Summary
Kanserin metastaz kansere bağlı ölümlerin önemli bir nedenidir. Biz solid organ tümörlerinin metastaz mekanizmaları çalışmak için bir "hasta" gibi ortotopik singenik fare modeli sistemi kurulması için hayatta kalma cerrahi yönteminin derinlemesine bir açıklama sağlar.
Protocol
Etik Beyanı
Tüm hayvan çalışmaları New York Şehir Üniversitesi Hunter College Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
Not: Sekiz BALB / c fareleri, bu deneysel prosedür kullanılmıştır. Beş BALB / c fareleri, primer tümör üretmek için 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 fare hepatoselüler karsinoma hücreleri ile implante edildi. Herhangi bir nakil Üç BALB / c fareleri, kontroller olarak kullanılmıştır. BNL 1ME A.7R.1 sıçangil olmayan tümörijenik hepatosit hücre çizgisi BNL CL.2 kimyasal dönüştürme ile elde edilen bir murin hepatosellüler karsinom hücre hattıdır. BNL 1ME A.7R.1 Amerikan Tip Kültür Koleksiyonu (ATCC) elde edilmiştir.
1. Ön cerrahi
- Tüm yaşam ameliyatları sağlıklı için fareler olun. Fareler sağlıklı olduğundan emin olmak için, cilt tenting ile dehidratasyon belirtileri kontrol edin. Hastalık ya da d herhangi bir kanıt ile fareler kullanmayınBu deneylerde istress.
- Onlar kilolu olmayan sağlamak için farelerin tartılır. Ağırlığı en az 16-20 gram olduğundan emin olun.
- Fare başına implantasyon için 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücreleri hazırla:
- BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücrelerinin% 70 birleşen hücre kültürü çanak - 10 ml'lik% 60 aspire medya. 5 ml PBS ile iki kez yıkanır. Çanak tripsin 2 ml ilave edilir ve 5 dakika boyunca hava ve% 5 CO2 ile nemlendirilmiş bir kuluçka makinesi içinde 37 ° C'de inkübe edin.
- Daha sonra, bir pipet 10 ul 10X büyütmede mikroskop altında hücre sayımı için manuel bir hemasitometre içine hücreleri tripsinize. Dört büyük köşe meydanlarda bulunan hücrelerin toplam sayısını ve toplam hücre sayısına göre seyreltme faktörünü çarpın. Ardından, (ml başına hücreleri) sayılan kareler sayısına göre bölmek ve hücre konsantrasyonu 10 6 ile çarpın.
- Hesaplama kullanarak, steril fare başına 5 milyon hücreleri toplamak1.5 ml mikrosantrifüj tüpleri. 1.5 ml mikrosantrifüj tüpler etiketleyin.
- Fosfat tamponlu tuzlu su, 100 ul (PBS) içinde 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücrelerinin yeniden süspanse edin. Cerrahi implantasyon kadar buz üzerinde bu hücreleri tutun.
- Böyle anestezi indüksiyon ve saç kirlenmesini önlemek için steril ekipman ve materyallerden uzak kırpma olarak ameliyata farelerin hazırlanması için gerekli aktiviteleri yapın.
- Ve dakika başına 1 L (yakl.% 2.1) sabit bir konsantrasyonu, bir akış oranında oksijenle birlikte izofluran buharlaştırıcı kullanılarak izofluran teneffüs ettirilerek farelerde, genel anestezi neden. Not: Sistem kendi kendine yeten ve hassas bir buharlaştırıcı, bir oksijen kaynağı ve gaz / anestezik atma için gerekli bir solunum devresine bağlı olan bir aktif karbon filtresi içerir.
- Anestezi, ameliyat sırasında ağrı geçiyor gelen hayvan önlemek için yeterli olduğundan emin olun. Ayak-tutam gerçekleştirin ve non-sorumluluk gibi için hayvan gözlemlemekcilik anestezi onaylayın.
- O zaman, burun konisi vana hattı, mühür kutusuna açık geçiş yapın.
- En kısa sürede fare anestezi olarak, kurutma ve hasardan koruyucu bir önlem olarak kornealara bir göz merhemi küçük bir miktar uygulayın.
