrument har lämnats.

Introduction

Masspektrometri avbildning (MSI) är en analytisk teknik för att bestämma den rumsliga lokalisering och distributionsmönster av föreningar på ytan av en vävnadssektion 1,2. Matrix assisterad laser desorption / jonisering (MALDI) MSI för analys av peptider och proteiner har använts i mer än tio år och det har skett stora förbättringar av metoder för provberedning, detektionskänslighet, rumslig upplösning, reproducerbarhet och databehandling 3,4. Genom att kombinera information från histologiskt färgade snitt och MSI experiment, patologer kan korrelera fördelningen för specifika föreningar med pathophysiologically intressanta funktioner 5.

De spridningsmönster små molekyler inklusive exogena droger 6,7 och deras metaboliter 8-10 har också förhörts av MALDI-MS vävnad avbildning 11. Lipider är kanske den mest studerade class av föreningar med MALDI imaging, både i MS 12-17 och MS / MS 18 lägen. Användningen av MALDI MSI för liten molekyl avbildning har begränsats av flera faktorer: 1) MALDI-matriser är i sig själva små molekyler (vanligtvis m / z <500), som alstrar rikliga jon-signaler. Dessa rikliga signaler kan undertrycka jonisering av småmolekylära analyter och störa deras upptäckt 19,20. Lösningsmedelsfri matrisbeläggning 21, matrissublime 22, och matris förbelagda MALDI MS 23, bland andra, har utvecklats för att förbättra MSI av små molekyler.

Nya matriser som kan förbättra analysen av låg-MW föreningar är av stort intresse för små molekyler MSI. Dessa matriser bör ge ökade analyt signaler med minskade matrissignaler. I den positivt jonmod, 2,5-dihydroxibensoesyra (DHB) och α-cyano-4-hydroxikanelsyra (CHCA) är de två vanligen använda MALDI MS matriser för MSI 24 22,25. 9-aminoakridin har använts för MSI av protiska analyter i den positivt jonmod 26 och för nukleotider och fosfolipider i negativ jon-läge 26-29. -2-merkaptobensotiazol har befunnits ge effektiv MALDI detektion av lipider 30, och har använts för att avbilda mushjärna gangliosider 31. Den ultrahöga upplösning Fouriertransform jon cyklotron resonans (FTICR) masspektrometrar kan något lindra detta problem genom att lösa analytsignaler från matrissignaler 32. En annan fördel med användningen av FTICR-MS är att intensiteterna hos de metastabila matris kluster är minskninged 33, vilket också minskar dessa störningar 27.

Användningen av ditranol (DT, 1,8-dihydroxi-9 ,10-dihydroanthracen-9-en) som en MALDI matris för vävnad avbildning har tidigare rapporterats 34. I det pågående arbetet, är ett detaljerat protokoll anges för användning av DT för MSI av endogena lipider på ytan av nötkreatur linsvävnadssnitt, i den positiva-jon-läge.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Vävnadssnittning

  1. Flash-frysa emissionsprover, en gång skördas, med hjälp av flytande kväve, skicka dem på torris (om sjöfarten krävs), och förvara dem vid -80 ° C tills vävnadssnittning. (Om varuprover används, se till att proven är beredda på detta sätt.)
  2. Skär organ till en hanterbar storlek för att passa MALDI målet. Klipp bort oönskade delar av orgeln. För denna studie beskrivs här, var nötkreatur kalv linser decapsulated hjälp av ett tidigare beskrivet förfarande 35 innan vävnadssnittning.
  3. Ta bort hela organ från -80 ° C frys och fixera dem på en kryogen vävnad skärstadiet. För att fixa en bovint kalvlins, placera en eller två droppar vatten på vävnadsskärande skede av en kryostat. Snabbt placera objektivet i vattnet innan det stelnar. Alternativt kan optimala skärtemperatur (oktober) föreningar också användas för att fastställa en vävnad på skärstadiet. Om oktober föreningar används, en minimal mängd oktober bör tillämpas och försiktighet bör vidtas för att se till att de skär vävnadssnitt inte kommer att förorenas med oktober föreningar som kan störa jonisering och detektering av analyt 5,36,37.
  4. Låt temperaturen i kryostaten ekvilibrera till -18 ° C. Med lägre eller högre temperaturer kan användas för mjukare eller hårdare vävnader, respektive. Skär sedan vävnaden ekvatoriellt i 20 nm tjocka skivor. Använd 10-15 mikrometer tjocka skivor för de flesta vävnader, men på grund av den känsliga naturen hos nötkreatur linsvävnaden, var 20 nm tjocka skivor används. För nötkreatur linsvävnaden, kassera de första vävnadssnitt och endast använda skivor som är nära eller vid ekvatorialplanet.
  5. Om en okularlinsen vävnad avbildas, använd 1,5 | il myrsyra (98% i renhet, LC-MS-kvalitet) till prewet ytan av en indiumtennoxid (ITO)-belagda objektglas.
  6. Försiktigt överföra vävnadssnitten till ytan av ITO-coated glas objektglas inuti kryostaten. Avsnittet vävnad kommer snabbt tina och blir hårt fäst på glidytan. Vanligtvis kan flera vävnadssnitt monteras på en samma ITO-belagt glida på detta sätt.
  7. Lyofilisera bilden i 15 min innan MALDI matris ansökan.
  8. För matristester, upplösa de individuella matriser i lämpliga lösningsmedel. Spot manuellt 1 l av varje matrislösning på vävnadssnittet. Dessutom ser en liten molekyl kalibreringsstandard på vävnaden för verifiering av MALDI känslighet.
  9. Lägg tre undervisnings märken till ITO belagd glasskiva genom att skriva på icke ledande yta ITO belagd glasskiva med en korrigering-flytande penna. Ta en optisk bild av vävnaden glida med hjälp av en flatbäddsskanner och spara den i lämpligt format som tiff eller jpg.

