Disturbi metabolici sono tra una delle malattie più comuni negli esseri umani. Il modello di organismo geneticamente trattabili D. melanogaster può essere utilizzato per identificare nuovi geni che regolano il metabolismo. Questo documento descrive un metodo relativamente semplice, che permette lo studio del metabolismo in linea misurando la produzione di CO 2.
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Articolo metodologico
Misurazione del tasso metabolico in
In questo articolo
Sommario
Abstract
Disturbi metabolici sono un problema frequente che colpisce la salute umana. Pertanto, la comprensione dei meccanismi che regolano il metabolismo è un compito scientifico fondamentale. Molti geni che causano malattie negli esseri umani hanno un omologo mosca, rendendo Drosophila un buon modello per studiare vie di segnalazione coinvolte nello sviluppo di malattie diverse. Inoltre, la trattabilità di Drosophila semplifica schermi genetici per aiutare a identificare nuovi bersagli terapeutici che possono regolare il metabolismo. Per eseguire tale schermata è necessario un metodo semplice e veloce per identificare le variazioni dello stato metabolico di mosche. In generale, la produzione di anidride carbonica è un buon indicatore di ossidazione del substrato ed il dispendio energetico fornire informazioni sullo stato metabolico. In questo protocollo si introduce un metodo semplice per misurare la CO 2 in uscita dalle mosche. Questa tecnica può potenzialmente aiutare nell'identificazione di perturbazioni genetiche che colpiscono tasso metabolico.
Introduzione
Il ciclo di Krebs biochimico genera ATP attraverso l'ossidazione di acetato derivata dai carboidrati, grassi e proteine che producono CO 2. In Drosophila, O 2 ingresso è direttamente correlata con CO 2 uscita e riflette il livello di metabolismo 1. Così, la misurazione di CO 2 in uscita è stato usato con successo in studi legati all'invecchiamento e metabolismo 2-5. Qui il nostro laboratorio ha modificato apparati sperimentali progettati in precedenza, consente la misurazione della produzione di CO 2 fino a diciotto campioni senza bisogno di attrezzature specializzate. Alt....
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Protocollo
1. Preparazione di Respirometri
- Tagliare la punta della pipetta 1.000 microlitri con una lametta per consentire l'inserimento del capillare micropipetta 50 pl, cercare di ottenere il puntale più diritta possibile.
- Posizionare un pezzo di schiuma nella pipetta e spingerla verso il basso nella punta della pipetta.
- Aggiungere una piccola quantità di CO 2 assorbente e contenere entro un secondo pezzo di schiuma.
- Applicare la colla nel luogo in cui la micropipetta viene inserito nella punta della pipetta.
- Lasciare il respirometro durante la notte per permettere la colla si asciughi.
Uno schema di un ....
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Risultati
Al fine di dimostrare che il metodo è sensibile abbiamo misurato la produzione di CO 2 da wild type (Oregon R) maschile vola a 18, 25, e 29 ° C e vola mutante per Dg. Mosche sono state sollevate a 25 ° C e poi spostato alla temperatura sperimentale per 5 giorni prima della misura. Come previsto per questa specie ectotermi, la quantità di CO 2 prodotta aumentata con la temperatura (Figura 2). Abbiamo in passato dimostrato che una dieta priva di zucchero riduce il t.......
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Discussione
In questo protocollo, si descrive un metodo poco costoso ed affidabile per misurare la produzione di CO 2 in mosche. Abbiamo trovato che questo esperimento è facile, rapida da condurre e genera dati riproducibile che è in accordo con altri studi 1, 6, 9. Il protocollo qui descritto può essere facilmente modificato per adattarsi bilancio e disponibili materiali di qualsiasi laboratorio. La costruzione di ogni singolo respirometro può essere adattato finché la camera rimane chiuso ermeticamente. Tutt.......
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Dichiarazioni
Non abbiamo nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare Max-Planck Society per finanziare la nostra ricerca.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| BlauBrand IntraMark 50 µ l micropipette | VWR | 612-1413 | |
| Soda Lime | Wako | CDN6847 | |
| Eosina | Sigma | 031M4359 | È possibile utilizzare qualsiasi colorante in grado di creare una colorazione visibile del liquido Camera di |
| sviluppo per cromatografia su strato sottile (TLC) | VWR | 21432-761 | Qualsiasi camera in vetro trasparente che può essere chiusa con il coperchio |
| Anestesizzatore, Lull-A-Fly Kit | Flinn | FB1438 | |
| Power Gel Glue | Pritt | ||
| 1 ml puntali per pipetta | Qualsiasi | ||
| Schiuma | Qualsiasi | ||
| Stucco Plaesticine | Qualsiasi | ||
| Bisturi | Qualsiasi | ||
| Pinzetta | Qualsiasi |
Riferimenti
- Van Voorhies, W. A., Khazaeli, A. A., Curtsinger, J. W. Testing the "rate of living" model: further evidence that longevity and metabolic rate are not inversely correlated in Drosophila melanogaster. J Appl Physiol. 97, 1915-1922 (2004).
- Ross, R. E.
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Ristampe e permessi
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