Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Экс Vivo Лечение отклика первичных опухолей и / или связанных метастазов для доклинических и клинических развития Therapeutics

doi: 10.3791/52157 Published: October 2, 2014
* These authors contributed equally

Summary

Штатные клеточные линии и ксенотрансплантаты рака были основой исследования рака в течение последних нескольких десятилетий. Тем не менее, последние данные свидетельствуют о том, что терапевтический ответ в значительной степени зависит от опухолевых клеток микроокружения. Поэтому мы разработали экс естественных анализ первичных образцов опухоли в целях развития наркотиков.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Разработка эффективные лечения рака оказалась чрезвычайно сложной. Клеточные линии рака и опухолевых экспланты - а также ксенотрансплантаты были использованы в исследовании рака на протяжении более половины 1,2,3 века. На сегодняшний день, молекулярный анализ чувствительности наркотиков и сопротивления в обоих установленных раковых клеточных линий и пациентов, полученных ксенотрансплантатах (PDX) незаменим. Тем не менее, тестирование соединений в установленных линий раковых клеток не часто прогнозировать эффективность в естественных условиях, и соответствующие в естественных условиях исследования на животных, особенно в моделях PDX, стоит очень дорого и отнимает много времени. Ограничения этих модельных систем, а именно неспособность сообщить о влиянии родной микросреды в опухолевой прогрессии и ответ на терапевтических стратегий, привело поле исследований по разработке дополнительных методов дополняют эти анализы. Из недавно, повышенное внимание уделяется к экс естественных анализа свою очередь пациентаили экспланты 4, 5 в связи с большим пониманием, что рак терапевтический ответ не только для присущего молекулярного состава раковых клеток, а в значительной степени зависит от опухолевых клеток микроокружения 6, 7 функций, которые не могут быть обобщены традиционными методами культивирования и / или PDX. Экс естественных анализ в вышеуказанном контексте (т.е.., влияние соседней микросреды окружающих опухолевых клеток) следует оценку жизнеспособных участков первичных опухолей / метастазирования, а не экс естественных анализа клеточных изолятов 8, 9.

Мы сообщаем здесь на экс естественных техники (т.е.., Высокоточные нарезанный разделы свежей ткани) из пациентов обеих первичных опухолей и связанные метастазы (то есть, лимфатические узлы), которые добросовестно сообщает о реакции (IC 50), мимо цели эффекты и позволяет молекулярной анализ сопротивления и механизмы обратной связи. Кроме того, корреляционный анализ therapeUTIC чувствительность / сопротивление против биомаркеров и генной профиля экспрессии могут быть выполнены в целях выявления пациентов, скорее всего, чтобы ответить на экспериментальный препарат интереса (то есть., высокий отклик препарат соответствует пациента с конкретной биологического профиля). Применение методики экс естественных и оценки в многопараметровой моды в это движение в сторону отбора пациентов и общего улучшения клинических исходов.

Экс естественных анализ ответ на лечение может стать стандартным инструментом в доклинической и клинической разработки лечения рака и предполагается как шаг к персонализированной медицине подхода в терапевтических стратегий развития.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

ПРИМЕЧАНИЕ: закупки Пациент ткани было разрешено через институционально наблюдательный совет (IRB) -approved Biospecimen и клинических протоколов (номера протокола 09-121 и 11-041, соответственно) в Memorial Sloan Kettering ракового центра.

