Protocol
एक मिश्रित C57BL 6 / पृष्ठभूमि पर वयस्क (3-4 महीने पुरानी है) नर चूहों इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल किया गया। पशु एक 12 घंटा / प्रकाश अंधेरे चक्र पर रखा है, और भोजन और पानी के लिए मुफ्त का उपयोग की अनुमति दी गई। इस प्रोटोकॉल में प्रदर्शन सभी प्रक्रियाओं Drexel विश्वविद्यालय संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार आयोजित की गई।
1. शल्य चिकित्सा क्षेत्र की तैयारी
- 70% इथेनॉल के साथ शल्य चिकित्सा की मेज कीटाणुरहित, तो शोषक पैड के साथ पूरे शल्य बेंच को कवर किया और stereotaxic से सटे सर्जिकल उपकरणों की व्यवस्था।
- जोड़तोड़ हाथ बिना stereotaxic उपकरण सेट करें। Stereotaxic पर हीटिंग पैड की व्यवस्था और 37 डिग्री सेल्सियस के लिए निर्धारित किया है। जानवर और हीटिंग पैड के बीच एक कागज तौलिया या शल्य चिकित्सा पैड का एक छोटा सा टुकड़ा रखकर पशु overheating से बचने।
- Autoclaved कैंची का प्रयोग, इसकी वजह जब तक 0.9% बाँझ खारा समाधान युक्त एक बाँझ पेट्री डिश में autoclaved gelfoam के छोटे-छोटे टुकड़ों में कटौतीप्रयोग के लिए डी वाई।
नोट: autoclaved उपकरणों और बाँझ शल्य चिकित्सा की आपूर्ति का उपयोग करके बाँझ काम के माहौल को बनाए रखें। जरूरत के रूप में, 10-15 सेकंड के लिए एक मनका अजीवाणु में सूई से जानवरों के बीच की प्रक्रिया के दौरान या में शल्य चिकित्सा उपकरण पुनः बाँझ। शुद्ध करना, जरूरत के रूप में, 70% इथेनॉल के साथ हाथ रगड़ से प्रक्रिया के दौरान साफ दस्ताने बनाए रखें।
सर्जरी के लिए 2. Prepping माउस
- (G) घर पिंजरे से माउस निकालें और वजन।
- Isoflurane शामिल कक्ष और 5 के लिए 2 एल / मिनट और isoflurane vaporizer के लिए सेट कर दिया ऑक्सीजन में जगह माउस संज्ञाहरण के एक शल्य चिकित्सा विमान, के बारे में 3-5 मिनट के लिए प्रेरित करने के लिए। धीमा साँस लेने और स्थिरीकरण के लिए निगरानी करें। माउस को पूरी तरह से पैर के अंगूठे चुटकी पलटा का उपयोग कर बेहोश है कि जाँच करें।
- माउस को पूरी तरह से बेहोश है, जब, stereotaxic फ्रेम में जगह isoflurane के लिए टयूबिंग के साथ जुड़ा हुआ है, जो नाक शंकु, में नाक सुरक्षित। सिर सुनिश्चित करने स्थिर है, कान नहर में कान सलाखों डालें और कस लें।
- कान से कान के सिर दाढ़ी, और आंखों के बीच से कान के पीछे करने के लिए।
- Isopropyl शराब और betadine आयोडीन के घोल, 3 बार प्रत्येक की बारी पोंछे के साथ त्वचा जीवाणुरहित।
- शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के दौरान बाहर सुखाने से उन्हें रोकने के लिए दोनों आंखों को कृत्रिम आँसू लागू करें।
3. शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया
- पैर की अंगुली या पूंछ बन्द रखो द्वारा संज्ञाहरण की गहराई मॉनिटर। वहाँ कोई जवाब नहीं है, और श्वसन धीमी है और यहां तक कि जब माउस उपयुक्त शल्य चिकित्सा विमान में है।
