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Behavior

कृंतक में Orofacial Nociceptive प्रतिक्रियाओं के उपाय के रूप में भोजन की अवधि

Published: January 10, 2014 doi: 10.3791/50745
Automatic Translation
1, 1
1Department of Biomedical Sciences, Texas A&M University Baylor College of Dentistry

Summary

भोजन की अवधि में एक लंबा होना ऑर्फेशियल दर्द के साथ मनुष्यों के गार्डिंग व्यवहार के समान कृन्तकों में ऑर्फेशियल अस्वीकार्य व्यवहार का प्रतिनिधित्व करता है। भोजन एक ऐसा व्यवहार है जिसके लिए कोई प्रशिक्षण या पशु हेरफेर की आवश्यकता नहीं होती है, कॉर्टिकल भागीदारी की आवश्यकता होती है, और अन्य प्रयोगात्मक रूप से प्रेरित व्यवहारों के साथ प्रतिस्पर्धा नहीं कर रहा है, इस परख को वैकल्पिक पलटा या ऑपरेंट माप से अलग करता है।

Abstract

भोजन की अवधि में एक लंबा orofacial यांत्रिक हाइपरएल्जेसिया में वृद्धि को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है जिसमें ओरोफेशियल दर्द के साथ मनुष्यों के गार्डिंग व्यवहार में समानताएं हैं। भोजन की अवधि को मापने के लिए अनर्गल चूहों को लगातार ध्वनि तनु, कंप्यूटरीकृत फीडिंग मॉड्यूल में दिनों से हफ्तों के लिए रखा जाता है ताकि फीडिंग व्यवहार रिकॉर्ड किया जा सके। ये ध्वनि-तनु कक्ष चाउ गोली डिस्पेंसर से लैस हैं। डिस्पेंसर में गर्त के तल पर रखे फोटोबीम के साथ एक गोली गर्त होती है और जब एक कृंतक फीडर गर्त से एक गोली निकालता है तो इस बीम को अब अवरुद्ध नहीं किया जाता है, कंप्यूटर को एक और गोली छोड़ने का संकेत देता है। कंप्यूटर उस तारीख और समय को रिकॉर्ड करता है जब छर्रों को गर्त से लिया गया था और इस डेटा से प्रयोगकर्ता भोजन मापदंडों की गणना कर सकता है। भोजन के मापदंडों की गणना करते समय एक भोजन को पिछले काम के आधार पर परिभाषित किया गया था और 10 मिनट (दूसरे शब्दों में जब जानवर 10 मिनट के लिए नहीं खाता है जो जानवर के भोजन का अंत होगा) पर भी न्यूनतम भोजन का आकार 3 छर्रों पर सेट किया गया था। भोजन की अवधि, भोजन की संख्या, भोजन का सेवन, भोजन का आकार और अंतर-भोजन अंतराल की गणना सॉफ्टवेयर द्वारा किसी भी समय अवधि के लिए की जा सकती है जो ऑपरेटर की इच्छा है। भोजन मापदंडों में से जो भोजन की अवधि की गणना की जा सकती है, को नर चूहों और चूहों और मादा चूहों में ओरोफेशियल एनओसी का एक निरंतर गैर-निवास जैविक मार्कर दिखाया गया है। भोजन अवधि माप मात्रात्मक हैं, कोई प्रशिक्षण या पशु हेरफेर की आवश्यकता होती है, कॉर्टिकल भागीदारी की आवश्यकता होती है, और अन्य प्रयोगात्मक रूप से प्रेरित व्यवहार के साथ प्रतिस्पर्धा नहीं करते हैं। ये कारक इस परख को अन्य ऑपरेंट या रिफ्लेक्स तरीकों से अलग करते हैं जो ओरोफेशियल एनओसी रिकॉर्ड करने के लिए हैं।

Introduction

पशु मॉडल दर्द और orofacial क्षति और या सूजन1,2के साथ जुड़े nociception अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, लेकिन उचित पशु मॉडल की कमी तंत्र की एक अधूरी समझ में परिणाम है । हालांकि वर्तमान मॉडल हमें तीव्र और पुरानी orofacial दर्द में शामिल विभिन्न तंत्र को समझने में मदद करते हैं, इन पशु मॉडलों के लिए ताकत और कमजोरियां हैं।

कई मॉडल छोटी अवधि के लिए व्यवहार निषेधात्मक प्रतिक्रियाओं को मापते हैं। चेहरे की नसों के संकुचन के बाद फेस ग्रूमिंग एक ज्ञात व्यवहार प्रतिक्रिया है3. अन्य अध्ययनों ने चेहरे को इप्सिल्टरल फोर या हिंडपंजा के साथ रगड़ने के साथ-साथ टेम्पोरोमंडिबुलर संयुक्त (टीएमजे) या लिप4-7में फॉर्मेलिन इंजेक्शन का प्रशासन करने के बाद सिर की फंकिंग को मापा। सिर वापसी विलंबता न्यसेप्टिव व्यवहार को मापने के लिए एक और मॉडल है जहां एक संशोधित पूंछ झटका एनाल्जेसिया मीटर का उपयोग चूहे 8 के मुंडा वाइब्रिसे पैड पर गर्मी लगाने के बाद नोसेप्टिव प्रतिक्रिया(यानी सिर वापसी) को निर्धारित करने के लिए कियाजाताहै। टीएमजे9में ग्लूटामेट इंजेक्शन लगने के बाद डिगास्ट्रिक और मैसेस्टर मांसपेशी गतिविधि को भी दर्द के सहसंबद्ध के रूप में दर्ज किया गया है । एक अन्य अध्ययन में सूजन टीएमजे के साथ पुरुष और मादा चूहों में अस्वीकार्य प्रतिक्रियाओं का आकलन करने के लिए नींद के मापदंडों में परिवर्तन मापा गया है, इन मापदंडों में नींद विलंबता, रैपिड-आई-मूवमेंट (रेम), गैर-रेम नींद का प्रतिशत, और रेम स्लीप10का प्रतिशत शामिल है। अधिकांश पशु मॉडल जो व्यवहारात्मक असंगत प्रतिक्रियाओं को मापते हैं, थोड़ी समय सीमा का उपयोग करते हैं, यानी मिनट प्रति दिन11-14घंटे तक। इसके अलावा, अधिकांश पशु मॉडल परीक्षण प्रकाश चरण के दौरान और एक रात के जानवर में होता है, चूहे की तरह, यह तनाव पैदा कर सकता है जो15-18के परिणामों को भ्रमित कर सकता है। उपरोक्त परख अलग-अलग ओरिक्षक परिस्थितियों में लेकिन कम अवधि के लिए नोसिप्टिव प्रतिक्रिया को मापता है और इसलिए केवल तीव्र विकारों का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है। एक वैकल्पिक परख मध्यम अवधि के nociception के एक उपाय के रूप में चेहरे की अभिव्यक्ति का इस्तेमाल किया है, लेकिन इस पद्धति व्यक्तिपरक19हो सकता है ।

लगातार या पुरानी ओरोफेशियल एनओसी का मूल्यांकन करने के लिए कुछ लोगों ने तंत्रिका कसना या टीएमजे सूजन3,20के अधीन जानवरों की यांत्रिक संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए त्वचा की सतह पर वॉन फ्रे फिलामेंट के अनुप्रयोग का उपयोग किया है। लिवरमैन एट अल 2009 ने चूहों की मालिश करने वाले मांसपेशी 21,22में सीएफए इंजेक्शन के बाद ग्रेडेड मोनोफिलामेंट का उपयोग करके निकासी प्रतिक्रियाओं को मापा। Yamazaki एट अल 2008 सीएफए के साथ TMJ इंजेक्शन और फिर 14 दिनों से अधिक यांत्रिक या गर्मी या ठंड उत्तेजना TMJ क्षेत्र पर लागू करने के लिए मात्रात्मक nociceptive व्यवहार। दुर्भाग्य से, इन nociceptive व्यवहार परख पशु संयम है, जो तनाव हार्मोन, सीखने या वैकल्पिक व्यवहार है कि मापा परिणामों के साथ हस्तक्षेप कर सकते है उत्पादन शामिल हैं ।

दांतों में नोक - चूज को मापने के लिए मॉडल जबड़े के उद्घाटन पलटा का उपयोग करते हैं लेकिन यह विधि अविश्वसनीय23 या गलत24हो सकती है । इलेक्ट्रोमायोग्राफिक गतिविधि का उपयोग दांतों कीनोक-पाईको मापने के लिए किया गया है, लेकिन इस विधि के लिए आमतौर पर यह आवश्यक है कि जानवर बेहोश हो जाए, हालांकि एक अध्ययन में दांत की नोक-चूत की स्वतंत्र रूप से चलती चूहों में जांच की गई थी26। 2008 में, खान ने संवेदनशील तनाव गेज27 का उपयोग करके दंत एनओसी और मास्टिकेटरी फंक्शन के बीच संबंधों का अध्ययन किया लेकिन इस काटने की अवधि मॉडल को सामान्य गतिविधि 28से जानवर को रोकने की आवश्यकता होती है। काटने बल मनुष्यों में दांत दर्द का एक विश्वसनीय उपाय है, लेकिन क्योंकि चूहों प्रशिक्षण और/या संयम काटने बल को मापने की आवश्यकता है तनाव का एक स्रोत शुरू की है जो संदिग्ध शारीरिक महत्व29-31 के साथ निष्कर्षों का उत्पादन कर सकते है

संयम और तनाव की कुछ सीमाओं को एक ओपेरा डिजाइन का उपयोग करके नष्ट व्यवहार का आकलन करके दूर किया जा सकता है । एक ऑपरेंट मॉडल32-35ओरोफेशियल एनओसी का मूल्यांकन और विशेषता के लिए असहज तापमान से बचने का उपयोग करता है। यह इनाम-संघर्ष मॉडल मीठा दूध के इनाम पर आधारित है ताकि कृंतक को गर्म या ठंडा थर्मल प्रोब34,36के खिलाफ स्वेच्छा से अपना चेहरा रखने के लिए प्रेरित किया जा सके। हालांकि, परीक्षण पशु प्रशिक्षण की आवश्यकता है, लेकिन परख की एक ताकत डेटा एक स्वचालित फैशन में एकत्र किया जाता है ।

फिर भी एक अन्य पशु मॉडल ने एनोफ़ेर-प्रेरित पीसन डिसफंक्शन37के सूचकांक के रूप में एनोएशन-प्रेरित डिसफंक्शन का उपयोग किया। हालांकि, कृंतक एक ट्यूब तक ही सीमित है और इसका एकमात्र भाग बाहर निकलने के लिए एक डोवेल के माध्यम से कुचलना है। इस मॉडल का एक लाभ यह है कि यह चूहों में तीव्र या पुरानी जबड़े की चोट के बाद जबड़े के कार्य को मापता है। हालांकि, कृंतक सीमित है, जो एक भ्रामक वैकल्पिक प्रतिस्पर्धी व्यवहार जोड़ता है, यानी बच, जो तनावपूर्ण होगा और इस प्रकार नोक-एथनी परख परिणामों को प्रभावित कर सकता है।

भोजन की अवधि का उपयोग टीएमजे गठिया38 -41, दांतों के लुगदी एक्सपोजर42और मांसपेशियों कोनुकसानपहुंचाने वाले जानवरों में नोक - माप को मापने के लिए किया गया है। एक कृंतक जिसने जानवर द्वारा भोजन शुरू करने के बाद ओरोफेशियल एनओसी का अनुभव किया। टीएमजे दर्द का अनुभव करने वाले रोगियों को भी अपने भोजन को चबाने में अधिक समय लगता है और जब टीएमजे दर्द44-46कम हो जाता है तो चक्र की लंबाई कम हो जाती है । जब टीएमजे दर्द मौजूद होता है तो भोजन की अवधि की लंबी होने की उम्मीद "गार्डिंग व्यवहार" होने की उम्मीद है, जिसे परिचालन रूप से नकसीर व्यवहार47के रूप में परिभाषित किया गया है।

भोजन की अवधि नर और मादा चूहों में 19 दिनों तक और पुरुष चूहों में 6 दिनों (सबसे लंबी अवधि परीक्षण) के लिए एक गैर-विकास विधि का उपयोग करके टीएमजे एनोकैसेप्शन को मापता है और इसे38-41के जैविक मार्कर के रूप में वर्णित किया जा सकता है। समर्थन में कि भोजन की अवधि नोसेप्टिव प्रतिक्रियाओं को मापता है, औषधीय हस्तक्षेप द्वारा एनओसी को कम किया जा सकता है जिससे जानवर के भोजन की अवधि सामान्य38,40,41पर लौट सकती है। इसकी पुष्टि तब भी हुई जब कैप्सैसिन का उपयोग करके नष्ट किए गए नंसिमेटिव न्यूरॉन्स; तंत्रिका विनाश के बाद टीएमजे 40 में सीएफए के इंजेक्शन के बाद जानवरों के भोजन की अवधि में वृद्धि नहीं की गई थी।

नीचे भोजन अवधि डेटा प्राप्त करने और सांख्यिकीय रूप से विश्लेषण करने के तरीके पर प्रोटोकॉल है।

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Protocol

इस मॉडल में चूहों या चूहों को भोजन और पानी विज्ञापन लिबिटमदिया जाता था । टेक्सास एएंडएम यूनिवर्सिटी बायलोर कॉलेज ऑफ डेंटिस्ट्री इंस्टीट्यूशनल एनिमल केयर एंड यूज कमेटी ने सभी प्रायोगिक प्रोटोकॉल को मंजूरी दे दी । नीचे विशिष्ट सेटिंग्स इटालिक्स में दिखाए जाते हैं और विशेष रूप से चूहा टीएमजे गठिया मॉडल के लिए उपयोग किए जाते हैं। चूहों का उपयोग इस मॉडल में भी किया जा सकता है और वैकल्पिक दांत दर्द और मायोजेनिक ओरोफेशियल दर्द पशु मॉडल का उपयोग42,43के साथ - साथ किया जा सकता है।

1. सॉफ्टवेयर सेटिंग्स

  1. फीडर इकाइयों के लिए पशु मॉनिटर सॉफ्टवेयर को कंप्यूटर पर लोड करें।
  2. एनिमल्स मॉनिटर सॉफ्टवेयर अब आइकन पर क्लिक करके खोला जाता है और फ़ाइल मेनू चयन के तहत "कॉन्फ़िगरेशन" पुल डाउन विकल्प चुनें।
  3. "एनिमल मॉनिटर कॉन्फ़िगरेशन" विंडो में "पैलेट डिलीवर इनपुट"(चित्रा 1A)नामक बॉक्स को अनियंत्रित कर दिया गया है।
    नोट: इस बॉक्स को आमतौर पर डिफ़ॉल्ट रूप से कारखाने में चेक किया जाता है। इस विकल्प का चयन करें। एक बार जांचकर्ता इस विकल्प को डिसेलेक्ट कर देता है तो एक गोली को तिरस्कृत किए जाने के बजाय गर्त से एक गोली को हटाकर परिणाम दर्ज किए जा रहे हैं ।
    नोट: जब "स्वचालित फ़ाइल नामकरण" बॉक्स की जांच की जाती है तो सॉफ्टवेयर स्वचालित रूप से फ़ाइलों(चित्रा 1A)का नाम देगा। इस बॉक्स को आमतौर पर डिफ़ॉल्ट रूप से कारखाने में चेक किया जाता है।
  4. टाइमर लाइट्स को 06:00 (6:00 बजे) पर चालू करने के लिए सेट करें और 20:00 (8:00 बजे) पर बंद करें।
    नोट: फीडर इकाइयों के लिए हार्डवेयर को संशोधित किया गया था ताकि बक्से के भीतर रोशनी सॉफ्टवेयर द्वारा नियंत्रित न हो, बल्कि एक अलग 24 घंटे टाइमर के बजाय वायर्ड हो। इस प्रकार, विन्यास सॉफ्टवेयर पर इंगित "हाउस लाइट" इन उदाहरणों में कार्यात्मक नहीं था।
  5. एडिट को नीचे मेनू खींचें और प्रयोग चुनें। शीर्षक के साथ एक खिड़की "बॉक्स 01-" प्रकट होता है(चित्रा 1B)।
  6. फाइल नाम इनपुट करें जिसके तहत इस विंडो के भीतर डेटा सेव हो जाएगा।
    नोट: यदि कोई फ़ाइल का नाम दर्ज नहीं किया जाता है तो डेटा फ़ाइलों का नाम सॉफ्टवेयर द्वारा स्वचालित रूप से हो जाएगा। प्रयोग का विवरण इस विंडो में जोड़ा जा सकता है और डेटा फ़ाइलों के साथ सहेजा जा सकता है। विंडो पर जानकारी को सहेजा और बाद के प्रयोगों के लिए भी इस्तेमाल किया जा सकता है।
  7. "प्रयोग लंबाई (दिन): नामक प्रवेश बॉक्स में प्रयोग के कुल समय से अधिक संख्या दर्ज करें।
    नोट: यह सुनिश्चित करेगा कि जब तक प्रयोग पूरा नहीं हो जाता, तब तक सॉफ्टवेयर डेटा बचाता है, एक गलती इस मूल्य को बहुत कम सेट करने में हो सकती है, जो सॉफ्टवेयर को डेटा रिकॉर्ड करने से रोक देगी, भले ही जानवर अभी भी फीडिंग मॉड्यूल में हों।
  8. "एक दिन में घंटे की संख्या" शीर्षक से प्रवेश बॉक्स में 24 दर्ज करें ।
    नोट: लंबाई को प्रयोगकर्ता के विनिर्देशों में संशोधित किया जा सकता है।
  9. "भोजन अवधि अंत मापदंड (न्यूनतम): नामक बॉक्स में 10 दर्ज करें
    नोट: चूहों के लिए एक भोजन पिछले अध्ययनों के आधार पर भोजन के मापदंड के 10 मिनट के अंत का उपयोग करके परिभाषित किया गया था48 (यानी एक भोजन को पहले और बाद में कोई छर्रों की 10 मिनट की अवधि से कोष्ठक किया गया था) और न्यूनतम भोजन का आकार इस सॉफ्टवेयर पैकेज में भोजन प्रति तीन छर्रों पर सेट किया गया था।
  10. "पैलेट साइज (मिलीग्राम) " नामक बॉक्स में 45 दर्जकरें। यदि कोई व्यक्ति इस विंडो के भीतर चूहों इनपुट 20 का उपयोग करना चाहता था।
  11. चूहों के लिए फीडर डिस्पेंसर हॉपर में 45 मिलीग्राम कृंतक चाउ छर्रों को जोड़ें।
    नोट: चूहों के लिए चाउ हॉपर में 20 मिलीग्राम कृंतक चाउ छर्रों को जोड़ें।
  12. प्रयोग विंडो के "चरण" अनुभाग में "नाम" क्षेत्र में और "घंटे के #" क्षेत्र प्रकार 24(चित्रा 1B)में शब्द दिवस दर्ज करें ।
    नोट: "चरण" अनुभाग के नीचे दो बड़े खुले फ़ील्डहैं। पहला बड़ा खुला मैदान पिछले "चरण" और "नाम" क्षेत्रों में दर्ज पाठ से आबाद होगा।
  13. अगले बड़े खुले क्षेत्र में "दिन चरण" हेडर "नाम" शब्द प्रकाश हकदार क्षेत्र में दर्ज करें और "प्रतिशत" संख्या ६० हकदार क्षेत्र में दर्ज करें ।
    नोट: यह दर्ज पाठ नीचे दिए गए बड़े क्षेत्र को पॉप्युलेट करेगा।
  14. अगले हकदार क्षेत्र में दर्ज करें "नाम" शब्द डार्क और हकदार क्षेत्र में दर्ज "प्रतिशत" संख्या ४० । नोट: इन प्रविष्टियों के साथ दिन के 60% प्रकाश चरण के लिए जिम्मेदार ठहराया जाएगा और 40% अंधेरे चरण के लिए जिम्मेदार ठहराया जाएगा। जब सॉफ्टवेयर भोजन पैटर्न की गणना करता है तो इस जानकारी का उपयोग किया जाएगा। इन सेटिंग्स एक 14:10 प्रकाश/अंधेरे चक्र पर रखा जाता है कि साइकिल चालन महिला जानवरों के लिए विशिष्ट ।
  15. "इस तरह सभी बक्से सेट" बटन का चयन करें । इस जानकारी को सहेजें और फिर ओके मारो।
  16. "स्टार्ट बॉक्स" स्क्रीन दिखाई देती है, ठीक(चित्रा 1C)को सक्रिय करने और हिट करने के लिए फीडर का चयन करें।
  17. इसके बाद एनिमल मॉनिटर रन-टाइम विंडो भोजन पैटर्न डेटा(चित्रा 1D)के साथ दिखाई देगी।
    नोट: चूहे के वर्तमान स्वास्थ्य को निर्धारित करने के लिए इस खिड़की से "# ऑफ छर्रों को तिरस्कृत" की निगरानी और रिकॉर्ड करें। एक स्वस्थ पुरुष चूहा जिसका वजन लगभग 300 ग्राम होता है, आमतौर पर एक दिन में 300-800 45 मिलीग्राम छर्रों के बीच खाएंगे।
  18. फ़ाइलें दैनिक उत्पन्न होती हैं और स्वचालित रूप से सहेजी जाती हैं जिनमें एक है। सीएसवी एक्सटेंशन। भोजन का सेवन, भोजन संख्या, भोजन की अवधि, भोजन का आकार, या इंटरमील अंतराल जैसे भोजन पैटर्न डेटा को पुनः प्राप्त करने के लिए इन फ़ाइलों को खोलें। इन भोजन पैटर्न के लिए अंतराल पूरे दिन के लिए या दिन के एक चरण के लिए जैसे अंधेरे और प्रकाश चरण की गणना की जा सकती है। जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, सेटिंग्स 14:10 प्रकाश/अंधेरे चक्र के लिए हैं । जब प्रत्येक गोली को गर्त से हटाया गया था, तब का कच्चा डेटा भी कच्चे के रूप में दर्ज किया जाता है । सीएसवी फाइल।
    नोट: सॉफ्टवेयर के पुराने संस्करणों में 3 छर्रों के न्यूनतम भोजन आकार का उपयोग गणना में उत्पन्न करने के लिए नहीं किया जाता है। सीएसवी फाइल।  इसके अलावा, पुराने सॉफ्टवेयर का उपयोग करके औसत भोजन अवधि प्राप्त करने के लिए आपको औसत भोजन अवधि कॉलम में मूल्यों से 10 मिनट घटाना होगा। सीएसवी फाइल।
    जब सॉफ्टवेयर काम कर रहा है तो ऑपरेटर मैन्युअल रूप से फ़ाइल पुल डाउन मेनू विकल्प का चयन कर सकता है और दैनिक चयन "कच्चे डेटा को बचाएं"। इससे पूरे प्रयोग के बजाय 24 घंटे की अवधि के लिए रॉ डेटा की बचत होगी । इस कच्चे डेटा को उपयोगकर्ता के विवेक पर वैकल्पिक सॉफ्टवेयर द्वारा संसाधित किया जा सकता है।
    नोट: दिखाए गए परिणामों में हमने 3 छर्रों के न्यूनतम भोजन आकार को शामिल करने के लिए वैकल्पिक सॉफ्टवेयर का उपयोग किया।

2. भोजन अवधि परख

  1. फोटोबीम कंप्यूटर-सक्रिय पैलेट फीडर से लैस ध्वनि-तनु कक्षों में व्यक्तिगत चूहों को रखें।
    नोट: इन खिला इकाइयों में स्नातक की उपाधि प्राप्त पानी की बोतलें और अपशिष्ट पैन होते हैं जिसमें मोटी शोषक कागज की एक शीट रखी जाती है। फीडर डिस्पेंसर हॉपर में 45 मिलीग्राम कृंतक चों छर्रों चूहों के लिए जोड़ा जा सकता है या चूहों के लिए 20 मिलीग्राम कृंतक चाउ छर्रों को जोड़ा जा सकता है। चाउ छर्रों को वी आकार के फीडिंग गर्त में तिरस्कृत किया जाता है और इस द्रोणिका के तल पर एक फोटोबीम है। इस फोटोबीम को तोड़कर गर्त में तिरस्कृत एक गोली का पता लगाया जाएगा। एक बार जब एक चूहा फीडर गर्त से इस गोली को हटा देता है तो फोटोबीम बहाल हो जाता है और यह कंप्यूटर को एक और गोली छोड़ने का संकेत देता है। फोटोबीम की बहाली भी तारीख और समय रिकॉर्ड करने के लिए कंप्यूटर चलाता है और छर्रों की एक चल मिलान तिरस्कृत रहता है । इसके बाद मेड असोसॉय इंक सॉफ्टवेयर का उपयोग करके दिन के किसी भी हिस्से के दौरान भोजन का सेवन, भोजन संख्या, भोजन अवधि, भोजन का आकार, या इंटरमील अंतराल निर्धारित करने के लिए छर्रों की इस संख्या का विश्लेषण किया जाता है। फिर से कच्चे । सीएसवी डेटा फ़ाइल का विश्लेषण बाहरी सॉफ्टवेयर39,40,49-51द्वारा किया जा सकता है ।
  2. खाया छर्रों की कुल संख्या रिकॉर्ड, पानी की मात्रा और प्रयोग के दौरान चूहों के सामान्य स्वास्थ्य विचार करने के लिए जानवरों के वजन।
  3. पानी की बोतलें कुल्ला और ताजा पानी के साथ दैनिक भरने और जरूरत होने पर फीडर हॉपर में चाउ जोड़ें।
  4. डंप अपशिष्ट पैन और पिंजरे के नीचे मोटी शोषक कागज दैनिक और फीडर के भाग चलती से धूल उड़ा दैनिक उच्च दबाव हवा का उपयोग कर ।
    नोट: व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण(जैसे गाउन, दस्ताने, मास्क और मास्क) की आवश्यकता होती है।
  5. प्रयोग पूरा होने के बाद फर्श, बेकार पैन और पानी की बोतलें निकालें और इन घटकों को धो लें। इसके अलावा, फीडिंग इलेक्ट्रॉनिक्स को कैजिंग वॉश से हाथ से या डिशवॉशर में निकाल दें।

3. टीएमजे गठिया का शामिल

  1. प्रयोग से कम से कम 4 दिन पहले फीडरों में जानवरों को रखें।
    नोट: इस डेटा को बेसलाइन फीडिंग व्यवहार प्राप्त करने के लिए पूर्वदिन के रूप में सूचित किया जाएगा। फिर इलाज के लिए फीडर से जानवरों को निकाल दिया जाता है। उपचार का एक प्रकार एक गठिया TMJ प्रेरित करने के लिए किया गया था। इस मॉडल के लिए चूहों को 08:00 (यानी प्रकाश चरण की शुरुआत) पर पूर्ण फ्रायंड के एडजुवेंट (सीएफए) के साथ इंजेक्ट किया जाताहै, क्योंकि चूहों को आइसोफ्लुरेन (5% प्रवाह) के साथ एनेस्थेटाइज्ड किया जाता है।
  2. प्रत्येक टीएमजे के पेरिआरटिकुलर स्पेस में द्विपक्षीय रूप से 50 एल में 250 मिलीग्राम सीएफए इंजेक्ट करें।
    नोट: उदाहरण में(चित्रा 2)50 एल में सीएफए के 250 मिलीग्राम प्रत्येक TMJ में इंजेक्शन था, लेकिन खुराक के रूप में कम के रूप में 10 मिलीग्राम मात्रा में 15 माइक्रोन के रूप में कम समय52की छोटी अवधि में प्रभावी हैं.
  3. 0.9% खारा के 50 एल के साथ नियंत्रण चूहों TMJ इंजेक्ट करें। नोट: संज्ञाहरण के शामिल होने के बाद सभी जानवर 5 मिनट या उससे कम समय के भीतर मोबाइल थे। इस घटना में कि सीएफए की एक छोटी खुराक कम मात्रा में दी जाती है नियंत्रण चूहों को नमकीन की इसी मात्रा प्राप्त होगी।

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Representative Results

भोजन की अवधि ओरोफेशियल दर्द का एक व्यवहारसंबंध है और भोजन की अवधि माप टीएमजे गठिया(चित्रा 2)और दांत क्षय(चित्रा 3)वाले जानवरों पर लागू किया गया है। एक प्रयोग में, चूहों सीएफए की एक उच्च २५० मिलीग्राम खुराक प्रशासन के बाद TMJ गठिया था और इस उपचार 19 दिनों के लिए भोजन की अवधि में एक महत्वपूर्ण वृद्धि प्रेरित(चित्रा 2)। प्रत्येक टीएमजे संयुक्त में इंजेक्ट की गई सीएफए (10 मिलीग्राम) की एक कम खुराक ने केवल 2-3 दिनों52 के लिए भोजन की अवधि में एक छोटी वृद्धि का उत्पादन किया जो इस भोजन अवधि परख का उपयोग करके सीएफए प्रशासन के लिए एक खुराक प्रतिक्रिया का संकेत देता है। भोजन की अवधि orofacial क्षेत्र में nociceptive प्रतिक्रियाओं मापा, लेकिन घुटने के भीतर गठिया से एक प्रतिक्रिया का पता नहीं था(चित्रा 2)।

एक दूसरे प्रयोग में, भोजन की अवधि भी लुगदी जोखिम(चित्रा 3)के साथ चूहों में nociceptive प्रतिक्रियाओं का पता चला है । लुगदी के संपर्क में आने से दांतों का क्षय हुआ और मनुष्यों में दांतों में दर्द के लिए एक मॉडल था42. भोजन का सेवन, भोजन संख्या और भोजन के आकार जैसे अन्य भोजन पैटर्न, उतनी हद तक नहीं बदलते हैं और न ही भोजन की अवधि के रूप में लंबे समय तक इन अन्य भोजन पैटर्न का सुझाव देने वाली भोजन अवधि39के रूप में न्यौतापूर्ण प्रतिक्रिया के लिए संवेदनशील उपाय नहीं है। भोजन की अवधि काफी बढ़ जाती है के रूप में वहां भोजन की संख्या और भोजन के आकार में आम तौर पर महत्वहीन प्रवृत्तियों है कि भोजन का सेवन सामांय के पास जा रहा है जैसे कि इलाज जानवर के शरीर का वजन नकली या नियंत्रण जानवरों के बराबर है में परिणाम हैं ।

चित्रा 1 और पिछले मतलब और मानक विचलन डेटा38-42 में डेटा से एक ८०% शक्ति के साथ कम से 2 मिनट के उपचार समूहों के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर की गणना करने के लिए (ANOVA का उपयोग कर) के बारे में 9 जानवरों की आवश्यकता होगी/

Figure 1
चित्रा 1. पशु मॉनिटर सॉफ्टवेयर के स्क्रीन शॉट्स। पैनल 1A पशु मॉनिटर विन्यास खिड़की है। पैनल 1B वह विंडो है जो तब दिखाई देती है जब एडिट पुल डाउन मेनू का चयन किया जाता है और प्रयोग को इस मेनू से चुना जाता है। पैनल 1 सी वह विंडो है जो विशेष फीडर इकाइयों के चयनात्मक सक्रियण के लिए अनुमति देता है। पैनल 1D अगली विंडो है जो दिखाई देती है और एनिमल मॉनिटर का हकदार है। यह विंडो सक्रिय फीडर इकाइयों के लिए भोजन मापदंडों के लिए वास्तविक समय गणना दिखाती है। बड़ी छवि देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2। भोजन की अवधि को पुरुष चूहों में गठिया टेम्पोरोमंडिबुलर जोड़ों (टीएमजे) के साथ 19 दिनों के लिए काफी लंबा किया गया था। नियंत्रण समूह के लिए Sprague Dawley चूहों प्रत्येक TMJ (नमकीन/TMJ, n = 13) में ५० एल खारा का एक इंजेक्शन दिया गया । प्रायोगिक समूह में पूर्ण फ्रायंड के एडजुवेंट (सीएफए) के २५० ग्राम को टीएमजे (सीएफए/टीएमजे, एन = 14) या घुटने (घुटने/सीएफए, एन = 7) में इंजेक्ट किया गया था । भोजन अवधि डेटा इंजेक्शन से पहले एक दिन के लिए गणना की गई थी (0) और टीएमजे या घुटने के इंजेक्शन के बाद 1-21 (1, 2, 3, आदि)। इंजेक्शन की साइट को सत्यापित करने के लिए व्यवहार परीक्षण के बाद विच्छेदन द्वारा प्रत्येक संयुक्त की जांच की गई थी। मान SEM ± साधन के रूप में दिया जाता है । दो तरह से ANOVA दोहराया उपायों के साथ स्वतंत्र चर उपचार (खारा और सीएफए) और समय और निर्भर चर भोजन अवधि इन अध्ययनों में इस्तेमाल किया गया था । सीएफए उपचार, एफ (2, 31) = 4.7, पी<0.05 के लिए एक महत्वपूर्ण मुख्य प्रभाव देखा गया था। डंकर के पोस्ट हॉक टेस्ट का उपयोग करके डेटा का और विश्लेषण किया गया । एक = पी <0.05 के लिए एक तुलना नमकीन/TMJ समूह और सीएफए/TMJ समूह के बीच किया गया था । बी = पी<005 के लिए सीएफए/टीएमजे समूह और सीएफए/घुटने समूह के बीच तुलना की गई थी ।

Figure 3
चित्र 3। पुरुष स्प्राक डाले चूहों के छह मैक्सिलरी मोलर्स सामने आए और सर्जरी के बाद 6 दिनों के लिए भोजन की अवधि मापी गई । नियंत्रण चूहों लुगदी जोखिम सर्जरी नहीं था, लेकिन संज्ञाहरण प्रशासित किया था । उपचार (नियंत्रण, एक्सपोजर) और समय और निर्भर चर भोजन अवधि के स्वतंत्र चर का उपयोग कर दोहराया उपायों के साथ दो तरह ANOVA भोजन अवधि डेटा का विश्लेषण करने के लिए इस्तेमाल किया गया था । लुगदी एक्सपोजर, एफ (1, 12) = 66, पी<0.001 के लिए एक महत्वपूर्ण मुख्य प्रभाव देखा गया था। डंकर के पोस्ट हॉक टेस्ट का उपयोग करके डेटा का और विश्लेषण किया गया । जब चूहा जो अपने मोलर्स उजागर किया था बनाम नियंत्रण की तुलना * = पी<0.05, **= पी<0.01 । मतलब ± SEM. प्रत्येक उपचार समूह में पांच चूहे थे ।

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Discussion

orofacial दर्द रिपोर्ट के साथ TMJ रोगियों को चबाने के समय में वृद्धि हुई है, जैसे कि, चबाने चक्र अब व्यक्ति45,53-56चबाने गया है लंबा । हमारे व्यवहार परख चूहों और चूहों में इसी तरह के परीक्षण के लिए अनुमति देता है जब भोजन अवधि३९मापने । हाल ही में एक अप्रकाशित अध्ययन का सुझाव दिया है कि वॉन Frey फिलामेंट परीक्षण भोजन अवधि माप की तुलना में अधिक संवेदनशीलता थी, एक लंबी अवधि के लिए एक महत्वपूर्ण परिवर्तन दिखा रहा है लेकिन वॉन Frey फिलामेंट परीक्षण एक पलटा प्रतिक्रिया घटक हो सकता है, जबकि भोजन की अवधि माप केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के क्षेत्रों द्वारा प्रसंस्करण की आवश्यकता है । इस प्रकार, संवेदनशीलता वॉन Frey फिलामेंट परीक्षणों के साथ अधिक हो सकता है, लेकिन प्रतिक्रिया, भाग में, एक पलटा प्रतिबिंबित कर सकता है । हालांकि, जिन दवाओं के केंद्रीय प्रभाव होते हैं, उनके साथ उपचार फिलामेंट परीक्षण परिणामों को संशोधित करता है जो परख का सुझाव देते हैं, केंद्रीय दर्द प्रसंस्करण57के कुछ पहलुओं को दर्शाता है।

भोजन की अवधि में परख में तिरस्कृत छर्रों की कुल संख्या दैनिक निगरानी की जानी चाहिए। एक पुरुष चूहा आम तौर पर 45 मिलीग्राम छर्रों के 400-800 निगलना होगा और एक मादा चूहा 300-600 छर्रों को निगलना होगा। इस घटना में कि दैनिक गोली मूल्य इन विशिष्ट मूल्यों से कम है प्रयोगकर्ता को फीडर इकाइयों की जांच करनी चाहिए, अगर गोली डिस्पेंसर गर्त से एक गोली को हटाने पर 5 छर्रों को छोड़ देता है; गोली हॉपर के पास गोली सेंसर (गर्त में नहीं) धूल भरा हो सकता है और सफाई की आवश्यकता हो सकती है। हालांकि मशीन 5 छर्रों गिर रहा है कंप्यूटर से संकेत मिलता है कि केवल एक गोली गिरा दिया गया था (कम गिनती दे) । इस प्रकार, चाहे पांच या एक गोली गर्त में है कंप्यूटर केवल एक घटना रिकॉर्ड करता है । सेंसर की सफाई के बाद फीडर गर्त से एक गोली को हटाने पर एक ही गोली को तिरस्कृत किया जाना चाहिए। वैकल्पिक रूप से, कोई भी सेंसर की जगह ले सकता है। यदि दैनिक गोली मूल्य इन विशिष्ट मूल्यों से अधिक है तो फीडिंग गर्त पर सेंसर धूल भरे हो सकते हैं और सफाई की आवश्यकता हो सकती है। सेंसर को साफ करें और अगले दिन यह निर्धारित करने के लिए जांच करें कि छर्रों की संख्या विशिष्ट सीमा के भीतर गिर गई है या नहीं।

भोजन की अवधि एक व्यवहार परख है जो प्रजातियों के मतभेदों से प्रभावित हो सकती है। एक पिछले अध्ययन में TMJ गठिया३९ के साथ चूहों का उपयोग कर चूहों के उपभेदों कि छर्रों ढेर होगा । चूहे फीडर गर्त से छर्रों को ले जाते और छर्रों को पिंजरे के कोने में और गोली खाने के बजाय बेकार पैन में छोड़ देते थे । होर्डिंग व्यवहार के कारण भोजन पैटर्न माप उस गति को प्रतिबिंबित नहीं करेगा जिस पर माउस खा रहा था और टीएमजे गठिया के साथ चूहों के यांत्रिक हाइपरएल्जेसिया के स्तर को प्रतिबिंबित नहीं करेगा। इस होर्डिंग व्यवहार के निवारण का एक तरीका पूर्व उपचार चरण में चूहों को स्क्रीन करना था। पिछले अध्ययनों से चूहों के बारे में 40-70% कुल छर्रों का 5% से अधिक ढेर होगा। इसके परिणामस्वरूप भोजन पैटर्न डेटा में महत्वपूर्ण परिवर्तन हुए। होर्डिंग समस्या को खत्म करने के लिए चूहों का पूर्वचयन किया गया ताकि वे अपने छर्रों के 5% से कम जमाखोरी करें। प्रयोग पूर्वचयनित जानवरों के साथ किए गए थे और पूरे प्रयोग में होर्डिंग व्यवहार पर नजर रखी गई थी। प्रयोग के किसी भी बिंदु के दौरान अपने कुल भोजन के सेवन का 5% से अधिक होर्डिंग वाले जानवरों को परिणामों से समाप्त कर दिया गया । इस चयन प्रक्रिया के साथ दो समस्याएं एक थीं, प्रयोग को पूरा करने के लिए जानवरों की संख्या प्राप्त करने के लिए पर्याप्त चूहों को प्रीस्क्रीन करने में समय लगता है और दूसरा, इस प्रक्रिया में बहुत सारे जानवरों की स्क्रीनिंग की आवश्यकता होती है, जिनमें से अधिकांश का उपयोग प्रयोग के लिए नहीं किया जाएगा जिसके परिणामस्वरूप अतिरिक्त लागत होती है।

अंत में भोजन की अवधि एक मात्रात्मक उपाय है जो प्रयोगकर्ता के लिए व्यक्तिपरक नहीं है। ऑपरेंट तरीकों की तरह खाने के लिए एक व्यवहार है कि कॉर्टिकल भागीदारी की आवश्यकता है, लेकिन खाने के कई पलटा माप के विपरीत है, जैसे खरोंच, वॉन Frey बाल, या गर्मी । भोजन की अवधि को मापते समय जानवर को परीक्षण से पहले प्रशिक्षित नहीं किया जाना चाहिए और न ही स्थिर या संभाला जाता है जो तनाव और वैकल्पिक व्यवहार को यौगिक कर सकता है। भोजन की अवधि माप निरंतर होते हैं इसलिए परीक्षण अंधेरे के साथ-साथ प्रकाश चरण में होता है, प्रकाश चरण में परीक्षण के विपरीत जब कृंतक सामान्य रूप से सोता है। भोजन अवधि माप अन्य तरीकों के विपरीत दिनों के लिए हो सकता है जहां परीक्षण विशिष्ट समय अंतराल पर संक्षेप में किया जाता है। ये फायदे भोजन की अवधि को सिर क्षेत्र में एनओसी के तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण बनाते हैं।

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Disclosures

खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Animal Monitor software Med Assoc. Inc SOF-710 East Fairfield, VT
Dustless Precision Pellets, Rodent, Grain-Based  Bio-Serv F0165 45 mg pellets, 50,000/box
Dustless Precision Pellets, Rodent, Grain-Based  Bio-Serv FO163 20 mg pellets
Complete Freund's Adjuvant Chondrex, Inc. 7001 No loger provides the 5 mg/ml concentration.  Can use CFA from other sources as long as the investigator consistently uses this source

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व्यवहार अंक 83 दर्द चूहा निशाचर मायोफेशियल ओरोफियल दांत टेम्पोरोमंडिबुलर संयुक्त (टीएमजे)
कृंतक में Orofacial Nociceptive प्रतिक्रियाओं के उपाय के रूप में भोजन की अवधि
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Kramer, P. R., Bellinger, L. L. Meal … More

Kramer, P. R., Bellinger, L. L. Meal Duration as a Measure of Orofacial Nociceptive Responses in Rodents. J. Vis. Exp. (83), e50745, doi:10.3791/50745 (2014).

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