Introduction
El interés científico en exóticos, patógenos de graves consecuencias ha aumentado constantemente en los últimos años. De particular interés son considerados patógenos emergentes o reemergentes agentes que son potenciales armas biológicas. En cuanto a la prioridad de la investigación y el riesgo, estos patógenos se clasifican por los Centros para el Control y Prevención de Enfermedades (CDC) como bioterrorismo Categoría Agentes de CA 1. Además, los patógenos de graves consecuencias se clasifican como agentes selectos [y] Las toxinas en lo que se refiere a las regulaciones de importación, de exportación y de acceso. En los EE.UU., las normas y procedimientos de bioseguridad que se deben seguir para el trabajo con patógenos especiales que requieren BSL-2, BSL-3, o BSL-4 de confinamiento se describen en Bioseguridad en laboratorios microbiológicos y biomédicos (BMBL) 2. Los patógenos que se perciben para presentar el riesgo para la salud más importante para los seres humanos y / o animales se consideran BSL-4 patógenos. En consecuencia, la investigación BSL-4 requiere especial precaución, highlformación especializada y, y una infraestructura robusta y redundante 3 instalación. Para mejorar el conocimiento general de los retos asociados con BSL-4 la investigación, la comprensión de los requisitos para las operaciones de construcción de alta contención, gestión de sistemas y pruebas de validación rutinaria de los controles de ingeniería es necesario. Nuestro objetivo es avanzar en este diálogo presentando visualmente el aumento de las normas de funcionamiento y seguridad de la biotecnología, y el consiguiente aumento de la dificultad de la práctica en la investigación en BSL-4 de confinamiento.
Instalaciones de vivienda laboratorios BSL-4 del juego deben cumplir requisitos estrictos, incluyendo, pero no limitado a, sistemas de ventilación nonrecirculating dedicados, sistema de manejo de residuos rigurosa y procesa 4,5, y los sistemas de automatización de edificios (BAS) 2,6,7. del aire de alimentación de laboratorio se filtra una vez y el aire de escape es de doble filtrado a través de filtros de partículas de alta eficiencia (HEPA), que se re-certificados anualmente. además, elBMBL impone requisitos estrictos para la descontaminación de desechos sólidos y la recogida y descontaminación de todos los efluentes antes de su liberación en el sistema general de residuos. Redundancias múltiples se construyen en el sistema para evitar la liberación de cualquier tipo de BSL-4 patógeno. Las operaciones de la instalación del monitor de forma remota y BAS puedan localizar el área del problema. sistemas de apoyo a las instalaciones se inspeccionarán diariamente por el personal de operación y notificación de problemas en tiempo real óptima. Todos los sistemas se prueban de forma recurrente para cumplir con los requisitos de la División de Selección de agentes y toxinas para el funcionamiento del centro de CDC /.
Además de estas normas para la instalación física, personal de laboratorio que trabaja con agentes selectos y toxinas debe someterse a una evaluación de riesgos de seguridad (SRA) por el Departamento de Justicia antes de trabajar con o alrededor de agentes selectos. Además, el personal que trabaja con el Nivel 1 Seleccione los agentes (por ejemplo, virus del Ébola, Bacillus anthracis) debe estar inscritoen un programa de fiabilidad de Personal (PRP) que evalúa continuamente la salud física y mental de los investigadores individuales 8. Los exámenes de salud a evaluar si los individuos son físicamente capaces de realizar el trabajo en BSL-4 de contención de una manera segura. exámenes de salud mental evaluar el bienestar general, el bienestar psicológico y la resistencia, y la conciencia de seguridad del personal. En el NIAID, los científicos que trabajan con agentes selectos se someten a un examen adicional en la que cada individuo termina un cheque y consultas (ANACI) verificación de antecedentes Agencia Nacional de Acceso, que examina las credenciales educativas y profesionales, antecedentes penales, historial financiero y el riesgo de la influencia extranjera.
En comparación con la entrada de laboratorio BSL-2, la entrada de contención máxima requiere una considerable inversión de recursos, el tiempo y la formación. Después de la aprobación SRA y el registro con la División de Selección de agentes y toxinas, el personal debe someterse a rigurosas manos en trening antes de acceder a los laboratorios BSL-4 del juego. El personal del laboratorio recibe formación sobre el funcionamiento de la instalación, incluyendo los controles diarios de las funciones críticas y procedimientos de entrada / salida 9. El personal también está capacitado en bioseguridad en el laboratorio y el cuidado y el uso de trajes de presión positiva. trajes blancos de tela de poliéster con revestimiento de cloruro de polivinilo se utilizan en las instalaciones de NIH / NIAID Integrado de Investigación en Fort Detrick. Las instalaciones que utilizan otros tipos / marcas comerciales de trajes de presión positiva pueden requerir diferentes procedimientos operacionales para entrar y salir del laboratorio BSL-4 de los descritos aquí. Los investigadores en las instalaciones que utilizan este artículo debe tener en cuenta estas diferencias antes del entrenamiento. Traje de entrenamiento en el Centro de NIH / NIAID Integrado de Investigación en Fort Detrick incluye procedimientos adecuados para ponerse el traje, lo que garantiza el traje está funcionando correctamente, la reparación y el mantenimiento de trajes (dentro y fuera del laboratorio), y en movimiento dentro del laboratorio. Ence esta formación se ha completado, el miembro del personal de laboratorio puede comenzar a trabajar dentro de los laboratorios BSL-4 del juego. Inicialmente, otros mentores experimentados miembros del personal de uno-a-uno el miembro del personal de nueva formación durante los primeros cinco visitas a los laboratorios BSL-4 del juego. Para trabajar de forma independiente en el Centro de NIH / NIAID Integrado de Investigación en Fort Detrick, el miembro del personal de nueva formación se completa un mínimo de 40 visitas supervisadas en BSL-4 laboratorios juego con al menos 100 horas de tiempo de trabajo práctico en el interior de los laboratorios.
Protocol
1. Lista de revisión diaria externa
- Verificar los sistemas de seguridad. Compruebe los sistemas de aire para respirar, copia de seguridad de los sistemas de aire se rompen, los sistemas de descontaminación de efluentes del sistema (EDS), sistema de ducha química, flujo de aire direccional y funcionalidad autoclave (Figura 1).
2. Los procedimientos de entrada de laboratorio
- Corredor tampón Procedimientos de ingreso del personal del laboratorio
- Introduce el nombre del personal de la persona, el tiempo de entrada, la ubicación de laboratorio, y los patógenos que se estudia en el personal de entrada / salida Libro de registro. Indicar la ubicación de laboratorio en un tablero magnético.
- Para garantizar el traje BSL-4 sistemas de los laboratorios están funcionando correctamente, compruebe que los sistemas externos se han comprobado y los laboratorios han sido talados para la entrada en el diario sistemas externos Lista de Seguridad (Figura 1).
- Para asegurar que la presión ambiente de laboratorio se encuentra dentro de los puntos de ajuste de presión negativa que mantiene proper flujo de aire direccional, revise el sistema de automatización de edificios (BAS) monitor fuera de la entrada de la sala de cambio exterior. Si la presión de habitación no está en el rango normal, notificar a la bioseguridad o de atención multilingüe y retrasar la entrada de laboratorio hasta que dichos presión vuelve a los valores normales.
- Asegurar la disponibilidad de un autoclave para la esterilización de los residuos y / o lavandería biológica siguiente trabajo experimental.
- Obtener matorrales, calcetines, toallas y desde la sala de almacenamiento que contienen materiales de construcción de las instalaciones situadas cerca del personal de entrada / salida Libro de registro.
- Exterior de la habitación cambiar los procedimientos de ingreso del personal del laboratorio:
- requisitos de seguridad completas que regulan el acceso y el documento al laboratorio de contención biológica. Entra en la habitación cambio exterior.
- Quitar toda la ropa de calle, ropa interior, joyas y relojes, don matorrales, y proceder a la sala de juego.
- Con presión positiva Inspección Traje protector y evaluar la integridad de LaEl personal boratorio del traje de la habitación:
- Tras la obtención de un traje de protección de presión positiva de un tamaño apropiado, lleve a cabo una inspección visual de la mirada del juego no tenga agujeros, lágrimas, pinchazos, roturas puntos de costura o puntos débiles. Los guantes, comprobar traje exteriores a fondo, ya que los guantes son el lugar más probable que sufran daños.