- अभी लगभग एक नंबर 11 स्केलपेल ब्लेड का उपयोग कर एक एकल, फर्म प्रस्ताव में कान के बीच करने के लिए आंखों के पीछे से एक parasagittal त्वचा चीरा बनाओ। एक तरफ त्वचा ले जाएँ और hemostat के साथ सही पक्ष क्लिप।
- नंबर 11 स्केलपेल और कपास की सुस्त पक्ष का उपयोग overlying झिल्ली की साफ़ खोपड़ी applicators इत्तला दे दी। कपास इत्तला दे दी applicator 0.9% नमकीन घोल में डूबा हुआ है के साथ वैकल्पिक रूप से, खोपड़ी पोंछ। पूरी तरह से सूखे की अनुमति दें।
- हमेंएक छोटा सा शासक आईएनजी, एक स्थायी मार्कर के साथ, बाण के समान सिवनी (चित्रा 1) के लिए पार्श्व 1 मिमी राज्याभिषेक सिवनी दुम, और 1 मिमी craniotomy के बाएं किनारे पर craniotomy के पूर्वकाल सीमा के निशान। तब बाण के समान और राज्याभिषेक टांके, क्रमशः (चित्रा 1) से 4 मिमी पर craniotomy के सही और दुम सीमाओं के निशान।
- एक 0.5 मिमी ड्रिल बिट का उपयोग करना, स्थायी मार्कर रूपरेखा निम्नलिखित धीरे धीरे ड्रिलिंग के द्वारा craniotomy बनाने के लिए शुरू करते हैं। पूरी तरह से खोपड़ी के माध्यम से तोड़ने के लिए नहीं भूलें। प्रेस धीरे नंबर 5 संदंश के साथ पार्श्विका हड्डी के अलग टुकड़े पर, कमजोरी के क्षेत्रों दबाव को रास्ता दे देंगे। पतला हड्डी परिधि भर में पर्याप्त रूप से कमजोर है, हड्डी टुकड़ा हटाने के लिए तैयार है।
नोट: अन्वेषक अनुभवों कठिनाई एक टुकड़ा में हड्डी को दूर हैं, तो यह हड्डी पर्याप्त ड्रिलिंग के दौरान पतला नहीं कर रहा था कि पता चलता है। FACILITA करने के बाद पशुओं में आगे खोपड़ी ड्रिलिंग पर विचारहड्डी के टुकड़े के ते आसान हटाने। - एक 23 जी सुई के साथ लगे एक 10 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करना, पृथक हड्डी और drilled क्षेत्र सोख करने के लिए 0.9% खारा की एक छोटी राशि लागू होते हैं।
- Stereotaxic उपकरणों के लिए जोड़तोड़ हाथ संलग्न। Rostrally का सामना करना पड़ ब्लेड के तेज पक्ष के साथ जांच धारक के लिए एक नया नंबर 11 स्केलपेल ब्लेड संलग्न।
नोट: व्याख्यान चबूतरे वाला और दुम ऊतकों ब्लेड के तेज और कुंद किनारों का अनुभव है, क्रमशः, मर्मज्ञ चोट से प्रेरित यांत्रिक क्षति घाव की हद तक भर तुलनीय है। हम व्याख्यान चबूतरे वाला और दुम वर्गों के बीच GFAP अभिव्यक्ति या प्रसार की upregulation, सहित प्रतिक्रियाशील gliosis की प्रमुख विशेषताओं में कोई सराहनीय मतभेद निरीक्षण करते हैं। - जिस तरह से बाहर जोड़तोड़ हाथ रखते हुए सावधानी से 5/45 कोणीय संदंश का उपयोग कर अलग हड्डी उठा। Ful एक में पीछे छोड़ दिया हड्डी का टुकड़ा खींच करने के लिए का लाभ उठाने का उपयोग कर, पृथक हड्डी और लिफ्ट के पक्ष में संदंश की नोक डालेंएल आंदोलन।
नोट: मस्तिष्क चाकू या खोपड़ी के नीचे ड्यूरा परेशान करने के लिए नहीं सावधान रहना होगा। - लथपथ absorbable जेल फोम का एक छोटा सा टुकड़ा ले लो और बाहर सुखाने से रोकने और मौजूद हो सकता है कि किसी भी खून को सोखने के लिए खुला दिमाग पर जगह है।