1 Tissue закупок

  1. Закупка пациента первичной опухоли / метастазов
    ПРИМЕЧАНИЕ: На сегодняшний день, этот протокол был выполнен на хирургически удаленных поджелудочной, желудка и опухоли молочной железы типов, а также, лимфомы метастазов.
    1. Направьте хирургической бригады, чтобы доставить образец от курьера или системы пневмопочты в отдел патологии в плотно закрытой и стерильной герметичной пластиковой образца мешок в стерильной влагозащищенная контейнера. Направьте хирургической бригады для транспортировки образца в свежем состоянии, без формалина или фиксатором.
    2. Направьте патологоанатома или патологоанатома помощника урожай свежего образца с использованием стерильной техники, которая вклLudes использование стерильных перчаток и инструментов под капотом ламинарного потока.
    3. Запишите время уборки закупаемых образца, которая хранится строго под 30 мин от завершения хирургической процедуры. Принимая во внимание последствий холодной ишемии, не брать пробы из резецированных образцов с холодным ишемической время> 30 мин 18.
    4. Направьте персонала патологоанатомического отделения для удаления первичного образца опухоли примерно 0,5 см 3 до 1,0 см 3 в ламинаре поддерживать стерильную среду. Когда это возможно, выбрать ткань опухоли от периферии индекса поражения, чтобы избежать возможных откровенный центральный некроз (гибель клеток).
      Примечание: некротических тканей может быть грубо узнать по любой из следующих критериев: потери цвета или бледность ткани; потеря прочности в котором некротические ткани является мягким и рыхлым; особым разграничение между некротической и жизнеспособной ткани.
    5. Направьте pathologiул или патологоанатом помощник обеспечить периферическое ткань, которая в избытке (хирургического отбрасывания) после непосредственной выборки опухоли для диагностической оценки. Поместите образец в 15 мл стерильной коническую центрифужную пробирку, содержащую приблизительно 5 мл минимальной необходимой информации (MEM), содержащей 1% антибиотики (пенициллин и стрептомицин).
    6. Если имеется (например, лимфатических узлов подмышечной хвосте мастэктомии образца), закупать грубо положительные образца связано лимфатических узлов того же размера (0,5 см 3 до 1,0 см 3) и по сравнению с ответом наркотиков первичной опухоли. Как первичные опухоли образца, разместить соответствующие образец лимфатических узлов в 15 мл стерильной коническую центрифужную пробирку, содержащую приблизительно 5 мл минимальной необходимой массовой информации (MEM), содержащей 1% антибиотики (пенициллин и стрептомицин).
    7. Если размер хирургических разрешений образца (например, мастэктомии образца), удалить (удаленных от первичной опухоли) образца нормальной ткани (т.е.,нормальный плотный / волокнистый паренхимы молочной железы) и место в 15 мл стерильной коническую центрифужную пробирку, содержащую приблизительно 5 мл минимальных базовых СМИ (MEM), содержащих 1% антибиотики только для передачи. После перевода в лабораторных объектов, передать "нормального" образец для криопробирку, 'привязки' замораживания и хранения в -80 ° C морозильник для будущих молекулярных анализов.
    8. Поместите все образцы на льду и сразу транспортировать в лабораторных помещений для экс естественных свежей ткани срезов. Не допускайте раздел нормальную образца, а хранить в -80 ° C морозильник для будущих молекулярных анализов. Перевести часть первичной опухоли и метастазов, связанный с криопробирку, 'привязки' замораживания и хранения в -80 ° C морозильник для будущих молекулярных анализов.
  2. Закупка ткани от клинических исследований (например, дополнительный основные иглы биопсии (CNB))
    ПРИМЕЧАНИЕ: Мы получим опухолевые ткани от больныхпоступил на клинических протоколов, которые дают свое согласие на прохождение CNB из доступном метастазов опухоли до начала терапии. CNBS, на сегодняшний день, были выполнены на пациентов с раком молочной железы, маргинальной зоны лимфомы, лимфомы мантийных клеток, метастатическим параганглиомы, шейки матки (плоскоклеточный клеток) и яичников.
    1. Есть медицинский персонал от интервенционной радиологии или соответствующего департамента выполнить предварительной обработки основной биопсии и поместить образец в 15 мл стерильной коническую центрифужную пробирку, содержащую приблизительно 5 мл минимальной необходимой информации (MEM), содержащей 1% антибиотики (пенициллин и стрептомицин).
    2. Поместите биопсии на льду и сразу транспортировать в лабораторных помещений для экс естественных свежей ткани срезов.

2 Подготовка материалов для секционирования и Vibratome Настройки

  1. Подготовка материалов для секционирования
    1. Сделайте 4% раствор агарозы путем добавления 4 г агавырос до 100 мл PBS. Автоклав (настройки цикла: жидкие, 121 ° C, 30 мин, 15 фунтов на квадратный дюйм) решение перед первым использованием. Для последующего использования, поместите 4% агарозы в микроволновой печи для разжижения (сильном огне в течение 30 интервалов сек) перед каждым использованием и охладить надлежащим образом ~ 25 ° C (т.е., теплая на ощупь) помнить, что агарозном затвердевает при комнатной температуре.
    2. Используйте 4% агарозы как непостоянного ткани вложение средств массовой информации. Когда 4% агарозном остынет и все еще находится в жидком состоянии, с стерильные щипцы разместить образец ткани в вложения форму и залить в 4% агарозы.
    3. Расположите образец ткани тесные (~ 2 мм расстояние), но не непосредственно на режущей поверхности стенки вложения плесени. 4% агарозном начнет затвердевать быстро, поэтому соответствующим образом позиционировать образец ткани быстро. Во время секционирования, держать 4% агарозы в водяной бане при 55 °, чтобы держать в решение.
    4. К 24-луночный планшет для анализа раздела, добавить 1 мл ое полную среду (т.е. MEM + 10% фетальной бычьей сыворотки + 1% антибиотиков) в каждую лунку. Держите 24-луночного планшета при комнатной температуре (~ 25 ° C) в течение всего срока секционирования.
  2. Подготовка Настройки Vibratome
    1. Используя вибрирующий микротом, установить скорость, в которой лезвие приближается образца [0 (0.00 мм / сек) до 10 (2,5 мм / сек)] и частоту лезвие [0 (0 Гц) до 10 (100 Гц) ]. Настройте параметры в соответствии с текстурой ткани (т.е. плотность / твердость).
    2. Для первичной опухоли молочной инвазивного раком протоков, настроить параметры на 6 и 3, скорости и частоты соответственно. Для менее плотной / фирмы опухолевой ткани, уменьшить скорость и увеличить частоту соответственно.
    3. Установите толщину профиля в пределах приборов (1 - 999 мкм). Для этих анализов, установить толщину профиля на 200 мкм.
    4. Установите агарозном встраиваемый образца с помощью тонкого слоя жидкого клея на образец диска тхат погружают в резервуар СМИ, которое заключено в мокром льду.

3 Tissue Секционирование, Лечение и анализ

  1. Снимите точности нарезанный разделы сразу после секционирования с помощью стерильного пинцета и место в мульти-луночного планшета в 1 мл полной среды. При достаточных разделы приобретены для реагирования и коррелятивных анализов, разместить табличку с мульти-а в реакции на лечение в культуре ткани инкубатор при стандартных условиях ткани культивирования.
  2. Возьмем несколько секций управления, что форзац обработанных участков, с тем, чтобы подтвердить ответ в зависимости от дозы, в отличие от культивируемых артефактов. Выполните ткани быстро секционирования (~ 30 - 40 мин), а в любых пагубных последствиях холодной ишемии (~ 2 - 4 ч) 18. Выполнение обработки секций только после периода акклиматизации 1 час.
  3. После 1 ч периода акклиматизации, добавить увеличением дозы (терапевтически актуальны;
  4. После обработки, удалить все разделы в стерильных условиях и формалина-исправить путем размещения срезы ткани в пробирку, содержащую либо 10% буферный формалин и место при комнатной температуре O / N, или в пробирку, содержащую 4% параформальдегида (разбавленной 16% параформальдегида из флакона с PBS до конечной концентрации 4%) и месте при комнатной температуре в течение 2 часов.
    1. Fix более широкие слои ткани (например,., ~ 6 мм х 4 мм) 200 мкм в 10% буферном растворе формалина O / N при комнатной температуре. Закрепить меньшие участки (например,., 1 мм х 1 мм) 200 мкм в 4% параформальдегид в течение 2 ч при комнатной температуре.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для эффективного проникновения фиксатора объем Fixative следует 20x объем ткани. Учитывая, что этот протокол результатов в чрезвычайно малых размеров ткани (например, 6 мм 3 ткани = 6 объемных мкл), для обеспечения надлежащего фиксации использования 1 мл фиксатора для всех размеров ткани.
    2. После фиксации имеют образцы ткани в парафин персоналом отделении патологии. Раздел образец парафиновых блоков на заряженных слайдов быть гематоксилином и эозином окрашенных и оценивается иммуногистохимически (например, апоптоз).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Для этого исследования, экс естественных техника использовалась в корреляционного анализа терапевтического чувствительности / сопротивления белок теплового шока 90 ингибитора (Hsp90i). В доклинических оценки этой Hsp90i, первичной опухоли рака молочной железы, в ER + инвазивной протоковой карциномы (IDC), и связанного метастазов в лимфатических узлах были проанализированы экс естественных ответ на лечение   (Рисунок 1). Несколько 200 мкм последовательные срезы обрабатывали носителем и только возрастающих дозах (0,25, 0,50, 1,0 и 2,5 мкм) Hsp90i. Данные на рисунке 1 представляет фиксированных формалином, парафин (FFPE) и гематоксилин и эозином (H & E) окрашивали разделы следующие периода лечения 48 час. Контроль (машина только) обрабатывают раздел показывает жизнеспособные гнезда IDC в то время как лечение срез ткани 2,5 мкМ привело к 40% индукции апоптоза, как видно на ядерных морфологических изменений (то есть, пикнотическими ядер / АПОПтическое мусора) (1А). Апоптоз было дополнительно подтверждено в первичной опухоли с помощью анализа терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы дУТФ ник конец маркировка (TUNEL) (данные не показаны). IC 50 рассчитывают из данных ответа от графиков процента апоптоза в зависимости от концентрации препарата. Примечательно, что сопровождающий, Hsp90 играет ключевую роль в стабилизации белка и гомеостаза критических сигнальных путей в нормальных, так и раковых клеток 10. Возможность целевой Hsp90 при раке опирается на открытии, что злокачественные клетки сильно зависит от функции chaperoning из Hsp90, особенно в попытке преодолеть подчеркнул состояния негостеприимных условиях, возникших в ходе метастатического прогрессирования. В сущности, раковые клетки стали сильно зависит от функции Hsp90 в результате чего наведения селективного пула "онкогенного" Hsp90 11. На вставке, 1А, рядом доброкачественная долька с соответствующим ацинусов и канала остается неизменной ян же 2,5 мкМ Hsp90i обращению раздел. Насколько нам известно, это первый раз, когда это Hsp90 рак-специфичность визуально захватили в Hsp90i отклика-оценки первичной опухоли и связанных метастазов. Этот вывод из неизмененных доброкачественных / нормальных клеток, как видно на соседних доброкачественных долек IDC (фиг.1А), а также сосудов в окружающую доброкачественной паренхимы молочной железы первичной опухоли и связанные с метастазами в лимфатических узлах (данные не приведены) были обобщены в нескольких различных типы опухолей (например, груди, желудка и лимфомы метастазы).

Сопроводительный метастазов в лимфатических узлах этой первичной опухоли показал полный ответ только в гнездах IDC, которые были слабо связанных (Рисунок 1В). IDC гнезда, которые образуются плотные сферические, однако, остаются жизнеспособными, что подтверждается TUNEL (фиг.1С). Дополнительный анализ жизнеспособных сфероидов IDC иммунофлуоресценцией выявленныхпостоянные или повторно выражение клетка-клетка молекулы адгезии, Е-кадгерина (рисунок 1С). Этот вывод согласуется с постоянным, избыточная экспрессия Е-кадгерина, добавляющего к метастатическим потенциалом или метастатическим эффективности, как это отражено в высоко злокачественной, смертельной рака воспалительный рак молочной 12, 13. Несмотря на красивые, этот вывод выходит за рамки данной статьи. Тем не менее, важно отметить, что эти лимфатических узлов (LN) IDC сфероиды поддерживали в культуре в течение 2 недель, и, таким образом, придает достоверность силы с помощью экс виво метод для изучения как чувствительность / сопротивление в доклинической разработки лекарств.

Экс естественных техника также используется в клиническом исследовании на ядро пункционной биопсии (CNBS) для доказательства целевого торможения в опухолей 16,17. Пациенты, которые согласие, имеющие процедуру предварительной обработки ядро биопсии (CNB) выполняется (рисунок 2). Сопоставимыена доклинической оценки первичных опухолей, экс виво метод используется для определения чувствительности или реакции в НБЧ доступных метастазов. Несколько 200 мкм последовательные секции НБЧ лечили только увеличением дозы и (0.25, 0.50, 1.0 и 2.5 мкм) Hsp90i транспортного средства. Количество Hsp90i дозах, используемых в экс естественных оценки диктуется размером CNB. Тем не менее, стремится к тому, чтобы использовать спектр доз предложенных выше. Как доклинической экс естественных оценки, ответ может быть оценен и позже по сравнению с фактическим в реакции пациента (т.е. коррелятивных анализов; Рисунок 2), как определено после лечения CNB фармакокинетического (ПК), то есть, сохранение наркотиков, измеренная с помощью жидкостной хроматографии масс-спектрометрии тандем (LC-MS / MS) анализа, а также в пациента ПЭТ (Рисунок 2) 16,17. На сегодняшний день, анализа с использованием экс естественных технику в этом сlinical было проведено исследование на нескольких типах опухолей (например, молочной железы, лимфомы маргинальной зоны, лимфому мантийных клеток, метастатическим параганглиома, шейки матки и яичников) 16, 17. Полный корреляционный анализ дальнейшей реализации экс естественных технику примером полезности этой техники в Клиническая разработка лекарств.

Рисунок 1
Рис.1 Экс естественных анализ ответа из рака ER + груди. (, Левая панель) отображает жизнеспособных гнезда инвазивной протоковой карциномы (IDC) (гематоксилином и эозином окрашенных; масштабную линейку 100 мкм). После обработки (А, правая панель) с 2,5 мкМ Hsp90i есть индукция ~ 40% апоптоза ответ (пикнотические ядер / апоптическая мусора; стрелки) (гематоксилином и эозином окрашенных; линейка 100 мкм). Доброкачественные дольки г> (, вставка) остаются неизменными после лечения (гематоксилином и эозином окрашенных; линейка 200 мкм). Контроль ассоциированного лимфатического узла (LN) (B, левая панель) представляет собой небольшую уровень апоптоза (гематоксилином и эозином окрашенных; масштабную линейку 100 мкм), в то время как лечение разделе (B, правые панели) показать площадь метастатического IDC гнезда с полным ответом (гематоксилином и эозином окрашенных; линейка, по часовой стрелке, 2 мм, 300 мкм, 200 мкм и 200 мкм). Тем не менее, жесткие IDC сфероиды (сфероидов; SP) из того же раздела (C, слева) показывают, что мало, если таковые имеются, апоптоз, как показано с помощью анализа TUNEL остальные жизнеспособным с сопутствующим (масштабную линейку 200 мкм) (С, правая панель) в течение -expression Е-кадгерина (увеличение 100X).> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Рисунок 2
Рисунок 2 Схема реализации экс естественных техники в клиническом исследовании. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Биологи рака сталкиваются с серьезными проблемами при попытках разработать эффективные терапевтические стратегии. Тестирование наркотики в развитии на установленных линиях раковых клеток не может точно отражать в естественных ответ и в естественных экспериментов на моделях PDX являются трудоемкими и очень дорого. Учитывая вышеизложенное, применение бывших естественных методов первичной пациента опухоли 14, 15 теперь находится рядом с молекулярного анализа установленных линий раковых клеток и пациента, полученных ксенотрансплантатах (PDX).

Эта статья занимает применение экс естественных техники на новую высоту в том, что методика добросовестно сообщает о реакции (IC50), мимо цели эффекты и позволяет молекулярного анализа сопротивления и механизмы обратной связи. Когда данные ответа коррелирует с опухолевой молекулярной профиль (т.е. экспрессии белка опухолевых биомаркеров, мутации) корреляционная исследования (ответ против опухоли мольecular профиль) может быть использован для выбора пациентов, скорее всего, чтобы ответить на конкретного препарата, в целях улучшения результатов лечения пациентов. Самое главное, в развитии клинической наркотиков (т.е.., Дополнительные биопсии), экс естественных реакция предварительной обработки CNB может коррелировать с (и подтверждено) в ответ пациента (т.е., после лечения CNB) и удержание наркотиков (фармакокинетические (PK) оценка) 16,17. Использование экс естественных техники в этом клиническом исследовании был в состоянии определить реакцию опухоли, а также подтверждения специфичность цели (т.е. PD; индукции Hsp70) и сообщить о дозировке и планирования 16,17.

Экс естественных техника поддается большинстве солидных опухолей, а также через кровь метастазы рака (например, метастазами в лимфатические узлы лимфомы) с небольшими изменениями в протоколе для некоторых типов опухолей, которые представляют незначительные проблемы. Например, опухоли поджелудочной железы, как правило, имеют высокую секTroma соотношение опухолевых клеток, что может привести к секций, которые имеют плохое представление раковых клеток. Заготовка раковых клеток, богатых районах опухоли не может быть произведена по грубой анализа. Поэтому, чтобы преодолеть эту потенциальную недостаток несколько меньшие куб области от образца опухолевых можно встроить (4 / агарозном-вложение плесень) и разделяемую одновременно увеличивая вероятность мобильному богатых экс естественных разделе опухоли.

Наши данные сильно поддерживают использование экс естественных техники в доклинической разработки лекарств (Рисунок 1). Наряду с ответом (IC50), повторить разделы могут быть проанализированы для альтернативных жизнеспособности анализов, метаболомики, комбинаторные терапевтических стратегий, эффект воздействия наркотиков оказывает на секретируемых факторов (например, цитокины, экзосомы), сопротивления и механизмы обратной связи и главное, сообщить об мимо цели эффекты (т.е. нормальные и доброкачественных клеток). В данном конкретном исследовании, которые использовали Hsp90i, целевой спеcificity и идентификация "офф-целевых эффектов" является ключевым основана на предпосылке, что является отличительной пул »онкогенного Hsp90" можно найти только в раковых клетках при злокачественной трансформации 10. Это было представлено в разделе результатов (вставки, рис 1А), где доброкачественные дольки экс естественных Hsp90i обработанной разделе оставался неизменным. Не менее значения, найденного в другом разделе того же первичной опухоли отраженного на рисунке 1, в 10 мкм (терапевтически значения доза) обрабатывают раздел показали полную реакцию IDC гнезд, тогда как связанные раком протоков на месте (DCIS) оставалась неизменной (данные не представлены) . Будущие исследования в этой линии исследования выходят за рамки данной статьи. Тем не менее, именно этот факт сообщает о состоянии "злокачественной трансформации» или прогрессирования заболевания попутного DCIS в IDC образцов, по отношению к онкогеннымиHsp90 chaperoning функционирует и поддерживает целесообразность использования экс естественных технику в разработке лекарств.

Еще одна область применения экс естественных методики является использование в анализе предварительно эффективности в моделях ксенотрансплантатных опухолевых (т.е.., Экс естественных секционирование PDX) в разработке лекарственных препаратов для определения фармакокинетического / фармакодинамических (ФК / ФД) данных до выполнения участвует, дорого в естественных условиях исследования - позволяет более сообщил, экономически эффективной в естественных наркотиков эффективности исследования.

Ключевые шаги и потенциальные ограничивающие факторы экс естественных техники являются закупки и секционирования. Закупка образца опухолевых (т.е.., Первичная опухоль / метастаз) должны выполняться оперативно с пристальным вниманием к выявлению площадь опухоли с высокой степенью жизнеспособности. Большие опухоли, как правило, имеют некротические центральные районы, которые не сильно заметны. Поэтому, приобретение тканей ером внешний самых обод увеличивает вероятность получения жизнеспособных образца. Что касается секционирования, сбора точных срезов на желаемой толщины (например., 200 мкм) в значительной степени зависит от плотности опухоли / твердости (исключая CNBS в связи с крайне малым размером). Например, инвазивной протоковой карциномы обычно намного плотнее в отличие от инвазивного очаговая рак. Плотная ткань опухоли обеспечивает соответствующее сопротивление - в отсутствии постоянного вложения средств массовой информации - к лезвию, в то время как менее плотная ткань опухоли нет. Примеры менее плотных типов тканей опухоли включают, но не ограничиваются ими инвазивной карциномы, очаговая муцинозных карцином желудка и типов опухолей. Чтобы преодолеть эту потенциальную ограничение, устранение неисправностей при соответствующей скорости полотна и частоты требуется. В соответствии точность нарезанный разделе толщина, на протяжении всего процесса секционирования, имеет решающее значение для точной оценки ответа наркотиков.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Vibratome Leica VT1000s Leica 14047235613
UltraPure agarose Invitrogen 16500500 Prepare 4% and 6% before use
Injector blade Ted Pella 121-4
MEM with Penicillin  + Streptomycin Media Core Facilities (MSKCC) The media is prepared at Memorial Sloan Kettering Cancer Center 
Scalpel no. 10 Thermo Scientific 31-200-32
Disposable forceps Cole-Parmer 84011182
Embedding mold Electron Microscopy Science 70181
FBS (heat inactivated) Gemini 100106
24 well plates Corning 3524
Formalin (10%) Sigma Diagnostics SDHT501128 
16% Formaldehyde solution Thermo Scientific 28908
Embedding microsettes Simport M503-2
Ethanol (70%) Fisher Scientific A405P-4
Waterbath Fisher Scientific 15-462-2SQ
Microwave General Electric ModelJES2051DNBB
Adhesive (Ethyl Cyanoacrylate) Sigma-Aldrich E1505-5G
10 mm dishes BD Falcon 353003
15 ml tubes BD Falcon 352096

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Abercrombie, M., Ambrose, E. J. Interference Microscope Studies of Cell Contacts in Tissue Culture. Experimental Cell Research. 15, (58), 332-345 (1958).
  2. Coriell, L. L., McAllister, R. M., Wagner, B. M. Criteria for Determining Malignancy in Tissue-Culture Cell Lines in the Albino Rat. New York Academy of Science. 5, 351-355 (1957).
  3. Paul, J. The Cancer Cell in Vitro: A Review. Cancer Research. 22, 431-440 (1962).
  4. Dean, J. L., et al. Therapeutic response to CDK4/6 inhibition in breast cancer defined by ex vivo analysis of human tumors. Cell Cycle. 11, (14), 2756-2761 (2012).
  5. Bray, K., et al. Bcl-2 Modulation to Activate Apoptosis in Prostate Cancer. Molecular Cancer Research. 7, (9), 1487-1496 (2009).
  6. Quail, D. F., Joyce, J. A. Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis. Nature Medicine. 19, (11), 1423-1437 (2013).
  7. Nakasone, E. S., et al. Imaging Tumor-Stroma Interactions during Chemotherapy Reveals Contributions of the Microenvironment to Resistance. Cancer Cell. 21, 488-503 (1016).
  8. Shi, Y., Hogue, J., Dixit, D., Koh, J., Olson, J. A. Functional and genetic studies of isolated cells from parathyroid tumors reveal the complex pathogenesis of parathyroid neoplasia. PNAS. 111, (8), 3092-3097 (2014).
  9. Vidal, S. J., et al. Isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples. J. Vis. Exp. (85), e51332 (2014).
  10. Wanping, X., Neckers, L. Targeting the Molecular Chaperone Heat Shock Protein 90 Provides a Multifaceted Effect on Diverse Cell Signaling of Cancer Cells. Clinical Cancer Research. 13, 1625-1629 (2007).
  11. Moulick, K., et al. Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated by Hsp90. Nature Chemical Biology. 7, (11), 818-826 (1038).
  12. Alpaugh, M. L., Tomlinson, J. S., Ye, Y., Barsky, S. H. Relationship of sialyl-Lewis(x/a) underexpression and E-cadherin overexpression in the lymphovascular embolus of inflammatory breast cancer. American Journal of Pathology. 161, (2), 619-628 (2002).
  13. Chu, K., Boley, K. M., Moraes, R., Barsky, S. H., Robertson, F. M. The paradox of E-cadherin: role in response to hypoxia in the tumor microenvironment and regulation of energy metabolism. Oncotarget. 4, (3), 446-462 (2013).
  14. Vaira, V., et al. Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors. PNAS. 107, (18), 8352-8356 (2010).
  15. Centenera, M. M., Raj, G. V., Knudsen, K. E., Tilley, W. D., Butler, L. M. Ex vivo culture of human prostate tissue and drug development. Nature Reviews Urology. 10, 483-487 (2013).
  16. Jhaveri, K., et al. Heat shock protein 90 inhibitors in the treatment of cancer: current status and future directions. Expert Opinion on Investigational Drugs. 5, 611-628 (2014).
  17. Gerecitano, J. F., et al. Using 124-PU-H71PET imaging to predict intratumoral concentration in patients on a phase I trial of PU-H71. Journal of Clinical Oncology. 31, Suppl . 11076-11 (2013).
  18. Yildiz-Aktas, I., Dabbs, D. J., Bhargava, R. The effect of cold ischemic time on the immunohistochemical evaluation of estrogen receptor, progesterone receptor, and HER2 expression in invasive breast carcinoma. Modern Pathology. 25, 1098-1105 (2012).
<em>Экс Vivo</em> Лечение отклика первичных опухолей и / или связанных метастазов для доклинических и клинических развития Therapeutics
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Corben, A. D., Uddin, M. M., Crawford, B., Farooq, M., Modi, S., Gerecitano, J., Chiosis, G., Alpaugh, M. L. Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics. J. Vis. Exp. (92), e52157, doi:10.3791/52157 (2014).More

Corben, A. D., Uddin, M. M., Crawford, B., Farooq, M., Modi, S., Gerecitano, J., Chiosis, G., Alpaugh, M. L. Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics. J. Vis. Exp. (92), e52157, doi:10.3791/52157 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter