Protocol
Voksen (3-4 måneder gamle) hannmus med en blandet C57BL / 6 bakgrunn ble anvendt i denne protokollen. Dyrene ble holdt på en 12 timers lys / mørke syklus og tillatt fri adgang til mat og vann. Alle prosedyrer utført i denne protokollen ble gjennomført i henhold til protokoller godkjent av Drexel University Institutional Animal Care og bruk komité.
1. Klar kirurgiske området
- Desinfisere operasjonsbord med 70% etanol, og deretter dekke hele kirurgisk benk med absorberende pads og ordne kirurgiske instrumenter i tilknytning til stereotaksisk.
- Sett opp stereotaksisk utstyr uten manipulator arm. Ordne varmeputen på stereotaxic og satt til 37 ° C. Unngå overoppheting dyret ved å plassere et lite stykke tørkepapir eller kirurgisk pad mellom dyr og varmeputen.
- Ved hjelp av autoklaveres saks, skjære små biter av autoklaveres gelfoam i en steril petriskål som inneholdt 0,9% steril saltoppløsning til ready for bruk.
Merk: Oppretthold sterilt arbeidsmiljø ved hjelp autoklaveres instrumenter og sterile kirurgiske forsyninger. Re-sterilisere kirurgiske instrumenter i løpet av prosedyren eller mellom dyr ved dypping i en vulst sterilisator for 10-15 sek, etter behov. Opprettholde rene hansker hele prosedyren ved å gni hendene med 70% etanol, som nødvendig, desinfisere.
2. Prepping Mouse for kirurgi
- Fjern musen fra hjemmet buret og veier (g).
- Plasser mus inn i induksjonskammeret isofluran og satt oksygen til 2 l / min og isofluran fordamper til 5 for å fremkalle en kirurgisk plan av anestesi, ca. 3-5 min. Monitor for bremset pust og immobilisering. Sjekk at musen er fullt bedøvet med tå klype refleks.
- Når mus er fullstendig bedøvet, plasseres i stereotaksisk ramme, sikre nesen i nesepartiet, som er festet til slangen til isofluran. Sett øret barer i øregangen og stram, sikre hodet er stabil.
- Barbere hodet fra øre til øre, og fra mellom øynene til bak ørene.
- Steril huden med alternerende våtservietter isopropylalkohol og Betadine jod-løsning, tre ganger hver.
- Påfør kunstige tårer i begge øynene for å hindre dem fra å tørke ut under den kirurgiske prosedyren.
3. Kirurgisk prosedyre
- Overvåke anestesidybden ved å knipe tå eller hale. Musen er i den aktuelle kirurgiske flyet når det er ingen respons, og respirasjon er langsom og jevn.
- Lag en parasagittal snitt i huden fra like bak øynene til nesten mellom ørene i en enkelt, bestemt bevegelse ved hjelp av en nr 11 skalpell blad. Flytt huden til side og klippet høyre side med pinsetten.
- Clear skallen av overliggende membran med kjedelig siden av No. 11 skalpell og bomull tippet applikatorer. Eventuelt tørk skallen med bomull tipped applikator dyppet i 0,9% saltløsning. La det tørke helt.
- Ossing en liten linjal, merke fremre kant av craniotomy på 1 mm caudal til den koronale sutur, og venstre kant av craniotomy 1 mm lateralt for sagittal sutur (figur 1), med en permanent markør. Deretter markerer riktig og caudal grenser for kraniotomi ved 4 mm fra sagittal og koronale sting, henholdsvis (figur 1).
- Ved hjelp av en 0,5 mm bor, begynner å gjøre craniotomy ved å bore sakte følge permanent markør disposisjon. Pass på å ikke bryte gjennom skallen helt. Trykk forsiktig på den isolerte stykke issebeinet med No. 5 tang, vil områder av svakhet vike for press. Når tynnet benet er tilstrekkelig svak i hele omkretsen, er benet stykket klart for fjerning.
MERK: Hvis etterforsker erfaringer problemer med å fjerne bein i ett stykke, tyder dette på at benet ikke var tilstrekkelig tynnet under boring. Vurdere boring skallen videre i senere dyr til facilitate enkel fjerning av bein stykke. - Ved hjelp av en 10 ml sprøyte med en 23 G nål, påfør en liten mengde 0,9% saltvann for å suge den isolerte bein og boret området.
- Fest manipulatorarmen til stereotaxic utstyr. Fest en ny No. 11 skalpell blad til sonden holder med den skarpe siden av bladet vendt rostrally.
MERK: Selv om rostral og kaudale vev oppleve de skarpe og butte kanter av bladet, henholdsvis mekanisk skade indusert av penetrerende skader er sammenlignbar i hele omfanget av lesjonen. Vi observerer ingen merkbare forskjeller i store trekk av reaktiv gliose inkludert oppregulering av GFAP uttrykk eller spredning mellom rostral og caudal seksjoner. - Holde manipulatorarmen ut av veien, løfter forsiktig den isolerte bein bruker 5/45 vinklet pinsett. Sett tuppen av tang inn i siden på den isolerte bein og løft, bruker innflytelse til å trekke av den del av bein liggende igjen i en full bevegelse.
MERK: Vær forsiktig med å stikke hjernen eller forstyrre dura under skallen. - Ta en liten bit av gjennomvåt absorberbare gel skum og legg på avdekket hjernen for å hindre at den tørker ut og suge opp noe blod som kan være til stede.
- Når gelen er skummet på plass, svinge manipulatorarmen på plass og justere bladet til midten av kraniotomi over gelen skum. Fjern gel skum og senk bladet før spissen berører dura uten punktering av dura. Mark rygg / ventral koordinater ved hjelp av Vernier skala på den vertikale arm av stereotaxic.
- Ved hjelp av manipulatorarmen, sakte senke bladet nøyaktig 3 mm inn i hjernen. Dette oppnås ved hjelp av vernier skalamarkeringer på manipulatorarmen. Tillate bladet å holde på plass for 5-10 sek. Flytt stereotaxic arm med festet rostralt til hale tre ganger slik at bladet for å nå de rostral og caudal grenser craniotomy før han flyttet til opposisjonte slutt.
MERK: dura er ikke fjernet før innsetting av bladet. I motsetning til rotter dura, som er ~ 80 mikrometer i tykkelse 7, er muse dura betydelig tynnere (bare noen få cellelag tykk) og produserer ikke nevneverdig motstand mot skalpellblad under innføring. Bruk en ny skalpellblad for hver mus for å sikre at hvert dyr får en konsistent skade. - Sakte heve stereotaxic arm, fjerne kniven fra hjernen. Etter fjerning av bladet, umiddelbart plassere en annen del av gelfoam på hjernen overflaten for å suge opp overflødig blod eller væske.
- Samtidig fjerner stereotaxic arm og kast av No. 11 skalpell blad. Når blødningen har stoppet, fjern gelfoam.
- Lukke såret ved å sy huden med ikke-absorberbare sutur, slik som Ethilon eller prolen. Suturer bør fjernes 9-10 dager etter operasjonen.
- Returner musen til sitt hjem buret, og la musen til å gjenopprette sakte på en heating pad og monitor for eventuelle tegn på stress. Utvinning fra isofluorane-indusert anestesi oppstår vanligvis innen 2-5 minutter etter fjerning fra isofluorane. Ikke la dyret uten tilsyn før den har gjenvunnet sternal recumbancy.
- Administrer 0,5-1 ml Ringer-laktat oppløsning subkutant å sikre hydrering.
4. Post-kirurgisk Care
- Følge nøye med dyr postoperativt til utvinning fra anestesi før retur til kolonien.
- For å redusere smerte og ubehag postoperativt, administrere 0,05-0,1 mg / kg buprenorfin ved ip injeksjon umiddelbart etter inngrepet.
- Observere dyrene i 2-3 dager postoperativt for alvorlige tegn på stress som bundne bevegelser, manglende stell, eller vekttap. Avlive dyr som viser noen av disse tegn på stress og fjerne fra studien.
- For å undersøke histopatologi skadde vev, avlive dyr ved standard intracardial perfusjon.
- I korthet, bedøve dyrene med en overdose av ketamin / xylazin, deretter intracardially perfusert med 15-20 ml av 0,9% NaCl, eller til leveren er ryddet av blod, etterfulgt av 60 ml av 4% paraformaldehyd ved avslutningen av forsøket.
- Dissekere hjernen og post-fix for 2-4 timer i 4% paraformaldehyde før de overføres til 30% sukrose løsning. § hoder på en kryostat på 40-60 pm, og fremgangsmåten ved hjelp av standard histologiske eller immunhistokjemiske prosedyrer, eller som beskrevet i Garcia 8,9.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Fordi dyr som gjennomgår denne prosedyren ikke krever spesialiserte postoperativ omsorg, korte eller langsiktige tids overlevelse perioder er lett tas med i studien, avhengig av behovet for å undersøke akutt eller kronisk patologi etter skade. Hovedtrekkene i reaktiv gliose, for eksempel oppregulering av GFAP og hypertrofi av soma, kan observeres så tidlig som 2-3 dager etter skade. Toppen fasen av spredning for reaktive astrocytter er under dager 3-5 etter skade 10. De representative resultatene vist nedenfor er fra dyr som har fått et stikk sår lesjon 7 dager tidligere.
Den generelle morfologi og cytoarchitecture i forhjernen etter en forhjernen stikkskade kan visualiseres ved Nissl-farging (figur 2). Selv om bladet sporet er mest fremtredende i løpet av midten av lesjon, avslører forstyrret kortikale cytoarchitecture rostral og caudal omfanget av den skadede tproblem. Reaktive astrocytter kan observeres ved immunhistokjemi for GFAP (figur 3). Legg merke til at mange kortikale astrocytter ikke viser immunohistokjemisk påvisbare nivåer av GFAP i fravær av skade. Imidlertid er GFAP ekspresjon dramatisk oppregulert i den ipsilaterale hemisfæren til skaden mens resterende ved forholdsvis lave nivåer i den kontralaterale hemisfære (figur 3), hvilket antyder at reaktive astrocytter er begrenset til den ipsilaterale hemisfæren. Legg merke til at mens det kortikale vev ipsilaterale til lesjonen viser markert oppregulering av GFAP, astrocytic andre markører, slik som S100β er konstitutivt uttrykt i fravær av en skade (figur 4), og opprettholde tilsvarende uttrykk nivåer etter skade (figur 4). I tillegg til øket ekspresjon GFAP, reaktive astrocytter gjennomgår cellehypertrofi. Celle organer og prosesser bli forstørret og viser intens farging for GFAP (Figur 3).
Spredning av reaktive astrocytter kan observeres ved administrering av tymidinanalog, 5-brom-2'-deoksyuridin (BrdU), eller ved farging for de proliferative markører Ki67 eller PCNA. Rutinemessig administrere Vi 200 mg / kg BrdU, ip, til dyr i løpet av 3-5 dager etter skade, toppen av reaktive gliose 10 (figur 3). Men den nøyaktige dosering og tidspunktet for BrdU bør betraktes som uavhengig av hverandre for hver studie, med tanke på at BrdU permanent merke celler som gjennomgår proliferasjon, samt deres avkom, på tidspunktet for administrering, men at celler som kommer inn i cellesyklus før BrdU starter, eller etter BrdU administrasjon er fullført, vil ikke merkes. I figur 4, viser vi omfattende ko-lokalisering mellom GFAP og BrdU på en uke etter skade, noe som indikerer at mange reaktive astrocytter spredte under tidsforløpet av BrdU administrering. Merk at proliferating reaktive astrocytter er hovedsakelig lokalisert i tilknytning til lesjonen kjernen, mens det reaktive astrocytter lokalisert distalt fra lesjonen kjernen er stort sett ikke-proliferative (figur 4).
Fig. 1: Skjematisk av mus skallen, som viser området av kraniotomi blå linjer viser de innledende kodingen på grensene av området som skal bores. De øvre og venstre merkene er målt til en mm under eller sideveis til de koronale eller sagittal sting, hhv. De nederste og høyre merkene er målt ved 4 mm fra koronale og sagittal sting, hhv. Den kraniotomi utføres ved å bore en sirkel innenfor de markerte grenser (stiplet linje), og skaper en kraniotomi som er omtrent 3 mm i diameter (stiplet linje). Skjematisk er ikke i målestokk.
Figur 2: Nissl farging gjennom hele rostrokaudale omfanget av lesjonen volum. (A - C) koronale skiver av skadde hjernen en uke etter skade, viser halvkule ipsilaterale til lesjonen. Innfellinger skildre zoomet inn bilder av eske regionene. Bladet sporet er mest fremtredende i midten av lesjon, ~ 2,5 mm fra Bregma (pilen i B). Legg merke til avbrutt kortikal cytoarchitecture (innfellinger) i avsnitt anterior (A) og bakre (C) til lesjonen sentrum. Scale bar 500 mikrometer, innfelt, 250 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: strong> Lysfelt immunhistokjemi for GFAP en uke etter en forhjerne stikkskade. (A - B) Lav forstørrelse bilder av GFAP farging i kontralateral (A) og ipsilaterale (B) halvkuler av samme vev delen fra et skadet dyr. Lesjonen området er vist i (b), og det tilsvarende område i den kontralaterale hemisfære uskadet, er vist i (A). Scale bar, 100 mikrometer. (C - D) høy forstørrelse bilder av normal (C) og (D) reaktive astrocytter fra kontralaterale og ipsilaterale halvkuler, respektivt. Legg merke til den dramatiske hypertrofi av cellelegemet og prosesser av reaktive astrocytt i (D), sammenlignet med (C). Scale bar, 10 mikrometer.
825 / 52825fig4.jpg "/>
Figur 4: Reaktiv astrocytter sprer følge en forhjerne stikkskade. (A - B) Immunofluorescent farging for BrdU (rød) og GFAP (grønn) i uskadd, kontroll (A) og skadde (B) hjerner, en uke etter stikkskade. (C - D) Immunofluroescent farging for BrdU (rød) og astrocytic markør S100β (grønn) i uskadd (C) og skadde (D) hemisfærer, en uke etter stikkskade. Dyr mottatt BrdU over dager 3-5 etter skade. Merk at mange astrocytter formerer på lesjon området i det skadde cortex (B og D, innfellinger, pilspisser), mens astrocytter i uskadet cortex ikke formerer (A og C, innfellinger). Kontra med DAPI (blå). Skala barer, 100 mikrometer, innfelt, 25 mikrometer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det er viktig at hodeskallen eller underliggende dura ikke skades under boringen. Bruk lett press under boring for å sikre skallen er ikke punktert. I tillegg bør man være forsiktig mens du løfter skallen stykke å sikre dura ikke løftes av med beinet.
Forhjernen stikkskade beskrevet her modellene en gjennomtrengende skader på sentralnervesystemet. Selv om mindre klinisk oversett enn TBI modeller som FPI eller CCI, serverer forhjernen stikke lesjon modellen som et nyttig verktøy for et bredt spekter av studier for å undersøke ulike biokjemiske, cellulære, eller molekylære hendelser utløst av en diskret CNS fornærmelse. Selv om kognitive defekter er blitt rapportert hos rotter, tre uker etter en bilateral stikkskade 11, bør det bemerkes at det unilaterale lesjon stikke modellen, som er beskrevet her, er best egnet for undersøkelser rettet mot den cellulære respons på skade. Grunnleggende aspekter av ulike nevropatologiske prosesser, for eksempel reaktiv gliose og arrdannelse kan lett observeres og studert. I motsetning til FPI eller CCI som produserer diffus og utbredt nevropatologi, den lokaliserte gliale aktivering og patologi, lette intra-dyr sammenligninger mellom de skadde og uskadde halvkuler. I tillegg er infiltrasjonen av meningeale celler i CNS ved lesjonen stedet gir en mulighet til å undersøke interaksjonen mellom disse celler og lokale reaktive astrocytter. Faktisk er slike interaksjoner er viktige i dannelsen av arrvev, og har vist seg å ha negativ regulere ettergivende egenskaper av reaktive astrocytter til aksonal regenerering 12.
Her bruker vi standard immunhistokjemiske prosedyrer for å demonstrere noen av de viktigste funksjonene i reaktiv astrogliosis som hypertrofi av celle organer og prosesser, økt GFAP uttrykk, og skade-indusert spredning. Merk at selv om hulrom ikke er observert hos mus ved 1-2 uker folgende denne prosedyren, studier med rotter rapportere hulrom formasjon, tre uker etter skaden 11. Forskjeller i nevropatologi mellom mus og rotter er også observert i ryggmargsskader. Mens rotter som gjennomgår en ryggmargsskade utstillingen cyster eller hulrom formasjon ved lesjon stedet, ikke slike hulrom ikke dannes i mus 13,14.
Fremgangsmåten er enkel, pålitelig og lett reproduserbar, og krever minimalt utstyr. Det kan enkelt endres til å utføre rotte eller mus studier. Spesielt kan bruk av denne modellen med forskjellige transgene mus linjer eller i farmakologiske undersøkelser tilveiebringe en ny innsikt i mekanismene som regulerer CNS respons på skade. Lesjon størrelse og alvorlighetsgraden kan endres ved å justere dybden av bladet og forflytningen til den stereotaktisk arm som holder bladet for å frembringe diskrete punkteringer i stedet for langsgående mekaniske lesjoner. Således kan forhjernen stikkskade-modellen tjene som et utmerket Experimental plattform som å studere bestemte aspekter av ulike nevropatologiske svar til skade.
Skade CNS utløser en kompleks reaksjon som er dynamisk og flercellet 6. I tillegg til reaktive astrocytter, mikroglia mobilisere raskt til fagocyttere rusk og initiere både pro og anti-inflammatoriske signalkaskader 15-18. Aktiverte mikroglia og invaderende makrofager produserer cytokiner og chemokiner, skaper et fiendtlig miljø for normal cellefunksjon og overlevelse 19-21. Ekstracellulære matriks (ECM) molekyler, slik som kondroitinsulfat proteoglykan (CSPG), fremstilles fra en rekke celletyper, inkludert reaktive astrocytter og fibroblaster, og skape et fiendtlig miljø for regenerering og strukturell reorganisering av overlevende neuroner 22,23. Her viser vi noen av de viktigste funksjonene i reaktiv astrogliosis som oppstår etter forhjerne stikkskade. Oppregulering av mellom filaments som GFAP, astrocytt proliferasjon, og glial arrdannelse, etterfulgt av påfølgende vev-omforming kan lett vurderes ved bruk av standard fremgangsmåter immunhistokjemi.
Det bør bemerkes at mens noen av funksjonene i reaktiv gliose er vektlagt her, er reaktiv gliose svært kontekstavhengig, med varierende egenskaper og genuttrykk profiler som dukker avhengig av den spesifikke trigger 24. Likevel kan en rekke grunnleggende egenskaper med hensyn til CNS respons på skade og forsøk på reparasjon modelleres og studert i forhjerne dolke lesioned vev. Faktisk har det vist seg at målrettet ablasjon av prolifererende reaktive astrocytter følge en forhjernen stikk skade fører til økt leukocytt infiltrering inn i CNS, og øker nevronal degenerering, noe som viser at nevrobeskyttende egenskaper for reaktive astrocytter 2. Flere nylig, reaktive astrocytter isolert etter en gjennomtrengende dolke lesjon, but ikke en non-invasiv skade, viser nevrale stamcellepotensial in vitro 25,26. Således forhjernen stikket er en kraftig skade-modell for å studere et bredt spekter av biokjemiske, cellulære og molekylære hendelser som utløses av skader på sentralnervesystemet. Den enkle og enkelhet i denne skaden modellen vil legge til rette for videre studier som kan føre til ny innsikt i CNS respons på skade- og reparasjonsmekanismer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Stereotax | Harvard Apparatus | 726049 | |
| High speed micro drill | Harvard Apparatus | 724950 | |
| stainless steel scalpel blade, #11 | MedVet | JOR581S | |
| 5/45 angled forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Gelfoam sponge 12 cm x 7 mm | Fisher | NC9841478 | |
| Rb anti-GFAP | DAKO | Z033429-2 | Dilution - 1:20,000 (bright-field); 1:1,000 (fluorescence) |
| Shp anti-BrdU | Abcam | ab1893 | Dilution - 1:20,000 (bright-field); 1:500 (fluorescence) |
| Biotinylated goat anti-rabbit | Vector Laboratories | BA-1000 | Dilution - 1:400 (bright-field) |
| Biotinylated rabbit anti-sheep | Vector Laboratories | BA-6000 | Dilution - 1:400 (bright-field) |
| Alexafluor 488 goat anti-rabbit | Life Technologies | A-11008 | Dilution - 1:400 (bright-field) |
| Alexafluor 568 donkey anti-sheep | Life Technologies | A-21099 | Dilution - 1:1,000 (fluorescence) |
| DAPI Nucleic Acid Stain | Life Technologies | D3571 | Dilution - 1:1,000 (fluorescence) |
| Cresyl Violet Acetate | Sigma Aldrich | C5042-10G | Dilution - 1% (bright-field) |
References
- Hamby, M. E., Sofroniew, M. V. Reactive astrocytes as therapeutic targets for CNS disorders. Neurotherapeutics. 7 (4), 494-506 (2010).
- Bush, T. G., et al. Leukocyte infiltration, neuronal degeneration, and neurite outgrowth after ablation of scar-forming, reactive astrocytes in adult transgenic mice. Neuron. 23 (2), 297-308 (1999).
- Faulkner, J. R., et al. Reactive astrocytes protect tissue and preserve function after spinal cord injury. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 24 (9), 2143-2155 (2004).
- Okada, S., et al. Conditional ablation of Stat3 or Socs3 discloses a dual role for reactive astrocytes after spinal cord injury. Nature Medicine. 12 (7), 829-834 (2006).
- Voskuhl, R. R., et al. Reactive Astrocytes Form Scar-Like Perivascular Barriers to Leukocytes during Adaptive Immune Inflammation of the CNS. Journal of Neuroscience. 29 (37), 11511-11522 (2009).
- Burda, J. E., Sofroniew, M. V. Reactive Gliosis and the Multicellular Response to CNS Damage and Disease. Neuron. 81 (2), 229-248 (2014).
- Maikos, J. T., Elias, R. A., Shreiber, D. I. Mechanical properties of dura mater from the rat brain and spinal cord. Journal of neurotrauma. 25 (1), 38-51 (2008).
- Garcia, A. D., Doan, N. B., Imura, T., Bush, T. G., Sofroniew, M. V. GFAP-expressing progenitors are the principal source of constitutive neurogenesis in adult mouse forebrain. Nat Neurosci. 7 (11), 1233-1241 (2004).
- Garcia, A. D., Petrova, R., Eng, L., Joyner, A. L. Sonic hedgehog regulates discrete populations of astrocytes in the adult mouse forebrain. J Neurosci. 30 (41), 13597-13608 (2010).
- Amat, J. A., Ishiguro, H., Nakamura, K., Norton, W. T. Phenotypic diversity and kinetics of proliferating microglia and astrocytes following cortical stab wounds. Glia. 16 (4), 368-382 (1996).
- Hozumi, I., et al. Administration of prosaposin ameliorates spatial learning disturbance and reduces cavity formation following stab wounds in rat brain. Neuroscience letters. 267 (1), 73-76 (1999).
- Ness, R., David, S. Leptomeningeal cells modulate the neurite growth promoting properties of astrocytes in vitro. Glia. 19 (1), 47-57 (1997).
- Byrnes, K. R., Fricke, S. T., Faden, A. I. Neuropathological differences between rats and mice after spinal cord injury. Journal of magnetic resonance imaging : JMRI. 32 (4), 836-846 (2010).
- Steward, O., et al. Genetic approaches to neurotrauma research: opportunities and potential pitfalls of murine models. Experimental neurology. 157 (1), 19-42 (1999).
- Davalos, D., et al. ATP mediates rapid microglial response to local brain injury in vivo. Nature neuroscience. 8 (6), 752-758 (2005).
- Hanisch, U. -K., Kettenmann, H. Microglia: active sensor and versatile effector cells in the normal and pathologic brain. Nature neuroscience. 10 (11), 1387-1394 (2007).
- Neumann, H., Kotter, M. R., Franklin, R. J. M. Debris clearance by microglia: an essential link between degeneration and regeneration. Brain. 132 (2), 288-295 (2008).
- Nimmerjahn, A. Resting Microglial Cells Are Highly Dynamic Surveillants of Brain Parenchyma in Vivo. Science. 308 (5726), 1314-1318 (2005).
- Horn, K. P., Busch, S. A., Hawthorne, A. L., van Rooijen, N., Silver, J. Another Barrier to Regeneration in the CNS: Activated Macrophages Induce Extensive Retraction of Dystrophic Axons through Direct Physical Interactions. Journal of Neuroscience. 28 (38), 9330-9341 (2008).
- Ip, C. W. Immune Cells Contribute to Myelin Degeneration and Axonopathic Changes in Mice Overexpressing Proteolipid Protein in Oligodendrocytes. Journal of Neuroscience. 26 (31), 8206-8216 (2006).
- Perry, V. H. Contribution of systemic inflammation to chronic neurodegeneration. Acta neuropathologica. 120 (3), 277-286 (2010).
- McKeon, R. J., Jurynec, M. J., Buck, C. R. The chondroitin sulfate proteoglycans neurocan and phosphacan are expressed by reactive astrocytes in the chronic CNS glial scar. Journal of Neuroscience. 19 (24), 10778-10788 (1999).
- Silver, J., Miller, J. H.
- Zamanian, J. L., et al.
- Buffo, A., et al. Origin and progeny of reactive gliosis: A source of multipotent cells in the injured brain. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (9), 3581-3586 (2008).
- Sirko, S., et al. Reactive glia in the injured brain acquire stem cell properties in response to sonic hedgehog. [corrected]. Cell stem cell. 12 (4), 426-439 (2013).