- जेल फोम जगह में है एक बार, जगह में जोड़तोड़ हाथ स्विंग और जेल फोम से अधिक craniotomy के केंद्र के लिए ब्लेड समायोजित करें। जेल फोम निकालें और टिप ड्यूरा puncturing बिना ड्यूरा छू तक ब्लेड कम है। मार्क पृष्ठीय / stereotaxic के ऊर्ध्वाधर बांह पर वर्नियर पैमाने का उपयोग उदर निर्देशांक।
- जोड़तोड़ हाथ का प्रयोग, धीरे-धीरे ब्लेड मस्तिष्क में ठीक 3 मिमी कम है। इस जोड़तोड़ बांह पर वर्नियर पैमाने चिह्नों का उपयोग करके हासिल की है। ब्लेड 5-10 सेकंड के लिए जगह में रहने की अनुमति दें। Opposi में जाने से पहले craniotomy के व्याख्यान चबूतरे वाला और दुम सीमाओं तक पहुंचने के लिए ब्लेड की अनुमति के तीन बार दुम को ब्लेड लगाव व्याख्यान चबूतरे के साथ stereotaxic हाथ में ले जाएंते अंत।
नोट: ड्यूरा ब्लेड डालने से पहले हटा दिया नहीं है। जो चूहे ड्यूरा, ~ के विपरीत मोटाई 7 में 80 माइक्रोन, माउस ड्यूरा काफी पतली है (केवल कुछ ही सेल मोटी परतों) और सम्मिलन के दौरान स्केलपेल ब्लेड के लिए एक सराहनीय प्रतिरोध का उत्पादन नहीं करता। प्रत्येक जानवर एक लगातार चोट प्राप्त करता है कि यह सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक माउस के लिए एक नया स्केलपेल ब्लेड का प्रयोग करें। - धीरे-धीरे मस्तिष्क से हटाने की पत्ती, stereotaxic हाथ बढ़ा। ब्लेड से हटाने के बाद, तुरंत किसी भी अतिरिक्त रक्त या तरल पदार्थ को सोखने के लिए मस्तिष्क की सतह पर gelfoam का एक और टुकड़ा रखें।
- इस बीच, stereotaxic हाथ हटाने और नंबर 11 स्केलपेल ब्लेड के निपटान के। खून बह रहा बंद कर दिया है एक बार, gelfoam हटा दें।
- ऐसे ethilon या Prolene के रूप में गैर absorbable सीवन, के साथ त्वचा suturing से घाव को बंद करें। स्यूचर्स सर्जरी के बाद 9-10 दिनों हटाया जाना चाहिए।
- अपने घर पिंजरे करने के लिए माउस लौटें, और माउस एक Heatin पर धीरे-धीरे ठीक करने की अनुमतिसंकट के किसी भी लक्षण के लिए जी पैड और मॉनिटर। Isofluorane प्रेरित संज्ञाहरण से वसूली आमतौर पर isofluorane से हटाने के बाद 2-5 मिनट के भीतर होता है। यह sternal recumbancy आ गया है जब तक पहुंच के बाहर जानवर मत छोड़ो।
- जलयोजन सुनिश्चित करने के लिए lactated घंटी समाधान subcutaneously की 0.5-1 मिलीलीटर प्रशासन।
4. शल्य चिकित्सा के बाद की देखभाल
- बारीकी से कॉलोनी में लौटने से पहले संज्ञाहरण से वसूली तक इस पद ऑपरेशन जानवरों की निगरानी।
- , पोस्ट ऑपरेशन दर्द और परेशानी को कम करने के लिए तुरंत प्रक्रिया के बाद आईपी इंजेक्शन द्वारा 0.05-0.1 मिलीग्राम / किग्रा buprenorphine प्रशासन।
- ऐसे प्रतिबंधित आंदोलनों, संवारने की कमी है, या वजन घटाने के रूप में संकट के गंभीर लक्षण के लिए पोस्ट ऑपरेशन 2-3 दिनों के लिए जानवरों को ध्यान से देखें। संकट के इन संकेतों के किसी भी प्रदर्शन जानवरों euthanize और अध्ययन से हटा दें।
- स्टेन ने जानवरों euthanize, घायल ऊतकों की ऊतकविकृतिविज्ञानी जांच करने के लिएदर्द intracardial छिड़काव।
- संक्षेप में, Ketamine / xylazine की अधिक मात्रा के साथ पशुओं anesthetize, तो intracardially 15-20 मिलीलीटर 0.9% की NaCl के साथ perfused, या जिगर प्रयोग के समापन पर 4% paraformaldehyde के 60 मिलीलीटर के द्वारा पीछा किया, खून की मंजूरी दे दी है जब तक।
- 30% sucrose के समाधान के लिए स्थानांतरित करने से पहले 4% paraformaldehyde में 2-4 घंटे के लिए दिमाग और बाद तय काटना। गार्सिया 8,9 में वर्णित है, या के रूप में मानक ऊतकीय या immunohistochemical प्रक्रियाओं द्वारा धारा 40-60 माइक्रोन से कम एक cryostat पर दिमाग, और इस प्रक्रिया।
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Representative Results
इस प्रक्रिया के दौर से गुजर जानवरों की आवश्यकता नहीं है क्योंकि, पोस्ट ऑपरेटिव केयर विशेष छोटी या लंबी अवधि के समय जीवित रहने की अवधि को आसानी से चोट के बाद तीव्र या पुराना पैथोलॉजी जांच की जरूरत पर निर्भर करता है, अध्ययन में शामिल कर रहे हैं। ऐसे GFAP और सोमा के अतिवृद्धि की upregulation के रूप में प्रतिक्रियाशील gliosis के प्रधानाचार्य सुविधाओं, के रूप में जल्दी चोट के बाद 2-3 दिन के रूप में मनाया जा सकता है। प्रतिक्रियाशील astrocytes के लिए प्रसार के शिखर चरण चोट 10 के बाद के दिनों 3-5 के दौरान होता है। नीचे दिखाया गया प्रतिनिधि परिणाम 7 दिन पहले एक चाकू के घाव घाव प्राप्त किया है कि जानवरों से कर रहे हैं।
एक अग्रमस्तिष्क वार चोट के बाद अग्रमस्तिष्क के सामान्य आकृति विज्ञान और cytoarchitecture Nissl धुंधला (चित्रा 2) द्वारा देखे जा सकते हैं। ब्लेड ट्रैक घाव के केन्द्र भर में सबसे प्रमुख है, बाधित कॉर्टिकल cytoarchitecture क्षतिग्रस्त टी के व्याख्यान चबूतरे वाला और दुम हद तक पता चलता हैसमस्या। रिएक्टिव astrocytes GFAP (चित्रा 3) के लिए immunohistochemistry द्वारा मनाया जा सकता है। कई कॉर्टिकल astrocytes चोट के अभाव में GFAP की immunohistochemically detectable स्तर का प्रदर्शन नहीं करती है। Contralateral गोलार्द्ध (चित्रा 3) में अपेक्षाकृत कम स्तर पर, जबकि शेष हालांकि, GFAP अभिव्यक्ति नाटकीय रूप से प्रतिक्रियाशील astrocytes ipsilateral गोलार्द्ध के लिए प्रतिबंधित कर रहे हैं, सुझाव है कि चोट के गोलार्द्ध ipsilateral में upregulated है। ध्यान दें कि घाव को cortical ऊतक ipsilateral GFAP के रूप में चिह्नित upregulation, अन्य astrocytic मार्कर, S100β के रूप में इस तरह के रचनात्मक रूप में एक चोट (चित्रा 4) के अभाव में व्यक्त की, और चोट (चित्रा 4) निम्न इसी तरह की अभिव्यक्ति के स्तर को बनाए रखने रहे हैं दर्शाता है। बढ़ी हुई GFAP अभिव्यक्ति के अलावा, प्रतिक्रियाशील astrocytes सेलुलर अतिवृद्धि से गुजरना। सेल शरीर और प्रक्रियाओं विस्तृत हो और (GFAP के लिए तीव्र धुंधला दिखानेचित्र तीन)।
प्रतिक्रियाशील astrocytes के प्रसार, या proliferative मार्कर Ki67 या PCNA के लिए immunostaining द्वारा thymidine अनुरूप, 5-ब्रोमो-2'- deoxyuridine (BrdU) प्रशासन द्वारा मनाया जा सकता है। हम नियमित रूप से दिन के दौरान पशुओं के लिए, 3-5 निम्नलिखित चोट, प्रतिक्रियाशील gliosis 10 (चित्रा 3) के शिखर 200 मिलीग्राम / किलो BrdU, आईपी प्रशासन। हालांकि BrdU की सटीक खुराक और समय स्वतंत्र रूप से BrdU के स्थायी रूप से प्रशासन के समय में, प्रसार के दौर से गुजर कोशिकाओं, साथ ही उनकी संतान लेबल होगा कि मन में असर, प्रत्येक अध्ययन के लिए विचार किया जाना चाहिए, लेकिन लगता है कि BrdU के पहले सेल चक्र में प्रवेश कि कोशिकाओं शुरू होता है, या BrdU प्रशासन पूर्ण होने के बाद, के रूप में चिह्नित नहीं किया जाएगा। चित्रा 4 में, हम कई प्रतिक्रियाशील astrocytes BrdU के प्रशासन के समय के पाठ्यक्रम के दौरान proliferated यह दर्शाता है कि 1 सप्ताह पद की चोट पर GFAP और BrdU के बीच व्यापक सह स्थानीयकरण दिखा। कि जनसंपर्क नोटoliferating प्रतिक्रियाशील astrocytes प्रतिक्रियाशील astrocytes के घाव कोर से बाहर का स्थानीयकृत जबकि मुख्य रूप से, घाव कोर के निकट स्थानीयकृत बड़े पैमाने पर गैर-प्रफलन (चित्रा 4) कर रहे हैं।
चित्रा 1:। माउस खोपड़ी के योजनाबद्ध, craniotomy के क्षेत्र चित्रण ब्लू लाइन क्षेत्र की सीमाओं की पहचान प्रारंभिक चिह्नों drilled किया जा करने को दर्शाती है। शीर्ष और छोड़ दिया निशान क्रमश: नीचे 1 मिमी पर मापा जाता है या राज्याभिषेक या बाण के समान टांके के लिए पार्श्व कर रहे हैं। नीचे और सही के निशान क्रमशः, राज्याभिषेक और बाण के समान टांके से 4 मिमी पर मापा जाता है। craniotomy व्यास (धराशायी लाइन) में लगभग 3 मिमी है कि एक craniotomy बनाने, चिह्नित सीमाओं के भीतर एक चक्र (बिंदीदार रेखा) ड्रिलिंग के द्वारा किया जाता है। योजनाबद्ध पैमाने पर नहीं है।
चित्रा 2: घाव मात्रा का व्याख्यान चबूतरे वाला दुम हद तक भर Nissl धुंधला हो जाना। (ए - सी) के घाव को गोलार्द्ध ipsilateral दिखा घायल दिमाग का राज्याभिषेक स्लाइस 1 सप्ताह पद चोट,। Insets बॉक्सिंग क्षेत्रों की छवियों में उछाल को दर्शाती है। ब्लेड ट्रैक ~, शीर्षस्थान (बी में तीर) से 2.5 मिमी घाव के केंद्र में सबसे प्रमुख है। घाव के केंद्र के लिए वर्गों पूर्वकाल (ए) और पीछे (सी) में बाधित कॉर्टिकल cytoarchitecture (insets) ध्यान दें। स्केल बार 500 माइक्रोन, इनसेट, 250 माइक्रोन। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र तीन: strong> अग्रमस्तिष्क वार चोट के बाद GFAP 1 सप्ताह के लिए Brightfield immunohistochemistry। (ए - बी) एक घायल जानवर से प्रतिपक्षी (ए) में GFAP धुंधला और ipsilateral (बी) एक ही ऊतक खंड के गोलार्द्धों के कम बढ़ाई छवियों। घाव साइट (बी) में दिखाया गया है, और रिहाई contralateral गोलार्द्ध में इसी क्षेत्र (ए) में दिखाया गया है। स्केल बार, 100 माइक्रोन। (सी - डी) सामान्य (सी) और प्रतिपक्षी और ipsilateral गोलार्द्धों से प्रतिक्रियाशील (डी) astrocytes की उच्च बढ़ाई छवियों क्रमशः। (सी) की तुलना में सेल शरीर और प्रतिक्रियाशील अस्थिकणिका की प्रक्रियाओं की नाटकीय अतिवृद्धि (डी), ध्यान दें। स्केल बार, 10 माइक्रोन।
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चित्रा 4: रिएक्टिव astrocytes के एक अग्रमस्तिष्क वार चोट के बाद पैदा करना। (ए - बी) BrdU (लाल) और GFAP (हरा) रिहाई, नियंत्रण (ए) में और घायल (बी) के दिमाग, चाकू की चोट के बाद 1 सप्ताह के लिए Immunofluorescent धुंधला। (सी - डी) BrdU (लाल) के लिए Immunofluroescent धुंधला और astrocytic मार्कर S100β (हरा) रिहाई (सी) में और घायल (डी) गोलार्द्धों, चाकू की चोट के बाद 1 सप्ताह। पशु दिनों 3-5 पद चोट से अधिक BrdU प्राप्त किया। रिहाई का कोर्टेक्स में astrocytes (ए और सी, insets) proliferating नहीं कर रहे हैं, जबकि कई astrocytes, घायल कॉर्टेक्स (बी और डी, insets, तीर) में घाव स्थल पर proliferating हैं कि ध्यान दें। DAPI (नीला) के साथ counterstaining। स्केल सलाखों, 100 माइक्रोन, इनसेट, 25 माइक्रोन।
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Discussion
यह खोपड़ी या अंतर्निहित ड्यूरा ड्रिलिंग के दौरान क्षतिग्रस्त नहीं कर रहे हैं कि महत्वपूर्ण है। हवा निकाल नहीं है खोपड़ी सुनिश्चित करने के लिए ड्रिलिंग, जबकि प्रकाश दबाव का प्रयोग करें। ड्यूरा सुनिश्चित करने के लिए खोपड़ी टुकड़ा उठाने की हड्डी के साथ बंद उठाया नहीं जाता है, जबकि इसके अलावा, ध्यान रखा जाना चाहिए।
अग्रमस्तिष्क वार चोट मॉडल यहाँ सीएनएस के लिए एक मर्मज्ञ चोट का वर्णन किया। ऐसे FPI या सीसीआई के रूप में TBI के मॉडल की तुलना में कम चिकित्सकीय अनुवाद हालांकि, अग्रमस्तिष्क वार घाव मॉडल एक असतत सीएनएस अपमान से चालू होने वाले विभिन्न जैव रासायनिक, सेलुलर, या आणविक घटनाओं की जांच के उद्देश्य से अध्ययन की एक विस्तृत रेंज के लिए एक उपयोगी उपकरण के रूप में कार्य करता है। संज्ञानात्मक घाटे चूहों में सूचित कर दिया गया है, 3 सप्ताह एक द्विपक्षीय वार चोट 11 के बाद, यह एकतरफा वार घाव मॉडल, यहाँ के रूप में वर्णित, चोट करने के लिए सेलुलर प्रतिक्रिया को संबोधित अध्ययन के लिए सबसे उपयुक्त है कि ध्यान दिया जाना चाहिए। इस तरह के रूप में पुन: विभिन्न नयूरोपथोलोगिकल प्रक्रियाओं के बुनियादी पहलुओं,सक्रिय gliosis और निशान गठन आसानी से मनाया जाता है और अध्ययन किया जा सकता है। फैलाना और व्यापक neuropathology, स्थानीय glial सक्रियण और विकृति का उत्पादन जो FPI या सीसीआई के विपरीत, घायल और रिहाई गोलार्द्धों के बीच, अंतर-पशु तुलना की सुविधा। इसके अलावा, घाव स्थल पर सीएनएस में मस्तिष्कावरणीय कोशिकाओं की घुसपैठ इन कोशिकाओं और स्थानीय प्रतिक्रियाशील astrocytes के बीच बातचीत की जांच के लिए एक अवसर प्रस्तुत करता है। दरअसल, इस तरह बातचीत निशान ऊतक के गठन में महत्वपूर्ण हैं, और नकारात्मक axonal उत्थान से 12 प्रतिक्रियाशील astrocytes की अनुमोदक गुणों को विनियमित करने के लिए दिखाया गया है।
यहाँ हम इस तरह के सेल शरीर और प्रक्रियाओं की अतिवृद्धि, बढ़ GFAP अभिव्यक्ति, और चोट प्रेरित प्रसार के रूप में प्रतिक्रियाशील astrogliosis के प्रमुख विशेषताओं में से कुछ का प्रदर्शन करने के लिए मानक immunohistochemical प्रक्रियाओं का उपयोग करें। Cavities के 1-2 सप्ताह में चूहों में नहीं मनाया जाता है हालांकि fol कि नोटlowing इस प्रक्रिया, चूहों का उपयोग अध्ययन चोट 11 निम्नलिखित 3 सप्ताह, गुहा गठन की रिपोर्ट। चूहों और चूहों के बीच neuropathology में अंतर भी रीढ़ की हड्डी की चोट में मनाया जाता है। एक रीढ़ की हड्डी में चोट प्रदर्शनी अल्सर या घाव स्थल पर गुहा गठन से गुजरना है कि चूहों जबकि, इस तरह cavities के चूहों 13,14 में फार्म नहीं है।
प्रक्रिया सरल, आसानी से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य, विश्वसनीय है, और न्यूनतम उपकरणों की आवश्यकता है। यह आसानी से चूहे या माउस पढ़ाई प्रदर्शन करने के लिए संशोधित किया जा सकता है। विशेष रूप से, विभिन्न ट्रांसजेनिक माउस लाइनों के साथ या औषधीय अध्ययन में इस मॉडल का उपयोग चोट के सीएनएस प्रतिक्रिया के विनियमन तंत्र में उपन्यास अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकते हैं। घाव आकार और गंभीरता असतत punctures के बजाय अनुदैर्ध्य यांत्रिक घावों का उत्पादन करने के लिए ब्लेड पकड़े stereotaxic हाथ से ब्लेड और यात्रा दूरी की गहराई का समायोजन करके संशोधित किया जा सकता है। इस प्रकार, अग्रमस्तिष्क वार चोट मॉडल एक उत्कृष्ट experimenta के रूप में सेवा कर सकते हैंजिसके साथ एल मंच चोट करने के लिए विभिन्न नयूरोपथोलोगिकल प्रतिक्रियाओं के विशिष्ट पहलुओं का अध्ययन करने के लिए।
सीएनएस को चोट गतिशील और 6 बहुकोशिकीय है कि एक जटिल प्रतिक्रिया से चलाता है। प्रतिक्रियाशील astrocytes के अलावा, microglia मलबे phagocytose और समर्थक और विरोधी भड़काऊ संकेतन Cascades 15-18 दोनों आरंभ करने के लिए जल्दी से लामबंद। सक्रिय microglia और हमलावर मैक्रोफेज सामान्य कोशिका समारोह और अस्तित्व 19-21 के लिए एक शत्रुतापूर्ण वातावरण बनाने, साइटोकिन्स और chemokines का उत्पादन। ऐसे chondroitin सल्फेट proteoglycan (CSPG) के रूप में बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) अणुओं, प्रतिक्रियाशील astrocytes और fibroblasts सहित प्रकार की कोशिकाओं की एक किस्म से उत्पादन किया, और न्यूरॉन्स 22,23 जीवित रहने का उत्थान और संरचनात्मक पुनर्गठन के लिए एक शत्रुतापूर्ण वातावरण बना रहे हैं। यहाँ हम एक अग्रमस्तिष्क वार चोट के बाद होती है कि प्रतिक्रियाशील astrogliosis के प्रमुख विशेषताओं में से कुछ प्रदर्शित करता है। मध्यवर्ती च के upregulationबाद में ऊतक remodeling के द्वारा पीछा ऐसे GFAP, अस्थिकणिका प्रसार, और glial निशान गठन के रूप में ilaments, आसानी से मानक immunohistochemistry प्रक्रियाओं का उपयोग मूल्यांकन कर रहे हैं।
यह प्रतिक्रियाशील gliosis की कुछ सुविधाओं को यहाँ पर बल दिया जाता है, जबकि प्रतिक्रियाशील gliosis बदलती सुविधाओं और विशिष्ट ट्रिगर 24 के आधार पर उभरने के जीन की अभिव्यक्ति प्रोफाइल के साथ, अत्यधिक संदर्भ निर्भर है कि ध्यान दिया जाना चाहिए। फिर भी, मरम्मत पर चोट और प्रयास करने के लिए सीएनएस प्रतिक्रिया के बारे में मौलिक गुणों में से एक नंबर मॉडलिंग और अग्रमस्तिष्क वार lesioned ऊतक में अध्ययन किया जा सकता है। दरअसल, यह प्रतिक्रियाशील astrocytes 2 की न्यूरोप्रोटेक्टिव गुणों का प्रदर्शन, चाकू चोट सीएनएस में वृद्धि हुई ल्युकोसैट घुसपैठ और बढ़ न्यूरोनल अध: पतन की ओर जाता है एक अग्रमस्तिष्क निम्नलिखित प्रतिक्रियाशील astrocytes proliferating की पृथक लक्षित है कि दिखाया गया है। हाल ही में, प्रतिक्रियाशील astrocytes के एक मर्मज्ञ चाकू के घाव, बी निम्नलिखित अलग-थलगकेन्द्र शासित प्रदेशों नहीं एक गैर इनवेसिव चोट, इन विट्रो 25,26 में तंत्रिका स्टेम सेल संभावित प्रदर्शित करता है। इस प्रकार अग्रमस्तिष्क वार सीएनएस के लिए चोट से चालू होने वाले जैव रासायनिक, सेलुलर, और आणविक घटनाओं की एक व्यापक रेंज का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली चोट मॉडल है। इस चोट मॉडल की आसानी और सादगी की चोट और मरम्मत तंत्र को सीएनएस प्रतिक्रिया में उपन्यास अंतर्दृष्टि के लिए नेतृत्व कर सकते हैं कि आगे के अध्ययन की सुविधा होगी।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Stereotax | Harvard Apparatus | 726049 | |
| High speed micro drill | Harvard Apparatus | 724950 | |
| stainless steel scalpel blade, #11 | MedVet | JOR581S | |
| 5/45 angled forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Gelfoam sponge 12 cm x 7 mm | Fisher | NC9841478 | |
| Rb anti-GFAP | DAKO | Z033429-2 | Dilution - 1:20,000 (bright-field); 1:1,000 (fluorescence) |
| Shp anti-BrdU | Abcam | ab1893 | Dilution - 1:20,000 (bright-field); 1:500 (fluorescence) |
| Biotinylated goat anti-rabbit | Vector Laboratories | BA-1000 | Dilution - 1:400 (bright-field) |
| Biotinylated rabbit anti-sheep | Vector Laboratories | BA-6000 | Dilution - 1:400 (bright-field) |
| Alexafluor 488 goat anti-rabbit | Life Technologies | A-11008 | Dilution - 1:400 (bright-field) |
| Alexafluor 568 donkey anti-sheep | Life Technologies | A-21099 | Dilution - 1:1,000 (fluorescence) |
| DAPI Nucleic Acid Stain | Life Technologies | D3571 | Dilution - 1:1,000 (fluorescence) |
| Cresyl Violet Acetate | Sigma Aldrich | C5042-10G | Dilution - 1% (bright-field) |
References
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