Flere lys skader protokoller er blevet beskrevet til skade fotoreceptorer og dermed fremkalde en retinal regenerering respons hos voksne zebrafisk. Denne protokol beskriver en forbedret metode, der kan anvendes i pigmenterede dyr, og at skader størstedelen af stang og kegle fotoreceptorer tværs af hele nethinden.
Light-induceret retinal degeneration (LIRD) er almindeligt anvendt i både gnavere og zebrafisk for skader stang og kegle fotoreceptorer. Hos voksne zebrafisk, udløser fotoreceptordegenerering Müller gliaceller at genindtræde cellecyklus og producere forbigående-forstærkende stamceller. Disse forfædre fortsætter med at formere sig, når de trækker til det beskadigede område, hvor de i sidste ende giver anledning til nye fotoreceptorer. I øjeblikket er der to udbredte LIRD paradigmer, som hver resulterer i varierende grader af fotoreceptor tab og tilsvarende forskelle i regenerering reaktion. Som mere genetiske og farmakologiske værktøjer er tilgængelige til at teste betydningen af enkelte gener af interesse under regenereringen, er der behov for at udvikle en robust LIRD paradigme. Her beskriver vi en LIRD protokol, der resulterer i udbredt og sammenhængende tab af både stang og kegle fotoreceptorer, hvor vi har kombineret brug af to tidligere anvendte LIRD teknikker. EndvidereKan denne protokol udvides til brug i pigmenterede dyr, hvilket eliminerer behovet for at opretholde transgene linier af interesse på albino baggrund for LIRD studier.
Light-induceret retinal degeneration (LIRD) er almindeligt anvendt i både gnavere og zebrafisk for skader stang og kegle fotoreceptorer. Hos voksne zebrafisk, udløser fotoreceptordegenerering Müller gliaceller at genindtræde cellecyklus og producere forbigående-forstærkende stamceller. Disse forfædre fortsætter med at formere sig, når de trækker til det beskadigede område, hvor de i sidste ende giver anledning til nye fotoreceptorer. I øjeblikket er der to udbredte LIRD paradigmer, som hver resulterer i varierende grader af fotoreceptor tab og tilsvarende forskelle i regenerering reaktion. Som mere genetiske og farmakologiske værktøjer er tilgængelige til at teste betydningen af enkelte gener af interesse under regenereringen, er der behov for at udvikle en robust LIRD paradigme. Her beskriver vi en LIRD protokol, der resulterer i udbredt og sammenhængende tab af både stang og kegle fotoreceptorer, hvor vi har kombineret brug af to tidligere anvendte LIRD teknikker. EndvidereKan denne protokol udvides til brug i pigmenterede dyr, hvilket eliminerer behovet for at opretholde transgene linier af interesse på albino baggrund for LIRD studier.
Her viser vi, at kombinere en kort UV-eksponering med en kontinuerlig Kraftigt lys resulterer i udbredt fotoreceptor tab og en robust regenerering svar. Sammenlignet med de individuelle LIRD metoder, er dette kombineret metode også den mest effektive protokol til skade både stave og tappe i begge halvdele af nethinden. Vigtigere er det, denne behandling er effektiv i pigmenterede dyr samt albino dyr.
Selvom vi dokumentation for, at de kombinerede protokoller resulterer i mere udbr…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne vil gerne takke Xixia Luo for fremragende fisk dyrehold og teknisk support. Dette arbejde blev finansieret af National Institutes of Health tilskud R21EY019401 (RT) og P30EY04068 (RT), og opstart midler til RT, herunder en ubegrænset bevilling fra forskning til at forebygge blindhed til Wayne State University, Department of Ophthalmology. JT blev understøttet af en Thomas C. Rumble Fellowship leveres af Wayne State University Graduate School.
UV light source | Leica | EL600 |
Glass Petri dish (150 x 20 mm) | Sigma-Aldrich/Pyrex | CLS3160152BO |
250 ml glass beaker | Sigma-Aldrich/Pyrex | CLS1000250 |
4 L glass beaker | Sigma-Aldrich/Pyrex | CLS10004L |
Aluminum foil | Fisher | 01-213-105 |
250 W halogen lamps | Workforce | 265-669 |
1.8 L clear acrylic tanks | Aquaneering | ZT180T |
1.8 L clear acrylic tank lids | Aquaneering | ZT180LCL |
Fan | Honeywell | HT-900 |
Aerator | Tetra | 77853-900 |
Thermometer | Cole-Parmer | YO-08008-58 |
Bent forceps (5/45) | World Precision Instruments | 504155 |