Abstract
El cerebro se compone de cuatro tipos de células primarias incluyendo neuronas, astrocitos, microglia y oligodendrocitos. Aunque no son el tipo de célula más abundante en el cerebro, las neuronas son las más ampliamente estudiado de estos tipos de células dado su papel directo en impactando comportamientos. Otros tipos de células en el cerebro también afectar la función y el comportamiento neuronal a través de las moléculas de señalización que producen. Los neurocientíficos deben comprender las interacciones entre los tipos de células en el cerebro para entender mejor cómo estas interacciones afectan la función neuronal y la enfermedad. Hasta la fecha, el método más común de analizar la proteína o la expresión génica utiliza la homogeneización de muestras de tejidos enteros, generalmente con sangre, y sin tener en cuenta el tipo de célula. Este enfoque es un enfoque informativo para examinar los cambios generales en la expresión de genes o proteínas que pueden influir en la función y el comportamiento neural; sin embargo, este método de análisis no se presta a una mayor comprensión de la célula--tipo específica la expresión génica y el efecto de la comunicación de célula a célula en la función neural. Análisis de la epigenética de comportamiento ha sido un área de creciente interés que examina cómo las modificaciones del ácido desoxirribonucleico (ADN) estructura de impacto de la expresión génica a largo plazo y el comportamiento; sin embargo, esta información sólo puede ser relevante si se analiza de una manera específica del tipo de célula dado el linaje diferencial y marcadores epigenéticos que por lo tanto puede estar presente en ciertos genes de tipos de células neuronales individuales. La fluorescencia técnica de clasificación de células activadas (FACS) se describe a continuación proporciona una manera simple y eficaz para aislar las células neuronales individuales para el posterior análisis de la expresión génica, expresión de proteínas, o las modificaciones epigenéticas del ADN. Esta técnica también puede ser modificado para aislar tipos más específicos de células neuronales en el cerebro para el análisis específico del tipo celular subsiguiente.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Neural Dissociation Kit (P) | Miltenyi Biotec | 130-092-628 | |
| Myelin Removal Beads II | Miltenyi Biotec | 130-096-733 | |
| LS Columns | Miltenyi Biotec | 130-042-401 | |
| QuadroMACS Separator | Miltenyi Biotec | 130-090-976 | |
| MACS MultiStand | Miltenyi Biotec | 130-042-303 | |
| Nylon Mesh Sheet | Amazon | CMN-0074-10YD | 40 inch width, 80 micron size mesh |
| Fc Block / anti-CD32 | BD Biosciences | BDB550270 | reactivity for rat |
| APC-conjugated CD11b antibody | Biolegend | 201809 | reactivity for rat |
| Rabbit anti-GLT1 | Novus Biologicals | NBP1-20136 | reactivity for rat or human |
| PE-conjugated anti-rabbit secondary antibody | eBioscience | 1037259 | secondary antibody for anti-GLT1 |
| FITC-conjugated anti-rat CD90 (Thy1) mouse antibody | Biolegend | 202504 | reactivity for rat |
References
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