Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Bioengineering

マイクロ流体ジェッティングを使用して、脂質二重層小胞の生成

doi: 10.3791/51510 Published: February 21, 2014

Summary

液滴界面の脂質二重層に対するマイクロ流体噴射は、膜の非対称性、膜貫通タンパク質の取り込み、および材料のカプセル化を制御して小胞を生成するための信頼できる方法を提供します。この技術は、区画化された生体分子が所望される生体系の様々な研究に適用することができる。

Abstract

ボトムアップ合成生物学は、潜在的に生化学系と、最小限の生物を調査し、再構成するための新しいアプローチを提示します。この新興分野は、下から上に複雑な、機能してシステムへの基本的な生物学的なコンポーネントを設計し、組み立てる技術者、化学者、生物学者、物理学者を行っています。このようなボトムアップのシステムは、基本的な生物学的問い合わせや、革新的な治療法1,2人工細胞の開発につながる可能性があります。巨大単層小胞(GUVs)は、それらの細胞様膜構造とサイズに合成生物学のためのモデルのプラットフォームとして機能することができます。マイクロ流体吐出、又はmicrojettingは、制御された大きさ、膜組成、膜貫通タンパク質の取り込み、およびカプセル3を有するGUVsの生成を可能にする技術である。この方法の基本原理は、懸濁リットル変形するピエゾ作動式インクジェット装置によって生成された複数の高周波流体パルスの使用であるGUVに重層をIPID。プロセスは、石鹸膜でシャボン玉を吹くに似ています。噴出液、包含する溶液の組成、および/または成分の組成を変化させることによって二重層に含まれる、研究者は、カスタマイズされた小胞を作成するためにこの技術を適用することができる。本稿ではmicrojettingにより液滴界面二重層から簡単な小胞を生成するための手順について説明します。

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

これは、細胞生物学の分子から細胞への我々の理解を統合することが含まマルチスケール問題であることがますます明らかになってきた。その結果、分子が個別に動作し、正確にどのように知ることは複雑な細胞の挙動を理解するには十分ではない。これは、5を抽出するアフリカツメガエルにおける脂質二重層小胞4、紡錘体とアクチンネットワーク相互作用の再構成によって例示されるように、部分的には多成分系の射出挙動の存在であり、細菌の細胞分裂機械6の空間的なダイナミックス。生体系の分子プロセスを解剖の還元主義のアプローチを補完する一つの方法は、生物学的要素の最小セットを使用して細胞挙動を再構成する逆のアプローチを取ることです。このアプローチの重要な部分は、限られた量の生体分子の信頼性の高いカプセル化、細胞の重要な機能が含まれます。

e_contentは">いくつかの戦略は、バイオミメティックシステムを研究するための生体分子をカプセル化するために存在する。最も生物学的に関連システムは、細胞の細胞質膜によって課される生化学的および物理的な制約を模倣する脂質二重膜、である。電鋳7による巨大単層小胞(GUVs)の形成、精製タンパク質を操作するための問題である可能性がありGUV世代14のために最も広く使用される技術の一つは、通常、高塩緩衝液8との互換性がないため不十分な封入収率を持っています。電鋳でも大量の試料を必要とする(> 100μL)、 、および非効率的に近接した脂質層の間の拡散の困難さに起因する大きな分子を組み込んでいる脂質小胞を生成するためのいくつかのマイクロ流体アプローチが開発されている。層を水 - 油 - 水との間の2つのインターフェイスを介して構成要素を通過するダブルエマルション法を、(W / O / W)、Voの蒸発に依存しています脂質二重層の形成9を駆動するlatile溶媒。他のものは脂質二重層小胞10または二つの独立したステップ11での連続的なストリームを生成するマイクロ流体組立ラインを使用している。我々は、急速に制御されたサイズ、組成、およびカプセル化のGUVsを生成するために液滴界面二重層12に流体パルスを印加することに基づいて、代替技術を開発した。マイクロ流体噴射として知られている我々のアプローチは、生物学的な様々な問題を調査するための機能的な生体分子システムを作成するためのアプローチを提供し、いくつかの既存の小胞生成技術の組み合わせの利点があります。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1。無限チャンバー製作

  1. コンピュータ支援設計(CAD)ソフトウェアを使用して(その形状にちなんで命名)​​無限室を設計し、それがレーザーカッターと互換性があるように、ファイルを保存します。レーザーカッターで透明なアクリルで1/8- 3月16日からチャンバをカット0.15インチの中心間距離でこの形​​状、直径0.183の別々の二つの円を作成します。無限の形状は、液滴界面二重層形成および安定性を促進する。
  2. 無限型のウェルにアクリルチャンバーの縁を通じて1月16日に穴を開けます。反対側に繰り返します。はさみで0.2ミリメートルのアクリルシートまたは井戸底として機能するように、レーザーカッターから小さな長方形をカットします。
  3. 0.2ミリメートルのアクリルの片面に速乾性接着剤の薄いが完全な層を適用し、チャンバーの底に接着します。室の底にしっかりと所定の位置に0.2ミリメートルのアクリルを保持し、分配する接着剤は、シールを作成しても表示領域を覆う回避することを可能にする界面での接着剤。その縁がチャンバ壁の端と同一平面であり、それは完全に無限室カットアウトを覆うようにアクリルを合わせてください。これは、十分なジェットの浸透を可能にし、ウェルの漏洩を防ぐことができます。
  4. 開けた穴をカバーするために天然ゴムの2小片をカット。穴の周囲速乾性の接着剤を適用します。確保にピンセットですべての領域に穴を押し上でゴムを配置します。両方開けた穴について、この手順を繰り返します。漏れを防ぐために、すべての接着の接続が完了したシールであることを確認してください。
  5. 針23 G、1を用いて、圧電方式のインクジェット先端部の挿入を容易にするために、チャンバの両側に天然ゴムに穴を突く。

2。実験の準備

-20℃の冷凍庫でクロロホルムに店頭在庫の脂質溶液。この研究では、1,2 - diphytanoどちらかイル-sn-グリセロ-3 -ホスホコリン(DPhPC)または1,2 -ジオレオイル-sn-グリセロ-3 -ホスホコリン(DOPC)を用いた。 25 mg / mlの脂質溶液は、一般的に、このプロトコル中で調製し、-20℃で保存した場合、2ヶ月間続くの2ミリリットル

  1. n-デカン中の脂質を再懸濁するためには、最初の小さなガラスジャーにストックバイアルからそれを転送し、アルゴンまたは窒素下で乾いた。脂質がより速く乾燥させ、ガスにより多くの表面積を露出するように乾燥しながら角度でjarファイルを保持します。
  2. わずかにねじ込まジャーのキャップを、乾燥した溶液は、1〜2時間デシケーター内で真空下に座ることができます。その後、25 mg / mlので脂質を再溶解するためにn-デカンを追加します。渦簡単に脂質溶液で15分間にわたり浴超音波処理器中でそれを超音波処理。 -20℃でn-デカン中に再構成する脂質を保存する
  3. 株式ショ糖溶液を調製します。 1.5 mlのマイクロチューブに、300 mMスクロースの900μLと100μLを追加1%のメチルセルロース(MC)。メチルセルロースは、吐出するのに役立つ溶液の粘度を増加させるために添加される。オプションのステップ:それぞれ、撮像において、よりコントラストや蛍光を貸して暗い色の食用色素や蛍光ビーズのオプションの1を添加する。この溶液は、細胞の浸透圧を一致させ、microjettingの間にコントラストを提供するように設計300ミリオスモルスクロース溶液である。
  4. 使い捨て1ミリリットルのプラスチックシリンジに溶液を描く。先端が上を向いて注射器を保持した状態で、先端に向かって気泡を追い出すために繰り返しシャフトをフリックして、閉じ込められた空気を排出するためにプランジャーを押してください。それが噴出する責任の適切な圧電収縮を妨害するように、先に進む前に、注射器からすべての空気を抜くようにしてください。
  5. 注射器の端部に0.22μmのフィルターを取り付けます。フィルターに捕捉されるから空気を防ぐために、垂直方向に注射器を保持し、液滴がチップ上に形成されるまで、プランジャーを押してください。注:A33ミリメートル直径のシリンジフィルターユニットが最適に機能することが見出されたが、直径3mmのシリンジフィルターなどのような別の小さなフィルターはデッドボリュームを低減するために使用することができる。
  6. インクジェットの雌ルアーアダプターを外し、しっかりとフィルターの端の上に所定の位置に押し込みます。ここでも、空気を閉じ込める防ぐために流体を噴射。インクジェットの上でねじ込みます。それが完全に取り付けられた後、流体は、インクジェットの先端に移動する必要があります。

3。機器を準備を進め

  1. V-クランプを使用して、顕微鏡ステージ上で注射器アセンブリをマウントします。インクジェットコントローラ、インクジェットからのワイヤを接続します。注:カスタム·ステージは、このプロトコルのために構築した;ステージデザインは、ユーザによって決定することができるが、それは注射器及び試料ホルダのxy制御xyzの独立した制御を有することが重要である。
  2. 所望の撮影を実現するために拡大し、必要なレンズの組み合わせを決定します。ここで、10×対物レンズおよび10倍の接眼レンズを使用する。 噴射と小胞の生成を可視化するために高速度カメラ(≥千FPS)を使用します。イメージングに先立ち、必要に応じて、カメラのキャリブレーションを行う。画像キャプチャを開始するために、カメラのソフトウェア内の画像ベースの自動トリガーを使用しています。
  3. 顕微鏡ステージ上に無限チャンバーをマウントします。ステージ上で所定の位置にテープでチャンバーを固定します。
  4. 図1bを参照)、天然ゴムに穴をあけ穴にインクジェット先端を慎重に位置を合わせます。これを行うには、室内に近いインクジェットを持参し、目で位置を調整し、顕微鏡レンズを通してより正確な調整を行う。粗い動きがインクジェット先端に損傷を与えることができるよう、慎重に進んでください。
  5. インクジェットが整列されると、ウェルのロード中に、インクジェットへの損傷を防止するために、離れてチャンバからシリンジ組立部品を再生する。それは、膜の穴に合うままであるように、インクジェットの運動が単方向であることを確認してください。
  6. PLUNを軽く押して、インクジェットノズルでの小滴が形成されるまで注射器アセンブリのGER。これは、いくつかの初期背圧を提供する。
  7. 入力噴射パラメータ。台形バイポーラ波については、以下のパラメータを使用:20kHzのパルス周波数、3マイクロ秒の立上り時間、35秒のパルス持続時間、3秒立ち下がり時間、65 Vの印加電圧(パルス振幅)、及びトリガ100ジェットパルス(パルス数) 。しかし、印加電圧(パルス振幅)およびパルス数(トリガ当たりのジェットパルス)小胞のサイズを制御するために変えることができる。

4。小胞の生成

  1. 両方の井戸の全表面をカバーする、無限室にn-デカンに懸濁し25〜30μlの脂質溶液を追加します。
  2. ピペッティングゆっくりとスムーズに、よく1の最も外側のエッジに(ショ糖溶液と同じ浸透圧モル濃度の)25μlのグルコースを追加します。グルコースおよび脂質溶液が混合しないので、堆積の際、グルコースの低下は、形成すべきである。別の25を追加1、別のドロップを作り、5〜10分以内に室内の中央にある脂質二重膜を形成することに反対でなく、グルコースのL。
  3. 天然ゴムを介してインクジェットを挿入し、慎重に液滴界面二重層に向けて案内する。導入されたインクジェットボリュームを置換し、二重層を破壊することができるように、ゆっくりと二重層にアプローチ。
  4. インクジェットは〜200μmの範囲内にある場合は、ステップ3.8で説明した設定で噴射を適用します。二重層からの距離が他のパラメータの中で、電圧およびパルス数に応じて、主に変化し得る。このプロトコルは、徐々に設定(電圧やパルス数)を増加し、二層の変形を観察することをお勧めします。

5。洗浄装置

  1. 顕微鏡ステージから注射器を切り離し、1ミリリットルのプラスチックシリンジとフィルターを処分。
  2. インクジェットをきれいにする、solutioに先端を浸漬することによって順番に次の解決策を吸引nは7〜10倍各々 :70%エタノール、温水中の2%Neutrad溶液、70%エタノール、および蒸留H 2 Oをインクジェットは、吸引ピペットに安全に収まらない場合は、アダプターを形成するために、ピペットチップをカット。
  3. ティッシュでチャンバーを乾かします。 5〜10分間、2%(v / v)の温水にNeutrad、超音波処理して250ミリリットルのビーカーに無限室を配置します。超音波処理の後、完全に圧縮された空気の下に井戸を乾燥。ウェル中の水分は、脂質二重膜の安定性を損なうことができるので、それはまた、チャンバ15分間60℃のオーブン内に配置されることが推奨される。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

私たちは、機械加工部品や手動マイクロメートルから組み立てたカスタムステージ( 図1)と、従来の倒立蛍光顕微鏡でミクロ流体噴射セットアップを組み立てています。インクジェットの特性評価は、小胞の生成プロセスへの洞察を提供します。インクジェットノズルと脂質二重層との間の距離を変化させることにより、力が膜の変形を生じさせるために適用影響を及ぼす。二重層のすぐ近くには、ジェット気流を当て、離れて小胞の発生点からのエネルギーを分散させることから、膜を防ぐことができます。渦旅行我々の期待します( 図2)と一致して圧電アクチュエータに印加される電圧に応じて増加する。小胞形成と代表は小胞は、図3に示されている噴出。 図3aは microjettingによって小胞形成のための代表的な画像シーケンスを示している。形成に続いて、小胞の安定性は、小胞diameteに変化する傾向があるrは、小さな小胞は、より安定である。

図1
図1。技術や機器のイラスト。液滴界面二重層に対する圧電駆動型の噴射プロセスの(a)の回路図。複数のパルスはGUVsを生産する二重層を変形渦環構造を形成して矢継ぎ早に押し出さ。右下の描写は井戸のグルコースの堆積と次元の位置を示しています。脂質溶液が無限チャンバーに添加された後、25μlのグルコースは、第(1)で、次いで(2)において、ウェルの最も外側の縁部に付加される。 (B)に取り付けられたシリンジアセンブリ、カスタム保持台と、無限室。チャンバは、適所に固定され、インクジェットの先端が中空と整列さ井戸の側の天然ゴムの電子。 (C)完全な顕微鏡とカスタムステージアセンブリを。 拡大画像を表示するにはここをクリックしてください。

図2
図2インクジェットの特性であって、(a)は20kHz(55 Vパルス振幅における50パルス)での迅速なインクジェットパルスが単一渦環を形成して重なる。 (b)は、固定パルス数(200パルス)に対するパルス振幅範囲(40〜65 V)上の時間の関数としての液体ジェットのフロント変位を。 拡大画像を表示するにはここをクリックしてください。

常に "> 図3
図3。小胞の生成。 小胞の生成過程の画像と、いくつかの小胞が生成。 (A)の溶液の急速なパルスによって生成液滴界面二重層(DPhPC)の変形は、膜がピンチオフとGUVを形成させる。 (b)は、マイクロ流体ジェットを使用して生成される多数の小胞。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

多くの技術が電鋳、エマルション、液滴発生14-16を含む、小胞の生成のために開発されている。ただし、新しい実験技術は、生体系に成長して類似性を有する生物学的システムの設計を可能にするために必要です。特にマイクロ流体の方法は近い生物学にベシクルモデルをもたらし、膜unilamellarity、サイズの単分散性、および内部のコンテンツ17,18を管理するコントロールのレベルの増加を提供してきました。さらに、マイクロ流体噴射を使用して特徴付けおよび実験は、有効配向膜タンパク質の組み込み、膜非対称、およびカプセル化3,13を示している。

この手法は簡単ですが、注意すべきであるいくつかのステップが含まれています。アクリル板と天然ゴムの両方が製造中に無限室を完備し、シールを形成しなければならない。そうでなければ、無限型のウェルが漏れるとrますISK二重層の安定性。実験準備中に、研究者は最初に、各コンポーネントを取り付けた後、完全に空気の注射器を真空に確認する必要があります。このアセンブリ内の気泡は、ジェット内の圧縮可能ボリュームを作成し、圧電アクチュエータの噴射影響を緩和または否定する。機器の準備を進めながら、主な関心事は、脆弱なインクジェットノズルを損傷している。これはその後の噴射のための脂質二重層を確立最後に、グルコースの堆積は、小胞の生成をこれまでの手順の際に最も注意が必要です。

マイクロ流体噴射して小胞の生成は、信頼性と再現性であるが、インクジェットの中の矛盾はある程度の知識とパラメータを必要とする。我々の経験では、前噴射に無限室へのインクジェットノズルの導入は、離れてから、二重層のわずかな曲がりを生産、ノズルの寸法に応じて、グルコース、数マイクロリットルまで変位可能インクジェット。もともと二重層を確立するときに不均衡グルコース溶液を分散させることによって、この効果を相殺することができ、平面二重層をもたらす。これは二層の安定性を向上させるだけでなく、小胞形成のよりよい制御を可能にしていないだけ。インクジェット20μmのオリフィス直径は本稿に示す結果を得た。 10〜20μmでのオリフィス径を推奨します。振動の最小化にもお勧めします。シンプルなゴム製の切り欠きは、顕微鏡テーブルをサポートし、実験室での振動を減衰するために使用された。

このプロトコルは、多くの脂質に適用可能であるが、DPhPCは、その特定の化学的性質と高い二層の安定性のために選択した。試験した他の主要な脂質には、1,2 -ジパルミトイル-sn-グリセロ-3 -ホスホコリン(DPPC)、1,2 -ジオレオイル-sn-グリセロ-3 -ホスホコリン(DOPC)であった。比較的、DPhPC、一貫した液滴界面二重層を形成し、単層小胞を生成するために、より強い傾向があった。初期時に形成、このプロトコルでの二重層は、非平面のインターフェースや油の混入に起因する見かけ上の厚さを有していた。水性液滴の形状が湾曲した二重層を形成し、これは、所与の視野内の厚さとして現れた。 DPhPCは2滴との界面での最初の接触ゾーンが離れて二重層から油を駆動し、拡大することができました。これによりエネルギー的に有利なプロセスに、2つの小滴との間の接触ゾーンのより多くの二重層となり、観察可能な厚さは経時的に減少した。二重層領域のこの成長は、二重層の長さの変動の下で試験し、初期のチャンバ設計は、(第二世代の設計には0.13の中心間距離によって分離され、直径0.15つの円からなる)を微調整した。小さいボリュームを必要とし、より小さな二層インターフェイスをもたらします。正確な小胞の生成に許可され、新規および初期設計でありながらどちらのデザインの両方DOMINを示した二層間伐でant利点。別のテストの最適化は、ピエゾインクジェットに適用されるコンピュータ制御背圧た。噴射しながら、これは流量をより定量的な制御を与えたが、それは実験の大半を通じて使用されていませんでした。

この方法は、いくつかの既存の技術を組み合わせた利点を提供しています。急速な小胞の生成が、この研究の焦点では​​なかったが、複数のGUVsは、原因脂質分子の高濃度に高周波(〜200ヘルツ)で生成することができる。単一の脂質二重層に対して、この技術ジェットので、膜unilamellarityが期待され、観察されている。さらに、溶液の広い範囲が、より潜在的な用途17を可能にする、例えば分子 ​​量または電荷のような特定の溶質の性質とは無関係に封入することができる。また、原因は形成された小胞の大きさ(範囲は<400μmで>10μmの可能)、従来のマイクロによる観察へSCOPYの技術は十分な13です。

マイクロ流体吐出は、生物学的さまざまな問題に適用することができる。一具体例は、細胞のバイオメカニクスである。GUVsの変形性は、彼らにGUV 4,19の表面に組み立てられたときの興味深い効果を示したカプセル化されたアクチンネットワークの力発生と自己集合体を研究するための理想的なツールをレンダリングします。追加のアプリケーションでは、ドラッグデリバリーシステム、セルサイズのバイオリアクター、合成生物学、生物物理学、および基礎科学、産業、および区画化された生体分子が望まれる医学の他の分野の様々なモジュール式システムが含まれる。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

利害の対立が宣言されていません。

Acknowledgments

我々はmicrojettingパラメータに関するアドバイスを、カリフォルニア大学バークレー校のフレッチャー研究室からマイクVaheyに感謝します。この作品は、NIHの助成金DP2 HL117748-01が主催した。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Piezoelectric Inkjet MicroFab Technologies MJ-AL-01-xxx xxx denotes orifice diameter in microns
Jet Drive III Controller MicroFab Technologies CT-M3-02
High-speed camera Vision Research MiroEX2
DPhPC lipid in chloroform Avanti 850356C Ordered in small aliquots in vials
33 mm PVDF filters, 0.2 µm Fisher Scientific SLGV033RS
1 ml Syringes Fisher Scientific 14823434
n-Decane Acros Organics 111871000
Glucose Acros Organics 410950010
Sucrose Sigma-Aldrich S7903-1KG
Methylcellulose Fisher Scientific NC9084958
1/8 in Acrylic McMaster Carr 8560K239 CAD designs for the infinity-shaped chamber are available upon request
0.2 mm Acrylic Astra Products Clarex clear 001
Acrylic Cement TAP Plastics 10693
Loctite 495 Superglue Fisher Scientific NC9011323
Loctite 3494 UV Strengthening Adhesive Strobels Supply 30765
Natural rubber McMaster Carr 85995K14
Custom stage homemade N/A CAD designs are available upon request

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Liu, A. P., Fletcher, D. A. Biology under construction: in vitro reconstitution of cellular function. Nature reviews. Mol. Cell Biol. 10, 644-650 (2009).
  2. Yeh, B. J., Lim, W. A. Synthetic biology: lessons from the history of synthetic organic chemistry. Nat. Chem. Biol. 3, 521-525 (2007).
  3. Richmond, D. L., et al. Forming giant vesicles with controlled membrane composition, asymmetry, and contents. Proc. Natl. Acad. Soc. U.S.A. 108, 9431-9436 (2011).
  4. Liu, A. P., et al. Membrane-induced bundling of actin filaments. Nat. Phys. 4, 789-793 (2008).
  5. Brown, K. S., et al. Xenopus tropicalis egg extracts provide insight into scaling of the mitotic spindle. J. Cell Biol. 176, 765-770 (2007).
  6. Loose, M., Fischer-Friedrich, E., Ries, J., Kruse, K., Schwille, P. Spatial regulators for bacterial cell division self-organize into surface waves in vitro. Science. 320, 789-792 (2008).
  7. Angelova, M. I., Dimitrov, D. S. Liposome electroformation. Faraday Disc. Chem. Soc. 81, 301-311 (1986).
  8. Bucher, P., Fischer, A., Luisi, L. P., Oberholzer, T., Walde, P. Giant Vesicles as Biochemical Compartments: The Use of Microinjection Techniques. Langmuir. 14, 2712-2721 (1998).
  9. Shum, H. C., Lee, D., Yoon, I., Kodger, T., Weitz, D. A. Double emulsion templated monodisperse phospholipid vesicles. Langmuir. 24, 7651-7653 (2008).
  10. Matosevic, S., Paegel, B. M. Stepwise Synthesis of Giant Unilamellar Vesicles on a Microfluidic Assembly Line. J. Am. Chem. Soc. 133, 2798-2800 (2011).
  11. Hu, P. C. C., Li, S., Malmstadt, N. Microfluidic Fabrication of Asymmetric Giant Lipid Vesicles. ACS Appl. Mater. Inter. 3, 1434-1440 (1021).
  12. Hwang, W. L., Chen, M., Cronin, B., Holden, M. A., Bayley, H. Asymmetric droplet interface bilayers. J. Am. Chem. Soc. 130, 5878-5879 (2008).
  13. Stachowiak, J. C., Richmond, D. L., Li, T. H., Brochard-Wyart, F., Fletcher, D. A. Inkjet formation of unilamellar lipid vesicles for cell-like encapsulation. Lab Chip. 9, 2003-2009 (2009).
  14. Meleard, P., Bagatolli, L. A., Pott, T. Giant unilamellar vesicle electroformation from lipid mixtures to native membranes under physiological conditions. Methods Enzymol. 465, 161-176 (2009).
  15. Nishimura, K., Suzuki, H., Toyota, T., Yomo, T. Size control of giant unilamellar vesicles prepared from inverted emulsion droplets. J. Colloid Interface Sci. 376, 119-125 (2012).
  16. Teh, S. Y., Lin, R., Hung, L. H., Lee, A. P. Droplet Microfluidics. Lab Chip. 8, 198-220 (2008).
  17. Stachowiak, J. C., et al. Unilamellar vesicle formation and encapsulation by microfluidic jetting. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 4697-4702 (2008).
  18. Osaki, T., Yoshizawa, S., Kawano, R., Sasaki, H., Takeuchi, S. Lipid-coated microdroplet array for in vitro protein synthesis. Anal. Chem. 83, 3186-3191 (2011).
  19. Liu, A. P., Fletcher, D. A. Actin polymerization serves as a membrane domain switch in model lipid bilayers. Biophys. J. 91, 4064-4070 (2006).
マイクロ流体ジェッティングを使用して、脂質二重層小胞の生成
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Coyne, C. W., Patel, K., Heureaux, J., Stachowiak, J., Fletcher, D. A., Liu, A. P. Lipid Bilayer Vesicle Generation Using Microfluidic Jetting. J. Vis. Exp. (84), e51510, doi:10.3791/51510 (2014).More

Coyne, C. W., Patel, K., Heureaux, J., Stachowiak, J., Fletcher, D. A., Liu, A. P. Lipid Bilayer Vesicle Generation Using Microfluidic Jetting. J. Vis. Exp. (84), e51510, doi:10.3791/51510 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter