Summary
Недавно мы определили роман Drosophila циркадный выход, ритм предпочтения температуры (TPR), в котором предпочтительная температура у мух поднимается в течение дня и падает в ночное время. TPR регулируется независимо от другого циркадного производства, локомотивной деятельности. Здесь мы описываем дизайн и анализ TPR в Drosophila.
Abstract
Циркадные часы регулируют многие аспекты жизни, в том числе сон, локомотивной активности, и температура тела (BTR)ритмы 1,2. Недавно мы определили роман Drosophila циркадный выход, называемый ритм предпочтения температуры (TPR), в котором предпочтительная температура у мух поднимается в течение дня и падает в течение ночи 3. Удивительно, но активность TPR и локомотива контролируется с помощью различных циркадных нейронов3. Дрозофила локомотивной деятельности является хорошо известным циркадных поведенческих выход и предоставил сильный вклад в открытие многих консервативных млекопитающих циркадных генов часов имеханизмов 4. Поэтому понимание ТПР приведет к выявлению до сих пор неизвестных молекулярных и клеточных циркадных механизмов. Здесь мы описываем, как выполнять и анализировать анализ TPR. Этот метод не только позволяет рассекать молекулярные и нервные механизмы TPR, но и дает новое представление о фундаментальных механизмах функций мозга, которые интегрируют различные экологические сигналы и регулируют поведение животных. Кроме того, наши недавно опубликованные данные свидетельствуют о том, что муха TPR разделяет особенности с млекопитающим BTR3. Дрозофила являются эктотермы, в которых температура тела, как правило, поведенчески регулируется. Таким образом, TPR является стратегия, используемая для создания ритмичной температуры тела в этихмух 5-8. Мы считаем, что дальнейшее исследование Drosophila TPR облегчит характеристику механизмов, лежащих в основе контроля температуры тела у животных.
Introduction
Температура является вездесущим экологическим сигналом. Звери проявляют различные виды поведения, чтобы избежать вредных температур и искать удобные. Drosophila демонстрируют надежное поведение предпочтения температуры6,7. Когда мухи высвобождаются в температурный градиент от 18-32 градусов по Цельсию, мухи избегают как теплых, так и холодных температур и, наконец, выбирают предпочтительную температуру 25 градусов поЦельсию утром 3. Датчики теплой температуры являются набор термосенсорных нейронов, ак нейронов, которые выражают Drosophila преходящих рецепторов потенциал (TPR) канал, TRPA16,9. Датчики холодной температуры расположены в 3-м сегменте антенны, так как ablating 3-й сегмент антенны вызывает отсутствие холодной температуры избегания6. Недавно был выявлен белок TRPP Brivido (Brv)10. Так как Brv выражается в 3-м сегменте антенны и опосредует обнаружение холода, Brv является возможной молекулой холодного зондирования, которая имеет решающее значение для поведения предпочтения температуры. В общем, мухи используют эти два датчика температуры, чтобы избежать теплых и холодных температур и найти предпочтительную температуру.
В то время как млекопитающие генерируют тепло для регулирования температуры тела, эктотермы обычно адаптируют температуру тела к температуре окружающейсреды 11. Некоторые эктотермы, как известно, демонстрируют ежедневное поведение TPR, который, как полагают, является стратегией для эктотерм для регулирования их BTR12. Чтобы определить, продемонстрировали ли мухи TPR, мы повторили поведенческий анализ температурных предпочтений в различных точках в течение 24 часов. Мы обнаружили, что Drosophila экспонат ежедневно TPR, который является низким утром и высоко вечером и следует шаблону, аналогичной BTR улюдей 13.
В Drosophila, Есть 150 часов нейронов в головном мозге. Нейроны часов, регулирующие активность локомотивов, называются осцилляторами M и E. Однако, что интересно, осцилляторы M и E не регулируют TPR, вместо этого, мы показали, что DN2 часовые нейроны в головном мозге регулируют TPR, но не локомотивную активность. Эти данные указывают на то, что TPR регулируется независимо от деятельности локомотива. Примечательно, что БТР млекопитающих также самостоятельно регулируется от локомотивной деятельности. Абляционные исследования на крысах показывают, что БТР контролируется с помощью конкретных нейронов SCN, которые нацелены на другой подмножество нейронов подпаравентрикулярной зоны, чем те, которые контролируют активностьлокомотивов 14. Таким образом, наши данные рассматривают возможность того, что млекопитающие БТР и муха TPR эволюционносохраняется 3, так как и летать TPR и млекопитающих БТР экспонат циркадных часов зависимых температурных ритмов, которые независимо регулируются от локомотивной активности.
Здесь мы описываем детали того, как проанализировать TPR поведенческий анализ в Drosophila. Этот метод позволяет изузнать не только молекулярный механизм и нейронные цепи TPR, но и то, как мозг интегрирует различные экологические сигналы и внутренние биологические часы.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Подготовка мух
- Светлые темные (LD) Эксперименты
- Поднимите мух в инкубаторах (25 градусов по Цельсию/40-60%относительной влажности (RH)) при свете 12 часов/темные 12 часов (LD) циклов. Интенсивность света инкубаторов составляет 500-1000 евро люкс.
- Два инкубатора необходимы для завершения анализа поведения в течение 24 часов. Оба инкубатора должны иметь программируемый свет с функциями ON OFF. Они также должны иметь прочные двери, которые не проницаемы для света(т.е. без стекла или плексигласа).
Примечание: Один инкубатор должен быть назначен "дневным" инкубатором и установлен на цикл LD 12 часов света и 12 часов темноты. Второй инкубатор должен быть назначен "ночной" инкубатор и установить на обратный первый с 12 часов темноты следуют 12 часов света. Ночной инкубатор должен быть помещен в комнату, доступную в темноте, таким образом мухи испытывают ночные условия могут быть легко доступны для экспериментов. - Поместите флаконы мухи в дневные или ночные инкубаторы. Собирайте вылупившихся мух в свежем флаконе, 20-30 за анализ и держите в том же инкубаторе 2-3 дня.
- Через 2-3 дня используйте мухи для поведенческого анализа температурных предпочтений.
- В течение дня (время времени Зейтгебера (ЗТ) 0-12) эксперименты, собирать мух из дневного инкубатора.
- Прямо перед поведенческими экспериментами, возьмите собранные флаконы мухи из инкубатора дня.
- На ночь (ЗТ 13-24) экспериментирует, собирает мух из ночного инкубатора.
- Прямо перед поведенческими экспериментами вынёт собранные флаконы из ночного инкубатора, заверните алюминиевой фольгой и поместите в коробку в темной комнате под красную лампу.
Примечание: Поскольку поведенческий анализ температурных предпочтений проводится в темноте для ночных экспериментов, воздействие света на мух должно быть предотвращено до конца поведенческих экспериментов.
Примечание: Мухи не должны подвергаться воздействию двуокиси углерода в день, когда должны состояться эксперименты.
- Эксперименты постоянной тьмы (DD)
-
День ДД
- Дополнительный инкубатор необходим для дневных экспериментов ДД, которые мы называем «переходным» инкубатором для остальной части рукописи. Переходный инкубатор должен быть помещен в комнату, доступную в темноте, таким образом, мухи, испытывающие условия DD, могут быть легко доступны для экспериментов. Пример светового графика для переходного инкубатора будет иметь свет ON с 13:00 до 19:00 и свет OFF в 19:00-13 вечера(рисунок 1).
- Соберите мух, которые были подняты в дневном инкубаторе. Поместите флаконы мух в переходный инкубатор между 13:00-7 вечера, когда свет ON. Таким образом, мухи должным образом подвергаются воздействию света до 7 вечера, в это время свет выключается OFF.
- На следующий день, до 13:00, в темных условиях вынюхайте флаконы из переходного инкубатора, заверните их алюминиевой фольгой и поместите в коробку. Храните коробку в любом инкубаторе еще один день.
-
DD Ночь
- Соберите мух, которые были подняты в ночном инкубаторе в темноте под красной лампой. Или дополнительно собирать мух, когда свет ночного инкубатора ON.
- Оберните собранные флаконы с алюминиевой фольгой в темноте в любое время огни OFF и поместите флаконы в коробку. Храните коробку в любом инкубаторе еще два дня(рисунок 1B).
Примечание: Поскольку поведенческий анализ температурных предпочтений проводится в темноте для ночных экспериментов, воздействие света на мух должно быть предотвращено до конца поведенческих экспериментов.
-
День ДД
- Эксперименты с постоянным светом (LL)
-
Ll день
- Дополнительный инкубатор необходим для дневных экспериментов LL. Этот инкубатор поддерживает состояние LL (25 градусов по Цельсию, 800 люкс), со светом ON непрерывно.
- Собирайте мух, которые были подняты в дневном инкубаторе. Поместите флаконы мух в инкубатор LL в любое время во время их "дня".
-
LL Ночь
- Собирайте мух, которые были подняты в ночном инкубаторе. Передача флаконов мухи из ночного инкубатора в инкубатор LL во время света в ночном инкубаторе ON.
Примечание: Например, свет выключается в 7 утра в ночном инкубаторе. Перенесите флаконы с ночного инкубатора в инкубатор LL до 7 утра и держите флаконы в инкубаторе LL еще 4 дня.
Примечание: В день 4 в условиях LL, колебания активности локомотиваотменено 15,16, в то время как TPR по-прежнему поддерживается 3.
- Собирайте мух, которые были подняты в ночном инкубаторе. Передача флаконов мухи из ночного инкубатора в инкубатор LL во время света в ночном инкубаторе ON.
-
Ll день
2. Аппарат для поведенческого анализа предпочтений температуры
- Поместите крышку из плексигласа (29 см х 19,2см) (рисунок 4)на алюминиевую пластину.
- Мониторинг температуры воздуха между пластиной и крышкой. Шесть температурных зондов прикрепляются в различных положениях на внутренней стороне крышки в пределах одной из полос движения(рисунок 2).
Примечание: Убедитесь, что зонды не касаются ни алюминиевой пластины, ни крышки плексигласа. Температура воздуха должна быть установлена в градиенте от 18-32 градусов по Цельсию. - Поместите аппарат в экологическое помещение при 25 градусах по Цельсию/65-75% RH. Эта комната должна быть закрыта от любого внешнего света. Экологическая комната обычно оборудована вентиляторами для поддержания определенной температуры и влажности.
Примечание: Воздух из вентилятора, вероятно, нарушает стабильный градиент температуры на аппарате. Чтобы предотвратить это, мы используем прозрачный лист, который охватывает область, окружающую аппарат. - Подготовьте термометр и гигрометр, чтобы проверить температуру и влажность в экологической комнате.
Примечание: Свет влияет на температурные предпочтения Drosophila3. Такая же интенсивность света должна поставляться на аппарат равномерно. Интенсивность наших экологических огней комнате составляет 800 фунтов стерлингов люкс.
Примечание: Когда поведенческие эксперименты будут сделаны, поместите трубку,соединенную с резервуаром CO 2 или поставку вблизи отверстия верхней части аппарата для того, чтобы анестезировать и избавиться от мух.
3. Подготовка аппарата к использованию
- Включите аппарат в течение не менее 30 минут, чтобы правильно установить температурный градиент на поверхности пластины(рисунок 3).
- Пальто крышку аппарата поведения с водоотталкивающим, чтобы предотвратить мух от восхождения стены или потолок крышки. Протрите излишки водоотталкивающего и оставьте крышку на 25-30 минут, чтобы высохнуть.
- Удалите конденсат на алюминиевой пластине. Поместите крышку плексигласа на алюминиевую пластину и закрещив с шестью C-зажимами(рисунок 2).
Примечание: Очень важно, чтобы крышка была хорошо запечатана, при необходимости может быть использована двойная палка. - Оставьте крышку, по крайней мере 15 мин. Градиент температуры воздуха между алюминиевой пластиной и крышкой создается от 18-32 градусов по Цельсию.
4. Анализ предпочтений температуры поведения
- Загрузите мух в пространство между алюминиевой пластиной и плексигласовой крышкой аппарата через небольшие отверстия в центре каждой полосы покрытия(рисунки 2 и 4). Обложка отверстия с крышкой скользит, чтобы предотвратить мух от побега.
- Для темных условий, выключите все огни в экологической комнате. Красная лампа может быть использована, когда мухи помещаются в аппарат. Убедитесь, что мухи не подвергаются воздействию каких-либо огней, за исключением красной лампы, пока поведенческие эксперименты не будут сделаны.
- Для каждого испытания используйте 20-25 взрослых мух, которые не должны использоваться повторно в последующих испытаниях. Поведенческий анализ проводится в течение 30 минут. Сделай несколько фотографий с или без вспышки. Будьте осторожны, чтобы не сделать много шума или каких-либо резких движений во время экспериментов.
- Замехать температуру всех шести зондов на аппарате. Обратите внимание на комнатную температуру, а также влажность.
- Обезболивать мух в аппарате углекислым газом, ослабить зажимы, удалить крышку плексигласа, и удалить мух из пластины. После каждого эксперимента мухи отбрасываются. Протрите конденсат или влагу с тарелки. Замените крышку на пластине и затяните зажимами в рамках подготовки к следующему эксперименту.
- Для того, чтобы иметь представление о температурных предпочтениях в течение всего дня, 24-часовой период делится на восемь часовых поясов, четыре в течение дня и четыре ночью. Например, мы используем эти ЗТ или КТ 1-3, 4-6, 7-9, 10-12, 13-15, 16-18, 19-21 и 22-24.
Примечание: Поскольку фенотипные вариации, вызванные эффектами маскировки, ожидаются сразу после того, как свет включен (ЗТ0) или OFF (ЗТ12), мы не исследуем поведение предпочтения температуры в это время (ЗТ или КТ 0-1, 11,5-13 и 23,5-24). По крайней мере пять испытаний должны быть сделаны в каждом часовом поясе для того, чтобы результаты были статистически обоснованными.
5. Анализ данных
- Рассчитайте градиент температуры следующим образом: Определите, где расположены температурные зонды на основе двух рядов, которые расположены на верхней и нижней стороне крышки плексигласа покраям (рисунок 2A).
- Температурный градиент между температурными зондами оценивается как линейный. Основываясь на расположении температурных зондов, а также на соответствующих зарегистрированных температурах, рисуйте линии, представляющие каждую степень температуры в соответствующем положении на снимках. Подсчитайте количество мух, расположенных в каждом интервале градуса. Исключите любые мухи на стенах или потолке крышки.
- Рассчитайте процент мух в каждом температурном диапазоне каждой полосы движения. Средняя предпочтительная температура рассчитывается путем суммирования процентной доли мух и температуры каждого интервала, как показано ниже:
% мух х 18,5 кк х % мух х 19,5 кк й % мух х 20,5 "C ...." % мух х 31,5 КК % от мух х 32,5 С. - Рассчитайте среднюю предпочтительную температуру в каждом часовом поясе: поведение предпочтения температуры выполняется >5 раз в каждом часовом поясе (ЗТ 1-3, 4-6, 7-9, 10-12, 13-15, 16-18, 19-21 и 22-24). Для расчета средней предпочтительной температуры в каждом часовом поясе средняя предпочтительная температура каждого испытания усредовылась вместе. Бары ошибок .m s.e. равны погрешности между испытаниями.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Пример ритма температурных предпочтений показан на рисунке 5. Если процедура поведения успешно выполнена, мухи должны проявлять TPR, в котором они предпочитают низкую температуру утром и более высокую температуру в вечернее время. Увеличение на 1-1,5 градуса по Цельсию в дневное время в температурных предпочтениях следует наблюдать в течение дня, независимо от генетического фона, так как мы показали, что w1118, yw и Canton S мухи демонстрируют аналогичные предпочтения температуры вдневное время 3.
Рисунок 1. Схема подготовки мухи в день ДД. (A)Пример дневного эксперимента ДД. Свет ON с 1 вечера-7 вечера и свет OFF с 7 вечера-1 вечера в переходном инкубаторе. Соберите мух, которые были подняты в дневном инкубаторе. Поместите флаконы мухи в переходный инкубатор где-то между 13:00-7 вечера. На следующий день до 13:00 вынёте флаконы из переходного инкубатора в темноте, заверните их алюминиевой фольгой и поместите в коробку. (B)Пример ночного эксперимента DD. Соберите мух, которые были подняты в ночном инкубаторе либо в темноте в течение 7 утра до 7 вечера или в свете в течение 7 вечера до 7 утра. Возьмите летать флаконы из ночного инкубатора в темноте между 7 утра и 7 вечера, и оберните их алюминиевой фольгой и поместите их в коробку
Рисунок 2. Температурные предпочтения поведенческого аппарата. (A)Вид сверху. Крышка плексигласа помещается на алюминиевую пластину с шестью C-зажимами. Шесть температурных зондов прикрепляются в различных положениях на внутренней стороне крышки в пределах одной из полос движения. Две линейки расположены на верхней и нижней части крышки плексигласа по краям, чтобы определить градиент температуры. (B) Вид сбоку. Под алюминиевой пластиной (44 см х 22 см) помещаются четыре устройства Peltier. Каждое устройство Peltier подключено к контроллерам температуры, которые генерируют холодную или жаркую температуру. Чтобы предотвратить перегрев Peltiers, компьютерная система охлаждения подключена к водопроводу, вентиляторам для охлаждения воздуха и источнику питания. Температурные зонды встроены в край алюминиевой пластины и подключены к контроллерам температуры для непосредственного контроля температуры на алюминиевой пластине. Для нашего нынешнего аппарата холодные и горячие стороны устанавливаются на уровне 12 градусов по Цельсию и 36 градусов по Цельсию, соответственно.
Рисунок 3. Схема аппарата. Температурные зонды используются в качестве контроля обратной связи, читая температуру на алюминиевой пластине. Устройства Peltier подключены к контроллерам температуры. Чтобы предотвратить перегрев Пелтиеров, жидкие охладители непосредственно помещаются под Peltiers. Четыре жидких охладителя соединены водопроводом, которые соединяются с насосом и радиатором. Радиатор имеет два вентилятора, которые охлаждаются температурой воды. Насос и радиатор подключены к энергоснабжению.
Рисунок 4. План крышки плексигласа. Это план для крышки, которая сделана из плексигласа. Крышка имеет четыре полосы, разделенные на три 0,2 см толщиной разделителей, и 0,7 см диаметром отверстие расположено в центре верхней панели на каждой полосе(рисунок 2A).
Рисунок 5. Пример поведенческих данных TPR. TPR w1118 летает более 24 часов. Предпочтительные температуры были рассчитаны с использованием распределения мух в экспериментах по поведению предпочтения температуры. Данные отображаются как средняя предпочтительная температура в каждом часовом поясе. Цифры представляют собой количество анализов. АНОВА, П< 0.0001. Тест Туки-Крамера по сравнению с ЗТ1-3, ЗП < 0,001, ЗП < 0,01 или 0,01 < 0,05. Эта цифра фенотипа TPR адаптирована из Kaneko et al. 3 с разрешения.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Здесь мы иллюстристрм детали поведенческих предпочтений температуры аппарата и анализ поведения TPR. Drosophila демонстрируют основные, надежные и воспроизводимые особенности тактовой TPR. Тем не менее, наши данные показывают, что по крайней мере два фактора, окружающий свет и возраст, значительно нарушают TPR поведенческих фенотипов.
Мы наблюдаем, что свет значительно влияет на температурные предпочтения в Drosophila. Это согласуется с тем фактом, что w1118 мух хранится в LD предпочитают более высокие температуры в дневное время, чем те, которые хранятся в ПД, хотя ритмические изменения предпочтительной температуры по-прежнему поддерживается под LD иDD 3. Таким образом, свет влияет на температурные предпочтения мухи независимо от циркадных часов. Поскольку не ясно, сколько интенсивности света требуется и какие механизмы регулируют этот свет зависит от температуры предпочтения, мы используем ту же интенсивность света (500-1000 люкс) во время экспериментов для получения воспроизводимых результатов.
Возраст мух также влияет на температурные предпочтения. Мы избегаем использования день 1 мух, потому что фенотипы TPR день 1 мухи (один день после вылупления) являются переменными. Хотя день 4 и старше мухи показывают постоянное поведение TPR, они предпочитают более низкие температуры, чем 2 или 3 дня старых мух. Поэтому очень важно не смешивать широко возрастных мух. Мы используем день 2-3 мухи или день 4-5 мух группы по мере необходимости.
В нашем текущем методе поведения TPR мы исследуем поведение температурных предпочтений только в течение 30 минут. Причина этого в том, что мухи держали >1 час в градиенте температуры, как правило, предпочитают более низкую температуру. Возможно, это связано с нехваткой пищи и воды в аппарате. Таким образом, мы отбрасываем мух после каждого 30 мин поведенческого эксперимента. Было бы огромным преимуществом, если бы поведение TPR можно было измерять непрерывно, по крайней мере 24 часа, в идеале 15 дней. В этом случае анализ поведения TPR будет легко сделать без переноса флаконов мух в различные инкубаторы. Что еще более важно, фенотипы TPR будут более эффективно по сравнению с другими циркадными поведениями, такими как активность локомотивов.
Звери очень чувствительны к небольшим изменениям в окружающей среде. Мы показали, что поведение предпочтения температуры мух не только регулируется часами, но сильно зависит от света. TPR может быть поведенческий выход, который интегрирован всеми экологическими сигналами и внутренними состояниями. Дрозофила является сложной модельной системой для вскрытия фундаментальных механизмов функций мозга с помощью различных генетических инструментов, относительно простой структуры мозга и универсальных поведенческих анализов. Таким образом, изучение анализа температурных предпочтений может пролить свет на фундаментальные механизмы того, как мозг интегрирует различную информацию для получения оптимального поведения.
Кроме того, наши недавно опубликованные данные свидетельствуют о том, что муха TPR разделяет особенности с млекопитающим BTR3. Поскольку механизмы контроля сна у мух аналогичны тем, кто контролирует сонмлекопитающих 17-20,мы считаем, что дальнейшее исследование Drosophila TPR будет способствовать более широкому пониманию циркадного ритма и поведения сна.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Раскрывать нечего.
Acknowledgments
Мы благодарны докторам Аравинтхану Сэмюэлю и Марку Гершоу, которые помогли разработать начальную версию поведенческого аппарата, и Мэтью Бати, который модифицировал поведенческий аппарат. Это исследование было поддержано попечителем Грант из Цинциннати Детская больница, JST / PRESTO, Марш Dimes и NIH R01 GM107582 в F.N.H.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bright Lab Jr. Safelight | Amazon | #B00013J8UY | Red light for dark rooms |
| Rain X | SOPUS products | Water repellent: Apply the plexiglass cover | |
| C-Clamp | Home Depot | ||
| Temperature/hygrometer | Fisher | 15-077-963 | |
| Peltier devices | TE Technology, Inc. | HP-127-1.4-1.15-71P | |
| Thermometer | Fluke | Fluke 52II | |
| Bench top controller | Oven Industries | 5R6-570-15R and 5R6-570-24R | |
| Temperature sensor probe | Oven Industries | TR67-32 | |
| Generic 480 Watt ATX power supply | computer cooling system | ||
| MCR220-QP-RES Dual 120 mm Radiator with reservoir | Swiftech | computer cooling system | |
| MCP350 In-Line 12V DC pump | Swiftech | computer cooling system | |
| MCW50 graphics Card liquid cooler | Swiftech | computer cooling system | |
| Scythe Kaze-Jyuni SY1225SL12SH fan | Crazy PC | computer cooling system |
References
- Krauchi, K. The thermophysiological cascade leading to sleep initiation in relation to phase of entrainment. Sleep Med. Rev. 11, 439-451 (2007).
- Krauchi, K. The human sleep-wake cycle reconsidered from a thermoregulatory point of view. Physiol. Behav. 90, 236-245 (2007).
- Kaneko, H., et al. Circadian Rhythm of Temperature Preference and Its Neural Control in Drosophila. Curr. Biol. 22, 1851-1857 (2012).
- Allada, R., Chung, B. Y. Circadian organization of behavior and physiology in Drosophila. Annu. Rev. Physiol. 72, 605-624 (2010).
- Garrity, P. A., Goodman, M. B., Samuel, A. D., Sengupta, P. Running hot and cold: behavioral strategies, neural circuits, and the molecular machinery for thermotaxis in C. elegans and Drosophila. Genes Dev. 24, 2365-2382 (2010).
- Hamada, F. N., et al. An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila. Nature. 454, 217-220 (2008).
- Hong, S. T., et al. cAMP signalling in mushroom bodies modulates temperature preference behaviour in Drosophila. Nature. 454, 771-775 (2008).
- Dillon, M. E., Wang, G., Garrity, P. A., Huey, R. B. Review: Thermal preference in Drosophila. J. Therm. Biol. 34, 109-119 (2009).
- Viswanath, V., et al. Opposite thermosensor in fruitfly and. Nature. 423, 822-823 (2003).
- Gallio, M., Ofstad, T. A., Macpherson, L. J., Wang, J. W., Zuker, C. S. The coding of temperature in the Drosophila brain. Cell. 144, 614-624 (2011).
- Stevenson, R. D. The relative importance of behavioral and physiological adjustments controlling body temperature in terrestrial ectotherms. Am. Nat. 126 (3), (1985).
- Refinetti, R., Menaker, M. The circadian rhythm of body temperature. Physiol. Behav. 51, 613-637 (1992).
- Duffy, J. F., Dijk, D. J., Klerman, E. B., Czeisler, C. A. Later endogenous circadian temperature nadir relative to an earlier wake time in older people. Am. J. Physiol. 275, 1478-1487 (1998).
- Saper, C. B., Lu, J., Chou, T. C., Gooley, J. The hypothalamic integrator for circadian rhythms. Trends Neurosci. 28, 152-157 (2005).
- Konopka, R. J., Pittendrigh, C., Orr, D. Reciprocal behaviour associated with altered homeostasis and photosensitivity of Drosophila clock mutants. J. Neurogenet. 6, 1-10 (1989).
- Qiu, J., Hardin, P. E. per mRNA cycling is locked to lights-off under photoperiodic conditions that support circadian feedback loop function. Mol. Cell Biol. 16, 4182-4188 (1996).
- Crocker, A., Sehgal, A. Genetic analysis of sleep. Genes Dev. 24, 1220-1235 (1220).
- Hendricks, J. C., et al. Rest in Drosophila is a sleep-like state. Neuron. 25, 129-138 (2000).
- Shaw, P. J., Cirelli, C., Greenspan, R. J., Tononi, G. Correlates of sleep and waking in Drosophila melanogaster. Science. 287, 1834-1837 (2000).
- Parisky, K. M., et al. PDF cells are a GABA-responsive wake-promoting component of the Drosophila sleep circuit. Neuron. 60, 672-682 (2008).
