Summary
Protokoller for effektiv utarbeidelse av homogene prøver av edderkopp midd, angrep av eksperimentelle planter, og vurdering av anlegget skader, slik det kreves for studier av plante-pest interaksjon ble utviklet.
Abstract
De to-spotted spider mite, Tetranychus urticae, er en allestedsnærværende polyphagous leddyr herbivore som strømmer på en bemerkelsesverdig bredt spekter av arter, med mer enn 150 av økonomisk verdi. Det er en stor pest av klima avlinger, spesielt i solanaceae og Cucurbitaceae (f.eks, tomater, auberginer, paprika, agurk, squash) og klimapryd (f.eks, roser, krysantemum, nelliker), årlige jordbruksvekster (som mais, bomull, soyabønner, og sukkerroer), og i flerårige kulturer (alfalfa, jordbær, druer, sitrus og plommer) 1,2. I tillegg til det ytterste polyphagy som gjør det til et viktig landbruks pest, T. urticae har en tendens til å utvikle resistens mot et bredt utvalg av insekticider og acaricider som benyttes for sin styring 3-7.
T. urticae er en utmerket eksperimentell organisme, som det har en hurtig livssyklus (7 dager ved 27 ° C), og kan lett opprettholdes ved høy tetthet i laboratoriet. Metoder for å bestemme genekspresjon (inkludert in situ hybridisering og antistoffarging), og for å inaktivere ekspresjon av edderkoppmidd endogene gener ved hjelp av RNA-interferens er blitt utviklet 8-10. Nylig har hele genomsekvens av T. urticae har blitt rapportert, og skaper en mulighet til å utvikle denne pest herbivore som modellorganisme med tilsvarende genomisk ressurser som allerede finnes i noen av sine vertsplanter (Arabidopsis thaliana og tomat Solanum Lycopersicum) 11. Sammen kan disse modellorganismer gi innsikt i molekylære grunnlaget for plantevern interaksjoner.
Her er en effektiv metode for rask og enkel samling av et stort antall voksne hunnmidd, deres anvendelse på en eksperimentell plante-vert, og vurderingen av anlegget skade på grunn av spider mite foring beskrevet. Den presenterte protokollen noringen er rask og effektiv innsamling av hundrevis av personer på ethvert utviklingsstadiet (egg, larver, nymfer, voksne menn, og kvinner) som kan benyttes til senere eksperimentelt program.
Introduction
Plant-pest interaksjon er et tema av stor vitenskapelig og økonomisk betydning. Det var historisk studert ved hjelp av både planter (for eksempel tomat) og modell anlegg, A. thaliana. I begge tilfeller kunne mottakelighet for anlegget til planteeter måles enten direkte gjennom vurdering av plante fenotype etter herbivore angrep eller indirekte ved vurderingen av pest ytelse.
Direkte målinger av plante mottakelighet ble benyttet tidligere for et antall insekt skadedyr ved hjelp av en rekke metoder. For eksempel er herbivory av lepidopteran-larver målt som en estimering av det parti av plantevev som forbrukes av enten Plutella xylostella (diamant møll) eller Trichoplusia ni (kål sløyfen) ved det blotte øye ved hjelp av et gitter 12.. Også, det finnes metoder som utnytter digital avbildning av blad skade med påfølgende kvantitativ bildeanalyse. Slike fremgangsmåter ble brukt istudier av A. thaliana interaksjon med Frankliniella occidentalis (vestlige blomst thrips) 13, Scaptomyza flava (blad-mining Drosophila) 14, og T. ni 15.
Indirekte målinger av plante mottakelighet er mye brukt i studier av plante-pest interaksjon. For eksempel susceptibility of A. thaliana å fersken bladlus Myzus persicae herbivory er vanligvis vurderes gjennom analyse av pest fruktbarhet og beskrivelse av brutto morfologi av et anlegg etter samspill 16,17. En annen typisk indirekte indikator på A. thaliana mottakelighet for et skadedyr er en tørr eller våt vekt vurdering av planteeter. Denne parameteren er ofte brukt for å karakterisere herbivory av lepidoterans, slik som Pieris rapae (liten hvit), P. xylostella, eller T. ni på larve eller pupal iscenesetter 15,17.
Spider midd er celle-innhold feEders. Mite-indusert skade er anerkjent som en samling av chlorotic flekker som varierer i farge fra hvit til blek grønn. Mottakelighet av et anlegg vert å edderkopp midd herbivory ble tidligere vurdert enten indirekte gjennom analyse av edderkoppen midd ytelses dager etter infisering 18,19, eller direkte ved hjelp av brutto morfologi av planter uker etter infeksjons 18 eller ved hjelp av en digital avbildning av blader utsatt mot midd i flere dager med påfølgende automatisert bildeanalyse 19. Disse metodene ble utviklet og brukt for studier av interaksjoner mellom tomatplanter og T. urticae, og vanligvis brukt lite antall edderkopp midd (5-15 per behandling) som ble samlet inn fra den blandede midd befolkning og ble plassert på bladet overflaten med en myk børste. Men disse fremgangsmåter er ikke egnet for studier hvor større antall midd må anvendes. I tillegg, mens direkte behandling av blad-bilder i bildeanalyse-programvaresom Adobe Photoshop (San Jose, CA), eller ImageJ 20 kan anvendes for analyse av tomat skade disse protokollene trenger modifikasjon for å kunne anvendes på blader som har større grad av refleksjon av overflaten eller blir lett farget, og har svært synlige trichomes ( f.eks, A. thaliana) som forstyrrer automatisert utvalg av chlorotic flekker som preger anlegget skader. Videre er det utviklingsmessige stadiet av spindelmidd som lett kan benyttes med de tidligere fremgangsmåter er begrenset til de mest utbredte og lett identifiserbare voksne hunner, og utelukker bruken av andre utviklingsstadier.
Den første avgjørende skritt mot high-throughput analyser av plante-edderkopp midd samhandling er å etablere reproduserbare, enkle og robuste protokoller for å utfordre planter med edderkopp midd og pålitelig vurdere interaksjons utfall.
I denne videoen, en effektiv metode for rask og enkel samling av et stort number av voksne hunnmidd, er deres applikasjon på en eksperimentell anlegget vert, og vurderingen av anlegget skade på grunn av edderkopp midd fôring beskrevet. Den presenterte protokollen muliggjør rask og effektiv innsamling av hundrevis av personer på ethvert utviklingsstadiet (egg, larver, nymfer, voksne menn, og kvinner) som kan benyttes til senere eksperimentelt program. I tillegg kan disse protokoller brukes på alle midd vertsplanten, men er spesielt vist i tilfellet A. thaliana.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
En. Vedlikehold av Spider Mite Befolkning
MERK: Spider midd er alet opp på California røde kidneybønner (Phaseolus vulgaris).
- Grow bønne planter fra frø i 2-3 uker før angrepet.
- Intermix disse plantene med infiserte planter; voksen midd vil raskt kolonisere friskt plantemateriale.
- Fjern gamle infested bønne planter hver 7-10 dager, og erstatte dem med friske planter.
To. Samle Voksen Kvinne Midd
- Mite Collection bruker Vasking Metode
- Å samle midd, plassere en frisk bønne plante i kontakt med infiserte planter 1 til 2 dager før eksperimentet.
- Bruk 20 til 30 friske bønneplanter å samle 1000 til 2000 voksen hunnmidd.
- Forbered en løsning av Tween 20 på 0,001% ved hjelp av vann fra springen på RT.
- Vask infiserte bønneplanter i Tween 20-løsning, ved hjelp av 2 til 3 planter på et tidspunkt.
- Komplett steg 2.1.4 innen 10 minutter for å unngå dødelighet midd.
- Isolering av voksne kvinner midd ved filtrering av Mite Suspension gjennom Sikter av Definert Maskevidde
- Forbered sikter av følgende maskevidder: 500 mikrometer (for å fjerne rusk) og 300 mikrometer (å samle kvinnelige voksen midd) (figur 1A).
- Filtrer suspensjonen gjennom 500 mikron sikt.
- Refilter suspensjonen gjennom 300 mikron sikt. Voksne kvinnelige midd vil bli beholdt.
- Dypp en 300 mikrometer sil med voksne kvinnelige midd i rent vann fra springen for å fjerne Tween 20.
- Spre midd i et enkelt lag på bunnen av sikten.
- Bruk tørkepapir for å fjerne overflødig vann fra mesh og sidene av sil. MERK: Dette er gjort fordi midd trenger å tørke raskt for å komme seg.
- Tilbered en sammenstilling som vist i figur 1.B; Dette vil tillate midd å bevege seg fritt, men vil hindre dem fra å rømme.
- Plasser sikt med midd på toppen av silen som brukes som en støtte.
- Omgi bunnsikt med vann for å hindre midd fra å spre seg. MERK: Midd vil begynne å utvinne etter ca 5 min. Etter omtrent 30 min, er tilstrekkelig til å starte samlingen (Fig. 1D) antallet bevegelige midd. Midd bør samles løpet av 1 time, mens de produserer silke som interfererer med samlingen.
Tre. Plant Infestation med Midd
MERK: Når voksne kvinnelige midd har gjenopprettet, kan de brukes for anleggsangrep. Det er to metoder som brukes til å hjemsøke eksperimentelle planter med voksne kvinnelige midd: a) ved hjelp av en fin pensel (protokoll avsnitt 3.1) og b) ved hjelp av en pumpe eller vakuum linjen (protokoll pkt. 3.2).
- Mite Infestation med en børste
MERK: Spider midd angrepmed en børste er brukt for anvendelse av opp til 30 midd pr plante.- Bruk et mykt hår runde kunst børste av størrelse 00 eller finere.
- Fukt børsten med RT vann fra springen.
- Forsiktig plukke opp midd fra sil hjelp av børsten spissen og overføre dem til anlegget.
- Midd angrep ved hjelp av en pumpe
MERK: Plant Infestation med mites samlet inn av en pumpe / vakuum linje brukes når mer enn 30 midd er brukt. For denne metoden, kan en vakuumpumpe for mikroelektroniske komponenter pickup eller en vakuumledning benyttes. Det er viktig å holde luftmengden konstant og tilstrekkelig styrke (2-4 psi).- Fest en 1 ml pipette til røret som forbinder pumpen eller vakuumledning ved hjelp av en 1,5 ml sentrifugerør snitt nederst som en adapter mellom pumpen / vakuum-røret og dysen.
- Legg et stykke tørkepapir mellom pipettespissen og adapteren (1,5 ml sentrifugerør). MERK: hensikten med dette er å felle midd inne than pipettespissen under aspirasjon prosessen og også for å redusere luftstrømmen (figur 1C).
- Samle midd direkte fra sil hjelp pipettespissen.
- Alternativt samle midd én etter én fra infiserte bladene ved hjelp av en stereoskop.
- Når det nødvendige antall midd har blitt samlet inn, fjerne pipettespissen fra røret, og pass på at stykke papir håndkle på baksiden av pipettespissen er uforstyrret.
- Samle midd ved å banke pipettespissen og klumper midd sammen. Deretter plasserer dem på bladet; i løpet av sekunder, vil midd begynne å spre seg på bladet.
4. Opptak og vurdere Plant Damage
- Opptak Plant Damage
MERK: For A. thaliana, er anlegget skade vurderes etter 4 dager med midd fôring. Skade er registrert som det totale areal på chlorotic flekker. For skade måling, er hele rosett kuttet og skannet.Skanningsparametere som beskrives er for en Epson V30 skanner, men vil fungere som et godt utgangspunkt for en lignende planskanner. Hold skanneparametrene konstant for alle eksperimenter slik sammenligning mellom individuelle eksperiment går.- Dekk skanneren med åpenhet ark for å hindre forurensende skanner overflaten med plantemateriale.
- Skjær en hel rosett og sted på skanneren så adaxial (øvre) side av blader står overfor skanneren lyskilde og fangst element. Alternativt, hvis rosetter er for tett til å fange opp individuelle blader uten overlapping, dissekere rosett i individuelle blader eller grupper av ikke-overlappende blader med gode saks før du legger på skanneren. Flere rosetter kan skannes samtidig.
- Dekk rosetter eller blader med et stykke hvitt papir for å hindre tilslutning til og forurensning av skannerdekselet.
- Lukk skannerdekslet og utføre et søk med følgende parametre: Oppløsning: 1,200 dpi; Fargemodus: Adobe RGB; Lysstyrke: 25; Filtype: maksimal kvalitet JPEG.
- Lagre bildefiler for senere skader analyse.
- Plant Skade Kvantifisering
MERK: Arealet av skaden er beregnet manuelt ved hjelp av Photoshop. På grunn av store forskjeller i bladform, og intensiteten av fargen av de symptomer som et resultat av den midd foring, automatiske metoder var upålitelige. Dermed er et rutenett metode som brukes for å vurdere planteskader:- Åpne bildet av anlegget med Photoshop.
- Lag et nytt lag, legg så over skannede bildet med et rutenett av 0,25 mm x 0,25 mm divisjoner (Vis eller Display - Show - Grid, hurtigtasten Ctrl + ').
- På et overleggs lag, merker skadede blad områder ved hjelp av en prikk (bruk "Pencil Tool", hurtigtast B). Bruk ett enkelt punkt for hvert kvadrat av gitteret under hvilken det er skade som dekker mer enn halvparten av risten enheten. Størrelsen av dot er definert i piksler (dvs,
- Når alle rutene i rutenettet som viser anlegget skader for minst halvparten av rutenettet enheten er merket med en prikk, bruke histogrammet verktøy (Vindu - Histogram) for å fastslå det totale antall piksler på laget. Histogrammet verktøyet tillater en å måle antall piksler. Siden hvert punkt er representert ved en konstant og kjent antall bildepunkter, vil histogrammet verktøyet måler det totale antall bildepunkter, som representerer det totale antall punkter, og i forlengelsen av det totale antall merkede kvadrater.
- Beregn det antall "prikkene" merket ved hjelp av formelen:
Antall prikker = totalt antall piksler / antall piksler per prikk. - Beregn det totale arealet av skade ved å multiplisere antall merkede prikker på bildet ved arealet av en firkant av rutenettet, som en prikk tilsvarer en firkant av rutenettet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ved hjelp av 20 til 30 infiserte bønneplanter, kan man samle rundt 2000 voksen hunnmidd hjelp sikter. Den tiden som kreves for å hjemsøke 10 planter med 20 midd per plante er ca 15 min hvis du bruker en pensel til å overføre midd. Kombinasjoner av innsamlings-og påføringsmetoder er vist i figur 2..
Denne protokollen genererer reproduserbare resultater av anlegget skade, viser at innsamlede midd er av tilsvarende fysiologiske tilstand og egnet for plante-edderkopp midd interaksjonsstudier (figur 3 A). For å vurdere protokoll reproduserbarhet, ble voksne kvinnelige midd samlet inn ved hjelp av vaskemetode hvor 20 midd ble plassert på rosett blader av tre uke gamle A. thaliana planter (tiltredelse Col-0) med en våt pensel. Behandlede planter ble skannet 4 dager postinfestation og område av skade ble kvantifisert ved hjelp av de teknikker som er beskrevet ovenfor. Sammenligning av gjentatte resultatene fra eksperimentet ble gjort ved hjelp av ANOVA.
Som et eksempel på eksperimentell søknad, vurderte vi naturlig variasjon i mottakelighet for edderkopp midd herbivory over 3 A. thaliana tiltredelser ved anvendelse av 20 kvinnelige edderkopp midd per plante med en våt pensel og opptak skade fire dager etter infisering. Typisk opptreden av skader i skannede bilder er vist i figur 3B. Etterpå kan kvantifisering av skade data bli presentert som et søylediagram eller et boksplott og analysert av den statistiske metoden for valg (Figur 3C). I dette eksempel fulgte ANOVA ved Tukey HSD-test ble anvendt for dataanalyser.
Figur 1. Eksperimentell oppstilling for isolering av voksne hunnmidd. (A) Sett med sikter for å tillate utskilling av forskjellige edderkopp midd utviklingsstadier. (A. 0,5 mm åpning størrelse - fjerner rusk fra midd suspensjon b 0,3 mm -.. Samler voksne kvinnelige midd c 0,2 mm -.. Samler unge kvinner, menn og nymfer d 0,16 mm -.. Samler larver og nymfer e.. 0,1 mm -.. samler egg) (B) Oppsett som brukes til å tillate midd å utvinne uten å unnslippe etter vasking og filtrering (C) Oppsett som brukes til å samle inn midd ved hjelp av pumpen (D) Sieve med bevegelige voksne hunnmidd klar til å bli oppsamlet..
Figur 2. Mulige strategier for å isolere voksne hunnmidd, i henhold til antallet midd til anvendelse. Dersom eksperimentell design krever bruk av et høyt antall voksne hunnspindelmidd, er den mest effektive metode for å bruke vakuumpumpen innsamlingsmetode direkte fra bønne blader.Ved et eksperiment krever bruk av et utviklingsstadium enn voksne kvinner, eller et lite antall individer må nøye plassert på unge planter, er det anbefalt å utføre innhenting og fraksjonering av edderkoppmidd utviklingsstadier med vaske tilnærming ved hjelp av siler, etterfulgt av angrep med en børste.
Fig. 3. Representative resultater. (A) reproduserbarhet av forsøksresultater. Skade område målt på tre ukers gamle A. thaliana planter, tiltredelse Col-0, 4 dager etter påføring av 20 kvinnelige edderkopp midd. Sammenligning av gjentatte resultatene fra eksperimentet ble gjort ved hjelp av ANOVA (n = 6, F = 0,621, p = 0,735). (B og C) Naturlig variasjon i mottakelighet for edderkopp midd herbivory over 3A. thaliana tiltredelser: Col-0, Ler-0, og ws2 (B) Utseende av planter etter edderkopp midd herbivory.. Røde piler peker mot typiske skadede områdene. (C) Forskjeller i mottakelighet for edderkopp midd herbivory vurdert ut fra området av skade. Mottakelighet for edderkopp midd herbivory betydelig varierer mellom akses (ANOVA, n = 6, F = 13,4, P = 0,0004). Bokstaver indikerer signifikante forskjeller mellom genotyper på P <0,05 (Tukey HSD test). Fremstilt grafisk verdier er gjennomsnitt ± standardavvik.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne videoen viser protokollene som brukes til å isolere og å hjemsøke planter med et stort antall voksne kvinnelige midd. Selv om vi presenterte denne protokollen med A. thaliana, kan det brukes til noe plante-edderkopp midd interaksjon system og blir nå med hell brukes også på tomat og Grapevine (Vitis vinifera) planter. Protokollen rentene reproduserbare resultater, indikerer at innsamlede midd er av sammenlignbare fysiologiske tilstand (figur 3).
Selv om disse protokollene er enkle å utføre, flere viktige skritt krever spesiell oppmerksomhet som de vil påvirke midd utvinning. Vaske midd fra bladene må gjøres på opptil tre bønne planter samtidig og må være ferdig innen 10 min med vann på RT. I tillegg, midd må spres på en sikt for hurtig tørking. Hvis midd utvinning er utilfredsstillende, er det viktig å sjekke om den anbefalte mengden av Tween 20 vaskemiddel var ossed og hvis vaskemiddel ble fullstendig fjernet i løpet av rensetrinnet.
Det er to viktige begrensninger i protokollen frem: a) mite samling ved hjelp av pumpen fungerer godt for samling av mer enn 30 midd, men samling av et mindre antall midd krever bruken av en børste, og er forholdsvis langsom; imidlertid å samle og konsentrere voksen midd gjennom vaskemetode i stor grad forenkler deres søknad; b) skade analyse gjennom scoring overflaten av chlorotic flekker kan være en tid-og krefter tidkrevende trinn; fremtidige forsøk bør ligge i å identifisere markørgener som kan brukes som et mål på midd foring.
Sammenlignet med tidligere publiserte metoder, den presenterte metoden for edderkopp midd kolleksjonen byr på en fordel med å samle et stort antall levedyktige individer og effektiv separasjon av utviklingsstadier i ett trinn. I tillegg, vurdering av planteskade fenotype i plante-pest interaksjon gjennom visuell inspectipå eller digital bildeanalyse er vanligvis det første trinn av en kompleks analyse som involverer en eller annen form av molekylær avlesing (slik som genekspresjonsanalyse eller metabolitt profilering). Nåværende protokoller er egnet for anvendelse av noen få midd og innsamling av materiale dager etter infestation som er verdifulle for analyse av den langsiktige interaksjoner mellom anlegg og pest; Men denne protokoll gjør det mulig å anvende flere hundre midd samtidig til effektivt å fange opp plante responser som forekommer i løpet av en kortere tid (t) og ved foring side.
I sammendrag, er fremgangsmåter for påføring av voksen hunnmidd på vertsplanter og vurdering av planteskade er blitt beskrevet. Disse protokollene er avgjørende for eksperimenter som tar sikte på å forstå den genetiske og molekylære grunnlaget for samspillet mellom planter og de to-spotted spider mite.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Plant material: | |||
| California red kidney bean | Stokes, Thorold, ON, Canada | 2 week old, well infested with spider mites 2 or 3 days before use. Other cultivars of Phaseolus vulgaris can be used. | |
| Chemicals: | |||
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P9416 | 1% stock solution is prepared to simplify aliquoting |
| Tap water | At room temperature, heat- and cold-shock affect mite survival rate and performance | ||
| Other materials and equipment: | |||
| Plastic tray | |||
| Set of scissors | |||
| 2 L beakers | |||
| Paper towels | |||
| Sets of sieves | Manufactured in house | Detailed instructions are available | |
| Thin brush | |||
| Pipettes | |||
| Pipette tips | 0.2 and 1 ml | ||
| 1.5 ml centrifuge tubes | |||
| Air pump | Aquarium type pump with inverted air flow. Vacuum line can be used. Required pressure drop is approx. 2-4 psi | ||
| Stereoscope | |||
| Scanner | Epson | V30 | Any flatbed scanner allowing necessary degree of control over scan quality. We use Epson V30 for our experiments. |
| Computer | Windows or OS X PC which is compatible with scanner hardware and Adobe Photoshop software. | ||
| Adobe Photoshop software | Adobe Systems Inc., San Jose, CA, USA | various | Any version with Histogram tool included. |
References
- Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. Mites injurious to economic plants. , University of California Press. (1975).
- Migeon, A., Dorkeld, F. Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae. http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).
- Croft, B. A., Vandebaan, H. E. Ecological and Genetic-Factors Influencing Evolution of Pesticide Resistance in Tetranychid and Phytoseiid Mites. Exp Appl Acarol. 4, 277-300 (1988).
- Van Leeuwen, T., et al. Mitochondrial heteroplasmy and the evolution of insecticide resistance: Non-Mendelian inheritance in action. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 5980-5985 (2008).
- Van Leeuwen, T., Vontas, J., Tsagkarakou, A., Dermauw, W., Tirry, L. Acaricide resistance mechanisms in the two-spotted spider mite Tetranychus urticae and other important Acari: A review. Insect Biochem Molec. 40, 563-572 (2010).
- Dermauw, W., et al. The cys-loop ligand-gated ion channel gene family of Tetranychus urticae: Implications for acaricide toxicology and a novel mutation associated with abamectin resistance. Insect Biochem Molec. 42, 455-465 (2012).
- Van Leeuwen, T., et al. Population bulk segregant mapping uncovers resistance mutations and the mode of action of a chitin synthesis inhibitor in arthropods. Proceedings of the National Academy of Sciences. 109, 4407-4412 (2012).
- Dearden, P. K., Donly, C., Grbic, M. Expression of pair-rule gene homologues in a chelicerate: early patterning of the two-spotted spider mite Tetranychus urticae. Development. 129, 5461-5472 (2002).
- Khila, A., Grbic, M. Gene silencing in the spider mite Tetranychus urticae: dsRNA and siRNA parental silencing of the Distal-less gene. Development genes and evolution. 217, 241-251 (2007).
- Grbic, M., et al. Mity model: Tetranychus urticae, a candidate for chelicerate model organism. BioEssays : news and reviews in molecular, cellular and developmental biology. 29, 489-496 (2007).
- Grbic, M., et al. The genome of Tetranychus urticae reveals herbivorous pest adaptations. Nature. 479, 487-492 (2011).
- Kliebenstein, D., Pedersen, D., Barker, B., Mitchell-Olds, T. Comparative analysis of quantitative trait loci controlling glucosinolates, myrosinase and insect resistance in Arabidopsis thaliana. Genetics. 161, 325-332 (2002).
- Abe, H., et al. Function of jasmonate in response and tolerance of Arabidopsis to thrip feeding. Plant & cell physiology. 49, 68-80 (2008).
- Whiteman, N. K., et al. Mining the plant-herbivore interface with a leafmining Drosophila of Arabidopsis. Molecular ecology. 20, 995-1014 (2011).
- Goodspeed, D., Chehab, E. W., Min-Venditti, A., Braam, J., Covington, M. F. Arabidopsis synchronizes jasmonate-mediated defense with insect circadian behavior. Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 4674-4677 (2012).
- Kim, J. H., Lee, B. W., Schroeder, F. C., Jander, G. Identification of indole glucosinolate breakdown products with antifeedant effects on Myzus persicae (green peach aphid). The Plant journal : for cell and molecular biology. 54, 1015-1026 (2008).
- Adio, A. M., et al. Biosynthesis and defensive function of Ndelta-acetylornithine, a jasmonate-induced Arabidopsis metabolite. Plant Cell. 23, 3303-3318 (2011).
- Li, L., et al. The tomato homolog of CORONATINE-INSENSITIVE1 is required for the maternal control of seed maturation, jasmonate-signaled defense responses, and glandular trichome development. Plant Cell. 16, 126-143 (2004).
- Kant, M. R., Ament, K., Sabelis, M. W., Haring, M. A., Schuurink, R. C. Differential timing of spider mite-induced direct and indirect defenses in tomato plants. Plant Physiol. 135, 483-495 (2004).
- Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nat Methods. 9, 671-675 (2012).