- Daha sonra, burun konisi düzgün (bakım anestezi için) yerleştirilir ve bağlı olan, hazırlık alanı hayvan taşımak. Bu hazırlık alanında Depilasyon tarafından ameliyat için cerrahi kesi yeri hazırlayın.
- Cerrahi alan diğer tüm aktivite ücretsiz bir yerde olduğundan emin olun.
- Çalışma yüzeyi sağlam ve uygun dezenfekte, unsoiled ve dağınıklıktan arınmış ameliyattan önce olduğundan emin olun. Keten ya da üzerinde cerrahi tepsi steril parça yerleştirin.
- Operatif alan ameliyatı yapan yalnızca kişilerin mevcut olduğundan emin olun. Cerrahi oda uygun bir dezenfeksiyon ile temizlenmeli ve uygun bir temizleyici ile süpürüldü ve püskürtülür emin olunctant.
- O da uzak kapılar ve hava akımlarından olarak windows konumlandırılmış sitenin kirlenme giden toz yayılabilir emin olun.
- Steril aletler ile hayatta kalma ameliyat gerçekleştirin. Ya üreticinin tavsiyesine veya otoklav göre dezenfektan aletleri ıslatın. Kullanıma hazır olan temel steril malzemeleri kullanın.
- Ayrı araçlar işlevlerine göre steril alanlara bulaşmasını önlemeye yardımcı olur.
- Hayvanın karaciğeri erişmek için kesi (orta hat insizyonu) sitesinde etrafında yaklaşık 1 inç tıraş. Ameliyat bölgesinde uzak hayvandan saç çıkarın.
- Tıraştan sonra sabunlu dezenfektan (betadin cerrahi fırçalayın) alanı fırçalayın ve steril PBS solüsyonu ile aşırı dezenfektan silsin. Yaklaşık 5 dakika süren tüm bodur süreci ile, bu birkaç kez yapın. Çıkarın ve kullanılan eldivenler atılır.
- Daha sonra, bu tür Surgic olarak koruyucu giysi değiştirmekal elbisesi, bodur üst ve yüz maskesi. Sonraki cerrahi eldiven takmadan önce doğru fırçalayın solüsyonu ile eller dezenfekte. Not: Bu dökülme ve potansiyel kirleticiler ile cerrahi siteyi kirlenmesine önlemek için gerekli bir adımdır.
2. Cerrahi
- Anestezi tüm süre boyunca sıcaklık için bir dış ısı kaynağı sağlar. Anestezi termoregülasyonun bozuklukları neden olduğundan hayvan bazı hipotermi karşılaşabilirsiniz; Bu nedenle, vücut ısısını muhafaza.
- Ameliyat boyunca sırtında fare yerleştirin.
- Cerrahi bantlar parçaları ile ameliyat masasına ön bacaklarda, arka bacaklarda ve fare kuyruğu sabitleyin.
- Xyphisternum düz bir çizgi kesi hemen aşağı olun.
- Karaciğeri maruz steril kendini istinat cerrahi retraktörü kullanın.
- Bir şırınga yavaş ve dikkatli bir 20G iğne sahip olan 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 içeren PBS 100 ul enjekteKaraciğerin sağ lobunun içine fare HCC hücreleri.
- İğneyi çıkardıktan sonra, bağlı karaciğer yüksek vaskülarite için herhangi bir potansiyel kanamayı durdurmak için en az 1 dakika süreyle steril bir pamuklu çubuk uygulayın.
- Cerrahi klipleri kullanarak cilt kapatılması ve ardından bir emilebilir sütür ile cilt altı dokusu kapatın. Daha sonra, betadin fırçalayın ile bir kez daha yara temizleyin. Not: Bu cerrahi yaranın kapanmasını sağlayacaktır.
- Subkutan serum fizyolojik 100 ul verir.
3. Post-cerrahi
- Ameliyattan hemen sonra, fare durumun bakıcıları bildirmek için bir ameliyat sonrası kimlik kartı ile temiz bir kafes fare aktarın. Su ve yiyecek sağlamak. Not: Bizim tecrübelerimize göre, ilk 24 saatlik süre sonrası ameliyat için ıslak yiyecek ve su ile tek başına ev sahipliği eğer sadece en iyi ücret olacak ameliyat geçirmiş bir fare.
- 38 ºC aşarak değil ısı üreten bir ısı lambası ile hayvan sıcak tutun. UFare tamamen iyileşti kadar sıcaklığını ölçmek için bir termometre se.
- Tercihen kağıt yatak ile bir kafes içinde Evi hayvan konfor sağlamak için.
- İlk kurtarma sonra, rahatsızlık, kanama, ağrı ve sıkıntı belirtileri için hayvan izleyin. Ağrı gidermek için buprenorfini (0.05 -0.1 mg / kg) verin. Yakından yaklaşık 2 saat boyunca aktivitesi, davranış ve görünüm, hem de su ve gıda tüketimi izler. Ayaktan ise, farelerin normal, normal konut için geri alan hayvan taşımak ve 24 saat sonrası ameliyat için 6-12 saat aralıklarla izlemeye devam. İsterseniz bir ağırlık kontrolü yapın.
- Hayvan sorunları iyileşirken sahip Ancak, eğer uygun destekleyici bakım eylemleri. Fareler kurtarmak için yapamıyorsanız, insancıl CO 2 boğulma ve servikal dislokasyon yoluyla fareler euthanize. Ötenazi için onaylanan kurumsal yönergeleri izleyin.
- Post-cerrahi, genellikle observab olan HCC klinik kanıt kontrolvücut kondisyon skoru le olarak anlamlı bir azalma. Not: Bu noktada, bir primer tümör olasılıkla karaciğerde gelişmiş ve metastatik yatakları olasılıkla akciğer gelişmiştir.
- Bu noktada, insani ötenazi deneyde yer alan (deney ve kontrol) tüm fareler kurban. Karbon dioksit ile boğularak fareler Konu: çok yavaş 5 -10 dakikalık bir süre boyunca bölme içine karbon dioksitin bırakın. Bu solunum durmasına neden olur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Balb / c fare karaciğerleri 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücrelerinde implante edildi. HCC gelişme Klinik kanıtlar 63 gün ameliyat sonrası gözlemlenebilir oldu. Sonuç olarak, fare insanca kurban edilmiştir. Otopsi Öldürülen farelerin üstünde gerçekleştirilmiştir. Akciğerler ve karaciğer, resekte edilen ve dikkatli bir brüt incelenmesi makroskopik tümörlerin belirlenmesi için gerçekleştirilmiştir. Bir farede, yüzeysel tümör karın duvarı (Şekil 1A) bazı bağlantı ile karaciğerin yüzeyi üzerinde gözlenmiştir. İkinci bir farede, anormal dönük karaciğer gözlenmiştir. Anormallik çok güçlü bir yüzeysel tümör (Şekil 1B) gibi görünüyor. Beklendiği gibi bir kontrol faresinden alınan bir karaciğer (Şekil 1D) ve akciğer (Şekil 1E) ile kanıtlandığı gibi, BNL 1ME A.7R.1 HCC hücrelerinin herhangi bir implantasyonu ile kontrol grubundaki fareler, herhangi bir tümör geliştirdi. Ayrıca, tümörleri olan farelerin akciğerleri biraz anormal görünüyordu, ekranhemorajik nekroz ing alanları (Şekil 1C). Bir önceki deneyimlere dayanarak, bu akciğerler metastatik mevduat 3 liman olabilir.
Tümör ve metastaz Şekil 1. Kaba inceleme. Balb / c fareleri 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 tümör hücreleri implante edildiği ve 63 gün sonra kurban edilmiştir. Fotoğraflanmış ve burada gösterildi gözlenen Örnek karaciğer tümörleri. (A ve B), her iki yüzeysel karaciğer tümörleri gösterir. (C) (E). Fareler implante tümör hücrelerinden akciğerler. (D) Bir kontrol fare karaciğeri görüntüler bir kontrol akciğerleri gösterir fare. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Hepatosellüler karsinom metastaz "hasta" gibi ortotopik singeneik fare modeli metodolojisi Şekil 2. şematik. Bir kez anestezi, fare karaciğeri 5 X 106 BNL 1ME A.7R.1 fare hepatosellüler karsinom (HCC) hücreleri ile implante edilir. HCC klinik kanıt gözlemlenebilir olduğunda, hayvan (perkütan intrakardiyak kan kaybından ve servikal dislokasyon tarafından takip karbondioksit boğulma tabi) insani ötenazi ile kurban. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu yazıda yöntemin derinlemesine bir açıklama (Şekil 2) son zamanlarda Ogunwobi ve HCC metastazı ortotopik singeneik fare modeli başarılı kuruluş arkadaşları tarafından rapor edildi verilir 3. Bu prosedür için tümörlerin alım oranı yüksektir. Biz daha önce% 100 3 tümör almak oranı gözlemledik. Ancak, take oranı araştırmacının yetkinlik bağlı değişken olabilir. Eğitim altında yeni bir yüksek lisans öğrencisi tarafından gerçekleştirilen son deneyde, tümör almak oranı% 40 gibi düşük oldu. En deneyleri 4 sonlandırıldı rağmen - 3 hafta - vücut kondisyon skoru düşüş nedeniyle 6 hafta, primer tümörleri 2 tarafından kurulabilir aynı farelere aynı hücrelerin deri altı implantasyonu deneyimlerinden inanıyorum. Biz genellikle başarılı Denemeden bir tümör nodülü görmek için bekliyoruz. Akciğer metastazı 4 arasında geliştirmek için bekliyoruz rağmen - 6 hafta, bu conceiv olduğunukaraciğerde tümör çok daha erken gerçekleşebilir olduğunu edebiliyoruz.
İyi cerrahi teknikler ve aseptik koşullar bu hayatta kalma cerrahi yöntemin başarısı için esastır. Sağkalım cerrahisinde kullanılan fareler sağlıklı olması gerekir. Öncesi ve sonrası ameliyat Tartı iyi bir uygulamadır. Farelerin ortalama öncesi cerrahi ağırlıkları kullanılan veya en son deney ortalama ağırlığı sadece 22 gram 18 gram ve deneysel sonu noktasında (63 gün sonrası cerrahi implantasyon). Nedeniyle tümörün sistemik hastalık kilo bazı düşüş vardı, çünkü o dönemde ağırlığının sadece 4 gram kazanç muhtemeldir. Biz bu daha objektif bir değerlendirme biz deney boyunca bir veya iki kez haftada fare ağırlığını ölçülen vardı olurdu. Bu en iyi uygulama önerilir.
Şekil 2'de özetlendiği gibi, fareler yeterince acı a önlemek için ameliyat süresi ameliyat öncesi ve süresince anestezi gerekir nd sıkıntı. Alan tüm dağınıklığı ücretsiz olmalı ve erişimi yalnızca cerrahi yapanlara mevcut olmalıdır. Hem kullanılan cerrahi alanı yanı sıra enstrümanlar steril olmalıdır.
Implantasyon başarısı için önemli bir aşama da implante edilecek BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücrelerinin hazırlanmasıdır. Hazırlanması sırasında, bu birleşen hücre kültürleri yemekleri hücrelerin toplanması kirlenmesini önlemek için çok önemlidir. Bu adımlar, steril koşullar altında, bir hücre kültürü kaputu yapılmalıdır. Bir hücre sayısı da 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücrelerinin 100 ul fosfat tamponlu tuz (PBS) içinde yeniden süspansiyon haline getirilmiş olan, fare başına steril bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içinde toplanmıştır sağlamak için yapılmalıdır. Tripan mavi boyama, isteğe bağlı olarak hücrelerin canlılığı teyit etmek için yapılabilir. Bu hücreler, farelerin karaciğerinde implantasyondan önce 2 saat daha uzun buz üzerinde tutulmalıdır.
