Antitumorali metallo Complessi: Sintesi e citotossicità valutazione da parte del saggio MTT

Summary

Un metodo per la sintesi di titanio e vanadio agenti antitumorali-vie sensitive è descritto, insieme con la valutazione della loro attività citotossica verso la linea di cellule di cancro umano dal saggio MTT.

Abstract

Titanio (IV) e vanadio (V) complessi sono agenti antitumorali molto potenti. Una sfida nella loro sintesi si riferisce alla loro instabilità idrolitica; quindi la loro preparazione deve essere condotta in atmosfera inerte. Valutazione dell'attività antitumorale di questi complessi può essere ottenuto mediante il saggio MTT.

Il saggio MTT è un saggio colorimetrico basato sulla redditività riduzione enzimatica della molecola MTT a formazano quando è esposto a cellule vitali. Il risultato della riduzione è un cambiamento di colore della molecola MTT. Misure di assorbanza relativi a un controllo determinano la percentuale rimanente cellule tumorali vitali dopo il loro trattamento con diverse concentrazioni di un composto in esame, che si traduce per l'attività antitumorale componenti ei valori di IC _50. Il saggio MTT è molto comune negli studi di citotossicità grazie alla sua precisione, rapidità e relativa semplicità.

Qui abbiamo preinviato un protocollo dettagliato per la sintesi di farmaci a base di metallo sensibile dell'aria e la misurazione della vitalità cellulare, compresa la preparazione delle piastre delle celle, incubazione dei composti con le cellule, misure di vitalità usando il saggio MTT, e determinazione dei valori di IC _50.

Introduction

La chemioterapia è ancora uno dei principali cicli di trattamenti impiegati in clinica per varie malattie tumorali, e quindi grande quantità di ricerca è condotta in tutto il mondo con l'obiettivo di sviluppare nuovi e migliori farmaci antitumorali. Tali studi principalmente iniziano a livello chimico, con la progettazione e la preparazione di composti, seguita da valutazione biologica delle proprietà citotossiche in vitro. La vitalità cellulare può essere valutata da vari saggi che forniscono informazioni sulle attività cellulare ^1-2.

Cisplatino è un esempio di un complesso di platino che è ampiamente utilizzato c....

Protocol

1. Preparazione del V (V) complesso (Figura 2); ¹⁸ condotta passaggi 1.1-1.4 in un glove-box, se un glove-box non è disponibile, passare alla alternativa passaggi 2 (2.1-2.6).
   1. Sciogliere 0,42 mmol dei leganti H ₂ L in THF anidro e aggiungerlo a una soluzione sotto agitazione di quantità equivalenti di VO (O i Pr) ₃ in THF.
   2. Mescolare la miscela di reazione a temperatura ambiente per 15 min, e rimuovere le sostanze volatili sotto vuoto.
   3. Aggiungere esano freddo e rimuoverlo sotto vuoto. Una polvere viola scuro deve essere ottenuta con una resa quantitativa.
   4. Pesare 8 mg del composto ottenuto i....

Results

I complessi sono stati preparati sulla base delle procedure stabilite ^18,28 e la loro purezza può essere valutata mediante analisi NMR ed elementare.

I dati ricevuti dal saggio MTT viene analizzata per valutare la citotossicità del composto ^18,21. In primo luogo, viene eseguita la sottrazione del valore di assorbanza del bianco di controllo da tutti gli altri valori. In secondo luogo, il valore del controllo del solvente THF è impostato su 100% vitalità, come è stato ag.......

Discussion

Il metodo descritto in questo manoscritto unisce la sintesi chimica con saggio biologico vitalità cellulare. Come con tutti i metodi biologici relativi cellule vitali, è fondamentale per lavorare in una cappa laminare, e mantenere condizioni di sterilità, compreso l'uso di solventi organici sterili. Inoltre, la preparazione e lo stoccaggio di farmaci a base di metallo idroliticamente instabile devono essere effettuate in condizioni inerti, per i quali dovrebbero essere utilizzati tecniche vano portaoggetti o di line.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagent/Material
Siero fetale bovino (FBS)	Biological Industries	04-007-1A
Hexane AR	Gadot	830122313	Essiccato utilizzando un sistema di essiccazione a solvente
HT-29 linea cellulare	ATCC	HTB-38
Isopropanolo AR	Gadot	830111370
L-glutammina	Biological Industries	03-020-1B
MTT	Sigma-Aldrich	M5655-1G
Antibiotici penicillina/streptomicina	Biological Industries	03-031-1B
RPMI-1640 con rosso fenolo con L-glutammina	Sigma-Aldrich	R8758
RPMI senza rosso fenolo	Biological Industries	01-103-1A
Tetraidrofurano (THF) AR	Gadot	830156391	essiccato utilizzando un sistema di essiccazione a solvente
Ti(OiPr)4	Sigma-Aldrich	205273-500ML	sensibile all'umidità
Tripsina/EDTA	Biological Industries	03-052-1B
VO(OiPr)3	Sigma-Aldrich	404926-10G	umidità sensitive
Equipment
Pipetta a 12 canali 30-300 μ l	Pipetta Thermo Scientific
a 12 canali 5-50 μ l	Finnpipette
75 cm2 pallone	NUNC	156472
piastra a 96 pozzetti con coperchio (fondo piatto)	NUNC	167008
CO2 Legante per incubatore		APT.line C150
Controcamera	Marienfeld-Superior	650030
Eppendorf fiala	KARTELL
Scatola a guanti	M. Braun
Cappa a flusso laminare	ADS LAMINAIRE	OPTIMALE 12
Spettrofotometro lettore di micropiastre	Bio-Tek	El-800
Microscopio	Nikon	Eclipse TS100
Pipetta 20-200 μ l	Pipetta Finnpipette
5-50 μ l	Pipetta