- Cambiar los guantes por lo menos cada 7 días naturales o si se identifica el daño a los guantes.
- Para volver a colocar los guantes de traje exteriores, quitar la cinta adhesiva del guante de juego existente, gire la junta tórica en la manga, y quitar el traje viejo guante.
- Ponga un nuevo guante en el manguito de la demanda y asegúrese de que el guante cubre todo el manguito y el pulgar está en la posición correcta. Coloque la junta tórica sobre el guante, asentar la junta tórica en la ranura del manguito, y el uso de cinta adhesiva para asegurar el juego exterior del guante.
- Doble el puño del guante sobre la cinta adhesiva y la junta tórica, sellar el guante con una pieza final de cinta adhesiva, y volver a inspeccionar el recién Attached guante.
- Aplicar una fina capa de lubricante a la cremallera de la cremallera al menos una vez a la semana.
- Cubrir cada una de las válvulas de escape, que se encuentra dentro del traje detrás de la cubierta de la cabeza y en el lado izquierdo de la espalda, ya sea con cinta adhesiva o un tapón de prueba de presión de aluminio, y la cremallera del traje cerrado.
- Conecte la desconexión rápida / conectar archivo adjunto al final de cada línea de respiración para la conexión de la manguera en el traje. Inflar el traje hasta que los brazos y las piernas son firmes y colocar el traje en una posición vertical. Desconectar el suministro de aire.
- El traje no debe ser sometido a presión excesiva como la presión excesiva puede causar graves daños a la demanda. Inspeccione minuciosamente el juego para cualquier indicación de una fuga de aire durante aproximadamente 5 minutos e inspeccionar visualmente el juego en busca de signos de deflación. Asegúrese de que el traje no se somete a presión excesiva como el exceso de presión puede causar graves daños a la demanda.
- Si el traje pierde firmeza, comprobar el juego para fugas por la re-inflating del traje. Escuchar y sentir si hay fugas en el traje. Si es necesario, rocíe todas las superficies del traje de protección con una solución jabonosa. Algunas de las áreas comunes de las fugas son las costuras del traje, el área de la cremallera, y la unión del material de la visera con el material del traje. Monitor para la formación de burbujas que indican una fuga, prestando especial atención a las costuras y la visera. Compruebe que las válvulas de escape están completamente sellados.
- Reparar las fugas pequeñas de tela temporalmente con cinta adhesiva. reparaciones permanentes completas utilizando material de un kit de reparación de juego. Si la demanda no puede ser reparado fácilmente, descontaminar el traje con un desinfectante a base de alcohol y retirar del traje de la habitación. Si el juego no se puede reparar, se retiran del juego del uso e incinerar.
- Una vez que se haya completado la prueba de integridad, descomprimir el traje y extraer las cubiertas de las válvulas de escape. Si no se retiran las tapas de escape va a tapar la filtración y dañar gravemente el traje. Introduzca las pruebas e información de reparación en elTraje de presión positiva Integridad registro de la prueba.
- Vestida con traje de presión positiva en el Traje de habitación e introducir en BSL-4 Laboratorios Traje:
- calcetines de cinta a las piernas de matorrales. Don guantes de nitrilo interior del conducto y papeles pegados a los puños de los matorrales. Don un segundo par de guantes de nitrilo (no grabada) en los guantes interiores. Si es necesario, limpiar el protector de la cara interior con un limpiador de vidrio para una mayor visibilidad.
- Don el traje de presión positiva, asegurándose de que el traje está comprimido completamente cerrada, y conecte el traje a una línea de aire para respirar. Entrar en los laboratorios BSL-4 del juego cuando los monitores BAS están libres de alarmas.
- Para entrar en los laboratorios BSL-4 del juego, desconectarse de la línea de aire para respirar en la sala de juego y empuje la solicitud botón para acceder a la sala de ducha química.
- Una vez que se activa el (APR) de la puerta de aire resistente a la presión, el sello alrededor de la puerta se desinfla y el imán de la puerta se desengancha. Las puertas APR dentro de los ro ducha químicaom están entrelazados, lo que significa una puerta abril tiene que estar cerrada cuando el otro está abierto para mantener la contención en todo momento. Para pasar por el cuarto de baño químico, cierre la puerta de la habitación APR juego, esperar a que la vejiga para volver a inflar y sellar completamente el marco de la puerta, y activar la segunda puerta que conduce abril al laboratorio.
- A la entrada a los laboratorios BSL-4 del juego, conecte el traje a una línea de aire de respiración disponible.
- Antes de continuar, cierre la puerta de abril lleva al laboratorio y asegurarse de que la ducha química se activa automáticamente para desinfectar el área de la ducha química y la demanda. Una vez desinfectada, la puerta TAE en cuarto de baño químico se puede abrir de nuevo desde la sala de juego. Si un ciclo no se inicia, el personal de las instalaciones de gestión de contactos.
- Si el traje no tiene botas integrales, ponerse un par de zapatos de goma que se encuentran en los estantes adyacentes a la puerta de salida, la ducha química puerta-ABR-. Para evitar riesgos / peligros adicionales, compruebe que el overshoes son de forma ajustada y cómoda.
3. La circulación dentro de los laboratorios BSL-4 Traje
- Moverse libremente por los laboratorios de desconexión y conexión a las líneas de aire a través de los laboratorios. Manténgase conectado a una línea de aire para mantener la presión positiva cuando se trata de agacharse o recuperar objetos cercanos a la tierra.
NOTA: Este tipo de movimientos mientras está desconectado de la línea de aire se agota el aire de respiración desde el interior del traje y crear una presión negativa que puede permitir que el aire de laboratorio para entrar en cualquier infracción en el traje. - Observar los monitores a través de los laboratorios para diferentes alarmas y el estado actual serie.
4. Procedimientos de Laboratorio salida de laboratorios BSL-4 Traje
- Descontaminar las manos enguantadas en limpiador desinfectante detergente en tanques de plástico clavada por el fregadero o en los pasillos interiores. Si no hay tanque de agua está presente, rocíe las manos enguantadas a fondo con desinfectante. </ Li>
- Inspeccionar la parte inferior de zapatos de goma o botas de material visible. Si chanclos son limpias, retire chanclos y colocarlos en los estantes adyacentes a la ducha química puerta-ABR-. Cierre todas las puertas interiores del laboratorio, desconectarse de la línea de aire para respirar, y proceder a la ducha química.
- Si los zapatos de goma están sucios, lavar a fondo en el fregadero con un limpiador desinfectante detergente.
5. BSL-4 Procedimientos de ducha químicos
- Introduzca la ducha química pulsando el botón de solicitud para abrir la puerta de acceso a APR, y cierre la puerta. Vuelva a conectar el juego a una línea de aire respirable dentro de la ducha.
- Una vez que la puerta se cerró APR, el ciclo de la ducha química se activará automáticamente para liberar una mezcla adecuada de limpiador desinfectante detergente para desinfectar adecuadamente el traje y la zona de la ducha química. Si el ciclo no se inicia automáticamente, tire de la manija diluvio. Frote el traje durante aproximadamente 1 min, empuje lainundar manejar en su lugar para evitar que se hayan descargado completamente los tanques de desinfectantes químicos. Un ciclo de ducha manual no está disponible.
- Compruebe si hay fugas de guantes y de los pies mediante la colocación de las manos y los pies con guantes en la tina de plástico que contiene solución limpiadora desinfectante detergente mantiene dentro de la ducha química. Busque líquido o humedad por debajo del guante exterior y comprobar que, rasgaduras o partes débiles en el guante exterior. Si se detecta una fuga en uno de los guantes exteriores, espere hasta que el ciclo de ducha, retire el juego exterior del guante y el guante interior más exterior, y dejar el guante exterior en la bañera de plástico.
- Frote el traje y traje integrada botas con un cepillo o matorrales manos de mango largo para distribuir el desinfectante químico para todas las superficies de la demanda. Enjuague bien el juego de limpiador desinfectante detergente durante el ciclo del agua de la ducha.
- Desconecte la línea de aire para respirar, previamente expuesta al aire del laboratorio, tanto durante el ciclo del agua a d químicas yisinfect la conexión en el juego. Enjuague la conexión de la línea aérea de cualquier limpiador desinfectante detergente. Sin desconexión, el limpiador desinfectante detergente no puede limpiar de otro modo la conexión de la línea de aire.
- Abra la puerta que conduce a la sala de juego y cerrarla después de salir.
- En el caso de una emergencia, como un corte de no vida en peligro o un incendio, siga el mismo procedimiento que se describe en 5.2.
6. Procedimientos Traje habitación después de salir de la ducha química
- Secar el exterior del traje con una toalla grande. Descomprimir el traje de presión positiva, retirar una mano del guante juego exterior, y examina la parte exterior del guante de nitrilo externo cuidadosamente para la humedad.
- Si la humedad se ha filtrado a través del guante de juego exterior, quite el traje guante exterior y el guante de nitrilo exterior y disponer en el cubo de basura de residuos biopeligrosos. Retire la otra mano y repetir la comprobación.
- Retire traje y seguirá secándose exterior del traje para evitar la podredumbre seca damage. Rociar el interior del protector de la cara con un limpiador de vidrio y seque. Colgar el traje para que se seque. Retire la cinta adhesiva y guantes de nitrilo interiores de matorrales y disponer de estos elementos en riesgo biológico designado papelera de reciclaje de residuos.
- Documentar cualquier fuga o reparaciones a la demanda en el registro de traje y reportarlos a la gestión de las instalaciones.
- Proceder a la habitación cambio interior, eliminar matorrales y los calcetines sucios, y colocarlos en el compartimiento del lavadero designado. Proceder y entrar en la ducha personal.
7. Ducha personales y exterior de la habitación Cambio procedimientos de salida
- Activar ducha y completamente lavar el cabello y el cuerpo durante un mínimo de 3 minutos con agua y jabón. Salir de la ducha personal y proceder a la habitación de cambio exterior.
- Seque y ropa de calle Don, salir de la habitación de cambio exterior, colocar toallas usadas en el compartimiento del lavadero designado, y proceder con el Corredor del búfer.
- Indique la hora de salida en la entrada de personal / salida Libro de registro e indicar laboratorio exen el tablón de localizador.
Representative Results
El personal ha sido cuidadosamente y completamente entrenados en estas técnicas para garantizar prácticas seguras y coherentes dentro de una instalación BSL-4. Al comprobar que la instalación está funcionando correctamente, como se indica en la lista de verificación diaria (Figura 1), estamos en condiciones de asegurar que todos los controles administrativos y de ingeniería necesarios están en su lugar y funcionando para mantener un ambiente seguro y funciona correctamente. La demanda de presión positiva proporciona una capa adicional de protección para el funcionario. El mantenimiento adecuado y el uso de estos trajes es parte integral de protección personal para el miembro del personal. A través de la estricta adhesión a estos procedimientos, no hay infecciones adquiridas en el laboratorio se han registrado en el Centro de NIH / NIAID Integrado de Investigación en Fort Detrick.
Figura 1: lista de comprobación visual diariaPara el soporte de copia de seguridad y sistemas para el BSL-4. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Discussion
Delineamos los BSL-4 procedimientos de entrada y salida utilizados en las instalaciones de NIH / NIAID Integrado de Investigación en Fort Detrick para trabajar con altamente peligrosos (4) Grupo de Riesgo patógenos. Uno de los propósitos de la visualización de los procedimientos de entrada y salida BSL-4 es hacer hincapié en la importancia de la seguridad del personal de laboratorio durante el trabajo con este tipo de patógenos para evitar las infecciones adquiridas en el laboratorio. Con presión negativa, BSL-4 laboratorios de mantener un flujo de aire hacia el interior direccional para asegurar que los patógenos estarán contenidos dentro del laboratorio. trajes de presión positiva con los sistemas de aire de respiración dedicada usados por el personal de laboratorio de contactos de mitigar patógenos en el aire con el personal de laboratorio. Después que el personal de laboratorio salen del laboratorio BSL-4, una ducha química desinfecta la superficie del traje potencialmente contaminada y por lo tanto evita la contaminación potencial del resto del edificio y la persona que cambia fuera del traje.
Como la integridad de la posititraje de ve-presión es una de las varias barreras primarias importantes para prevenir la potencial exposición a agentes patógenos, se requiere personal para comprobar que no haya fugas del juego antes de la entrada y después de salir de los laboratorios BSL-4. Si se produce una fuga, el personal identifica la ubicación de la fuga y alertas de gestión de instalaciones. Estas prácticas garantizan una respuesta rápida a cualquier exposición a altas patógenos consecuencia. A pesar de que se toma todos los esfuerzos para eliminar el riesgo de que el personal de laboratorio, quebrantamientos de la demanda pueden ser originados por el uso de material de vidrio, objetos punzantes, la agresión animal, o el uso continuo.
Mientras que los procedimientos que aquí se presentan generalmente siguen las especificaciones señaladas por los CDC BMBL 2, estos procedimientos son específicos para el IRF-Frederick. Cada instalación BSL-4 tiene diferentes especificaciones de diseño de construcción que afectan a los métodos exactos de operación del laboratorio. Procedimientos alternativos para entrar y salir de los laboratorios BSL-4 dependen en parte en el diseño y funcionamiento de estos LaboratoriES. Además, las regulaciones gubernamentales en diferentes países también pueden tener un efecto sobre los procedimientos de laboratorio BSL-4 en cada país. Sin embargo, una comprensión general de BSL-4 procedimientos y la construcción de sistemas que apoyan la seguridad del personal de laboratorio ayudará a los administradores de salud que están pensando en el diseño de edificios similares y colaboradores externos que participan en los estudios de los agentes patógenos de alto riesgo de monitoreo.
La productividad aumentará a medida que más personal de laboratorio está capacitado en BSL-4 entrada de laboratorio y procedimientos de salida y en la realización de experimentos bajo condiciones BSL-4. Sin embargo, en el diseño de protocolos con colaboradores externos, tiempo suficiente debe ser asignado para llevar a cabo incluso las operaciones básicas de laboratorio, y las expectativas de los plazos para la entrega de resultados tienen que ser ajustado mediante la aceptación de las dificultades inherentes con el trabajo en laboratorios BSL-4. Una suposición generalizada es que cualquier experimento realizado en BSL-2 (por ejemplo, 2 horas)requerirá el doble de la cantidad de tiempo para llevar a cabo en BSL-4 (por ejemplo, 4 h).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro-Chem Plus | National Chemical Laboratories | 255 | |
| Windex | Grainger | 3U560 | |
| Sperian aluminum pressure test cap | Honeywell Sperian | CC0199649 | |
| Sperian suit repair kit | Honeywell Sperian | CC0199621 | |
| Sperian Protection Suit Integrity Test Log | NA | NA | Created by individual lab |
| Sperian positive pressure suit | Honeywell Safety Products | BSL 4-2 | |
| Soapy water | NA | NA | Created by individual lab |
| Outer suit gloves (canners) | Fisher | 19-019-601 | |
| Outer suit gloves (MAPA) | Fisher | 2MYU1 | |
| Inner nitrile suit gloves | Fisher | 19-050-592 | |
| Zip Lube | Amazon | B000GKBEJA | |
| Scrubs | Cintas | 60975/60976 | |
| Socks | Cintas | 944 | |
| Duct Tape | Pack-N-Tape | 51131069695 | |
| Towels | Cintas | 2720 | |
| O-rings | O-ring warehouse | AS568-343 | |
| Overshoes | Amazon | B0034KZE22 | |
| Plastic dunk tanks | Fisher | 14-831-113 | |
| Entry and exit logbook | NA | NA | Created by individual lab |
| Baby powder | Amazon | 44230 | |
| Ethanol | Fisher | BP2818500 |
References
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- Shurtleff, A. C., et al. The impact of regulations, safety considerations and physical limitations on research progress at maximum biocontainment. Viruses. 4, 3932-3951 (2012).
- Walker, J., Stern, L. A Guide to the Biosolids Risk Assessments for the EPA Part 503 rule. , US Environmental Protection Agency, Office of Wastewater Management. Washington D.C. http://water.epa.gov/scitech/wastetech/biosolids/503rule_index.cfm (1995).
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