Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

الكشف عن شذوذ في الأوعية الدموية في غلاف العين المشيمي في نموذج الفأر من السن المتصلة تحلل البقعة الصفراء عن طريق التوقيت بالطبع الإندوسيانين الأخضر تصوير الأوعية الدموية

Published: February 19, 2014 doi: 10.3791/51061
Automatic Translation
1, 1, 1, 1,2
1Department of Ophthalmology & Visual Sciences, University of Utah Health Sciences Center, 2Department of Neurobiology & Anatomy, University of Utah Health Sciences Center

Summary

الإندوسيانين الأخضر تصوير الأوعية الدموية (أو ICGA) التي يؤديها حقن الوريد الذيل يوفر جودة عالية الصور ICGA بالطبع الوقت لتميز شذوذ في الماوس المشيمية.

Abstract

الإندوسيانين الأخضر تصوير الأوعية الدموية (أو ICGA) هي تقنية التي يقوم بها أطباء العيون لتشخيص تشوهات في الأوعية الدموية المشيمية والشبكية من أمراض العيون المختلفة مثل الضمور البقعي المرتبط بالعمر (AMD). ICGA يكون مفيدا بشكل خاص لصورة الأوعية الدموية المشيمية الخلفي من العين نظرا لقدرتها على اختراق من خلال طبقة مصطبغة مع الطيف بالأشعة تحت الحمراء. ويمكن تقسيم ICGA بالطبع الوقت في وقت مبكر، والمتوسطة، والمراحل المتأخرة. تقدم المراحل الثلاث معلومات قيمة عن علم الأمراض من مشاكل في العين. على الرغم من أن الوقت بالطبع ICGA بواسطة الوريد (IV) ويستخدم على نطاق واسع الحقن في عيادة لتشخيص وإدارة المشاكل المشيمية، ICGA طريق الحقن داخل الصفاق (IP) يشيع استخدامها في البحوث الحيوانية. نحن هنا أثبتت هذه التقنية للحصول على صور عالية الدقة ICGA الوقت بالطبع في الفئران عن طريق الحقن الوريد الذيل ومتحد البؤر المسح تنظير العين بالليزر. استخدمنا هذه التقنية لصورة المشيمية جنيهالتوترات في نموذج الفأر من سن المتصلة تحلل البقعة الصفراء. على الرغم من أنه من الأسهل بكثير أن أعرض ICG إلى الأوعية الدموية الماوس عن طريق IP، البيانات المتوفرة لدينا تشير إلى أنه من الصعب الحصول على استنساخه ICGA الصور بالطبع الوقت عن طريق IP-ICGA. في المقابل، ICGA عبر حقن الوريد الذيل يوفر جودة عالية ICGA الوقت بالطبع الصور مماثلة لدراسات الإنسان. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت لنا أن ICGA أجريت على الفئران البيضاء يعطي صورة أكثر وضوحا من الأوعية المشيمية من ذلك أجريت على الفئران المصطبغة. نقترح ينبغي أن يصبح ذلك الوقت بالطبع IV-ICGA من الممارسات المعتادة في البحث AMD بناء على النماذج الحيوانية.

Introduction

تصوير الأوعية الخضراء الإندوسيانين (ICGA) هو اختبار تشخيصي للمشاكل المتعلقة صورة الأوعية الدموية في العين. الامتصاص من ICG يتراوح 790-805 نانومتر بينما يتراوح الطيف الانبعاثات 770-880 نانومتر مع الانبعاثات ذروتها في 835 نانومتر 1. هذا يختلف عن الصبغة الشعبية الأخرى، فلوريسئين الصوديوم، الذي يقع في المدى المرئي الطيف. الطيف بالأشعة تحت الحمراء يمكن ICG لاختراق من خلال الشبكية ظهارة الصباغ (RPE)، والسوائل مصلي دموي، والإفرازات الدهنية، والتي يمكن أن تسد بسهولة عن طريق التصور الصوديوم فلوريسئين مقرها فلوريسئين تصوير الأوعية (FA). ICG في الأوعية الدموية مما يؤدي إلى تسرب أقل 98٪ من البروتين ملزمة، مما يتيح تعزيز تصوير الأوعية المشيمية والآفات المشيمية 1،2. ICGA يكاد يكون الخيار الوحيد لتصور الأوعية الدموية المشيمية، وهو الخلفي لRPE. الشكل 1 يبين المقارنة بين ICGA وFA في الأوعية الدموية في العينين التصوير الماوس. FA يمكن به استخدامها لصورة الأوعية الدموية في شبكية العين بشكل جيد ولكن ليس الأوعية الدموية المشيمية. في المقابل، ICGA يمكن استخدامها لصورة كل من شبكية العين والأوعية الدموية المشيمية. يتم تنفيذ ICGA مع أنظمة التصوير الرقمية عالية الدقة أو ناظور العيون المسح الضوئي ليزر (سلوفاكيا) جنبا إلى جنب مع كاميرات الفيديو الحساسة الأشعة تحت الحمراء، والتي سوف نستخدم في هذه الدراسة.

في العيادة، وقد أوصى ICGA في تشخيص عدد من الاضطرابات المشيمية و الشبكية التي تنطوي على الأوعية الدموية المشيمية بما في ذلك Polypoidal غلاف العين المشيمي وعائي (PCV)، الشبكية الورم الوعائي انتشار (RAP)، والشرائط شبيه الأوعية، المحي الشكل البقعي الضمور، اعتلال المشيمية و الشبكية المصلي المركزي، ورم وعائي المشيمية، نزيف في شبكية العين macroaneurysms تصلب والأورام المشيمية، وأشكال معينة من التهاب القزحية الخلفي 1،3. مزيج من ICGA مع الاتحاد الانجليزي والبصرية بالاتساق التصوير المقطعي (أكتوبر) توفير أدوات قوية لالأطباء في تشخيص وإدارة نضحي البقعي المرتبط بالعمرالضمور (AMD) 4-10. ICGA مفيد خاصة لتشخيص الظروف التي تنطوي على المشيمية. في الواقع، يعتبر ICGA المعيار الذهبي لتشخيص PCV، وهو البديل من نضحي AMD 11-13. يتميز PCV من خلال شبكة من الأوعية المتفرعة مع التوسعات polypoidal محطة في الأوعية الدموية المشيمية 11-13. كثيرا ما يرتبط PCV مع مفارز مصلي دموي المتكررة من RPE والشبكية مع التسرب ونزيف من مكونات polypoidal 11،14،15. نحن ذكرت مؤخرا توليد أول نموذج حيواني PCV بالإعراب عن transgenically HTRA1 الإنسان، وهو الأنزيم البروتيني سيرين متعددة الوظائف، في شبكية العين الماوس الظهارة الصبغية (RPE) 16. أظهرنا أن زيادة HTRA1 يسببها السمات المميزة لPCV، مثل الآفات polypoidal.

نحن هنا أثبتت الاستفادة من الوقت بالطبع ICGA بواسطة ذيل حقن الوريد في مجال البحوث AMD باستخدام لدينا HTRA1 نموذج الفأر. وتشير البيانات المتوفرة لدينا أنIV-ICGA متفوقة على الملكية الفكرية (أو تحت الجلد (SC)) ICGA التي يتم استخدامها حاليا في مجال 17،18 لوصف الآفات في المشيمية.

بيان للبحوث الحيوان

وأجريت التجارب على الحيوانات وفقا لبروتوكولات المعتمدة من قبل المؤسسات ورعاية الحيوان اللجنة استخدم (IACUC)، وأجريت وفقا للبيان ARVO لاستخدام الحيوانات في العيون والبحوث الرؤية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. إعداد الأدوات

  1. يتم تنفيذ الإجراء في غرفة الداخلي في منشأة الحيوان.
  2. ارتداء الأقنعة، الاغطيه الشعر، العباءات الجراحية، معقمة القدم الأغطية، وقفازات قبل البدء في التجربة.
  3. المياه الحرارية في كوب إلى ~ 40 درجة مئوية على موقد.
  4. وضع وسادة زرقاء معقمة على رأس وسادة التدفئة التي سيتم استخدامها في وقت لاحق للحفاظ على درجة حرارة الجسم الماوس، أثناء التصوير. بدوره على وسادة التدفئة.
  5. إعداد نظام التصوير:
    1. إزالة الغطاء الغبار وتشغيل الليزر.
    2. إخراج العدسة 55 درجة وتركيبها على الجهاز.
    3. فتح برامج التصوير من الكمبيوتر وإدخال المعلومات من الفأرة للتصوير تحت رقة المريض الجديد (مثل التركيب الوراثي، والعمر، وغيرها). تحت عنوان "نوع الجهاز"، اختر الأشعة تحت الحمراء (IR) واسطة.

ملاحظة: وقد أفيد أن استخدام سو عدسة شبه كروي مزدوج خارجي يمكن تحسين جودة الصورة 17-20 على الرغم من أن ليس لدينا أي مشكلة في الحصول على صور ذات جودة عالية من قبل IV-ICGA دون استخدام العدسات الخارجية (انظر نتائج ممثل، أرقام 1-4).

2. الذيل الوريد حقن ICGA

  1. تمدد عيون الفأر مع 1٪ تروبيكاميد حل العيون والانتظار 5 دقائق.
  2. وزن الماوس لتحديد كمية التخدير (الكيتامين / زيلازين / آسيبرومازين 65-100/10-20/1-3 ملغ / كلغ) الحاجة.
  3. استرداد العقيمة حقنة 1 مل جنبا إلى جنب مع إبرة G 32. حقن الفأر الغشاء البريتونى مع التخدير (13 ملغ / مل الكيتامين، 2.6 ملغ / مل زيلازين، 0.3 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني العقيمة آسيبرومازين). الانتظار حتى يتم تخدير الماوس بالكامل (~ 5 دقائق).
  4. وضع ذيل الماوس إلى 40 درجة مئوية الماء الدافئ لتسبب توسع الأوعية من الوريد.
  5. استرداد حقنة 1 مل مع إبرة G 32. سحب المبلغ المطلوب من ICG، وعادة 50 ميكرولتر من 1 ملغ / مل ICG، وهو العقيمة تصفيتها مع مرشح حقنة 0.2 ميكرومتر في أنبوب العقيمة، ل25 غ الماوس (2 ملغ / كلغ). يجب الحرص على عدم إدخال أي الهواء في حقنة.
  6. مسح الذيل مع مسحة الكحول لتعقيم المنطقة المراد حقنها.
  7. عقد ذيل بيد واحدة بحيث الوريد الذيل الأفقي هو أعلى. مع شطبة من الإبرة التي تواجه التصاعدي، حقن إبرة ~ 2 مم في الوريد في زاوية الحد الأدنى. يجب الحرص على عدم خرم الوريد. التراجع قليلا على حقنة والبحث عن آثار تدفق الدم في محور إبرة، مما يدل على أن الإبرة تم إدراجها بنجاح في الوريد.
  8. حقن ببطء ICG في الوريد. ينبغي أن يكون هناك الحد الأدنى من المقاومة عند حقن. إزالة الإبرة وتطبيق مسحة الكحول مباشرة إلى موقع الحقن ل~ 5-10 ثانية لوقف أي نزيف. الماوس ثم هو على استعداد للتصوير. من أجل اللحاق المرحلة المبكرة (0-4 دقيقة بعد حقن)، فمن ESSEntial لصورة الماوس بسرعة.

ملاحظة: يمكن الحصول على عيون ماوس بسهولة الجافة ويمكن أن تتطور الساد تحت التخدير. فمن المهم للحفاظ على العين رطبة من خلال تطبيق برنامج تلفزيوني العقيمة أثناء العملية. تمحو PBS الزائدة مع مسحة القطن المعقم قبل تسجيل ICGA. وقد استخدمت مختبرات أخرى العدسات اللاصقة لتجنب جفاف القرنية 17-20.

3. ICG تصوير الأوعية الدموية

  1. بدء لالتقاط صور 30-40 ثانية بعد حقن ICG، الذي يسمح القبض على المرحلة المبكرة من ملء المشيمية حتى التداولات الشبكية والمشيمية هي في أقصى سطوع (0-4 دقيقة). هو تصور الأوعية الدموية في شبكية العين أفضل في التركيز ~ 35-45 ديوبتر والأوعية الدموية المشيمية هو تصور في 10-15 ديوبتر.

    ملاحظة: خلال الفحص الأول من نموذج حيواني، فمن المستحسن لالتقاط الصور من جميع الزوايا (الأنف والزمانية، الظهرية والبطنية) لتحديد جميع abno ممكنrmalities في الأوعية الدموية. خلال المرحلة المبكرة، وتصور بشكل جيد سواء الشرايين والأوردة المشيمية المتوسطة والكبيرة. في نموذج حيواني المستخدمة في هذا البروتوكول، والآفات المشيمية (مثل polypoidal التوسعات) قد تبدأ في الظهور 1 دقيقة في مرحلة مبكرة.
  2. ضبط تركيز الصورة على الأوعية الدموية. التحكم عن السطوع والتركيز باستخدام وحدة التحكم ومقبض التركيز، على التوالي. هذه القيم قابلة للتعديل رقميا ويتم الاحتفاظ بسهولة ثابتة. الحفاظ على مسافة من العين الماوس إلى عدسة الكاميرا ثابتة لضمان جودة الصورة هو تكرار باستخدام تقنية الذي يلي.

    ملاحظة: منذ الجهاز يمكن أن الصورة سوى جزء من العين الخلفي، ونحن نحاول الحفاظ على التركيز، والسطوع، والمسافة بين عدسة الكاميرا والعين الماوس ثابتة ونحن صورة العين الخلفي بأكمله من زوايا مختلفة. المفتاح لهذا هو لمحاذاة التلألؤ على شكل دائرة المنبعثة من ICG من خلال العين مع مجال VIEث الكاميرا. ويتم إنجاز ذلك عن طريق جعل من اليسار إلى اليمين، صعودا ونزولا، والدخول والخروج من التعديلات موقف الكاميرا حتى تكون الصورة بأكملها لا يوجد لديه المناطق المظلمة. عندما تصطف التلألؤ ومجال الرؤية للكاميرا، وسوف المسافة من العين إلى عدسة تكون قابلة للتكرار للمجموعة التالية من الصور وكذلك على مسافة والأمثل لجودة التصوير.
  3. مرة واحدة في الأوعية الدموية هو في التركيز، التقاط إطارات الصور عن طريق الضغط على الزر الأسود جولة على حدة الاستحواذ. يمكن أن تستخدم أيضا على الزر الأسود جولة لخفض أو زيادة إشارة ICG للحصول على أفضل جودة الصورة.
  4. تحديد زاوية رأي الأمثل والتركيز على عمق الصورة الآفات المشيمية. فمن المهم للحفاظ على موقف العين، وعمق التركيز، وإعدادات جهاز آخر ثابت لكامل الوقت بالطبع ICGA. يتم حفظ الصور عن طريق الضغط على زر في لوحة اكتساب الشاشات التي تعمل باللمس وحدة الاستحواذ.
  5. الحصول على صور في المرحلة المتوسطة في 6-15 دقيقة الخلفإيه الحقن.

    ملاحظة: كل من المشيمية والشبكية السفن سيصبح أقل وضوحا. يبدو الأوعية الدموية المشيمية مضان منتشر كما. الآفات المشيمية اظهار hyperfluorescence الظهور على النقيض من يتلاشى المحيطة مضان الخلفية العادية.
  6. الحصول على صور في المرحلة في وقت متأخر من 17-25 دقيقة بعد الحقن.

    ملاحظة: Hyperfluorescence يتلاشى. لم يعد كل من الأوعية المشيمية والشبكية مرئية. يصبح رأس العصب البصري السوداء. الآفات المشيمية Hyperfluorescent يكون المقابل القصوى مع الخلفية يتلاشى.
  7. بعد الانتهاء من اقتناء الصور، وتطبيق مواد التشحيم واضحة هلام العين لعيون الماوس وترك الماوس على وسادة التدفئة لتحقيق الانتعاش.
  8. العودة الفئران لأقفاصها ومنطقة قابضة. تصدير الصور كما المشاجرة أو JPEG ملفات لمزيد من التحليل.

ملاحظة: توقيت كل مرحلة ليست مطلقة. وجدنا أن توقيت عصامقد تتغير مرحلة الفصل اعتمادا على كمية من ICG حقن. أكثر ICG يميل إلى إطالة أمد كل مرحلة. أفضل طريقة لتحديد المرحلة هو وفقا لخصائص كل مرحلة رئيسية من المذكورة أعلاه.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

أجرينا ICGA بالطبع الوقت في HTRA1 الفئران المعدلة وراثيا والسيطرة تتزاحم WT، وكلاهما على خلفية CD1. وقد تم اختيار الخلفية CD1 البيضاء لتسهيل تصوير الأوعية الخضراء الإندوسيانين (ICGA) التصوير (انظر المناقشة). تمدد الأوعية الدموية مثل بعض التوسعات بدأت تظهر في المرحلة المبكرة في الماوس HTRA1 (الشكل 2، السهم الأحمر يشير إلى تمدد في طرف سفينة ودائرة حمراء تشير إلى نوع الآفة polypoidal العنقودية). الأوعية المشيمية هي واضحة للعيان في كل WT والفئران HTRA1 خلال هذه المرحلة المبكرة التعبئة في مرحلة من مراحل صبغ ICG. في المرحلة المتوسطة، وأصبح الآفات hyperfluorescent في مرحلة مبكرة أكثر وضوحا وأكثر الآفات التي تظهر في حين بدأت السفن المشيمية لتتلاشى في الماوس HTRA1 (الدوائر الصفراء تشير إلى ظهور أكثر الآفات). في المرحلة المتأخرة، أصبحت الآفات المشيمية من الفأرة HTRA1 أكثر "متميزة"، كما تلاشى كل السفن بعيدا في الخلفية. العصب البصري وكان رئيس الظلام في كل WT والفئران HTRA1 (الأسهم الخضراء). السمات الرئيسية من المراحل الثلاث متشابهة إلى دوام ICGA في المرضى AMD الإنسان (المرحلة المبكرة، 0-3 دقيقة، المرحلة المتوسطة، 5-15 دقيقة؛ المرحلة في وقت متأخر، 18-22 دقيقة) 1.

الشكل 1
الشكل 1. مقارنة بين الاتحاد الانجليزي وICGA في شبكية العين الماوس التصوير والأوعية الدموية المشيمية. تم تصوير الفئران WT CD1 كتبها IV-IV-FA وICGA باستخدام نظام التصوير متعدد القيد. ويمكن رؤية الأوعية الشبكية في كل من الاتحاد الانجليزي وICGA. لا يمكن إلا أن ينظر الأوعية المشيمية في ICGA. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .

/ 51061fig2highres.jpg "سرك =" / files/ftp_upload/51061/51061fig2.jpg "/>
الشكل 2. ICGA مدار الساعة من HTRA1 الفئران المعدلة وراثيا عن طريق الحقن الرابع. تم تصوير عنصر تحكم WT والماوس المعدلة وراثيا من قبل HTRA1 ICGA (مع الذيل حقن الوريد). سهم أحمر يشير إلى تمدد في طرف سفينة (سليلة واحدة) ودائرة حمراء تشير إلى نوع الآفة polypoidal العنقودية، والتي ظهرت في المرحلة المبكرة. الدوائر الصفراء تشير العديد من الآفات التي ظهرت في المرحلة المتوسطة. تشير الأسهم الخضراء إلى الظلام رأس العصب البصري في كلا WT والفئران HTRA1. لاحظ أن تظهر الآفات polypoidal في المرحلة المبكرة من ICGA وتصبح أكثر وضوحا في المرحلة المتوسطة كما هو الحال في الدراسات الإنسانية 21-24. تظهر الآفات نقطة منفصلة في المرحلة المتوسطة وتصبح واضحة في المراحل المتأخرة (على سبيل المثال أكبر دائرة صفراء تشير إلى ثلاث آفات نقطة). اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر . الرقم 3
الرقم 3. دوام ICGA من HTRA1 الفئران المعدلة وراثيا عن طريق الحقن IP. تم تصوير HTRA1 الفئران المعدلة وراثيا 5، 12، و 20 دقيقة بعد الحقن IP للجنة الدولية. وقد أخذت صور من صفوف الفريق اثنين من اثنين من مختلف الفئران المعدلة وراثيا HTRA1. لاحظ أن الأوعية الدموية المشيمية غير مرئية في الغالب حتى 5 دقائق بعد الحقن (12 دقيقة للماوس في لوحات أقل). اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .

الرقم 4
الشكل 4. ICGA مدار الساعة من صبغةإد (C57BL6) والبيضاء (CD1) الماوس عن طريق الحقن الرابع. لاحظ الفرق في وضوح الأوعية الدموية المشيمية بين المصطبغة والفئران البيضاء. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

في هذه الدراسة، أثبتنا استخدام ICGA لصورة الآفات المشيمية في HTRA1 الفئران المعدلة وراثيا. خصائص في وقت مبكر، المتوسطة، والمراحل المتأخرة من ICGA في نموذج الفأر لدينا تطابق بالطبع الوقت جيدا في الدراسات الإنسانية 1. هذا مهم لإجراء مقارنات أفضل بين أمراض الحيوان والظواهر البشرية التي لا تقدر بثمن للبحوث بشأن آليات الفيزيولوجية المرضية واستراتيجيات علاج الحالات ذات الصلة المشيمية مثل AMD.

أجرينا أول ICGA في الفئران عن طريق الحقن IP وجدت أن الوقت كان الحال متغير بدرجة كبيرة من الماوس لماوس، وربما يرجع ذلك إلى امتصاص متغير من الصبغة ICG من تجويف الجسم في البطن (الشكل 3). وهذا يجعل من الصعب مقارنة مع الدراسات التي يقوم بها الإنسان حقن الرابع. بالإضافة إلى ذلك، ميزات التصوير الوعائي من مراحل مختلفة من IV-ICGA هي مفيدة جدا لوصف أنواع مختلفة من الآفات المشيمية في الحيوان النماذج. معظم الناس في اختيار لتجنب حقن الرابع (على سبيل المثال في FA) للفئران بسبب التحدي التقنية على أداء الذيل الوريد حقن (الماوس أوردة الذيل ضئيلة). ومع ذلك، وينفق الجهد بشكل جيد نظرا لطبيعة استنساخه من هذه التقنية وكمية المعلومات التي تم الحصول عليها. بمجرد أن تتقن تقنية حقن الوريد الذيل، وخطوات أخرى مماثلة إلى حد ما IP-ICGA. فإنه من المفيد أن نذكر أن على المرء أن تحصل على كل شيء أعد مسبقا (مثل نظام التصوير) من أجل القبض على المرحلة المبكرة قصيرة جدا (0-4 دقيقة). قارنا IP-IV-ICGA مقابل ICGA لدراسة مختلف الفئران المعدلة وراثيا HTRA1. قمنا به ~ 100 الفئران لكل طريقة. الاستنتاج هو أن IV-ICGA متفوقة على IP-ICGA لوصف الآفات في المشيمية. أصبح الوقت بالطبع IV-ICGA ممارستنا القياسية لفحص نماذج الماوس AMD. لنفس السبب، فإننا نقترح أن الباحثين ينبغي أن تنظر أداء IV-FA للبحوث الحيوانية.

ر "> أخرى من الطريق حقن، لاحظنا أن لون الصباغ أيضا يؤثر على نوعية ICGA. ذكرت دراسات سابقة أيضا هذا" تأثير تصبغ "18،25. ومع ذلك، لا تتوفر معلومات حول تأثير لون معطف على مختلف مراحل ICGA. قارنا بين الفئران ICGA المصطبغة (C57BL6) والفئران البيضاء (CD1) من خلال دوام IV-ICGA. الأوعية المشيمية كبيرة تظهر غامض وأقل وضوحا في حين أن السفن الصغيرة من الصعب أن نرى في الفئران C57BL6، والتي هي في حاد على النقيض من الصور أكثر وضوحا بكثير من الأوعية المشيمية الكبيرة والصغيرة على حد سواء في الفئران CD1 (الشكل 4). ولوحظ أكبر الفرق في المرحلة المبكرة على الرغم من أن يتأثر أيضا المرحلة المتوسطة، وليس هناك فرق كبير في ICGA المرحلة في وقت متأخر نظرا ل افول إشارة ICG في الأوعية المشيمية. على ما يبدو، ICG مضان يمكن أن يكون قد تم حظره جزئيا من قبل RPE والخلايا الصباغية في المشيمية في الفئران مصطبغة. كاقتراح، يمكن للمرء أن ترغب في النظر بreeding نماذج AMD بهم في الخلفية CD1 للحصول على دقة عالية ICGA.

على الرغم من أن الاتحاد الانجليزي هو المستخدمة في النماذج الحيوانية AMD أكثر على نطاق واسع، ICGA أمر أساسي في الكشف عن تشوهات في الأوعية الدموية المشيمية. القدرة على مراقبة الأوعية الدموية المشيمية الماوس بدقة عالية في الوقت الحقيقي يمكن أن يساعد كثيرا في وصف الباحثون نماذج الماوس AMD والربط مع البيانات التشريحية المرضية. سوف مزيج من ICGA، FA وأكت تكون مفيدة للغاية في وصف النمط الظاهري من النماذج AMD كما هو الحال في تشخيص AMD في المرضى من البشر. منذ الماوس حاليا النموذج الحيواني الأكثر استخداما على نطاق واسع لAMD البحوث 26-29، يمكن للزمن بالطبع IV-ICGA تلعب دورا أوسع في المجتمع البحثي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

YF هو مخترع اثنين من براءات الاختراع في انتظار التي هي ذات الصلة إلى نموذج الفأر AMD المستخدمة في هذا العمل. SK، ZB، وADJ ليس لديهم ما يكشف.

Acknowledgments

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح 1R01EY022901، وجائزة التطوير المهني من البحوث للوقاية من العمى (RPB)، CMReeves & MA مؤسسة ريفز، ومؤسسة E. ماتيلدا زيغلر للمكفوفين، ومؤسسة فرسان الهيكل العين، ومنحة غير المقيد إلى إدارة طب العيون في جامعة ولاية يوتا من RPB. نشكر Balamurali Ambati للحصول على المساعدة التقنية على نظام متعدد القيد التصوير Spectralis وتشانغ تاو للمناقشات وتعليقات على المخطوطة.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Spectralis Multi-Modality Imaging System Heidelberg Engineering, Germany SPECTRALIS HRA+OCT
Tropicamide ophthalmic solution (1%) Bausch & Lomb NDC 24208-585-64 for dilation of pupils
GenTeal Gel Genteal NDC 58768-791-15  clear lubricant eye gel 
Ketamine Vedco Inc NDC 50989-996-06
Xylazine Lloyd Laboratories NADA 139-236
Acepromazine Vedco Inc NDC 50989-160-11
32-G Needle Steriject PRE-32013
1-ml syringe BD 309659
Indocyanine Green Pfaltz & Bauer I01250

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Duane, T. D., Tasman, W., Jaeger, E. A. Chapter 4a, Indocyanine Green Angiography. Duane's clinical ophthalmology on CD-ROM. , Lippincott Williams & Wilkins. Philadelphia. (2002).
  2. Alfaro, D. V. Age-related macular degeneration : a comprehensive textbook. , Lippincott Williams & Wilkins. (2006).
  3. Yannuzzi, L. A. Indocyanine green angiography: a perspective on use in the clinical setting. Am. J. Ophthalmol. 151, 745-751 (2011).
  4. Destro, M., Puliafito, C. A. Indocyanine green videoangiography of choroidal neovascularization. Ophthalmology. 96, 846-853 (1989).
  5. Scheider, A., Schroedel, C. High resolution indocyanine green angiography with a scanning laser ophthalmoscope. Am. J. Ophthalmol. 108, 458-459 (1989).
  6. Guyer, D. R., et al. Digital indocyanine-green angiography in chorioretinal disorders. Ophthalmology. 99, 287-291 (1992).
  7. Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J. A., Guyer, D. R., Orlock, D. A. Digital indocyanine green videoangiography and choroidal neovascularization. Retina. 12, 191-223 (1992).
  8. Regillo, C. D., Benson, W. E., Maguire, J. I., Annesley, W. H. Indocyanine green angiography and occult choroidal neovascularization. Ophthalmology. 101, 280-288 (1994).
  9. Scheider, A., Kaboth, A., Neuhauser, L. Detection of subretinal neovascular membranes with indocyanine green and an infrared scanning laser ophthalmoscope. Am. J. Ophthalmol. 113, 45-51 (1992).
  10. Kuck, H., Inhoffen, W., Schneider, U., Kreissig, I. Diagnosis of occult subretinal neovascularization in age-related macular degeneration by infrared scanning laser videoangiography. Retina. 13, 36-39 (1993).
  11. Imamura, Y., Engelbert, M., Iida, T., Freund, K. B., Yannuzzi, L. A. Polypoidal choroidal vasculopathy: a review. Surv. Ophthalmol. 55, 501-515 (2010).
  12. Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Yannuzzi, L. A. Polypoidal choroidal vasculopathy. Ophthalmol. Clin. N. Am. 15, 537-554 (2002).
  13. Spaide, R. F., Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J., Orlach, D. A. Indocyanine green videoangiography of idiopathic polypoidal choroidal vasculopathy. Retina. 15, 100-110 (1995).
  14. Coppens, G., Spielberg, L., Leys, A. Polypoidal choroidal vasculopathy, diagnosis and management. Bull. Soc. belge d'Ophtalmol.. , 39-44 (2011).
  15. Tsujikawa, A., et al. Pigment epithelial detachment in polypoidal choroidal vasculopathy. Am. J. Ophthalmol. 143, 102-111 (2007).
  16. Jones, A., et al. Increased expression of multifunctional serine protease, HTRA1, in retinal pigment epithelium induces polypoidal choroidal vasculopathy in mice. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 14578-14583 (2011).
  17. Alex, A. F., Heiduschka, P., Eter, N. Retinal fundus imaging in mouse models of retinal diseases. Methods Mol. Biol. 935, 41-67 (2013).
  18. Seeliger, M. W., et al. In vivo confocal imaging of the retina in animal models using scanning laser ophthalmoscopy. Vision Res. 45, 3512-3519 (2005).
  19. Fischer, M. D., Zhour, A., Kernstock, C. J. Phenotyping of mouse models with OCT. Methods Mol. Biol. 935, 79-85 (2013).
  20. Jian, Y., Zawadzki, R. J., Sarunic, M. V. Adaptive optics optical coherence tomography for in vivo mouse retinal imaging. J. Biomed. Opt. 18, 56007 (2013).
  21. Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Huang, S. J., Costa, D. L., Yannuzzi, L. A. Polypoidal choroidal vasculopathy. Surv. Ophthalmol. 49, 25-37 (2004).
  22. Sasahara, M., et al. Polypoidal choroidal vasculopathy with choroidal vascular hyperpermeability. Am. J. Ophthalmol. 142, 601-607 (2006).
  23. Silva, R. M., et al. Polypoidal choroidal vasculopathy and photodynamic therapy with verteporfin. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 243, 973-979 (2005).
  24. Yannuzzi, L. A., et al. Polypoidal choroidal vasculopathy masquerading as central serous chorioretinopathy. Ophthalmology. 107, 767-777 (2000).
  25. Janssen, A., et al. Abnormal vessel formation in the choroid of mice lacking tissue inhibitor of metalloprotease-3. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2812-2822 (2008).
  26. Ding, X., Patel, M., Chan, C. C. Molecular pathology of age-related macular degeneration. Prog. Retin. Eye Res. 28, 1-18 (2009).
  27. Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. Animal models of choroidal and retinal neovascularization. Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).
  28. Pennesi, M. E., Neuringer, M., Courtney, R. J. Animal models of age related macular degeneration. Mol. Aspects Med. 33, 487-509 (2012).
  29. Elizabeth Rakoczy, P., Yu, M. J., Nusinowitz, S., Chang, B., Heckenlively, J. R. Mouse models of age-related macular degeneration. Exp. Eye Res. 82, 741-752 (2006).

Tags

الطب، العدد 84، الإندوسيانين الأخضر تصوير الأوعية الدموية، ICGA، الأوعية الدموية المشيمية،، الضمور البقعي المرتبط بالعمر، AMD، Polypoidal غلاف العين المشيمي وعائي، PCV، متحد البؤر المسح منظار العين بالليزر، IV-ICGA، والوقت بالطبع ICGA، حقن الوريد الذيل
الكشف عن شذوذ في الأوعية الدموية في غلاف العين المشيمي في نموذج الفأر من السن المتصلة تحلل البقعة الصفراء عن طريق التوقيت بالطبع الإندوسيانين الأخضر تصوير الأوعية الدموية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Kumar, S., Berriochoa, Z., Jones, A. … More

Kumar, S., Berriochoa, Z., Jones, A. D., Fu, Y. Detecting Abnormalities in Choroidal Vasculature in a Mouse Model of Age-related Macular Degeneration by Time-course Indocyanine Green Angiography. J. Vis. Exp. (84), e51061, doi:10.3791/51061 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter