संक्रमित करने के लिए एक प्रोटोकॉल<em> Caenorhabditis एलिगेंस</em> साथ<em> साल्मोनेला</em
Summary
एलिगेंस मेजबान रोगज़नक़ बातचीत का अध्ययन करने के लिए एक नए आनुवांशिक मॉडल के रूप में उभरा है. यहाँ हम सी. संक्रमित करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन साल्मोनेला के संक्रमण के खिलाफ रक्षा में मेजबान जीन की भूमिका की जांच करने के लिए डबल कतरा आरएनएआई हस्तक्षेप तकनीक के साथ मिलकर साल्मोनेला के साथ एलिगेंस.
Abstract
पिछले दशक में, सी. एलिगेंस ग्राम नकारात्मक जीवाणु साल्मोनेला के खिलाफ मेजबान बचाव सहित, मेजबान और रोगजनकों के बीच संबंधों का अध्ययन करने के लिए एक अकशेरुकी जीव के रूप में उभरा है. साल्मोनेला सी. की आंत में लगातार संक्रमण स्थापित एलिगेंस और संक्रमित पशुओं की जल्दी मौत में परिणाम है. उन्मुक्ति तंत्र के एक नंबर सी में पहचान की गई है साल्मोनेला के संक्रमण के खिलाफ की रक्षा के लिए एलिगेंस. भोजी, एक evolutionarily संरक्षित lysosomal गिरावट मार्ग, सी में साल्मोनेला प्रतिकृति को सीमित करने के लिए दिखाया गया है एलिगेंस और स्तनधारियों में. इधर, एक प्रोटोकॉल सी. संक्रमित करने के लिए वर्णित है कीड़े मानव में साल्मोनेला के संक्रमण के लिए इसी तरह की एक सीमित समय के लिए साल्मोनेला के संपर्क में हैं जो में साल्मोनेला, साथ एलिगेंस. साल्मोनेला संक्रमण काफी सी. के जीवन shortens एलिगेंस </ Em>. एक उदाहरण के रूप में आवश्यक भोजी जीन बीईसी-1 का उपयोग करना, हम सी. के साथ इस संक्रमण विधि संयुक्त एलिगेंस आरएनएआई दृष्टिकोण खिलाने और इस प्रोटोकॉल सी. के समारोह की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता पता चला साल्मोनेला के संक्रमण के खिलाफ रक्षा में एलिगेंस मेजबान जीनों. चूंकि सी. एलिगेंस पूरे जीनोम आरएनएआई पुस्तकालयों में उपलब्ध हैं, इस प्रोटोकॉल व्यापक सी. लिए स्क्रीन के लिए यह संभव बनाता है जीनोम चौड़ा आरएनएआई पुस्तकालयों का उपयोग साल्मोनेला और अन्य आंतों रोगजनकों के खिलाफ की रक्षा है कि एलिगेंस जीन.
Introduction
मुक्त रहने वाले मिट्टी निमेटोड Caenorhabditis एलिगेंस कई जैविक सवालों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल एक सरल और आनुवंशिक रूप से विनयशील मॉडल जीव है. सी. एलिगेंस मुख्यतः स्वयं fertilizing hermaphrodites के रूप में मौजूद है. पुरुषों अनायास gametogenesis 1,2 दौरान एक्स गुणसूत्र के गैर अलगाव से उत्पन्न कर रहे हैं. प्रचुर मात्रा में भोजन, सी. की उपस्थिति में एलिगेंस लगातार वयस्क के लिए चार लार्वा चरणों के माध्यम से विकसित करना. तापमान भी सी. प्रभावित करती है एलिगेंस विकास; तेजी से विकास के उच्च तापमान पर मनाया जाता है. प्रयोगशाला में, सी. एलिगेंस खाद्य 1,2 के रूप में वरीयता प्राप्त कोलाई (तनाव OP50) के साथ अगर प्लेट पर 20 डिग्री सेल्सियस के मानक के तापमान पर सुसंस्कृत है.
पिछले दशक में, सी. एलिगेंस मेजबान रोगज़नक़ बातचीत 3-5 अध्ययन करने के लिए एक अकशेरुकी जीव के रूप में उभरा है. प्रकृति में, सी. एलिगेंस अपने nutrien के रूप में बैक्टीरिया खातीटी स्रोत 1,2. अपनी सामान्य जीवाणु प्रयोगशाला खाद्य, OP50, आसानी सेल्सियस के बीच बातचीत की जांच करने के लिए अन्य रोगजनकों के साथ प्रतिस्थापित किया जा सकता एलिगेंस और किसी भी चुना रोगज़नक़. इन शर्तों के तहत, आंत के संक्रमण के प्राथमिक साइट है. दरअसल, बैक्टीरियल रोगज़नक़ों की एक विस्तृत श्रृंखला घातक सी. संक्रमित करने के लिए दिखाया गया है एलिगेंस 3-5.
ग्राम नकारात्मक जीवाणु साल्मोनेला दुनिया भर में 6,7 मानव खाद्य जनित बीमारी का कारण बनता है कि एक जठरांत्र रोगज़नक़ है. सी. इस जीवाणु replicates और लगातार आंतों में संक्रमण 8-10 दर्शाती रूप एलिगेंस साल्मोनेला के लिए एक अच्छा मॉडल मेजबान है. सी. एलिगेंस उपन्यास दोनों की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया गया है और पहले से ज्ञात साल्मोनेला डाह 11 कारकों. दिलचस्प है, सी. एलिगेंस प्रतिरक्षा प्रणाली को सफलतापूर्वक साल्मोनेला प्रतिकृति सीमा. ऐसा लगता है कि inhib पहले से सूचित कर दिया गया हैभोजी जीन की ition सी. में वृद्धि साल्मोनेला प्रतिकृति renders एलिगेंस, संक्रमित कीड़े 10 की जल्दी मृत्यु हो जाती है. (यहां पर भोजी के रूप में) Macroautophagy गिरावट 12 के लिए लाइसोसोम को प्रसव के लिए कोशिका द्रव्य और organelles पृथक subcellular झिल्ली के पुनर्निर्माण से जुड़े एक गतिशील प्रक्रिया है. भोजी सी. में साल्मोनेला प्रतिकृति को सीमित करने के लिए सूचित कर दिया गया है एलिगेंस और स्तनधारियों 10,13 में.
सी. एलिगेंस जीनोम अनुक्रम पहले बहुकोशिकीय यूकेरियोटिक जीनोम था; यह आरएनएआई उपचार 14-16 के लिए उत्तरदायी है. इसके अलावा, आरएनएआई आरएनएआई 16,17 खिलाने के रूप में जाना लक्ष्य जीन की डबल असहाय आरएनए युक्त बैक्टीरिया निगलना करने के लिए कीड़े subjecting द्वारा प्रभावी ढंग से प्रशासित किया जा सकता है. पूरे जीनोम आरएनएआई खिला पुस्तकालयों जीनोम चौड़ा आरएनएआई 16,18 स्क्रीनिंग के लिए उत्पन्न किया गया है. इस के साथ साथ, एक साल्मोनेला संक्रमण समर्थकtocol आरएनएआई परीक्षण सी. अनुमति देने के लिए भोजन के साथ युग्मित है साल्मोनेला के संक्रमण के खिलाफ की रक्षा करने की क्षमता के लिए ब्याज की एलिगेंस जीन.
Protocol
Representative Results
Discussion
एलिगेंस अपने पोषक स्रोत के रूप में बैक्टीरिया खाती है कि एक सरल आनुवंशिक मॉडल जीव है. इस प्रकार, यह सी. के बीच बातचीत की जांच के लिए एक पेट रोगज़नक़ के साथ अपनी सामान्य जीवाणु खाद्य स्थानापन्न करन?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम पांडुलिपि के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए डॉ. डायने Baronas-लोवेल धन्यवाद. इस काम विज्ञान बीज अनुदान की एक FAU चार्ल्स ई. श्मिट कॉलेज और के.जे. को एलिसन मेडिकल फाउंडेशन से एक एजिंग छात्रवृत्ति द्वारा समर्थित किया गया
Materials
| LB Broth | Fisher | BP9723-500 | |
| XLD agar | EMD Chemicals | 1.05287.0500 | |
| Bacto Agar | Fisher | DF0140-01-0 | |
| Peptone | Fisher | BP1420-500 | |
| Sodium Chloride | Fisher | S671-500 | |
| Calcium Chloride | Fisher | C69-500 | |
| Magnesium Sulfate | Fisher | M65-500 | |
| IPTG | Gold Biotechnology | 12481C50 | |
| Cholesterol | Sigma | C8667-25G | |
| Ampicillin | Fisher | BP1760-25 | |
| Salmonella typhimurium | ATCC | ATCC14028 | |
| Petri Dish 95 x 15mm | Fisher | FB0875714G | |
| Petri Dish 60 x 15mm | Fisher | 08-757-13A | |
| Falcon Serological pipet | Fisher | 13-668-2 | |
| Falcon Express Pipet-Aid | Fisher | 13-675-42 | |
| MaxQ6000 shaking incubator | Thermo Scientific | SHKE6000-7 | |
| Incubator | Percival | I-36DL |
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