2. Matrisbeläggnings

2,1. Automatiserad Matrix Beläggning

  1. Apply matrislösningar, som innehåller acetonitril eller blandade acetonitril / vatten som lösningsmedel, automatiskt till ytorna på vävnadssnitt med en Bruker ImagePrep eller ett liknande elektroniskt matris spruta.
  2. Täck kanterna på den främre ytan av ITO-belagt glasplatta med tejp så att matrisen inte belägga kanterna på objektglaset. Detta säkerställer att undervisnings märken på den motsatta ytan kan användas för vävnads slide uppriktning. Täck inte kanterna på bilden med matrisen eftersom de används som en kontaktpunkt för att upprätthålla den elektriska ledningsförmågan hos ITO-belagda objektglas.
  3. Coat glasskiva med tjugo cykler av matrisbeläggning (2-sek spray, 30-sek inkubation, och 60-sek torktid för varje cykel).

2.2. Manuell Matrix Beläggning

  1. Om organiska lösningsmedel (t.ex. kloroform och etylacetat) som är oförenliga med tillverkningsmaterial för elektroniska matris spruta är requiröd, använd en pneumatiskt assisterad airbrush spruta för att tillämpa matrisen. Lägg det preparerade matrislösningen till lösningsmedelsbehållaren för airbrushfokustryckspruta och tillämpa ett försiktigt flöde av trycksatt kvävgas för att prima sprayen.
  2. Täck kanterna på den främre ytan av den ITO-belagda glasskivor med tejp så att matrisen inte belägga kanterna på objektglaset. Detta säkerställer att undervisnings märken på den motsatta ytan kan användas för vävnads slide uppriktning. Täck inte kanterna på bilden med matrisen eftersom de används som en kontaktpunkt för att upprätthålla den elektriska ledningsförmågan hos ITO-belagda objektglas.
  3. Efter stabila och fina sprayer har observerats, spraya matrisen manuellt så att den helt rockar vävnadssnittet. Applicera den minsta matris lösning som krävs för att knappt väta ytan under varje cykel för att undvika eventuell analyt utlokalisering. I allmänhet använder cirka 10 cykler av matris spray för att belägga en vävnadssektion, antalet cykler ärberoende av vävnadstypen och matriskompositionen.

3. MALDI MS

  1. Bered en massa kalibreringslösning genom spädning av "ES Tuning Mix" standardlösning med en faktor av 1:200 i 60:40 isopropanol: vatten (innehållande 0,1% myrsyra i den slutliga blandningen).
  2. Införa 2 pl / min av den utspädda "ES Tuning Mix"-lösning i dual-mode elektrosprayjonisering (ESI) / MALDI jonkälla på FTICR masspektrometer, från ESI sidan.
  3. Använd FTICR instrumentet i den positiva-ESI-läge, med bredbandsdetektering och ett datainsamlingsstorlek på 1,024 kb / sek. Typiska ESI parametrar är kapillär elektro spänning, 3900 V, spray sköld spänning, 3600 V, nebulisator gas (N2) flöde, 2 L / min, torr gas (N2) flöde och temperatur, 4 L / min och 200 ° C; skummaren 1 spänning, 15 V, flygtiden (TOF), 0,009 sek, kollision gas (Ar) flöde, 0,4 L / s; source ion ackumulering tid, 0,1 sek;och kollisionscell jon ackumulering tid, 0,2 sek. Tune driftparametrarna FTICR i syfte att maximera den analytiska känsligheten över massområde från m / z 200 till 1400, under upprätthållande av god tidsdomän fritt induktions decay (FID) signaler. Oftast är det de driftsparametrar ICR är sidekick spänning, 8 V, sidekick offsetspänning, 8 V, excitation förstärkning av 10, excitationspuls tid, från 0,01 till 0,015 sek, front fälla plåt spänning, 1,5 V, back fälla platta spänning, 1,6 V och analysator entré spänning, -4 V. Efter en uppsättning FTICR driftsparametrar har bestämts, förvärva ESI masspektra och kalibrera instrumentet med hjälp av referensmassor standard föreningar i "ES Tuning Mix"-lösning.
  4. För att ställa in instrumentet för MALDI drift upplösa flera 1 il alikvoter av en blandad terfenadin och reserpin standardlösning i matrislösningen i en koncentration av 1 | iM vardera, och upptäcka dessa lösningar direkt på en av de tissue sektionerna (dvs en testvävnadssektion), som har monterats på en ITO-belagda objektglas. Placera ITO-belagda glida in i en vävnad slide-adapter (dvs. en speciell MALDI mål) och ladda adaptern från MALDI sidan in i den dubbla ESI / MALDI jonkälla. Optimera lämpliga MALDI driftsparametrarna för den lasereffekt och antalet laserskott för MALDI signal anhopning för varje vikt scan etc. Typiska MALDI driftsparametrar är: laserskott, 50, och en MALDI platta spänning på 300 V.
  5. Efter trimning, kalibrering och optimering av instrument för MALDI-MSI experiment, rikta den fysiska placeringen av en del vävnad som skall avbildas med sin inspelade optiska bilden i bildprogram. Använd de tre "korrigerings-flytande" märken, som tidigare släppts ut på motsatt sida av ITO-belagda glidytan (steg 1,9), för denna anpassning genom att använda ett trepunkts triangulering metoden.
  6. Utför en samtidig ESI och MALDI drift så att varje Masspektrumet innehåller referensmass topparna i "ES Tuning Mix"-lösning för efter förvärvet intern masskalibrering. Detta kommer att resultera i den mest korrekta massmätning under MALDI MS. För att göra detta, först dämpa ESI-signalen genom att minska kapillär spänning tills MALDI signalerna dominerar spektra medan ESI kalibreringssignalerna är fortfarande tillräckligt hög för intern masskalibrering.
  7. Därefter inrättades en automatiserad rastrering metod för laserstrålning. Definiera vävnadsområden som ska avbildas och ange lämplig laserrastersteg storlek. Observera att mindre raster stegstorlekar ger bilder med högre upplösning vävnad, men kräver en betydligt längre masspektral anskaffningstiden och mer datalagringsutrymme. Antalet bildpunkter är beroende av laserrastersteglängden för att ställa upp och vävnaden storlek. För en typisk bovin lins som har en 1 cm 2 vävnads storlek, är en vävnad image vanligtvis består av ca.

4. Dataanalys

  1. Kalibrera MALDI masspektra använder intern kalibrering för den första jämförelse och för att välja toppar för MS / MS. De-isotopen och välja de monoisotoptoppar som tidigare beskrivits, med användning av en anpassad VBA skript 38.
  2. Exportera den resulte monoisotopisk peak listor och inmatning de mätta m / z-värden i METLIN 39 och / eller de HMDB 40 Metabolome databaser för massmatchning med biblioteksposter. Betrakta (M + H) ^, (M + Na), och (M + K) ^-joner under sökningar databas, med en tillåten massa fel på ± 1 ppm.
  3. Generera MALDI bilder för alla lipid enheter som upptäckts över vävnadssektionen hela med hjälp av image-analys programvara, med en massa filterbredd på 1 ppm i toppens spets.
  4. När bilderna har tagits fram för samtliga m / z-värden som matchar databasposter, generera bilder för alla andra toppar också att leta efter unika distributionsmönster som kan undersökas senare.

5. Bekräftelse om vilka det avbildade lipider

  1. Bekräfta om vilka höga överflöd lipider, som har karaktäristiska fragmentjoner som kan detekteras med hjälp av FTICR instrumentet (t.ex. 184,073 för fosfolipider), genom MALDI-MS/MS. Utför MALDI-MS/MS använda kollisions-inducerad dissociation (CID) direkt på vävnaden.
  2. För de lipid-arter som inte kan beläggas direkt genom MALDI-MS/MS, använd en UPLC system kopplat till en Q-TOF-masspektrometer 34.
    1. Dissekera manuellt portioner som innehåller ~ 10 mg vävnad från det område där arten av intresse lokaliserades. Placera dessa vävnads portioner i 2ml centrifugrör.
    2. Homogeni varje vävnad alikvot i 250 l av vatten, med hjälp av en mixer kvarn med två 5 mm rostfritt stål metallkulor.
    3. Tillsätt 1 ml kloroform-metanol-lösning (01:03, v / v) och virvel rören. Därefter centrifugera rören med användning av en mikrocentrifug vid 12.000 x g under 10 min.
    4. Samla supernatanterna och torka dem i en rotationshastighetsvakuum koncentrator.
    5. Lös upp resterna i 100 ^ 30:70 isopropanol: vatten. Injicera en 10-ul alikvot på UPLC kolumnen för separation med hjälp av gradienteluering.
    6. Använd kromatografiska förhållanden för online lipid LC-MS/MS, som tidigare har publicerats 34.
    7. Generera extraherade jonström (XIC) kromatogram med hjälp av de teoretiska m / z-värden, med ett fönster på ± 50 ppm kring de teoretiska massorna.
    8. Om autentiska föreningar för dessa lipider är tillgängliga, matcha retentionstiderna för de autentiska föreningar med de motsvarande XIC toppar från vävnadsprover. Om föreningarna är desamma, bör retentionstiderna och MS / MS-spektra överensstämmer.
  3. Om en äkta förening inte är tillgänglig, använd fragmenteringsmönstret för den detekterade lipid för att matcha en vanlig MS / MS-spektrum från en metabolome databas som METLIN eller HMDB. Använd de novo masspektral tolkning att fastställa en möjlig struktur för lipid.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vävnadsprover som är sektione och tina monteras på ITO belagda glasskivor ska vara intakt, utan synliga bristningar. För många vävnader, är direkt vävnads tina montering på en ITO belagd glasskiva acceptabelt. För vissa specifika vävnader, såsom bovin-lins, är omfattande sönderslitning av vävnaden ofta ses när direkt tö monterings används (Figur 1a). Förbeläggning av ITO glasskiva med etanol eller myrsyra (figur 1b) hjälper till att bibehålla integriteten hos de vävnadssnitt under vävnadsmontering.

Både valet av matris och valet av lösningsmedel är viktiga faktorer som påverkar kvaliteten på MALDI-spektra. Då en lämplig MALDI MS-spektrum förvärvas från vävnadssnittet, är masspektret oftast tät med lipid-signaler inom massa detektionsområde (Figur 2a). En matris och ett lösningsmedel bör väljas så att de har polariteterONT-size: 14.399999618530273px; line-height:. 28px; "> liknar de analyter av intresse, eftersom MALDI Processen kräver en fast-fas-lösning av analyten i matriskristaller allmänhet de bästa analyt signalintensiteterna kommer från användningen av MALDI-matriser med löslighet som liknar den hos de önskade analyter 41,42. Figur 2a visar ett exempel på ett spektrum som produceras med en effektiv matris lösningsmedel (70% ACN med 0,01% TFA), och Figur 2b visar ett dåligt val av matris och lösningsmedel (70% MeOH med 0,01% TFA) för ditranol.

En av fördelarna med en dual-mode elektrosprayjonisering (ESI) / MALDI jonkälla är att det tillåter tillägg av ESI kalibreringssignaler samtidigt skaffa MALDI spektra utan att störa ablationsprocessen. Dessa ESI kalibreringssignaler medge invändig masskalibrering för att ge hög massnoggrannhet med massa fel på <0,5 ppm 38. EftersomESI-signal i den standard "ES Tuning Mix"-lösning kan vara en storleksordning större än de MALDI signalerna för de analyter från vävnaden, måste ESI-härledda kalibreringssignaler dämpas. Kalibreringssignaler ska vara synliga och med tillräcklig intensitet för kalibrering av spektra, men bör inte dominera spektra.

En gång har förvärvat uppsättning masspektra från en MALDI-MSI experiment, kan bilden för var och en av de påvisade jonerna genereras, med varje pixel representerar en laser strålning fläck från ytan av ett avsnitt vävnad. Kombinera samtliga individuella pixlar med olika jonintensiteter tvärsöver vävnadssnitt från en MALDI MSI experiment avspeglar joniseringen av målanalyter i vävnaden 1. Detta kan i sin tur ge information om de relativa koncentrationerna av analyter i olika delar av vävnadssnittet (Figur 3b). Man måste vara försiktig i behandlingen avuppgifter eftersom många faktorer kan påverka vad som syns och hur data tolkas. I de flesta experiment är data normaliseras till den totala jonströmmen (TIC) inom varje spektrum. Utan denna normalisering, kan områden med bättre analytmatris sam-kristallisation (dvs så kallade "hot spöts") orsaka starkare signaler för de analyter och detta skulle förvränga data genom att tillhandahålla information som inte kan korrelera väl med de faktiska relativa koncentrationerna av analyterna (figurerna 3C-3D).

Vävnadsberedning kan också dramatiskt ändra den bild som alstras. Om provet är "för blöt" (det vill säga för mycket lösningsmedel användes), då analyterna kommer utlokalisering på vävnaden och mycket av den rumsliga informationen går förlorad (figur 3f). Metoden för datainsamling är också viktig i den slutliga bilden erhålls. Som MALDI experiment på obehandlade vävnadssnitt är till sin natur "dirty & #34, kan känsligheten av instrumentet minska med tiden. För korta experiment denna minskning inte kan vara synliga, men kan det vara ett problem för längre experiment eller särskilt smutsiga prover. Om data förvärvas linjärt över provet detta kan leda till en plat partiskhet som specifika regioner av vävnadssektionen kommer att analyseras efter känsligheten hos instrumentet har minskat. Därför, med hjälp av slumpmässiga platser för alla dataförvärv rekommenderas. Även om den här metoden tar längre tid, hjälper det att ta bort eller minimera denna bias i data.

Såsom visas i vår tidigare papper 34 vid jämförelse med CHCA och DHB, DT aktiverat detekteringen av ytterligare lipid arter, medan lipider detekterades med CHCA och DBH kunde fortfarande detekteras.

Figur 1 >
Figur 1. Tissue montering och skärning. Jämförande optiska bilder av två bovint kalvlinsvävnadssnitt (20 | im tjock), utan myrsyra prewetting (a) och med myrsyra prewetting (b), som är monterade på ITO-belagda objektglas.

Figur 2
Figur 2. . Masspektra MALDI MS-spektra förvärvades direkt från ett vävnadssnitt: a) en idealisk tätbefolkade masspektrum med lipid-signaler (70% ACN med 0,01% TFA), b) ett masspektrum som alstras från en vävnadssektion belagd med ett dåligt val av lösningsmedel (70% MeOH med 0,01% TFA). Klicka här för att visa en större bild .

tält "fo: keep-together.within-page =" alltid "> Figur 3
Figur 3. MALDI MSI bilder Representant MALDI MSI bilder: a) en bovin lins avsnitt vävnad, b) en MSI-bild av samma vävnadssnitt, c) en MSI-bild som visar en bakgrund jon, d) en nonnormalized jon karta över samma jon e). en bovin linssektion vävnad, och f) en jon karta som visar en delvis delocalized analyt grund overwetting.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De viktigaste faktorerna för framgångsrik MALDI MSI är: 1) vävnader förberedelse, 2) matris val, 3) matrix ansökan, samt 4) uppgifter tolkning och analys. När provet och matrisen lämpligt förberedd, är MS datainsamling automatiserad. Analysen av data från denna typ av experiment är ganska arbetskrävande.

Lämplig vävnad förberedelse är avgörande för framgångsrika MALDI MSI experiment. Källan till vävnaden och hanteringen kan ha en stor inverkan på den slutliga analysen. Proverna måste vara omedelbart snabbfrystes i flytande kväve och lagrades vid -80 ° C, och de bör inte lagras under en längre tidsperiod, eftersom vissa metaboliter kan vara instabila även vid -80 ° C.

För många däggdjursvävnader, har 10-15 ìm tjocka vävnadsskivor rekommenderats för MALDI MSI. I dessa försök var nötkreatur kalv linser skär ekvatoriellt i 20 nm tjock vävnad slices följande lins decapsulation med användning av ett tidigare beskrivet förfarande 35. De tjockare bovint kalvlinsvävnadssektioner användes för att det befanns svårt att upprätthålla integriteten för en sektion lins vävnad både under vävnadsskärning och under vävnadsmontering. Linsen är en sfäriskt symmetrisk vävnad längs dess ekvatorialplanet, så bara skivor som var nära, eller på, var mittplanet samlas.

På grund av svårigheten att bibehålla vävnadsintegritet under vävnadsskärning och montering, prewetting användning av ett lösningsmedel, såsom etanol (för proteiner och peptider, 35) eller myrsyra (för lipider) kan användas. Det bör också noteras att, för protein-och peptid avbildning, är proverna ofta tvättas med ett organiskt lösningsmedel för att ta bort små molekyler inklusive lipider och oktober som används för montering, det ska dock ett tvättsteg endast göras med lösningsmedel som inte löser de analyter av intresse, och bör undvikas för small molekyl analys.

Valet av matris är också avgörande för alla MALDI experiment, men kan på-vävnadsmatrisprestanda inte vara samma som matrisprestanda med en renad standard. Till exempel vid minsta lasereffekt, DT genereras flödande DT-relaterade bakgrundssignaler från vävnaden fria matris fläckar och dessa signaler tilldelades som DT oligomerer och deras motsvarande natrium-och kalium-addukter, men på vävnad, många av dessa signaler var inte observerats, vilket tyder på att testa olika matriser på det specifika urval av val kan vara viktigt vid val av lämplig matris för en given MALDI MSI analys. DT används sällan för lipid analys på grund av den rapporterade hög bakgrund som genereras av matrisen, men i jämförelse med DHB och CHCA för på-vävnad profilering av lipider genom MALDI-FTICR MS, producerade DT goda resultat. Denna matris kan alltså vara ett potentiellt användbart matris för MALDI vävnad avbildning med detta instrument

Effektiv sam-kristallisation av matrisen och analyten är en förutsättning för hög känslighet MALDI-MS-analys. Fastfas-löslighet av en analyt i matrisen är därför viktigt i MALDI processen 41,42. MALDI-matriser med lösligheter liknande de hos de önskade analyter har rapporterats för att framställa de starkaste analyt signalintensiteterna. Eftersom DT är en svag organisk syra, såväl som en mycket hydrofob organisk förening, baserad på klassisk Bronsted-Lowry-syra-bas-neutralisering teori 43 och teorin om löslighet, kan det förväntas att gynna jonisering av positivt laddade och mindre polär föreningar. I själva verket visade det sig att polära lipider dominerade de detekterade föreningar vid positiv-jon-läge när DT användes som matris.

De lösningsmedel som används för framställning av en matrislösning spelar också en viktig roll i direkt vävnadsanalys genom MALDI-MS. PH-värdet har implicerats som enviktig faktor för effektiviteten i en matris, och TFA är en vanlig tillsats som används med CHCA och DHB. Men med DT, tillsats av en syra eller bas modifierare hade liten effekt på de resulterande data. På grund av hydrofobiciteten av DT och dess begränsade löslighet i polära lösningsmedel, är ett lipofilt organiskt lösningsmedel rekommenderas. Vid analys av lipider, en blandning av kloroform-metanol (02:01, volym: volym) med 1% myrsyra, vilket är ett typiskt organiskt lösningsmedel för extraktionen av fettet, användes. Vi antog att detta ger bättre samarbete kristallisering av lipider med DT. Den lipofila naturen hos lösningsmedlet kan även förhindra solubilisering av andra föreningar, såsom proteiner och salter, vilket visas i föregående vätskeextraktion ytanalys masspektrometri (LESA-MS) experiment 44. Detta skulle leda till bättre kristallisation av matrisen och lipider med färre föroreningar. Lösningsmedelssystemet som väljs för analys bör maximera lösligheten hos matrisen och desiröda analyter (lipider) och samtidigt minimera lösligheten av oönskade föroreningar (salter och proteiner / peptider).

Beläggningen av matrisen på ytan av vävnaden bör vara så jämn som möjligt. För att maximera den rumsliga upplösningen av bilden bör kristallstorleken vara så liten som möjligt 45. Med användning av en elektronisk matris spruta kan matrisen beläggas likformigt och reproducerbart sätt med en liten kristallstorlek. Detta är den föredragna metoden i vårt laboratorium. Det är mycket bättre att manuellt program eftersom det minskar punktstorlek, homogenitet, och reproducerbarhet. Men många av de lösningsmedel som är användbara för MSI av små molekyler är inte kompatibla med de material som används vid tillverkning av den automatiserade matris spruta. Men ännu inte genomförts i vårt laboratorium, har sublimebaserad matris ansökan rekommenderats för lipidanalys 22. Den här metoden ger förbättrad (dvs. minskat) spot storlek, homogenitet, och reproduktionbilitet och detta bör troligen vara den föredragna metoden när matrisen väljs är älskvärd till denna metod.

För beläggning av matriser som innehåller lösningsmedel som är oförenliga med den automatiserade matris spruta (inklusive kloroform), är en alternativ metod för matrisbeläggning för att använda en luftborste pistol. För dessa matrislösningar, använde vi en pneumatiskt assisterad airbrush spruta. Även om användningen av luftborst pistol är inte en idealisk metod, kan det vara den enda metod som kan användas för lösningsmedel och matriser som är oförenliga med de andra metoderna, och-med utbildning och erfarenhet-det kan generera mycket jämn matris beläggning. Vid tillämpning av det matrislösning manuellt måste endast den minsta mängd vätska anbringas under varje cykel för att knappt väta ytan av vävnaden. Alltför mycket vätska skulle potentiellt utlokalisering analyter på grund av de organiska lösningsmedlen. Det finns reproducerbara problem med manuell applicering och erfarenhet beläggning bilden med denna metod iär avgörande för framgång. På grund av den manuella typen av luftborst gun matris tillämpning, måste försiktighet iakttas för att säkerställa att en enhetlig beläggning görs, en inhomogen beläggning kan leda till skeva data, som är representativ för den matris beläggning och inte analyten lokalisering.

Vid genomförande av MALDI MSI experiment, är första kartläggningen av de upptäckta analyter vanligtvis baserad på metabolome databassökning av de uppmätta korrekta massorna som vanligtvis endast tillgängliga när en högupplöst instrument används 38. Den dubbla ESI / MALDI jonkälla på Apex-Qe 12-Tesla hybrid quadrupol-FTICR masspektrometer möjliggör tillägg av ESI-genererade signaler för användning som interna masskalibrerings toppar till varje MALDI masspektrum, utan att påverka MALDI desorption / jonisering processen. Användning av interna masskalibrering är avgörande för högmässa mätnoggrannhet i MALDI-FTICR. Extern kalibrering kan inte fullt ut ta hänsyn tillrymdladdningseffekter inom ICR cellen 46-48. Den inställning och kalibrering av FTICR är avgörande för framgång. På denna typ av instrument en parameter som kallas "Time of Flight" (TOF), vilket är den tid det tar för en jon att resa från kollisionscellen till analysatorn (ICR cell) är en av de viktigaste användardefinierade inställningar som påverkar känsligheten för en FTICR instrument upptäckt. Inom olika massintervall (dvs. m / z 200-1,400), gynnar en lägre TOF upptäckt av de lägre m / z joner och en högre TOF gynnar upptäcka högre m / z joner. Således är det önskvärt för högkänslig detektering av både låga och höga m / z joner inom detektionsmassområde TOF värde 9 msek.

För ett praktiskt experiment, måste en avvägning göras mellan rimlig datainsamling storlek, mass upplösning, och den tid som används för att förvärva MS bilddata. För en FTICR MS experiment, storleken på den förvärvade datafil och massan resolutiden är beroende av datainsamlings storleken på den fria induktionssönderfallssignalen (FID). En högre datainsamlings storlek kommer att resultera i en högre massupplösning och en större datafil storlek. Men en högre datainsamlings storlek orsakar också en långsammare MS avsökningshastighet. Som en kompromiss, rekommenderas att en datainsamling storlek på 1,024 kb / sec användas på FTICR. En lägre datainsamling storlek och en motsvarande mindre massa upplösning tillåter inte separation av några isobariska jonslag.

Laserrastersteg storlek måste också väljas så att den är tillräckligt liten för att ge en god upplösning för MS-bilder av analyterna av intresse, men kan en mycket liten rastersteg storlek gör datafiler ohanterliga väger en MS imaging datafil består av tusentals MALDI masspektra. Med tanke på den relativt stora storleken på linserna från nötkreatur, ca. 1,2 -1,5 cm i diameter, som vi använde en rasterstegstorlek av 250 | im. Med användning av en 1024 kb / s-data acquisition storlek och en 250 nm rastersteg storlek, vårt urval dataset var ca 60 Gb. Under datainsamlings bör en slumpvis plats analys användas, eftersom detta förhindrar platsbaserade förspänning på grund av gradvis signaldämpning; kräver emellertid slumpvis plats betydligt längre tid att förvärva data.

Eftersom MALDI MSI data som anskaffas på vår FTICR MS instrument föreskriva exakta massa uppgifter, kan den extraherade m / z sökas mot metabolome databaser som METLIN och / eller HMDB. Med hjälp av en ± 1 ppm fönstret de första uppdragen för många jon signaler till metaboliter är av hög tillit. Men eftersom många arter har samma kemiska formel, bekräftelse av ID: t måste ofta göras med hjälp av alternativa metoder. Således, MS / MS-experiment, och jämförelse av MS / MS spektra med tidigare publicerade data skall utföras för en säker identifiering. MALDI-MS/MS spektra kan ibland köpas direkt på FTICR instrument, men för maNY lipidmolekyler, deras abundances och / eller jonisering effektivitet är otillräckliga för att erhålla användbara MS / MS-data, och anrikning och rening innan LC-MS/MS krävs. I dessa analyser, de flesta av de observerade lipider var polära fosfolipider, och tilldelades som datorer, ESP, SM, PS'er, PGs, PAs, och ceramid fosfater (CerPs), andra lipidmolekyler identifierade inkluderar sterol lipider, acyl karnitiner och glycerider. Baserat på egenskaperna hos lösningsmedlet och matrisen, detta kan förväntas. MS / MS spektra av persondatorer innehåller ett framträdande topp vid m / z 184,073, som har tillskrivits den polära PC huvudgrupp, fosfokolin, samt ytterligare strukturellt viktig information, vilket kan ge en otvetydig identifiering av molekylerna. Dessutom, med den här metoden är många sterol lipider upptäckts, men de flesta kan inte entydigt tilldelas unika identiteter, även med MS / MS-data. Starka kalium addukter dominerar generellt spektra, men proton och sodiated addukter kan också detekteras.

Eftersom MALDI MS-processen är bara kan ge relativa förekomsten information som baseras på lokala joniseringseffektivitet inom varje bildpunkt, måste man vara försiktig när man tolkar MALDI MSI data utan stabila isotopen märkta interna standarder 49. Dessutom, för förtroendet för lokaliseringsresultat, bekräftelse av någon fördelningsmönster som upptäcks måste göras med hjälp av alternativa metoder. Utföra LC-MS/MS på dissekerade vävnadsprover för bekräftelse rekommenderas.

Utifrån de uppmätta korrekta massorna i de låga massområde kemiska formler kan genereras för en given m / z, inom en 1 ppm massa fel och tillåta ett obegränsat antal C, H, O och N, och högst 2 S och två P ofta endast en enda elementarsammansättning är möjlig. Detta m / z kan också sökas mot HMDB och METLIN databaser, vilket kan ge potentiella kandidatföreningar. Olyckligtvispå FTICR MS låg massa cut-off är ca. 130 Da, vilket kan göra det svårt att direkt utföra MS / MS. Sålunda bekräftelse använder ett annat system som ofta krävs.

Q-TOF LC-MS/MS experiment vanligen utförs på vävnadsprover som har manuellt dissekerade från specifika områden i vävnaderna av intresse. Med hjälp av den beskrivna lipid brytningsmetod, kan XICs genereras för målföreningarna och MS / MS kan förvärvas för bekräftelse. Antingen jämförelse med en autentisk standard eller de novo strukturell belysning krävs innan det kan bli en självsäker kemisk uppdrag.

Ditranol har använts för att undersöka mönster lipid distributions bovint kalvlins och även testats på råttlever, hjärta och njurvävnad 34. MALDI MSI kan användas för diagnos av sjukdomstillstånd hos människa och används redan för patologisk analys 50. Med utvecklingen av mer robust och snabb technologies för MALDI MSI, den rumsliga lokalisering av specifika föreningar kan vara användbar information för en patolog. När en analyt kan rutinmässigt avbildas med en MALDI MSI-baserad metod, kan den användas för diagnostiska ändamål. I själva verket kan vävnad avbildning utföras på sjukhus, med ett instrument som ligger bredvid operationssalen, där, som har redan visat 51, kan den användas för att exakt bestämma marginalerna för tumörer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Vi har inget att lämna ut.

Acknowledgments

Författarna vill tacka för Genome Canada och Genome British Columbia för plattforms finansiering och stöd. Vi tackar också Dr Carol E. Parker för kritisk granskning av manuskriptet och redigering assistans. CHL också tack British Columbia Proteomics nätverk för stöd.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Rat Liver Pel-Freez Biologicals 56023-2
Bovine Calf Lens Pel-Freez Biologicals 57114-2 Sample should be decapsulated29 before use
Dithranol (DT) Sigma-Aldrich 10608 MALDI Matrix
α-Cyano-4-hydroxy-cinnamic Acid (CHCA) Sigma-Aldrich 70990 MALDI Matrix
2,5-Dihydroxybenzoic Acid (DHB) Sigma-Aldrich 85707 MALDI Matrix
Reserpine Sigma-Aldrich 83580
Terfenadine Sigma-Aldrich T9652
Formic Acid Sigma-Aldrich 14265
Ammonium Formate Sigma-Aldrich 14266
Ammonium Hydroxide Sigma-Aldrich 320145
Trifluoroacetic Acid (TFA) Sigma-Aldrich 302031
Water Sigma-Aldrich 39253
Methanol Sigma-Aldrich 34860
Acetonitrile Sigma-Aldrich 34967
Ethyl Acetate Sigma-Aldrich 34972
Isopropanol Sigma-Aldrich 34965
Chloroform Sigma-Aldrich 366927
Acetone Sigma-Aldrich 34850
Ethanol Commercial Alcohols 95%
ES Tuning Mix Agilent Technologies G2431A
ITO Coated Glass Slides Hudson Surface Technology PSI1207000 Ensure that samples are placed on the electrically conductive side
Wite-Out Shake-N-Squeeze Correction Pen Bic WOSQP11
Airbrush Sprayer Iwata Eclipse HP-CS
ImagePrep Bruker 249500-LS
MALDI adapter Bruker 235380

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Chaurand, P., Stoeckli, M., Caprioli, R. M. Direct Profiling of Proteins in Biological Tissue Sections by MALDI Mass Spectrometry. Anal. Chem. 71, 5263-5270 (1999).
  2. Caprioli, R. M., Farmer, T. B., Gile, J. Molecular Imaging of Biological Samples. Localization of Peptides and Proteins Using MALDI-TOF MS. Anal. Chem. 69, 4751-4760 (1997).
  3. Amstalden van Hove, E. R., Smith, D. F., Heeren, R. M. A. A concise review of mass spectrometry imaging. J. Chromatogr. A. 1217, 3946-3954 (2010).
  4. Norris, J. L., Caprioli, R. M. Analysis of Tissue Specimens by Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry in Biological and Clinical Research. Chem. Rev. Feb 11, (2013).
  5. Walch, A., Rauser, S., Deininger, S. -O., Höfler, H. MALDI imaging mass spectrometry for direct tissue analysis: a new frontier for molecular histology. Histochem. Cell Biol. 130, 421-434 (2008).
  6. Hsieh, Y., et al. Matrix-assisted laser desorption/ionization imaging mass spectrometry for direct measurement of clozapine in rat brain tissue. Rapid Commun. Mass Spectrom. 20, 965-972 (2006).
  7. Trim, P. J., et al. Matrix-assisted laser desorption/ionization-ion mobility separation-mass spectrometry imaging of vinblastine in whole body tissue sections. Anal. Chem. 80, 8628-8634 (2008).
  8. Khatib-Shahidi, S., Andersson, M., Herman, J. L., Gillespie, T. A., Caprioli, R. M. Direct molecular analysis of whole-body animal tissue sections by imaging MALDI mass spectrometry. Anal. Chem. 78, 6448-6456 (2006).
  9. Atkinson, S. J., Loadman, P. M., Sutton, C., Patterson, L. H., Clench, M. R. Examination of the distribution of the bioreductive drug AQ4N and its active metabolite AQ4 in solid tumours by imaging matrix-assisted laser desorption/ionisation mass spectrometry. Rapid Commun. Mass Spectrom. 21, 1271-1276 (2007).
  10. Drexler, D. M., et al. Utility of imaging mass spectrometry (IMS) by matrix-assisted laser desorption ionization (MALDI) on an ion trap mass spectrometer in the analysis of drugs and metabolites in biological tissues. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 55, 279-288 (2007).
  11. Prideaux, B., Stoeckli, M. Mass spectrometry imaging for drug distribution studies. J. Proteomics. 75, 4999-5013 (2012).
  12. Sugiura, Y., Setou, M. Imaging Mass Spectrometry for Visualization of Drug and Endogenous Metabolite Distribution: Toward In Situ Pharmacometabolomes. J. Neuroimmune Pharmacol. 5, 31-43 (2009).
  13. Garrett, T. J., Yost, R. A. Analysis of intact tissue by intermediate-pressure MALDI on a linear ion trap mass spectrometer. Anal. Chem. 78, 2465-2469 (2006).
  14. Woods, A. S., Jackson, S. N. Brain tissue lipidomics: direct probing using matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry. AAPS J. 8, 391-395 (2006).
  15. Cha, S., Yeung, E. S. Colloidal graphite-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry and MSn of small molecules. 1. Imaging of cerebrosides directly from rat brain tissue. Anal. Chem. 79, 2373-2385 (2007).
  16. Burnum, K. E., et al. Spatial and temporal alterations of phospholipids determined by mass spectrometry during mouse embryo implantation. J. Lipid Res. 50, 2290-2298 (2009).
  17. Veloso, A., et al. Anatomical distribution of lipids in human brain cortex by imaging mass spectrometry. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 22, 329-338 (2011).
  18. Tanaka, H., et al. Distribution of phospholipid molecular species in autogenous access grafts for hemodialysis analyzed using imaging mass spectrometry. Anal. Bioanalyt. Chem. 400, 1873-1880 (2011).
  19. Lou, X., van Dongen, J. L., Vekemans, J. A., Meijer, E. W. Matrix suppression and analyte suppression effects of quaternary ammonium salts in matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry: an investigation of suppression mechanism. Rapid Comm. Mass Spectrom. 23, 3077-3082 (2009).
  20. Knochenmuss, R., Karbach, V., Wiesli, U., Breuker, K., Zenobi, R. The matrix suppression effect in matrix-assisted laser desorption/ionization: application to negative ions and further characteristics. Rapid Commun. Mass Spectrom. 12, 529-534 (1998).
  21. Puolitaival, S. M., Burnum, K. E., Cornett, D. S., Caprioli, R. M. Solvent-free matrix dry-coating for MALDI imaging of phospholipids. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 19, 882-886 (2008).
  22. Hankin, J. A., Barkley, R. M., Murphy, R. C. Sublimation as a Method of Matrix Application for Mass Spectrometric Imaging. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 19, 1646-1652 (2007).
  23. Grove, K. J., Frappier, S. L., Caprioli, R. M. Matrix pre-coated MALDI MS targets for small molecule imaging in tissues. J. Am. Soc. Mass Spectrom. 22, 192-195 (2011).
  24. Fuchs, B., Süss, R., Schiller, J. An update of MALDI-TOF mass spectrometry in lipid research. Prog. Lipid Res. 49, 450-475 (2010).
  25. Murphy, R. C., Hankin, J. A., Barkley, R. M., Zemski Berry, K. A. MALDI imaging of lipids after matrix sublimation/deposition. Biochim. Biophys. Acta. 1811, 970-975 (2011).
  26. Vermillion-Salsbury, R. L., Hercules, D. M. 9-Aminoacridine as a matrix for negative mode matrix-assisted laser desorption/ionization. Rapid Commun. Mass Spectrom. 16, 1575-1581 (2002).
  27. Hu, C., et al. Analytical strategies in lipidomics and applications in disease biomarker discovery. J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 877, 2836-2846 (2009).
  28. Miura, D., et al. Ultrahighly sensitive in situ metabolomic imaging for visualizing spatiotemporal metabolic behaviors. Anal. Chem. 82, 9789-9796 (2010).
  29. Cerruti, C. D., Benabdellah, F., Laprevote, O., Touboul, D., Brunelle, A. MALDI Imaging and Structural Analysis of Rat Brain Lipid Negative Ions with 9-Aminoacridine Matrix. Anal. Chem. 84, 2164-2171 (2012).
  30. Astigarraga, E., et al. Profiling and Imaging of Lipids on Brain and Liver Tissue by Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry Using 2-Mercaptobenzothiazole as a Matrix. Anal. Chem. 80, 9105-9114 (2008).
  31. Whitehead, S. N., et al. Imaging mass spectrometry detection of gangliosides species in the mouse brain following transient focal cerebral ischemia and long-term recovery. PloS one. 6, e20808 (2011).
  32. Cornett, D. S., Frappier, S. L., Caprioli, R. M. MALDI-FTICR imaging mass spectrometry of drugs and metabolites in tissue. Anal. Chem. 80, 5648-5653 (2008).
  33. Deininger, S. O., et al. Normalization in MALDI-TOF imaging datasets of proteins: practical considerations. Anal. Bioanalyt. Chem. 401, 167-181 (2011).
  34. Le, C. H., Han, J., Borchers, C. H. Dithranol as a MALDI matrix for tissue imaging of lipids by Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry. Anal. Chem. 84, 8391-8398 (2012).
  35. Han, J., Schey, K. L. MALDI Tissue Imaging of Ocular Lens α-Crystallin. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 2990-2996 (2006).
  36. Schwartz, S. A., Reyzer, M. L., Caprioli, R. M. Direct tissue analysis using matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry: practical aspects of sample preparation. J. Mass Spectrom. 38, 699-708 (2003).
  37. Chen, Y., et al. Imaging MALDI mass spectrometry of sphingolipids using an oscillating capillary nebulizer matrix application system. Meth. Mol. Biology. 656, 131-146 (2010).
  38. Han, J., et al. Towards high throughput metabolomics using ultrahigh field Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry. Metabolomics. 4, 128-140 (2008).
  39. Smith, C. A., et al. METLIN: a metabolite mass spectral database. Ther. Drug Monit. 27, 747-751 (2005).
  40. Wishart, D. S., et al. HMDB: a knowledgebase for the human metabolome. Nucleic Acids Res. 37, D603-D610 (2009).
  41. Hoteling, A. J., Erb, W. J., Tyson, R. J., Owens, K. G. Exploring the importance of the relative solubility of matrix and analyte in MALDI sample preparation using HPLC. Anal. Chem. 76, 5157-5164 (2004).
  42. Hoteling, A. J., Mourey, T. H., Owens, K. G. Importance of solubility in the sample preparation of poly(ethylene terephthalate. for MALDI TOFMS. Anal. Chem. 77, 750-756 (2005).
  43. Shroff, R., Rulísek, L., Doubsky, J., Svatos, A. Acid-base-driven matrix-assisted mass spectrometry for targeted metabolomics. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 106, 10092-10096 (2009).
  44. Eikel, D., et al. Liquid extraction surface analysis mass spectrometry (LESA-MS) as a novel profiling tool for drug distribution and metabolism analysis: the terfenadine example. Rapid Comm. Mass Spectrom. 25, 3587-3596 (2011).
  45. Sadeghi, M., Vertes, A. Crystallite size dependence of volatilization in matrix-assisted laser desorption ionization. Appl. Surf. Sci. 127 - 129, 226-234 (1998).
  46. O'Connor, P. B., Costello, C. E. Internal Calibration on Adjacent Samples (InCAS) with Fourier Transform Mass Spectrometry. Anal. Chem. 72, 5881-5885 (2000).
  47. Jing, L., Amster, I. J. An improved calibration method for the matrix-assisted laser desorption/ionization-Fourier transform ion cyclotron resononance analysis of 15N-metabolically- labeled proteome digests using a mass difference approach. Eur. J. Mass Spectrom. 18, 269-277 (2012).
  48. Zhang, L. -K., Rempel, D., Pramanik, B. N., Gross, M. L. Accurate mass measurements by Fourier transform mass spectrometry. Mass Spectrom. Rev. 24, 286-309 (2005).
  49. Clemis, E. J., et al. Quantitation of spatially-localized proteins in tissue samples using MALDI-MRM imaging. Anal. Chem. 84, 3514-3522 (2012).
  50. Schwamborn, K., Caprioli, R. M. Molecular imaging by mass spectrometry--looking beyond classical histology. Nat. Rev. Cancer. 10, 639-646 (2010).
  51. Oppenheimer, S. R., Mi, D., Sanders, M. E., Caprioli, R. M. Molecular analysis of tumor margins by MALDI mass spectrometry in renal carcinoma. J. Proteome Res. 9, 2182-2190 (2010).

Tags

Grundprotokollet öga molekylär avbildning kemi teknik analytisk masspektrometri matris assisterad laser desorption / jonisering (MALDI) tandem masspektrometri lipid vävnad avbildning bovin lins ditranol matris FTICR (Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance)
Dithranol som matris för Matrix Assisted Laser Desorption / Ionization Imaging på en Fourier Trans ion Cyclotron Resonance Mäss Spectrometer
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Le, C. H., Han, J., Borchers, C. H.… More

Le, C. H., Han, J., Borchers, C. H. Dithranol as a Matrix for Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Imaging on a Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometer. J. Vis. Exp. (81), e50733, doi:10.3791/50733 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter