나이 세리아 수막염은 혈관을 감염시키는 인간의 특정 병원체이다. 이 프로토콜에서 인간의 미세 혈관은 면역 억제 쥐에 인간의 피부를 이식하여 마우스에 도입된다. 박테리아는 일반적으로 인간의 경우에 관찰 부르르 발진, 혈관 손상과 발전에 선도적 인, 인간의 혈관에 광범위하게 준수합니다.
그것은 인간의 혈액 스트림을 입력 할 때 나이 세리아 수막염은 심각한, 자주 치명적인 패혈증의 원인이됩니다. 감염이 혈관 누수, 부르르 발진 최종 조직 괴사의 발전의 결과로 혈관의 광범위한 손상에 이르게한다. 이 감염의 발병 기전을 연구하는 것은 이전에 생체 내 모델에서 어렵게 박테리아의 인간의 특이성에 의해 제한되었다. 이 프로토콜에서는, 우리는 인간의 피부, 피부의 미세 혈관을 포함하는이, 면역 쥐에 이식되는이 감염에 대한 인간화 모델을 설명합니다. 그 인간의 특성을 유지하면서 이러한 혈관 마우스 순환 anastomose. 일단이 모델 N.에 도입 수막염은 광범위한 혈관 손상, 염증과 부르르 발진의 경우에 개발의 결과로, 인간의 혈관에 독점적 준수합니다. 이 프로토콜은 콩트에서이 모델의 접목, 감염 및 평가 단계에 대해 설명합니다N.의 XT 수막염 감염. 기술은 혈류 감염 수많은 인간의 특정 병원균에 적용될 수있다.
수막 구균 패혈증은 세균 병원체 나이 세리아 수막염 기인 자주 심각한 혈액 태어난 감염이다. 수막 구균 패혈증 환자들은 이전에 순환 세균과 박테리아 제품 1에 의한 혈관 파괴와 관련되어 자신의 피부에 점상 또는 부르르 발진이 존재. 임상 환자의 피부 생검은 종종 선박 2를 작성, 미세 혈관과 관련된 박테리아를 보여줍니다. 떨어져 박테리아, 광범위한 혈전증, 혈액 응고, 혼잡과 혈관 누출로부터는 부르르 지역 3-5에서 볼 수있다. 이 혈관 손상은 수막 구균 생존자 변연 절제술, 심지어 절단의 결과로, 피부와 주위 조직의 광범위한 괴사로 이어질 수 있습니다. 감염이 혈관 손상을 일으키는 방법을 이해하면 예방 및 치료 전략을 최적화하는 것이 중요합니다. 수막 구균 패혈증에 대한 연구의 대부분은 체외에서 수행되었다N. 인간의 특이성에 의한 인간 세포주 수막염. 감염의 여러 측면 세균의 부착, 숙주 세포 반응뿐만 아니라 사이토 카인 반응 6-9 포함한 체외에서 연구되어왔다. 유형 IV의 필리 (TFP)은 N.의 주요 접착 세포 기관으로 연루되어있다 수막염은 상피 및 내피 세포 (10)에 모두. 또한 N.의 접착력을 보였다 세포를 호스트 수막염은 전단 응력에 따라 달라지며, 따라서 미세 혈관 (11) 내의 혈액 흐름 속도에 관련된 것으로 생각된다. 이 박테리아가 생체 내에서 직면하는 역동적 인 스트레스가 발병에 매우 중요합니다 제안합니다. 이는 시험관 내에서의 작은 혈관의 미세 환경을 모델링하지만 매우 어렵다.
나이 세리아 TFP 대한 밀착성 수용체는 아직 알 수 있고, 따라서 동물 모델에서 세균의 부착을 달성하기 위해 노크의 전략은이 시점에서 예상 할 수없는. CD46는 총요소 생산성 수용체 유전자 변형 동물 모델 마우스의 역할을하도록 제작 된 것으로 제안했다. 그러나 이러한 동물에 감염 광범위한 감염으로 이어질하지 않거나 개발 (12, 13)를 발진 할 수 있습니다. 나이 세리아 감염 균혈증 측면에 대해 기술 된 다른 동물 모델의 계정에 철 소스 (14, 15) 인간 트랜스페린의 세균 환경을. 인간 트랜스페린을 보완 또는 연장 기간 동안 혈류의 증가 세균 부하 트랜스 결과로부터 발현하지만,이 모델은 세균의 부착이나 습진 개발 16,17 보여주지 않는다 어느.
이 프로토콜에서는, 우리는 피부의 미세 혈관을 포함하여 인간의 피부, 면역 마우스 (18, 19)에 이식 된 인간 답게 된 마우스 모델에 대해 설명합니다. 이것은 마우스 순환 관류 기능적 인간 혈관 초래한다. 인간 트랜스페린의 보완과 결합,이 MODEL N.은 인간의 특정 측면의 적어도 두 개의 차지 수막염은 생체 내 환경에서, 인간의 내피 세포와 인간 트랜스페린 즉. N. 수막염은 혈관 손상과 부르르 발진 개발 (18)을 포함하여 임상 환자에서보고되는 것과 유사한 병리를 생산, 인간의 내피 세포에 특이 적으로 부착이 모델에 정맥 소개했다.
동물 모델은 세균성 병인 연구에 매우 중요하다. 그것은 완전히 세포 배양에서 생체 내 환경을 모방하는 것은 불가능하며 기주 – 많은 동적 요인에 좌우되고 있다는 것이 명백 해지고있다. 같은 N. 일부 임상 적으로 중요한 병원체의 인간의 특이성 수막염은, HIV, HCV, 열대열 원충 (Plasmodium falciparum), 리스테리아 균, 살모넬라 균이 감염에 대한 생체 내 모델의 사용을 제한하고있다. 우리는 전염성 단계 특이성에 관여하는 이해하기 시작 그러나, 인간 답게 모델이 개발되고있다. 여기에 설명 된 프로토콜은 N.과 생체 내 감염의 광범위한 허용, 생쥐로 인간의 미세 혈관의 도입이의 데모입니다 수막염은 혈관 손상과 가끔 부르르 발진의 개발의 결과로.
이 모델을 사용하여,우리는 총요소 생산성의 접착 성이 세균의 돌연변이 체를 사용하여 혈관 손상이 접착 (18)의 부재에서 감소된다 의해 생체 내에서 혈관 식민지에 참여하는 것으로 정의 할 수 있었다. 이전에는 순환 세균 제품이 손상 연루되어있다 그러나 우리의 결과는 지역의 접착 및 혈관 식민지에 대한 결정적인 역할을하는 것이 좋습니다. 이 새로운 치료 표적 개발을위한 새로운 가능성을 엽니 다. 병원성 세균의 부착은 약학 적으로 차단 될 수 있다면 그것은 아마도 피부 병변의 발생을 예방하고 조직 괴사, 괴사 조직 제거 및 사지 절단의 측면에서 수막 구균 생존자를위한 더 나은 결과로 이어질 수 있습니다. 작업은 또한 감염의 복잡성과 면역 반응과 응고 캐스케이드의 참여를 보여 주었다. 우리는 현재 인간의 내피 (18)의 상대적으로 작은 양에도 불구하고 감염된 생쥐의 혈청에서 인간의 사이토 카인 신호를 확인했다.이 영역에 마우스 면역 세포 집단의 침윤과 함께 중요한 시토 킨 반응을 나타냈다.
동물 모델은 물론 완벽하게 인간의 질병을 복제 할 수 없다 모든 결과를 염두에두고 고려되어야 그들로부터 얻고. 예를 들어,이 모델의 혈액 순환 세포를 마우스의 원산지이며, 우리는 그들이 인간의 세포에 다르게 동작 할 수 있음을 할인 할 수 없습니다. 이것의 장점은 그러나, 우리의 최근 간행물 (18)에서와 같이, 순환 마우스 세포와는 인간 내피로부터 발신 신호를 구별 할 수있는 능력이다. 이 모델에서 사용 된 마우스의 면역 배경 또한 상기 '인간화'양태를 추가, 인간 면역 세포 집단의 동종 전송을 허용한다. 쥐의 면역 배경 그러나 모든 부족하거나이 모델에서 결함이 NK, T 또는 B 세포의 역할을 마스크 할 수 있습니다. 상대적으로 짧이 모델에 사용되는 t의 기간 (24 시간)을 중심으로 타고난 반응을 우려하지만, 장기 감염과 면역 다른 옵션의 발전을 위해 탐구 할 필요가 있습니다.
피부는 N.을위한 중요한 감염 사이트입니다 수막염하지만 인간의 혈관은 비교적 적은 양을 갖는 또한 수많은 기관을 포함한 전신 감염에 데이터를 외삽하는 것은 어렵다는 것을 의미한다. 이 모델은 피부 병변 개발의 연구를 위해 수 있지만, 이러한 상피 및 뇌 혈관 횡단 등의 수막 구균 감염의 중요한 단계는 포함되어 있지 않습니다. 이러한 인간화 모델의 발전은 감염의 다른 측면을 해결하기 위해 필요하다. 그럼에도 불구하고이 모델은 수많은 사람의 특정 병원균, 혈관을 대상으로 특히 큰 잠재력을 제공합니다.
The authors have nothing to disclose.
저자는 원고의 중요한 읽기 Dumenil 연구소의 모든 구성원, 특히 실케 실바에게 감사의 말씀을 전합니다. HOPITAL Europeen에서 조르쥬 퐁피두 (HEGP), 박사 데이비드 Maladry의 수술 부서. 마이클 Hivelin 박사 패트릭 Bruneval, HEGP에서 병리학 교실. 엘리자베스 HUC 이끄는 PARCC의 동물 시설. 이 작품은 다음과 부여 기관에 의해 지원되었다 : 마리 퀴리 IEF 교제 없음. 273223 (KM), INSERM에서 ATIP-Avenir에서 그랜트, CODDIM 장비 보조금 (일 드 프랑스 지역), FRM 장비 부여, 우수 컨소시엄의 IBEID 연구소 (매그 라 공들인 médicale을 부어), ANR 부여 "(직원은 국립 라 공들인을 부어) 버그 인 흐름 ". 출자자는 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 게시 할 수있는 의사 결정, 또는 원고의 준비에 역할을했다.
DMEM | Gibco Invitrogen | 31885-023 | |
Phosphate buffered saline | Gibco Invitrogen | 10010-056 | |
Ketamine 500 | Virbac France | LOT N°VAL4243 | |
Xylazine | Bayer Healthcare | AMM N° FR/8146715 2/1980 | LOT N° KPO809S |
(Rompun 2%) | |||
Optigel | Europhta | Medicament autorisé N°3400933521134 | |
Lacrigel | |||
Tronothane | Lisa Pharma | ||
GC agar Base | Conda | 1106 | |
Human endothelium SFM media | Gibco Invitrogen | 11111 | |
Fetal bovine serum | P A A | A15-101 | |
Human transferrin | Sigma-Aldrich | T3309 | |
UEA lectin – rhodamine | Vector Labs | RL-1062 | |
Hematoxylin | Sigma-Aldrich | H9627 | |
Eosin | Sigma-Aldrich | E4009 | |
Xylene | Sigma-Aldrich | 534056 | |
Humeca BV, Holland | 4.SB01 | ||
Equiptment Name | Company | Catalogue Number | |
Sober Hand Dermatome | Humeca BV, Holland | 4.SB01 | |
Animal housing | Innovive | M-BTM-C8 | |
Biopsy punch (4 mm) | Dominic Dutscher | 30737 | |
Fast-Prep lysing matrix M tubes | MP Bio | 116923050 | |
MagNA Lyzer Green Beads | Roche | 3358941001 | |
MagNA Lyzer | Roche | 3358976001 | |
Vectashield mounting media | Vector Labs | H-1000 | |
Vetbond | 3M | 1469SB | Tissue Glue |
OCT tissue tek | Sakura | 4583 |