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Behavior

Duración de la comida como medida de las respuestas nociceptivas orofaciales en roedores

Published: January 10, 2014 doi: 10.3791/50745
Automatic Translation
1, 1
1Department of Biomedical Sciences, Texas A&M University Baylor College of Dentistry

Summary

Un alargamiento en duración de la comida representa comportamiento nociceptivo orofacial en roedores similares al comportamiento de guarda de seres humanos con dolor orofacial. Comer es un comportamiento que no requiere entrenamiento ni manipulación animal, requiere participación cortical y no compite con otros comportamientos inducidos experimentalmente, distinguiendo este ensayo de mediciones alternativas de reflejos u operandos.

Abstract

Un alargamiento en duración de la comida se puede utilizar para medir un aumento en hiperalgesia mecánica orofacial que tiene semejanzas al comportamiento de guarda de seres humanos con dolor orofacial. Para medir la duración de la comida, las ratas desenfrenadas se mantienen continuamente en módulos de alimentación computarizados atenuados por sonido durante días o semanas para registrar el comportamiento de alimentación. Estas cámaras atenuadas por sonido están equipadas con dispensadores de pellets chow. El dispensador tiene un abrevadero de pellets con un fotohae colocado en la parte inferior del canal y cuando un roedor elimina un pellet del comedero, este haz ya no se bloquea, lo que indica a la computadora que deje caer otro pellet. La computadora registra la fecha y hora en que se tomaron los pellets del canal y a partir de estos datos el experimentador puede calcular los parámetros de la comida. Al calcular los parámetros de la comida, una comida se definió en base al trabajo anterior y se fijó en 10 min (en otras palabras, cuando el animal no come durante 10 min, que sería el final de la comida del animal) también el tamaño mínimo de la comida se estableció en 3 pellets. La duración de la comida, el número de comida, la ingesta de alimentos, el tamaño de la comida y el intervalo entre comidas pueden ser calculados por el software para cualquier período de tiempo que el operador desee. De los parámetros de alimentación que pueden ser calculados la duración de la comida se ha mostrado para ser un marcador biológico no invasor continuo del nociception orofacial en ratas y ratones masculinos y ratas femeninas. Las mediciones de la duración de las comidas son cuantitativas, no requieren entrenamiento ni manipulación animal, requieren participación cortical y no compiten con otros comportamientos inducidos experimentalmente. Estos factores distinguen este análisis de otros métodos operante o reflejos para registrar la nocicepción orofacial.

Introduction

Se han utilizado modelos animales para estudiar el dolor y la nocicepción asociados con el daño orofacial y/o la inflamación1,2,pero la falta de modelos animales apropiados resulta en una comprensión incompleta de los mecanismos. Aunque los modelos actuales nos ayudan a comprender diversos mecanismos implicados en el dolor orofacial agudo y crónico, existen fortalezas y debilidades en estos modelos animales.

Muchos modelos miden las respuestas nociceptivas conductuales para duraciones cortas. El acicalamiento facial es una respuesta conductual conocida después de la constricción de los nervios faciales3. Otros estudios midieron el frotamiento facial con la proa ipsolateral o la parte posterior, así como, el desliceo de la cabeza después de administrar inyecciones de formol en la articulación temporomandibular (ATM) o el labio4-7. Las latencias de retirada de la cabeza es otro modelo para medir el comportamiento nociceptivo en el que se utiliza un medidor de analgesia de movimiento de cola modificado para cuantificar la respuesta nociceptiva (esdecir, la retirada de la cabeza) después de aplicar calor a la almohadilla vibrissae afeitada de una rata8. La actividad muscular digásttrica y masetera también se ha registrado como un correlato del dolor después de las inyecciones de glutamato en la ATM9. Otro estudio ha medido los cambios en los parámetros del sueño para evaluar las respuestas nociceptivas en ratas masculinas y femeninas con una ATM inflamada, estos parámetros incluyeron latencia del sueño, movimiento ocular rápido (REM), porcentaje de sueño no REM y porcentaje de sueño REM10. La mayoría de los modelos animales que miden las respuestas nociceptivas conductuales utilizan un marco de tiempo corto, es decir, minutos a horas por día11-14. Además, la mayoría de las pruebas con modelos animales ocurren durante la fase de luz y en un animal nocturno, como una rata, esto puede causar estrés que puede confundir los resultados nociceptivos15-18. Los ensayos anteriores miden la respuesta nociceptiva en diferentes condiciones orofaciales, pero por corta duración y, por lo tanto, solo se pueden usar para estudiar trastornos agudos. Un ensayo alternativo ha utilizado la expresión facial como medida de nocicepción de duración moderada, pero esta metodología puede ser subjetiva19.

Para evaluar la nocicepción orofacial persistente o crónica algunos han utilizado la aplicación de un filamento de von Frey en la superficie de la piel para evaluar la sensibilidad mecánica de animales sometidos a constricción nerviosa o inflamación de la ATM3,20. Liverman et al. 2009 midieron las respuestas de abstinencia utilizando monofilamentos graduados después de las inyecciones de CFA en el músculo masetero de ratas 21,22. 2008 inyectaron la ATM con CFA y luego durante 14 días cuantificaron comportamientos nociceptivos a la estimulación mecánica o de calor o frío aplicada sobre la región de la ATM. Desafortunadamente, estos ensayos de comportamiento nociceptivos implican restricción animal, que producen hormonas del estrés, aprendizaje o comportamientos alternativos que pueden interferir con los resultados medidos.

Los modelos para medir la nocicepción en los dientes utilizan el reflejo de apertura de la mandíbula, pero este método puede ser poco fiable23 o impreciso24. La actividad electromiográfica se ha utilizado para medir la nocicepción dental25,pero este método típicamente requiere que el animal esté inconsciente, aunque en un estudio se investigó la nocicepción dental en ratas que se movían libremente26. En 2008, Khan estudió la relación entre la nocicepción dental y la función masticatoria utilizando un medidor de tensión sensible27, pero este modelo de duración de la mordedura requiere restringir al animal de la actividad normal 28. La fuerza de mordida es una medida confiable del dolor de dientes en humanos, pero debido a que las ratas requieren entrenamiento y/o restricción para medir la fuerza de mordedura se introduce una fuente de estrés que puede producir hallazgos con importancia fisiológica cuestionable29-31

Algunas limitaciones de la restricción y el estrés se pueden superar mediante el uso de un diseño de operando para evaluar los comportamientos nociceptivos. Un modelo operante utiliza la evitación de una temperatura incómoda para evaluar y caracterizar la nocicepción orofacial32-35. Este modelo de recompensa-conflicto se basa en una recompensa de leche endulzada para inducir al roedor a posicionar su rostro voluntariamente contra una sonda térmica calentada o enfriada34,36. Sin embargo, la prueba requiere entrenamiento con animales, pero una fortaleza del ensayo es que los datos se recopilan de manera automatizada.

Otro modelo animal utilizó la disfunción de roedura inducida por la nocicepción como índice de nocicepción orofacial37. Sin embargo, el roedor está confinado a un tubo y su único escape es roer a través de una espiga para salir. Una ventaja de este modelo es que mide la función de la mandíbula después de una lesión de mandíbula aguda o crónica en ratones. Sin embargo, el roedor está confinado, lo que agrega un comportamiento competidor alternativo de confusión, es decir, escape, que sería estresante y, por lo tanto, podría influir en los resultados del ensayo de nocicepción.

La duración de la comida se ha utilizado para medir la nocicepción en animales con artritis de la ATM38-41,exposición a la pulpa dental42y daño muscular43. Un roedor que experimentó la nocicepción orofacial comieron más lentamente después de que el animal iniciara una comida. Los pacientes que experimentan dolor de la ATM también tardan más en masticar sus alimentos y la duración del ciclo se acorta cuando el dolor de la ATM disminuye44-46. Se espera que el alargamiento de la duración de las comidas cuando el dolor de la ATM está presente sea un "comportamiento de protección", definido operacionalmente como comportamiento nociceptivo47.