_content "> kanser hücrelerinin implantasyonu nedeniyle karaciğer hassas doğası (Şekil 2) dikkatle ele alınmalıdır. Kanser hücrelerinin enjekte sırasında, tüm karaciğer geçiyor iğne neden olabilir çok derin bir delik önlemek . Bu iğne alınmasından sonra çekilmesi. Diğer taraftan, enjeksiyondan önce bir iğne ile çok sığ bir delinme olasılıkla periton boşluğuna enjekte üzerinden kanser hücrelerinin dökülme neden olur. Aynı zamanda, yavaş ve dikkatli bir şekilde, kanser hücreleri enjekte esastır dışarı kanama organının bir potansiyel nedeniyle yüksek damarlanma için her zaman vardır. Bu nedenle, en az 1 dakika süreyle steril pamuklu çubukla uygulanarak tavsiye edilir. Bakım ve dikkat implantasyon başarı oranı en yüksek sağlayacaktır. Hayvan da sağlanmalıdır hipotermi gibi prosedür boyunca ısı dış kaynak anestezi sırasında termoregülasyonun bozuklukları neden olan önemli bir husustur. Post-cerrahi, hayvan açısından izlenmelidirrahatsızlık veya ağrı herhangi bir işaret bu noktada uygun bakım uygulanmalıdır. Fare ameliyat iyileşmek mümkün ise, insanca ötenazi edilmelidir.Kanser metastazı kanseri ölüm birincil nedeni olduğu gibi, kan yoluyla yayılması 2-4 mekanizmaları tasvir için çok önemlidir. Yeni dolaşımdaki tümör hücrelerinin metastazı HCC 3 bu ortotopik singeneik fare modeli kurulmuştur. Ayrıca bu modelde elde edilen kapalı zaman eğrilerinin sürekli olarak tümör başlaması ve metastatik yeteneği 3 artış göstermektedir. Onlar belirli bir moleküler faktörler, işaretleri ve kanser metastazı 2-4 olası terapötik hedefler çözülmeye yardımcı olarak bu yöntemi kullanarak izole dolaşan tümör hücreleri çok önemli olduğunu kanıtlayabilir. Bu metodoloji, daha önce kıyasla dolaşımdaki tümör hücrelerinin hepatosit büyüme faktörü (HGF) ve reseptörü, c-Met upregülasyonunu artmış olduğunu belirlemiştirHCC 3 primer tümör hücreleri. Bu sonuçlar, tümör metastazı önemli bir yönü epitelyal-mezenkimal geçiş 2-4,10 hücresel süreç olduğunu gösteren önceki çalışmaları üzerine inşa. Bu roman modeli kullanarak ayrıntılı karakterize dolaşan tümör hücreleri böylece HCC 1-3,10 daha etkin yönetiminin geliştirilmesine yol açan süreci teşvik faktörlerin karmaşık mekanizmalar anlayışımızı artacaktır.
Şu anda, en yaygın şekilde kullanılan bir hayvan tümör modelleri, insan tümör hücreleri, bağışıklık eksikliği farelere implante edilir ki burada fare ksenograft tümör modelleri vardır. Bu nedenle, tümör metastazı 3 immün sistemin rolü üzerinde çalışılması için müsait singeneik olup, çünkü bu makalede açıklanan model önemli avantajlara sahiptir. Bu model, izole kültürlenmesini ve canlı dolaşımdaki tümör hücrelerinin 3 çalışmaları için oldukça üretilebilir olduğu kanıtlanmıştır. Dolayısıyla, tremen ettitarama, tanı, prognoz, tedavi izleme ve yeni tedavi stratejilerinin keşfi gibi klinik uygulamalar değerlendirmek için dous potansiyeli. Yukarıda tarif edilen metodoloji bir sınırlaması farelere implante BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücrelerinin önemli bir bölümü hayatta kalamaz olacak ve böylece hücrelerin sadece küçük bir kısmı tümörü getirmeyi uygulanabilir ve usta olmasıdır İkincil siteler 3. Biz fare başına 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 fare HCC hücrelerinin ilk implantasyonu ile bu sınırlama oluşturmaktadır.
Sonuç olarak, metastatik solid organ bu kanser ortotopik singeneik fare modeli kanser hastalarında 3 kanında dolaşan tümör hücrelerinin metastazı özelliği biyolojik mekanizmaları ortaya çıkartılması için iyi bir platform sağlar. Kanser metastazı hema aracılığıyla öncelikle oluşur sırayla Bu büyük olasılıkla kanser metastaz mekanizmalarına yeni bakış açıları tutacaktogenous 11-13 yayıldı. Böylece kanser metastaz mekanizmalarına kazanmış Roman anlayışlar yeni yararlı klinik uygulamaların 3,14,15 gelişmesine önemli olacaktır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro Dissecting Tweezer | Roboz | (RS-5040) | Tip 0.20 x 0.12 mm |
| Graefe Micro Dissecting Forceps, serrated curved tip | Roboz | (RS-5111) | 1 X 2 teeth, curved tip width 0.6 mm |
| Micro Dissecting Retractor-Agricola (3 by 3 prongs) | Roboz | (RS-6501) | Blunt 3 X 3 prongs, depth 4 mm, spread 25 mm |
| Micro Dissecting Retractor-Goldstein (3 by 3 prongs) | Roboz | (RS-6503) | Blunt, 3 X 3 prongs, depth 4 mm, spread 19 mm |
| Jameson Caliper (Measures tumors) | Roboz | (RS-6466) | 80 mm/3 inch scale, chrome plated |
| Micro Dissecting Scissors, large ring sissors, straight and sharp | Roboz | (RS-5852) | 23 mm blades, length 4 inches, flat shanks and large rings |
| Scalpel with blades, for delicate dissecting procedures | Roboz | (RS-9861-36) | |
| Scalpel handle | Roboz | (RS-9884) | Solid |
| Littauer Stitch Sissors | Roboz | (RS-7074) | Length 4.5 inches |
| Brown needle holder, for easy suture tying | Roboz | (RS-7960) | Convex jaw, fine serrations |
| Reflex 7MM wound clips with reflex 7 clip applier | Roboz | (RS-9262) | safe, secure alternative method of wound closure |
| Instrument tray and lid | Roboz | RT-1350S | |
| Mini-clipper with detachable blade | Roboz | (RS-5903) | |
| Germinator 500 (the Germ Terminator) Dry Sterilizer | Roboz | Ds-400, Ds-401, DS-501 | For fast decontamination of micro-dissecting instruments. Instruments decontaminate within 15 sec. |
| Microinjection needles | VWR | BD305125 | 25G Needle |
References
- Sheng, W., et al. Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip. Lab on a Chip. 14, 89-98 (2014).
- Ogunwobi, O. O., Liu, C. Therapeutic and prognostic importance of epithelial-mesenchymal transition in liver cancers: insights from experimental models. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 83, 319-328 (2012).
- Ogunwobi, O. O., Puszyk, W., Dong, H. J., Liu, C. Epigenetic upregulation of HGF and c-Met drives metastasis in hepatocellular carcinoma. PloS One. 8, e63765 (2013).
- Ogunwobi, O. O., Liu, C. Hepatocyte growth factor upregulation promotes carcinogenesis and epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma via Akt and COX-2 pathways. Clinical and Experimental Metastasis. 28, 721-731 (2011).
- Fujiwara, S., et al. A novel animal model for in vivo study of liver cancer metastasis. World Journal of Gastroenterology : WJG. 18, 3875-3882 (2012).
- Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis. Nature Reviews Cancer. 11, 512-522 (2011).
- Heindryckx, F., Colle, I., Van Vlierberghe, H. Experimental mouse models for hepatocellular carcinoma research. International Journal of Experimental Pathology. 90, 367-386 (2009).
- Zhang, L., et al. An in vivo mouse model of metastatic human thyroid cancer. Thyroid Official Journal of the American Thyroid Association. 24, 695-704 (2014).
- Menezes, M. E., et al. Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer. Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).
- Ogunwobi, O. O., Wang, T., Zhang, L., Liu, C. Cyclooxygenase-2 and Akt mediate multiple growth-factor-induced epithelial-mesenchymal transition in human hepatocellular carcinoma. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 27, 566-578 (2012).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. The hallmarks of cancer. Cell. 100, 57-70 (2000).
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nature Reviews Cancer. 2, 563-572 (2002).
- Kim, M. Y., et al. Tumor self-seeding by circulating cancer cells. Cell. 139, 1315-1326 (2009).
- Stolpe, A., Pantel, K., Sleijfer, S., Terstappen, L. W., den Toonder, J. M. Circulating tumor cell isolation and diagnostics: toward routine clinical use. Cancer Research. 71, 5955-5960 (2011).
- Saad, F., Pantel, K. The current role of circulating tumor cells in the diagnosis and management of bone metastases in advanced prostate cancer. Future Oncology. 8, 321-331 (2012).
