Bu rapor, kısa süreli hafif anestezi altında fare lumbar spinal kordda siRNA yerelleştirilmiş transfeksiyonu için intratekal iğne giriş basit ve hızlı bir yöntem açıklanır.
Bu rapor, non-invaziv bir şekilde akut intratekal iğne enjeksiyon tekniği, kateter implantasyonu yani bağımsız bir adım-adım kılavuz açıklanır. Bu cerrahi tekniğin teknik sınırlama ellerin incelik yatıyor. Enjeksiyon, özellikle eğitimli bir deneyci için, hızlı, ve bu teknikle doku bozulma az olduğundan, tekrarlanan enjeksiyonlar mümkündür; yabancı araçlara ayrıca bağışıklık reaksiyonu (. Örneğin kateter) oluşmaz, böylece daha iyi ve daha spesifik dışarı oku verme spinal kord modülasyon. Maddenin uygulanması büyük ölçüde omurilik hedef bölge ile sınırlı olduğu için, ilaçlar büyük dozlarda uygulanması gerekmez ve diğer dokusu üzerinde istenmeyen etkileri daha da önemlisi, bir sistemik uygulama ile gözlemlendiği üzere, 1 aşılabilir 2. Ayrıca, polyethylenim yardımıyla nükleik asidin in vivo transfeksiyonu ile bu teknik kombineine (PEI) farmakolojik maddelerin teslimi hem de gen, RNA ve protein modülatörleri ile spinal fonksiyonlarını incelemek için büyük bir çok yönlü ve çok reaktif 3.,.
Omurilik işleme ve ağrılı (nosiseptif) girişlerine 4-7 iletim dahil kilit biyolojik süreçler ve fizyolojik fonksiyonları, çeşitli çok önemli bir merkezdir. Çeşitli deneysel teknikler, intratekal kateter 8 kronik implantasyonu, omurilik mikroenjeksiyon ve intratekal enjeksiyon iğne 9 ile omurilik, farmakolojik modülasyonuna kolaylaştırmak için geliştirilmiştir. Her teknik kendine özgü avantajları ve dezavantajları vardır, ve deney paradigma bağlı olarak bir teknik diğerlerine göre daha uygun olabilir. Intratekal kateter kronik implantasyonu sıçanda kolayca mümkün olduğu iken, bu yöntem, boyut kısıtlamaları göz önüne alındığında, fare çok zordur. Başarı oranı çok düşüktür ve motor açıkları nedeniyle sık sık fare ciddi sınırlı subdural alanda bir kateterin büyük varlığı nedeniyle meydana gelir. Ayrıca, ilaçların uzun süreli teslimat nedeniyle sık pıhtılaşma işlenirkronik kateter yerleştirildi. Son olarak, bağışıklık reaksiyonları yaygındır.
Bu sorunlar, farelerde omurilik için ilaç ve reaktiflerin hızlı ve anatomik olarak sınırlı uygulama sağlayan bir preimplanted kateter yokluğunda bir iğne vasıtasıyla, akut intratekal enjeksiyon yöntemi kullanılarak atlatılabilir. Bu yöntem, tam olarak böyle spinal düşük dozajları ve sınır yan etkileri izin modülasyonu, hem de maddelerin yok sunmak için yeteneği özgüllük gibi diğer sistemik tatbikat yolları (örneğin, oral, intravenöz, intraperitonal vs) üzerinden teslim intratekal yararlarını muhafaza intratekal enjeksiyon sırasında iğne dura mater ve omurilik arasına sokulur olduğundan, normal olarak kan-beyin bariyerinden geçmezler. Önemli olarak, ancak, intratekal teslimat diğer yöntemlere kıyasla, intratekal enjeksiyon iğne yöntem olup, çok sayıda uygulama sağlayan, en az invazivHerhangi bir ciddi doku hasarına neden veya bağlı yabancı madde implantasyonuna bağışıklık reaksiyonunu çağrıştıran olmadan aynı hayvan. Ancak, bu etkinlik için izin iğnenin çok hassas hedefleme için teknik beceri gerektirir.
Burada, özellikle görsel olarak lumbar spinal kordon hedeflenmesi için bir başarı oranı elde etmek için uygun bir yöntem göstermektedir. Bu deneyde seçilmiş enjeksiyonu site L5 ve omurga zarar olasılığını en aza indirmek için, spinal kordon uçları yere yakın L6 omurgalı kolonu arasındaki oluktur. Ayrıca, siRNA'lar kullanarak omurilikte genleri yıkmak için bu tekniğin kullanımını göstermektedir.
Bu nedenle, iğne intratekal enjeksiyonlar yukarıda tarif edilen teknik, etkili, hızlı, spesifik olarak lokalize edilmiş ve geri dönüşlü bir. Teknik olarak, bu prosedür, en kritik yönü oluk içine iğne sokulması noktasıdır. Bu prosedür çok sakin elleri ve sabır ile yapılır önemlidir. Birçok cerrahi işlemler gibi, eğitim başarılı enjeksiyon oranını artırır. Gerçek bir deney sırasında, bu teknik, doğrudan enjeksiyon başarılı olup olmadığını teyit etmek için açık bir göstergesi…
The authors have nothing to disclose.
in vivo-jetPEI | Polyplus | 201-10G | |
WAVE1 siRNA | Santa Cruz | sc-36832 | |
Control siRNA-A | Santa Cruz | sc-37007 | |
Anti-ß-Tubulin III antibody | Sigma | T2200 | |
Anti-WAVE1 antibody | R&D Systems | AF5514 | |
Fast green dye | Sigma | F-7252 | |
Isoflurane | Baxter | ||
Isoflurane setup | Dräger Lübeck | ||
Shaver | Wella | ||
Hamilton syringe Gastight 1702 | Hamilton | ||
30G 1/2, 0,3 * 13mm Needle | BD Microlance | 304000 | |
Microscope Leica MS5 | Leica | ||
WAVE1 forward primer for qRT-PCR | Sigma | cacagagcctcaggacagg | |
WAVE1 reversed primer for qRT-PCR | Sigma | cttttcaccaacggcatctt | |
FastStart Essential DNA Green Master | Roche | 6402712001 |