Summary
תאי גזע סרטני (CSCS) הם מעורבים בהישנות גידול עקב chemoresistance. יש לנו אופטימיזציה פרוטוקול לבחירה והרחבת CSCS משורות תאי סרטן השחלות. על ידי טיפול בתאים עם ציספלטין כימותרפיות וculturing בתאי גזע קידום תקשורת אנו מעשירים לתרבויות CSC לא חסידות.
Abstract
תאי גזע סרטני (CSCS) מוגדרים כקבוצת משנה של רכיבה על אופניים איטיים ותאים שלא עברו התמיינות אשר מחלקים סימטרי ליצירת שגשוג מאוד, חודרני, ותאי גידול chemoresistant. לכן, CSCS הוא אוכלוסייה אטרקטיבית של תאים למקד טיפולי. CSCS הם חזו לתרום למספר סוגי סרטן כמו כולל אלו שבדם, המוח, ריאות, מערכת עיכול, ערמונית, והשחלה. בידוד והעשרת אוכלוסיית תאים סרטניים לCSCS תאפשר לחוקרים ללמוד את המאפיינים, גנטיקה, ותגובה הטיפולית של CSCS. אנחנו שנוצרנו פרוטוקול שמעשיר reproducibly לCSCS סרטן השחלות משורות תאי סרטן השחלות (SKOV3 וOVCA429). מטופלים שורות תאים עם 20 ציספלטין מיקרומטר במשך 3 ימים. תאים ששרדו מבודדים ותרבותיים בתקשורת של תאי גזע ללא סרום המכילה ציטוקינים וגורמי גדילה. אנו מדגימים העשרת CSCS המטוהר אלה על ידי ניתוח התאים המבודדים לknown תאי גזע סמני Oct4, Nanog, וProm1 (CD133) וביטוי בתא שטח של CD177 וCD133. תערוכת CSCS מוגברת chemoresistance. שיטה זו לבידודה של CSCS היא כלי שימושי לחקר תפקידה של CSCS בהישנות chemoresistance וגידול.
Protocol
.1 תא תרבות ותיוג פלורסנט של שורות תאי סרטן השחלות
- הכן תקשורת SKOV3: תקשורת מקוי בתוספת סרום 10% שור עוברי (FBS), L-גלוטמין 0.1 מ"מ, 50 U / ml פניצילין, ו50 מיקרוגרם / מ"ל סטרפטומיצין. לשמור OVCA429 תאים בתקשורת המינימלי חיונית (MEM) בתוספת 10% FBS, פירובט נתרן 1 מ"מ, L-גלוטמין 0.1 מ"מ, 50 U / ml פניצילין, ו50 מיקרוגרם / מ"ל סטרפטומיצין.
- הפץ שורות תאי SKOV3 וOVCA429 בחממה humidified על 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO 2. לגדל תאים לconfluency 40-50%.
- לייצר תאים לבטא חלבון אדום ניאון (RFP) במטרה לעקוב אחר כדאיות במבחנת in vivo.
- כדי ליצור תאי SKOV3 להביע RFP, להוסיף חלקיקי lentiviral להביע RFP וpolybrene / מ"ל 10 מיקרוגרם לתקשורת SKOV3 בהעדר פניצילין וסטרפטומיצין ל72 שעה.
- לאחר 72 שעה, לבחור עבור RFP תאים חיוביים על ידי תא הקרינה הופעל Sorting (FACS) כדלקמן: RFP Trypsinize ולא RFP לבטא בתאים, צנטריפוגות ב XG 125 למשך 5 דקות, תאים גלולים ב10 7 / מ"ל תאי PBS המכיל BSA 0.1%. על סדרן תא, להשתמש בתאים שאינם RFP כדי לקבוע את הפרמטרים למיון. ואז לאסוף תאי המבטאים גבוה RFP באמצעות לייזר 561 ננומטר.
- לחלופין, אם פלסמיד lentiviral מבטא קלטת עמידות לאנטיביוטיקה, לבחור עבור תאי RFP להביע ידי culturing באנטיביוטיקה המתאימה (כגון 10 מ"ג / מ"ל blasticidin). הערה: הכמות של חלקיקי lentiviral שצריך להיות בשימוש יכול להשתנות על ידי אצווה ועל ידי סוג תא. כייל lentiviral נכון צריך להיות שנקבע לכל סוג תא.
.2 העשרה של תאי גזע סרטניים
- פנק את SKOV3, SKOV3-RFP, או OVCA429 שורות תאים עם 20 מיקרומטר של ציספלטין ל72 שעה. זהירות: ציספלטין הוא רעיל. השתמש בבגדים / כפפות מגן ולהימנע ממגע עם קרומי עור וריר. אל תשליך אני ציספלטיןשפכי n.
- הכן תקשורת CSC: תקשורת DMEM / F12 סרום ללא תוספת 5 מיקרוגרם / מ"ל אינסולין, 10 ng / גורם גדילה באפידרמיס רקומביננטי אנושי מ"ל (EGF), 10 ng / גורם גדילה פיברובלסטים בסיסי מ"ל (bFGF), ng 12 / גורם מעכב לוקמיה מ"ל , ואלבומין 0.4% בסרום שור (BSA).
- תאי Trypsinize. תרבות ששרד תאים בתקשורת CSC.
הערה: לאחר 2 ימים בspheroids שאינו חסיד התרבות יהוו. - שינוי בתקשורת כל 2 ימים על ידי איסוף מדיה המכילה תאים וצנטריפוגה ב125 XG למשך 5 דקות. אז resuspend גלולה בתקשורת CSC הטרי. בדקו תאים לכדאיות כל 2 ימים על ידי ספירת תאים וביצוע הרחקת trypan כחולה.
- ואז לאסוף CSCS עבור ניסויים נוספים על ידי צנטריפוגה 129 XG למשך 5 דקות וresuspending גלולה בthiocynate פנול המכיל guanidinium (RNA), שנאגרו מלוח פוספט (PBS: 137 mM NaCl, 2.7 מ"מ KCl, ו11.9 מ"מ חיץ פוספט, pH 7.4) עם BSA 0.1% (עבור cytometry זרימה), או מדיה CSC להמשיךculturing התאים.
- צג מורפולוגיה של תאי CSC באמצעות מיקרוסקופ אור ב20X ו40X הגדלה.
.3 אפיון CSC באמצעות ניתוח ביטוי גנים לסמני תאי גזע
- לאסוף 3 הכנות של CSCS על ידי איסוף מדיה המכילה תאים, צנטריפוגה ב129 XG למשך 5 דקות, וresuspending גלולה בפתרון של thiocynate guanidinium פנול המכיל (ניתן להשתמש בשיטות אחרות להפקת RNA).
- הכן RNA סך באמצעות TRIzol על פי הפרוטוקול של היצרן. לסנתז DNA המשלים (cDNA) .1-1 מיקרוגרם של RNA באמצעות ערכת cDNA ההפוך תמלול זמינה מסחרי.
- לבצע תגובה הפוכה עיבד כמותית השרשרת של פולימראז (qRT-PCR).
- מרכיבים את תערובת הורים עבור כל קבוצה של פריימרים המכילים תערובת qRT-PCR, פריימרים, ומים לסך 8 μl לדגימה (יכולים להיות מוגברים פריימרים עם fluorophores שונה באותה היטב). לדוגמא, ליצורתערובת אב אחד לOct4-FAM, Nanog-Hex, וGAPDH-Cy5. צור תערובות הורים נפרדות לNestin וProm1. הוסף 2 μl של תבנית cDNA לדגימה.
הערה: במחקר זה, qRT-PCR בוצע באמצעות פריימרים מפורטים בטבלה 1. - לבצע את כל qRT-PCR בשני עותקים עבור כל דגימה באמצעות זמן אמת thermocycler PCR מסוגל לאתר fluorophores מרובה. כולל לא שולט תבנית.
- לנרמל ביטוי גנים בתאי גזע לביטוי GAPDH עבור כל דגימה בשיטת ΔΔC T.
- מרכיבים את תערובת הורים עבור כל קבוצה של פריימרים המכילים תערובת qRT-PCR, פריימרים, ומים לסך 8 μl לדגימה (יכולים להיות מוגברים פריימרים עם fluorophores שונה באותה היטב). לדוגמא, ליצורתערובת אב אחד לOct4-FAM, Nanog-Hex, וGAPDH-Cy5. צור תערובות הורים נפרדות לNestin וProm1. הוסף 2 μl של תבנית cDNA לדגימה.
| אוקטובר -4-FAM | פריימר 1: 5'-CCCAAGGAATAGTCTGTAGAAGTG-3 " |
| פריימר 2: 5'-TGCATGAGTCAGTGAACAGG-3 " | |
| בדיקה FAM: 5'-CTTCCAAGC / ZEN / TGCCCACCTAACTTCT / 3IABkFQ -3 " | |
| Nanog-HEX | פריימר 1: 5'-CCTTCTGCGTCACACCATT-3 " |
| פריימר 2: 5'-AACTCTCCAACATCCTGAACC-3 " | |
| הבדיקה HEX: 5'-CTGCCACCT / ZEN.CTTAGATTTCATTCTCTGGT / 3IABkFQ-3 " | |
| GAPDH-Cy5 | פריימר 1: 5'-TGTAGTTGAGGTCAATGAAGGG-3 " |
| פריימר 2: 5'-ACATCGCTCAGACACCATG-3 " | |
| הבדיקה Cy5: 5'-AAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGTC / 3IABRQSP-3 " | |
| Nestin-FAM | פריימר 1: 5'-AGGACCTGAGCGATCTGG-3 " |
| פריימר 2: 5'-CGTTGGAACAGAGGTTGGAG-3 " | |
| בדיקה FAM: 5'-AACTTTTCA / ZEN / GTAGCCCGCAGCC / 3IABkFQ -3 " | |
| CD133-HEX | פריימר 1: 5'-ACTCTCTCCAACAATCCATTCC-3 " |
| פריימר 2: 5'-AAACAATTCACCAGCAACGAG-3 " | |
| הבדיקה HEX: 5'-ACAATCACT / ZEN / GAGCACTCTATACCAAAGCG / 3IABkFQ-3 |
Primers הטבלה 1 המשמש לאפיון CSC ידי qRT-PCR.
e_title "> 4. CSCS ניתוח לתא שטח סמני CD117 וCD133- CSCS קציר על ידי איסוף מדיה המכילה תאים וצנטריפוגה ב125 XG למשך 5 דקות. הוסף 500 μl של פתרון ניתוק מסוג התאים לא פרוטאוליטים לשבור-up תאים. תאי צנטריפוגה ב125 XG למשך 5 דקות כדי להסיר פתרון ניתוק תא. לאחר מכן לשטוף את תאים פעמיים עם PBS הקר.
- דגירה בתקשורת צמיחה נורמלית עבור שעה 1 לפני תאי תיוג. ספין למטה תאים 5 דקות ב129 x גרם. Resuspend תאים בPBS עם BSA 0.1% עם אנטי CD133-PE ואנטי CD117-FITC.
- תקן תאי הלילה בparaformaldehyde 1%. זהירות: Paraformaldehyde הוא (קרצינוגן חשד) רעיל. הפוך במנדף ולהשתמש תוך שבוע.
- לבצע cytometry זרימה לנתח CD117 (עם אנטי CD117 מצומדת לFITC) ביטוי על פני השטח של תאים בזרימה cytometer וCD133 (עם אנטי CD133 מצומדת לPE). לאסוף נתונים על תאים בFL1 (לFITC) וFL3 (לPE) ערוצים. צור שערים לתאים המבטאים את שניFITC וPE. צור עלילת נקודה עם 4 רביעים (FITC- וPE-, FITC + PE-, FITC- PE +, וFITC + וPE +) ולקבוע את מספר התאים בכל רבע.
.5 ניתוח CSCS לתגובה טיפולית
- צלחת 5,000 תאים לכל טוב (SKOV3, SKOV3-RFP, SKOV3 CSC וSKOV3-RFP CSCS) על צלחות 96 היטב הלילה.
- פנקו עם ציספלטין (0, 1, 10, 100, ו1,000 מיקרומטר) או פקליטקסל (0, 0.01, 0.1, 1, 10, ו100 מיקרומטר) ל96 שעה.
- בצע MTT (3 (4,5-Dimethylthiazol-2-י.ל.) ברומיד -2,5-diphenyltetrazolium) assay כדאיות תא.
- צלחת תאים 5,000 לכל טוב 100 μl על צלחת 96 היטב (תאי צלחת בשני עותקים וכוללים תקשורת לשלוט רק בארות).
- לאחר 24 שעות, להוסיף 10 μl של 10 מ"ג / מ"ל MTT. לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 2-4 שעות (עד צורות משקע).
- הוספה של MTT ממס 4 מ"מ HCl 100 μl, 0.1% NP-40 בisopropanol. דגירה במשך 15 דקות בחושך.
- קראו צלחות ב570 ננומטר על r צלחתeader.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
על מנת להוכיח כי אנו מבודדים CSCS משורות תאי סרטן השחלות אפיתל באמצעות טיפול ציספלטין, שרכשנו ראשון את תמונות של שורות התאים לפני טיפול ואחרי הבחירה. אנחנו השתמשנו במיקרוסקופ אור כדי ללכוד תמונות של חסיד (ללא טיפול) SKOV3 וOVCA429 תאים וSKOV3 וOVCA429 CSCS (איור 1). CSCS להופיע בסיבוב לא ומחובר לצלחות תרבית רקמה (איורים 1 ו -2). בנוסף, אנו מראים שתאי SKOV3 transduced עם RFP לשמור הקרינה שלהם לאחר הבידוד של CSCS הוכחה כי התאים הם קיימא (איור 2).
תרבויות CSC קיימא הוערכו לתגובה שלהם לטיפול תרופתי. CSCS הפגין התנגדות מוגברת לציספלטין (במיוחד ב100 מיקרומטר) ופקליטקסל (10 מיקרומטר) (איור 3). CSCS לעתים קרובות מאופיין בביטוים של גנים בתאי גזע. ביטוי של CD133 (הידוע גם בProm1), Nestin, Nanog, וOct4 נבדקו. CD133 היה מושרה באופן משמעותי בתרבויות SKOV3 CSC בהשוואה לתאים שלא טופלו (שליטה) (איור 4 א). CD133 גם היה מושרה בתרבויות CSC השוואה לקבוצת ביקורת שלא טופלה על ידי 16 פי ופי 13 בתאי OVCA429 וOVCA429-RFP (מידע לא מוצג). בניסויים ראשוניים Oct4, Nanog, וNestin היו גבוה בתרבויות SKOV3 CSC לעומת לא מטופלים, אך התוצאות לא היו (איור 4 א) משמעותיים מבחינה סטטיסטית. עם חזרה על ניסויים אלה Oct4 וNanog גדלו בSKOV3 CSCS בהשוואה לתאי בקרת הורים (איור 4). Oct4 הוגדל על ידי 4.7 פי ו8 פי בתאי OVCA429 וOVCA429-RFP הבא פרוטוקול העשרת CSC (לא מוצג). לבסוף, תערוכת SKOV3 CSCS מוגברת ביטוי פני תא של CSC סמן CD117 (איור 5). לסיכום, שיטה זו מאפשרת לבחירה של CSCS קיימא אליפטית (המבטא סמנים של תאי גזע) בסרטן השחלותשורות תאים על ידי בחירה עם ציספלטין וצמיחה בתקשורת של תאי גזע.
איור 1 המורפולוגיה של SKOV3 וOVCA429 תאים ותאי גזע סרטני (CSCS) נבחרה מSKOV3 וOVCA429 תאים. מיקרוסקופ לעומת השלב מתאר SKOV3 וOVCA429 תאים (חסיד), כי הם לא טופלו ונבחרו לCSCS (אליפטית).
איור העשרה .2 לCSCS מניבה spheroids שאינו חסיד. התאים (א) SKOV3 שלא טופל ומועשר לCSCS (60X הגדלה). (ב) תאי SKOV3-RFP שלא טופל (ב) או מועשר לCSCS (ג וד). פנלים משמאל מתארים תמונות בניגוד שלב ולוחות מימין מתארים הקרינה. הגדלה מקורית 40X. סרגל קנה מידה = 400 מיקרון.
איור תערוכת CSCS .3 מוגברת chemoresistance בהשוואה לשורות תאים שלא טופלו. SKOV3 (A, B) וSKOV3-RFP (C, D), SKOV3 CSCS (A, B) וSKOV3-RFP CSCS (C, D) טופלו בשונה ריכוזים של ציספלטין (וג) או פקליטקסל (טקסול) (B, D). assay MTT לאחר הטיפול 96 שעה בוצע. ניסויים בוצעו בn≥3 וסטטיסטיקה חושבה באמצעות שתי הדרך ANOVA; * P <0.05, *** p < ;. 0.0005 אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
ביטוי איור 4 גזע סמן התא בCSCS בהשוואה לתאים שלא טופלו. ניתוח qRT-PCR בוצע עבור SKOV3 (שליטה) וSKOV3 CSCS. () CD133 (Prom1), Nestin, Nanog, וOCT4 (מנורמל לGAPDH). ( B) ניסוי נוסף להוכחה שCSCS SKOV3-RFP שהתקבל מתאי תשואת פרוטוקול זה עם OCT4 המוגבה וNanog בהשוואה לתאים שלא טופלו. תוצאות היו מנורמלות עם ביטוי GAPDH. N = 3 וסטטיסטיקה חושבו באמצעות סטודנטים T-בדיקה; ** P <0.02, *** p <0.002.
5 "FO: = תוכן ברוחב" "src =" 5in / קבצים / ftp_upload / 51,891 / "width =" 51891fig5highres.jpg 500 "/>
איור 5 ניתוח תזרים Cytometry של סמנים בתאי גזע בתאי SKOV3 וSKOV3 CSCS לבד או transduced או בלי RFP. CD133, CD117, וCD133 ביטוי / CD117 ב (א) SKOV3 תאים (שלא טופלה / שליטה), (ב) SKOV3 CSCS, (C) SKOV3-RFP תאים שלא טופלו, ו( D) CSCS SKOV3-RFP. ניסויים בוצעו בשלושה עותקים. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
CSCS כי הם עמידים לטיפול עשוי להיות אחראי להישנות לאחר הטיפול של גידול ראשוני. אפיון של CSCS עלול להוביל לטיפולים משופרים לסרטן השחלות. הפרמטרים הקריטיים בהקמת CSCS chemoresistant באמצעות הפרוטוקול לעיל תזמון משך טיפול עם כימותרפיה והריכוז של כימותרפיה. בעת שימוש בפרוטוקול באל מא et. נמצא כי לאחר 7 ימים של טיפול עם ציספלטין ופקליטקסל, לא תאי קיימא נשארו 4. על ידי הפחתת הטיפול עד 3 ימים (עם 20 מיקרומטר ציספלטין במקום 40 ציספלטין מיקרומטר ו10 מיקרומטר paclitaxel), תאי chemoresistant קיימא וCSCS פיתחו. לאורכה והמינון של טיפול ייתכן שיהיה הצורך לשנות לשורות תאי סרטן השחלות שונות.
המגבלה העיקרית של פרוטוקול זה היא האורך שCSCS להישאר קיימא. השימוש בפרוטוקול זה, CSCS להישאר קיימא עבור פחות משבוע. לכן, הסוגי דואר של ניסויים וניתוח לCSCS צריכים להיות מתוזמן היטב.
אפיון נוסף של CSCS צריך להתנהל. זה יהיה שימושי כדי להשוות שיטה זו של CSCS לשיטות אחרות של דור CSC כדי לקבוע את הדמיון ושוני בין סוגי התאים. השוואה של סמנים בתאי גזע, תגובה לטיפול, והמערכת הטובה ביותר לניתוח in vivo צריכה להתנהל בין שיטות שונות ליצירת / בחירה של CSCS. היה מי שהציע כי ישנם סוגים שונים של CSCS עם דפוסים שונים ביטוי של סמנים בתאי גזע והפרוגנוזה שונות לחולים 10-12, הגדרה וכך נוספת של איזה סוג של CSCS מופקים על ידי פרוטוקול זה עשוי לעזור לקבוע כיצד הם מתייחסים לממאירות אנושיות . לבסוף, על מנת להדגים קפדנות שCSCS מבודד מפרוטוקול זה הוא CSCS סופי, תאים צריכים להיות מוזרקים לעכברי immunocompromised בassay דילול מגביל. זהassay מוכיח כי CSCS מסוגל לייצר גידולי השחלות בצפיפות נמוכה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| McCoy | Life Technologies | 16600-108 | Warm to 37 °C prior to use |
| DMEM / F12 serum free | Life Technologies | 11320-033 | Warm to 37 °C prior to use |
| Minimal Essential Media | Life Technologies | 42360032 | Warm to 37 °C prior to use |
| Sodium pyruvate | Life Technologies | 11360070 | |
| Polybrene | Millipore | TR-1003-G | |
| Blasticidin | Life Technologies | R21001 | |
| Fetal Bovine Serum | Atlas Biologicals | F-0500-A | |
| Penicillin-streptomycin | Life Technologies | 15070-063 | |
| Cisplatin | Sigma-Aldrich | T7402-5MG | Caution: Toxic. Use precautions |
| pLenti-suCMV-Rsv | Gentarget | LVP023 | BSL2 approval needed |
| Insulin | Sigma-Aldrich | I-1882 | |
| Human Recombinant EGF | Cell Signaling Technology | 8916LC | |
| bFGF | BD biosciences | 354060 | |
| LIF | Santa Cruz | sc-4988A | |
| Bovine Serum Albumin | Roche | 03 116 956 001 | |
| TRIzol | Life Technologies | 15596-018 | |
| High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit | Applied Biosystems | 4368813 | |
| IQ Multiplex Powermix | BioRad | 1725849 | |
| Accumax | Millipore | ||
| Primers | Integrated DNA Technology | individually designed and ordered (see protocol for sequnces) | |
| Anti-CD133 PE | Milenyl | 130-098-826 | Primer/probe sets are light sensitive |
| CD117-Biotin | Miltenly | 130-098-570 | |
| AntiBiotin-FITC | Miltenly | 130-098-796 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148-1KG | Caution: Toxic. Always prepare in hood and make fresh. |
| Trypsin | Life Technologies | 25300062 | |
| MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) | Sigma-Aldrich | 25200-072 | |
| EVOS Fl Epifluorescence and Transmitted Light Microscope | Advanced Microscopy Group | ||
| Biorad CFX96 C1000 System | Biorad | ||
| Beckman Coulter FC500 Flow Cytometer | Beckman Coulter | ||
| Spectramax 340PC384 | Molecular Devices |
References
- Pennington, K., Pulaski, H., Pennington, M., Liu, J. R. Too Much of a Good Thing: Suicide Prevention Promotes Chemoresistance in Ovarian Carcinoma. Curr Cancer Drug Targets. 10, 575-583 (2010).
- Thigpen, T. A rational approach to the management of recurrent or persistent ovarian carcinoma. Clin Obstet Gynecol. 55, 114-130 (2012).
- Burgos-Ojeda, D., Rueda, B. R., Buckanovich, R. J. Ovarian cancer stem cell markers: prognostic and therapeutic implications. Cancer letters. 322, 1-7 (2012).
- Ma, L., Lai, D., Liu, T., Cheng, W., Guo, L. Cancer stem-like cells can be isolated with drug selection in human ovarian cancer cell line SKOV3. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 42, 593-602 (2010).
- Bonnet, D., Dick, J. E. Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell. Nature Medicine. 3, 730-737 (1997).
- Alison, M. R., Lim, S. M., Nicholson, L. J. Cancer stem cells: problems for therapy. The Journal of pathology. 223, 147-161 (2011).
- Luo, X., Dong, Z., Chen, Y., Yang, L., Lai, D. Enrichment of ovarian cancer stem-like cells is associated with epithelial to mesenchymal transition through an miRNA-activated AKT pathway. Cell proliferation. 46, 436-446 (2013).
- Wang, L., Mezencev, R., Bowen, N. J., Matyunina, L. V., McDonald, J. F. Isolation and characterization of stem-like cells from a human ovarian cancer cell line. Molecular and cellular biochemistry. 363, 257-268 (2012).
- Abubaker, K., et al. Short-term single treatment of chemotherapy results in the enrichment of ovarian cancer stem cell-like cells leading to an increased tumor burden. Molecular cancer. 12, 24 (2013).
- Conic, I., Dimov, I., Tasic-Dimov, D., Djordjevic, B., Stefanovic, V. Ovarian epithelial cancer stem cells. ScientificWorldJournal. 11, 1243-1269 (2011).
- Liu, K. C., et al. Ovarian cancer stem-like cells show induced translineage-differentiation capacity and are suppressed by alkaline phosphatase inhibitor. Oncotarget. 4 (12), 2366-2382 (2013).
- Liu, T., Cheng, W., Lai, D., Huang, Y., Guo, L. Characterization of primary ovarian cancer cells in different culture systems. Oncology reports. 23, 1277-1284 (2010).