La duración de la comida mide la nocicepción de la ATM utilizando un método no invasivo durante un máximo de 19 días en ratas macho y hembra y 6 días (período más largo probado) en ratones machos y podría describirse como un marcador biológico de nocicepción38-41. En apoyo de que la duración de la comida mide respuestas nociceptivas, la nocicepción puede reducirse mediante una intervención farmacológica que hace que la duración de la comida del animal vuelva a la normalidad38,40,41. Esto también se confirmó cuando las neuronas nociceptivas fueron destruidas con capsaicina; después de la destrucción del nervio la duración de la comida de los animales no fue aumentada después de la inyección de CFA en el TMJ 40.

A continuación se muestra el protocolo sobre cómo obtener y analizar estadísticamente los datos de duración de las comidas.

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Protocol

En este modelo a las ratas o ratones se les dio alimento y agua ad libitum. El Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Facultad de Odontología baylor de la Universidad de Texas A&M aprobó todos los protocolos experimentales. A continuación, los ajustes específicos se muestran en cursiva y se utilizan específicamente para el modelo de artritis de la ATM de rata. Los ratones también se pueden utilizar en este modelo y el dolor dental alternativo y el dolor orofacial miogénico modelos animales también se pueden utilizar42,43.

1. Configuración del software

  1. Cargue el software Animal Monitor para las unidades de alimentación en la computadora.
  2. El software Animals Monitor ahora se abre haciendo clic en el icono y en la selección del menú de archivos elija la opción desplegable "configuración".
  3. En la ventana "Configuración del monitor animal" desmarque la casilla titulada "Pellet Delivered Input"(Figura 1A).
    Nota: Esta casilla generalmente está marcada en la fábrica de forma predeterminada. Anule la selección de esta opción. Una vez que el investigador anula la selección de esta opción, los resultados se registran mediante la eliminación de un pellet del canal en lugar de cuando se está dispensando un pellet.
    Nota: Cuando se marca la casilla "Nombre automático de archivos", el software nombrará automáticamente los archivos (Figura 1A). Esta casilla suele estar marcada en la fábrica de forma predeterminada.
  4. Configure las luces del temporizador para que se enciendan a las 06:00 (6:00 a.m.) y se apaguen a las 20:00 (8:00 p.m.).
    Nota: el hardware para las unidades de los alimentadores fue modificado de modo que las luces dentro de las cajas no sean controladas por el software sino que estén atados con alambre en lugar de otro a un temporizador aislado de 24 horas. Por lo tanto, la "Luz de la casa" indicada en el software de configuración no era funcional en estos ejemplos.
  5. Seleccione el menú desplegable editar y elija Experimentar. Aparece una ventana con el título "Box 01 -"(Figura 1B).
  6. Introduzca el nombre de archivo con el que se guardarán los datos en esta ventana.
    Nota: si no se introduce ningún nombre de archivo, el software nombrará automáticamente los archivos de datos. Los detalles del experimento se pueden agregar en esta ventana y guardar con los archivos de datos. La información de la ventana también se puede guardar y utilizar para experimentos posteriores.
  7. Introduzca un número mayor que el tiempo total del experimento en el cuadro de entrada titulado "Duración del experimento (días):".
    Nota: Esto asegurará que el software guarde los datos hasta que se complete el experimento, un error puede ser establecer este valor demasiado corto, lo que impedirá que el software grabe los datos aunque los animales todavía estén en los módulos de alimentación.
  8. Introduzca 24 en el cuadro de entrada titulado "Número de horas en un día".
    Nota: la longitud se puede modificar a las especificaciones del experimentador.
  9. Ingrese 10 en el cuadro titulado "Criterios de fin de período de comida (min):"
    Nota: para las ratas, una comida se definió utilizando un criterio de 10 minutos de fin de la comida basado en estudios anteriores48 (es decir, una comida se cuajó antes y después por un período de 10 minutos de no se tomaron pellets) y el tamaño mínimo de la comida se fijó en tres pellets por comida en este paquete de software.
  10. Introduzca 45 en el cuadro titulado "Tamaño del pellet (mg)". Si un individuo quería usar ratones, ingrese 20 dentro de esta ventana.
  11. Para las ratas agregue 45 mg de pellets de chow de roedores a la tolva dispensadora del alimentador.
    Nota: para ratones añadir 20 mg de roedores chow pellets a la tolva chow.
  12. En la sección "Fase" de la ventana Experimento ingrese el término Día en el campo "Nombre" y en el campo "# de Horas" escriba 24 (Figura 1B).
    Nota: debajo de la sección "Fase" hay dos grandes camposabiertos. El primer campo abierto grande se rellenará con el texto introducido en los campos anteriores "Fase" y "Nombre".
  13. El siguiente gran campo abierto tendrá el encabezado "Day Phase" Introduzca en el campo titulado "Name" la palabra Light e introduzca en el campo titulado "Percent" el número 60.
    Nota: este texto introducido rellenará el campo grande a continuación.
  14. A continuación introduzca en el campo titulado "Nombre" la palabra Oscuro e introduzca en el campo titulado "Porcentaje" el número 40. Nota: con estas entradas el 60% del día se atribuirá a la fase de luz y el 40% se atribuirá a la fase oscura. Cuando el software calcula los patrones de comida esta información se utilizará. Estos ajustes son típicos para los animales hembras en bicicleta que se mantienen en un ciclo de luz / oscuridad de 14:10.
  15. Seleccione el botón "Establecer todas las cajas como esta". Guarde esta información y, a continuación, pulse Aceptar.
  16. Aparece la pantalla "Cuadros de inicio", seleccione los alimentadores para activar y pulse OK (Figura 1C).
  17. A continuación, aparecerán las ventanas de tiempo de ejecución de Animal Monitor con los datos del patrón de comida (Figura 1D).
    Nota: monitoree y registre el "# de Pellets Dispensados" desde esta ventana para determinar la salud actual de la rata. Una rata macho sana que pesa alrededor de 300 g típicamente comerá entre 300-800 45 mg pellets al día.
  18. Los archivos se generan diariamente y se guardan automáticamente que tienen un archivo . CSV. Abra estos archivos para recuperar datos de patrón de comida como la ingesta de alimentos, el número de comida, la duración de la comida, el tamaño de la comida o el intervalo intermedio. Los intervalos para estos patrones de comida se pueden calcular para todo el día o para una fase del día como la fase oscura y clara. Como se indicó anteriormente, los ajustes son para un ciclo de luz / oscuridad 14:10. Los datos brutos de cuándo se eliminó cada pellet de la vaguada también se registran como un raw. Archivo CSV.
    Nota: En versiones anteriores del software un tamaño mínimo de comida de 3 pellets no se utiliza en los cálculos para generar el . Archivo CSV.  Además, para obtener la duración media de la comida utilizando el software más antiguo, debe restar 10 minutos de los valores de la columna Duración media de la comida del . Archivo CSV.
    Cuando el software está funcionando, el operador puede seleccionar manualmente la opción de menú desplegable de archivos y seleccionar diariamente "guardar datos sin procesar". Esto guardará los datos sin procesar durante un período de 24 horas en lugar de para todo el experimento. Estos datos sin procesar pueden ser procesados por software alternativo a discreción del usuario.
    Nota: en los resultados mostrados utilizamos software alternativo para incluir un tamaño mínimo de comida de 3 pellets.

2. Ensayo de duración de la comida

  1. Coloque ratas individuales en las cámaras atenuadas por sonido equipadas con alimentadores de pellets activados por computadora de fotobeam.
    Nota: en estas unidades de alimentación hay botellas de agua graduadas y sartenes de residuos en las que se coloca una hoja de papel absorbente grueso. En la tolva dispensadora del alimentador se pueden agregar pellets de chow de roedor de 45 mg para ratas o pellets de chow de roedor de 20 mg para ratones. Los pellets de Chow se dispensan en un comedero en forma de V y en la parte inferior de este comedero hay un fotoboste. Un pellet dispensado en el canal se detectará rompiendo este fotobeam. Una vez que una rata elimina este pellet del canal de alimentación, el fotobeam se restaura y esto indica a la computadora que deje caer otro pellet. La restauración del fotobeam también activa la computadora para registrar la fecha y la hora y mantiene un recuento de los pellets dispensados. Este recuento de pellets se analiza para determinar la ingesta de alimentos, el número de comidas, la duración de la comida, el tamaño de la comida o el intervalo intermeal durante cualquier parte del día utilizando el software Med Assoc. De nuevo el crudo . Archivo de datos CSV puede ser analizado por software externo39,40,49-51.
  2. Registrar el número total de pellets ingeridos, la cantidad de agua consumida y el peso de los animales para discernir la salud general de las ratas durante la experimentación.
  3. Enjuague las botellas de agua y llénese con agua dulce diariamente y agregue chow a la tolva del alimentador cuando sea necesario.
  4. Vierta la bandeja de residuos y el papel absorbente grueso debajo de la jaula diariamente y sople el polvo de la parte móvil del alimentador diariamente usando aire de alta presión.
    Nota: se requiere equipo de protección personal(por ejemplo, batas, guantes, máscaras y máscaras).
  5. Retire los pisos, las bandejas de residuos y las botellas de agua después de que se complete el experimento y lave estos componentes. Además, retire la electrónica de alimentación del lavado de enjaulado a mano o en un lavavajillas.

3. Inducción de la artritis de la ATM

  1. Coloque a los animales en los comederos al menos 4 días antes de la experimentación.
    Nota: estos datos se reportarán como predía para obtener un comportamiento de alimentación basal. Luego, los animales se retiran del comedero para su tratamiento. Un tipo de tratamiento era inducir un TMJ artrítico. Para este modelo, las ratas se inyectan con el adyuvante completo de Freund (CFA) a las 08:00(es decir, al comienzo de la fase de luz) después de que las ratas se anestesian con isoflurano (5% de flujo).
  2. Inyecte 250 mg de CFA en 50 L bilateralmente en el espacio periarticular de cada ATM.
    Nota: en el ejemplo(Figura 2)se inyectaron 250 mg de CFA en 50 L en cada ATM, pero dosis tan bajas como 10 mg en volúmenes tan pequeños como 15 μl son efectivas durante períodos de tiempo más cortos52.
  3. Inyecte ratas control TMJ con 50 L de solución salina al 0,9%. Nota: todos los animales eran móviles dentro de 5 minutos o menos después de la inducción de la anestesia. En el caso de que se administrara una dosis menor de AFC en menor volumen, las ratas control recibirían este mismo volumen de solución salina.

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Representative Results

La duración de la comida es un correlato conductual del dolor orofacial y las mediciones de la duración de la comida se han aplicado a animales con artritis de la ATM(Figura 2)y caries dental(Figura 3). En un experimento, las ratas tenían artritis de TMJ después de administrar una alta dosis del magnesio 250 de CFA y este tratamiento indujo un aumento significativo en la duración de la comida por 19 días(cuadro 2). Una dosis más baja de CFA (magnesio 10) inyectado en cada empalme de TMJ produjo un aumento más pequeño en la duración de la comida por solamente 2-3 días52 que indicaban una respuesta de dosis para la administración de CFA usando este análisis de la duración de la comida. La duración de la comida midió respuestas nociceptivas en la región orofacial, pero no detectó una respuesta de la artritis dentro de la rodilla(Figura 2).

En un segundo experimento, la duración de la comida también ha detectado respuestas nociceptivas en ratas con exposición a la pulpa(Figura 3). La exposición de la pulpa dio lugar a caries y era un modelo para el dolor de dientes en seres humanos42. Otros patrones de alimentación, como la ingesta de alimentos, el número de comidas y el tamaño de las comidas, no cambian en una medida tan grande ni durante un período tan largo como la duración de la comida, lo que sugiere que estos otros patrones de comida no son una medida tan sensible para la respuesta nociceptiva como la duración de la comida39. A medida que la duración de la comida aumenta significativamente, por lo general hay tendencias no significativas en el número de comidas y el tamaño de las comidas que dan lugar a que la ingesta de alimentos sea casi normal, de modo que el peso corporal del animal tratado sea igual al de los animales simulados o de control.

A partir de los datos de la Figura 1 y anteriores datos de media y desviación estándar38-42 para calcular una diferencia significativa entre los grupos de tratamiento de al menos 2 min con una potencia del 80% (utilizando ANOVA) se requerirían unos 9 animales/grupo de tratamiento.

Figure 1
Figura 1. Capturas de pantalla del software Animal Monitor. El panel 1A es la ventana configuración de Animal Monitor. El panel 1B es la ventana que aparece cuando se selecciona el menú desplegable de edición y se elige Experimentar en este menú. Panel 1C es la ventana que permite la activación selectiva de unidades de alimentación particulares. Panel 1D es la siguiente ventana que aparece y se titula Animal Monitor. Esta ventana muestra el cálculo en tiempo real de los parámetros de comida para las unidades de alimentación activas. Haga clic aquí para ver la imagen más grande.

Figure 2
Figura 2. La duración de la comida fue alargada perceptiblemente por 19 días en ratas masculinas con los empalmes temporomandibulares artríticos (TMJ). Para el grupo de control Las ratas de Sprague Dawley fueron dadas una inyección de 50 L salinos en cada TMJ (SALINE/TMJ, n = 13). En el grupo experimental 250 g de coadyuvante completo de Freund (CFA) fueron inyectados en el TMJ (CFA/TMJ, n = 14) o la rodilla (RODILLA/CFA, n = 7). Los datos de la duración de la comida eran calculados para un día antes de la inyección (0) y para los días 1-21 (1, 2, 3, etc.)después de TMJ o de la inyección de la rodilla. Cada empalme fue examinada por la disección después de la prueba del comportamiento para verificar el sitio de la inyección. Los valores se dan como las medias ± SEM. En estos estudios se utilizó ANOVA bidireccional con medidas repetidas con variables independientes de tratamiento (solución salina y CFA) y tiempo y la variable dependiente duración de la comida. Un efecto principal significativo fue observado para el tratamiento de CFA, F (2, 31) = 4,7, p<0,05. Los datos se analizaron más a fondo mediante la prueba post hoc de Duncan. Para a = p<0,05 se realizó una comparación entre el grupo SALINE/TMJ y el grupo CFA/TMJ. Para b = p<0,05 se realizó una comparación entre el grupo CFA/ATM y el grupo CFA/RODILLA.

Figure 3
Figura 3. Seis muelas maxilares de las ratas masculinas de Spraque Dawley fueron expuestas y la duración de la comida fue medida por 6 días después de la cirugía. Las ratas del control no tenían la cirugía de la exposición de la pulpa pero tenían anestesia administrada. Para analizar los datos de duración de la comida se utilizó ANOVA bidireccional con medidas repetidas utilizando las variables independientes de tratamiento (control, exposición) y tiempo y la variable dependiente duración de la comida. Un efecto principal significativo fue observado para la exposición de la pulpa, F (1, 12) = 66, P<0,001. Los datos se analizaron más a fondo mediante la prueba post hoc de Duncan. Al comparar el control versus la rata que tenía sus molares expuestos * = p<0,05, ** = p<0,01. Medias ± SEM. Cinco ratas estaban en cada grupo del tratamiento.

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Discussion

Los pacientes de TMJ con dolor orofacial reportan un aumento del dolor con un aumento del tiempo de masticación, de modo que, el ciclo de masticación se alarga cuanto más tiempo el individuo ha estado masticando45,53-56. Nuestro ensayo de comportamiento permite pruebas similares en ratas y ratones al medir la duración de la comida39. Un estudio inédito reciente sugirió que la prueba del filamento de von Frey tenía mayor sensibilidad que medidas de la duración de la comida, mostrando un cambio significativo por un período más largo pero la prueba del filamento de von Frey puede tener un componente reflejo de la respuesta mientras que las medidas de la duración de la comida requieren el proceso por las regiones del sistema nervioso central. Por lo tanto, la sensibilidad podría ser mayor con las pruebas de filamento de von Frey, pero la respuesta podría reflejar, en parte, un reflejo. Si bien, el tratamiento con fármacos que tienen efectos centrales modifican los resultados de la prueba de filamento sugiriendo que el ensayo refleja algunos aspectos del procesamiento central del dolor57.

En el ensayo de duración de la comida, el número total de pellets dispensados debe controlarse diariamente. Una rata macho típicamente ingerirá 400-800 de los 45 pellets de mg y una rata hembra ingerirá 300-600 pellets. En el caso de que el valor diario del pellet sea menor que estos valores típicos, el experimentador debe verificar las unidades de alimentación, si el dispensador de pellets deja caer 5 pellets al retirar un pellet del canal; el sensor de pellets cerca de la tolva de pellets (no en el canal) puede estar polvoriento y requerir limpieza. A pesar de que el dispensador está dejando caer 5 pellets, la computadora indicará que solo se dejó caer un pellet (dando el recuento bajo). Por lo tanto, si cinco o un pellet está en el canal de la computadora sólo registra un evento. Después de limpiar el sensor, se debe dispensar un solo pellet al retirar un pellet del comedero. Alternativamente, uno puede reemplazar el sensor. Si el valor diario del pellet es mayor que estos valores típicos, los sensores en el comedero pueden estar polvorientos y requerir limpieza. Limpie los sensores y compruebe al día siguiente para determinar si el número de pellets caídos cayó dentro del rango típico.

La duración de la comida es un ensayo de comportamiento que puede verse afectado por las diferencias de especies. En un estudio anterior usando ratones con artritis de TMJ39 había tensiones de ratones que acapararían los peloteos. Los ratones tomaban los pellets del comedero y dejaban caer los pellets en la esquina de la jaula y en la bandeja de residuos en lugar de comer el pellet. Debido al comportamiento de acaparamiento, las mediciones del patrón de comida no reflejarían la velocidad a la que el ratón estaba comiendo y no reflejarían el nivel de hiperalgesia mecánica de los ratones con artritis de la ATM. Un método para solucionar este comportamiento de acaparamiento fue examinar a los ratones en la fase de pretratamiento. De estudios anteriores, alrededor del 40-70% de los ratones atesarían más del 5% del total de pellets tomados. Esto dio lugar a cambios significativos en los datos del patrón de la comida. Para eliminar el problema del acaparamiento, los ratones fueron preseleccionados para que acaparar menos del 5% de sus pellets. Los experimentos fueron realizados con los animales preseleccionados y el comportamiento del acaparamiento fue supervisado a través del experimento. Los animales que acapararon más del 5% de su ingesta total de alimentos durante cualquier punto del experimento fueron eliminados de los resultados. Dos problemas con este proceso de preselección fueron uno, se necesita tiempo para preselección suficientes ratones para obtener el número de animales para completar el experimento y, en segundo lugar, el proceso requiere la detección de una gran cantidad de animales, una mayoría de los cuales no se utilizará para la experimentación, lo que resulta en un costo excesivo.

En conclusión, la duración de la comida es una medida cuantitativa que no es subjetiva para el experimentador. Al igual que los métodos operante, comer es un comportamiento que requiere participación cortical, pero comer es diferente a muchas mediciones reflejas, como rascarse, los pelos de von Frey o el calor. Al medir la duración de la comida, el animal no tiene que ser entrenado antes de la prueba ni inmovilizado o manipulado, lo que puede agravar el estrés y alternar comportamientos. Las mediciones de la duración de la comida son continuas, por lo que las pruebas ocurren en la fase oscura y ligera, en contraste con las pruebas en la fase de luz cuando el roedor duerme normalmente. Las mediciones de la duración de la comida pueden ocurrir durante días a diferencia de otros métodos en los que la prueba se realiza brevemente a intervalos de tiempo específicos. Estas ventajas hacen que la medición de la duración de la comida sea una herramienta poderosa para estudiar los mecanismos de nocicepción en la región de la cabeza.

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Disclosures

No hay nada que revelar.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Animal Monitor software Med Assoc. Inc SOF-710 East Fairfield, VT
Dustless Precision Pellets, Rodent, Grain-Based  Bio-Serv F0165 45 mg pellets, 50,000/box
Dustless Precision Pellets, Rodent, Grain-Based  Bio-Serv FO163 20 mg pellets
Complete Freund's Adjuvant Chondrex, Inc. 7001 No loger provides the 5 mg/ml concentration.  Can use CFA from other sources as long as the investigator consistently uses this source

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References

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Comportamiento Problema 83 Dolor rata nocicepción miofacial orofacial diente articulación temporomandibular (ATM)
Duración de la comida como medida de las respuestas nociceptivas orofaciales en roedores
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Kramer, P. R., Bellinger, L. L. Meal Duration as a Measure of Orofacial Nociceptive Responses in Rodents. J. Vis. Exp. (83), e50745, doi:10.3791/50745 (2014).

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