Introduction
Les polymères poreux de coordination (PCP) sont des composés de coordination basé sur des centres métalliques reliés par des ligands organiques de répéter les entités de coordination étendant dans une, deux ou trois dimensions qui peut être amorphe ou cristallin 3.1. Au cours des dernières années, cette classe de matériaux poreux a attiré une large attention en raison de leur porosité élevée, large accordabilité chimique et leur stabilité. PCP ont été explorées pour une gamme d'applications, y compris le stockage de gaz, la séparation de gaz, et la catalyse 3-6, et très récemment, les premières applications analytiques du PCP ont été décrits 7.
En raison de leur fonctionnalité chimique et haute porosité PCP améliorées ont été ciblés pour leur potentiel énorme pour l'amélioration des procédés de purification et de séparations chromatographiques, et un certain nombre de rapports concernant ce sujet ont été publiés 7-13. Toutefois, la performance des médecins généralistes ne sont pas actuellement à un equivaleniveau nt avec des matériaux chromatographiques existantes probablement en raison de la diffusion rapide grâce à de grands vides interparticulaires dans un garnissage de ces solides en raison de leurs morphologies généralement de forme irrégulière de leurs particules ou de cristaux. Cet emballage irrégulièrement répartis conduit à une performance plus faible que prévu, ainsi que les contre-pressions de haute colonne et indésirables morphologies de forme de pic 14,15.
Afin de résoudre le problème de la diffusion rapide à travers les vides entre les particules et de façon concomitante améliorer les performances des produits de soins personnels pour des applications d'analyse, l'élaboration d'un matériau hybride à base d'un monolithe de polymère macroporeux 16 qui contient le PCP sur la surface des macropores serait souhaitable. monolithes de polymères sont autonomes, les matériaux d'une seule pièce qui peuvent soutenir les flux de convection à travers leurs pores, ce qui les rend l'une des alternatives les plus efficaces à perler emballages et ont été commercialisés avec succès par plusieurs c es entreprises 17,18. Monolithes poreux de polymère sont généralement basés sur la polymérisation d'un monomère et un agent de réticulation en présence d'agents porogènes, qui sont typiquement des mélanges binaires de solvants organiques. Les matériaux monolithiques obtenus présentent une structure de microglobular et une porosité et une perméabilité élevée à l'écoulement.
Une approche simple pour unifier ces matériaux pour préparer un monolithe de polymère contenant un PCP est basée sur l'addition directe de produits de soins personnels tels que synthétisés dans le mélange de polymérisation du monolithe. Cette approche conduit à PCP plupart enterré dans un échafaudage de polymère, et ne pas être actif pour l'application ultérieure du matériau final 14,15. Une approche synthétique différente est clairement nécessaire afin de, par exemple, développer des films uniformes de PCP ou des cadres organiques de métaux cristallins (MOF) où la majorité des pores contenus dans le cristal sont accessibles depuis les macropores du monolithe polymère.
t "> Nous rapportons ici un protocole simple pour la préparation d'un matériau hybride de polymère organique de métal (MSP) basé sur un support polymère macroporeux avec des groupes fonctionnels appropriés pour la fixation des médecins généralistes, qui peuvent être facilement mises en œuvre comme un autonome unique -Pièce monolithe polymère sous forme de colonne avec des propriétés optimales pour des applications dynamiques. Le mode opératoire de synthèse de polymère est suivie d'une solution sur la base de la température ambiante simple, Procédé pour faire croître une couche de PCP sur la surface interne des pores du monolithe de 19 à 20. En tant que premier exemple, on décrit la préparation d'un film de polymère de coordination de fer (III) benzènetricarboxylate (FeBTC) dans un poly macroporeux (styrène-acide méthacrylique-divinylbenzène) monolithe. Ce procédé est efficace pour la préparation de poudres en vrac ainsi que des colonnes capillaires et le protocole décrit est facilement réalisable pour d'autres produits de soins personnels. A titre d'exemple du potentiel de MSPA comme matériaux fonctionnels pour l'écoulement through applications, nous avons appliqué le MDSP FeBTC développé qui contient un revêtement dense de Fe (III) pour enrichir phosphopeptides centres de mélanges de protéines digérées exploitant l'affinité de liaison de phosphopeptides de Fe (III). Le protocole mis au point 21 comprend trois parties principales: la préparation du polymère organique support monolithique macroporeuse; la croissance de la couche de PPC sur la surface des pores du monolithe; demande de l'enrichissement de phosphopeptides.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
NOTE: Avant de commencer, vérifiez que toutes les feuilles de données pertinentes matérielles (FS). Plusieurs des produits chimiques utilisés dans les procédures de synthèse et d'application sont toxiques. S'il vous plaît suivre toutes les pratiques de sécurité appropriées et utiliser l'équipement de protection adéquat (blouse, pantalon pleine longueur, des chaussures fermées, des lunettes de sécurité, gants). S'il vous plaît utiliser tous les équipements de protection individuelle cryogénique lors de la manipulation de l'azote liquide pour les mesures d'adsorption d'azote (gants isolants, écran facial).
1. poreux Polymer Monolith Préparation en vrac et colonne capillaire Format
- Bulk Polymer Monolith pour la caractérisation
- Purifier le styrène, le divinylbenzène et l'acide méthacrylique à travers une colonne d'alumine basique, afin d'éliminer les inhibiteurs de polymérisation. Placez 10 g d'alumine basique dans un ml seringue en plastique jetable 25 avec un bouchon de fibres de laine de verre emballé dans l'embout de la seringue. Percoler à environ 10 ml du monomère à travers la colonne.
- Charger les monomères de styrène (50 mg, 100 mg et 50 mg divinylbenzène acide méthacrylique) et les agents formant des pores (300 mg de toluène et 300 mg isooctane) dans un flacon de 1 ml en verre. Ajouter l'initiateur de la polymérisation, 4 mg de 2,2'-azobisisobutyronitrile (AIBN, 1% par rapport aux monomères).
- Homogénéiser par sonication pendant 10 min. Éliminer l'oxygène dissous par barbotage d'azote à travers le liquide pendant 10 minutes. Sceller le bouchon du flacon avec un film de paraffine et placer dans un bain d'eau à 60 ° C pendant 6 heures pour polymériser le mélange.
- Refroidir à la température ambiante et de briser le flacon soigneusement. Transférer le monolithe de polymère dans une cartouche d'extraction en cellulose. Placer la cartouche d'extraction dans une chambre d'extraction Soxhlet et l'assembler à un ballon à fond rond contenant un volume de methanol, qui est au moins trois fois le volume de la chambre d'extraction. Assemblage d'un condenseur à la partie supérieure de la chambre d'extraction. Réaliser une extraction Soxhlet en faisant bouillir le méthanolpendant 16 heures, en veillant à l'élimination complète des monomères non réagis et des agents formant des pores.
- Sécher toute la nuit dans une étuve à vide à 60 ° C. Confirmer la présence de groupes fonctionnels carboxyliques pour fixer la PCP par spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier (FT-IR). Mesurer la surface par adsorption d'azote porosimétrie.
- Fonctionnalisation de silice capillaires pour la préparation de colonnes monolithiques
- Couper 2 m d'un 100 um id silice fondue capillaire de polyimide revêtu. Connectez-le à une seringue en verre de 0,25-0,50 ml et laver le capillaire avec de l'acétone. Retirer l'acétone par rinçage du capillaire avec de l'eau.
- Pour activer le revêtement interne de silice du capillaire, en utilisant une pompe à seringue à couler une solution 0,2 M de NaOH aqueux à 0,25 ul / min pendant 30 min. Rincer à l'eau jusqu'à ce que l'effluent soit neutre.
- Utiliser des bandes de papier pH pour vérifier pH de l'effluent. Afin de protoner les groupes silanol du capillaire, une pompe Aqueo 0,2 Mune solution de HCl nous à travers le capillaire à 0,25 ul / min pendant 30 min. Rincer à l'eau jusqu'à ce que l'effluent soit neutre. Rincez avec de l'éthanol.
- Pompe à 20% (p / p) de solution éthanolique d'acide 3- (triméthoxysilyl) propyl méthacrylate (pH ajusté avec de l'acide 5 acétique) à 0,25 ul / min pendant 1 heure. Dans cette étape, le capillaire en silice est fonctionnalisée par des groupes vinyle dans le but de fixer le monolithe de polymère à la surface intérieure capillaire.
- Rincez avec de l'acétone et au sec dans un courant d'azote et le laisser à température ambiante pendant une nuit avant de l'utiliser. Couper le capillaire dans des pièces plus courtes de longueur 20 cm.
- Préparation des colonnes monolithiques capillaires
- Préparer un mélange de polymérisation identique à celui pour le monolithe de polymère en masse (section 1.1) dans une fiole en verre de 1 ml avec un septum en caoutchouc. Ajouter initiateur 1% par rapport à AIBN monomères. Homogénéiser par sonication pendant 10 min.
- Purger le mélange de polymérisation avec de l'azote par couplage d'un capillaire en silice non-fonctionnalisépour un courant d'azote.
- Insérer le capillaire de courant d'azote à travers le septum en caoutchouc du flacon et plonger dans le mélange de polymérisation de sorte que l'atome d'azote barbote à travers le liquide. Laissez le bouchon du flacon un peu lâche pour éviter une surpression. Purger pendant 10 min.
- Soulevez le capillaire de flux d'azote dans le mélange de polymérisation à l'espace de tête de la fiole, et fermer hermétiquement le bouchon. Insérer un capillaire fonctionnalisé à travers le septum dans le mélange de polymérisation. L'excès de pression dans le capillaire générée par l'azote injecté dans l'espace de tête pompe le mélange de polymérisation à travers le capillaire fonctionnalisé.
- Recueillir quelques gouttes de mélange de polymérisation à partir de l'effluent du capillaire pour qu'il soit complètement rempli et refermer avec un septum en caoutchouc. Prenez le capillaire du flacon très soigneusement et fermer l'entrée du capillaire avec un septum en caoutchouc.
- Polymériser le mélangeture contenu dans le capillaire dans un bain d'eau à 60 ° C pendant 6 heures. Refroidir à la température ambiante et de couper quelques millimètres des deux extrémités du capillaire. Éliminer les monomères non réagis et des agents formant des pores en rinçant la colonne avec de l'acétonitrile en utilisant une pompe de CLHP à 3 ul / min pendant 30 min. Vérifier la contre-pression de la colonne capillaire.
2. Croissance du Fer-benzenetrycarboxylate (FeBTC) PCP
- La croissance de l'FeBTC MSP sur un polymère Monolith en vrac pour la caractérisation
- Broyer le monolithe préalablement séché en utilisant un mortier et un pilon.
- Immerger 100 mg de la poudre de monolithe dans 5 ml de 2 mM de FeCl 3 · 6H 2 O dans de l'éthanol pendant 15 min. On filtre sous vide en utilisant un filtre en nylon (0,22 um) et laver la poudre avec de l'éthanol. Immerger la poudre de monolithe dans 5 ml d'acide 2 mM de 1,3,5-benzène tricarboxylique (BTC) dans de l'éthanol pendant 15 min. On filtre sous vide en utilisant un filtre en nylon (0,22 um) et laver la poudre avec de l'éthanol.
- Répétez l'étape numéro 2 comme vous le souhaitez. La croissance de la couche organique de métal-finale sera définie par le nombre de cycles appliqués. En règle générale, entre 10 et 30 cycles sont effectués. Confirmer la présence de nouveaux pores par adsorption d'azote porosimétrie. Mesurer la quantité de sites métalliques supplémentaires par analyse thermogravimétrique (TGA).
- La croissance de la FeBTC MDSP sur une colonne monolithique capillaire pour l'enrichissement de phosphopeptides
- En utilisant une pompe à seringue. Rincer le monolithe capillaire avec 2 mM de FeCl 3 · 6H 2 O dans de l'éthanol pendant 15 min à 2 ul / min. Laver avec de l'éthanol pendant 15 min à 2 ul / min. Rincer le monolithe avec un capillaire BTC 2 mM dans de l'éthanol pendant 15 min à 2 ul / min. Laver avec de l'éthanol pendant 15 min à 2 ul / min.
- Répétez l'étape 1 comme on le souhaite. La croissance de la couche organique de métal final sera défini par le nombre de cycles effectués.
3. la digestion des protéines et Enrichment de Phosphopeptides
- La digestion des protéines
- Dissoudre 0,5 ml de lait écrémé dans 1 ml d'eau et le diviser en fractions de 200 pi.
- Pour la digestion de la protéine ajouter 160 ul de 1 M de bicarbonate d'ammonium 50 mM de dithiothréitol et 45 ul de chaque fraction, afin de cliver les liaisons disulfure. Incuber à 50 ° C dans un Thermomixer pendant 15 min.
- Ajouter peu à peu 50 ul d'une solution aqueuse d'iodoacétamide 100 mM, tandis que la solution a été refroidie jusqu'à la température ambiante. Iodoacetamide permettra d'éviter la formation de nouvelles liaisons disulfures.
- Incuber dans l'obscurité pendant 15 min à température ambiante. Ajouter 1 ml d'eau déminéralisée. Ajouter 2 ug de trypsine et digérer les protéines dans un Thermomixer à 37 ° C pendant 14 h.
- Mettre fin à la digestion par acidification avec 10 pi d'acide trifluoroacétique à 1%, et de le placer dans le Thermomixer pendant 5 min à température ambiante. Stocker les protéines digérées à -20 ° C.
- Enrichissement de phosphopeptides en utilisant une colonne capillaire de MSP.
- Rincer la colonne avec 100 ul d'un mélange 4: 1 d'acétonitrile contenant un acide trifluoroacétique à 0,1% pendant 10 min à un débit de 1 pl / min. Pomper la digestion des protéines à travers la colonne à 2 ul / min pendant 30 min.
- Laver les peptides non phosphorylés à nouveau avec un mélange 4: 1 d'acétonitrile contenant un acide trifluoroacétique à 0,1% pendant 10 min à un débit de 1 pl / min. Laver à l'eau pendant 10 min à un débit de 1 pl / min.
- Phosphopeptides éluées en utilisant une solution tampon de phosphate pH 7 250 mM pompé à 1 pl / min pendant 15 min. Recueillir l'éluant dans un flacon et dessaler la solution en utilisant un protocole standard de 19. Préparer un acide / ml de 2,5-dihydroxybenzoïque 2 mg de l'utiliser en tant que matrice pour la spectrométrie laser assistée par matrice de désorption / ionisation à temps de vol de masse (MALDI-TOF-MS). Dessiné 2 pi de l'acide 2,5-dihydroxybenzoïque dans la pointe pour éluer le phosphopeptides et repèrent directement sur la plaque MALDI.
- Analyser les taches par MALDI-TOF-MS et régénérer la colonne Bien rincer avec de l'eau puis méthanol.
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Representative Results
Une illustration schématique de l'évolution de la PCP sur la surface des pores du monolithe de polymère organique est représenté sur la Figure 1. Sur cette figure, on illustre la première Fe (III) atomes retenus sur la surface des pores du monolithe de polymère initial coordonné à groupes fonctionnels carboxyliques . En utilisant le protocole décrit ligand organique présent mémoire supplémentaire et Fe ions (III) sont ajoutés à la surface, formant un réseau de coordination poreux à l'intérieur du monolithe de polymère. La figure 1 montre aussi schématiquement l'utilisation de la colonne capillaire de MDSP préparé comme support d'un écoulement pour la enrichissement de phosphopeptides. zone de surface et des mesures de distribution des pores, une image de microscopie électronique à balayage (SEM), FT-IR et de TGA ont été recueillies pour les matériaux préparés (figure 2). Ces expériences de caractérisation fourni des informations précieuses sur l'apparition de nouveaux pores après la croissance de l'FeBTC PCP (figure 2A). Le MOrphology de la matière après la modification avec FeBTC PCP est représenté sur la figure 2B. Sur la base de la simulation cristallographique, l'épaisseur de la couche MOF chaque individu est estimée à 3 et 5 Å, en fonction de l'orientation du cristal en croissance. Les spectres FT-IR montrent la présence de groupes fonctionnels dans le polymère monolithe de telle qu'obtenue par synthèse et ses homologues modifiés avec différents nombres de cycles FeBTC (figure 2C). TGA montre la stabilité thermique et à l'augmentation des sites métalliques (Figure 2D) obtenues après modification du monolithe polymère d'origine. Le résidu à 600 ° C est α-Fe 2 O 3, tel que confirmé par diffraction de poudre aux rayons X. La présence de fer dans le format de colonne capillaire est détectée par spectroscopie à dispersion d'énergie aux rayons X 21. La figure 3 montre un exemple d'application d'un échantillon réel du matériau de MDSP développé pour l'enrichissement de phosphopeptides à partir deune digestion du lait écrémé.
Figure 1:. Scheme (A) Illustration montrant les principales étapes de la préparation d'une colonne capillaire MSP pour l'extraction de phosphopeptides. (B) Illustration de la procédure pour l'extraction de phosphopeptides utilisant la colonne MOPH préparé.
Figure 2: résultats de caractérisation en vrac FeBTC MDSP isothermes (A) de distribution de taille des pores et d'adsorption d'azote du monolithe polymère organique d'origine et le MDSP après 30 cycles de coordination.. L'image (B) SEM de la MSP après 30 cycles de coordination. (C) des spectres FT-IR de la monolithe polymère d'origine et le MDSP après 10, 20 et 30 cycles de coordination. (D) TGA du monolithe polymère d'origine après un seul lavage avec la solution de précurseur métallique, et après 10, 20 et 30 cycles de coordination. (Adapté de ref. 21 avec la permission de John Wiley & Sons.)
Figure 3: Enrichissement de phosphopeptides de lait à l'aide d'un MALDI-TOF MS-spectres d'un échantillon de lait écrémé digéré capillaire FeBTC MOPH colonne avant et après l'enrichissement à l'aide d'une colonne capillaire de MSP après 10 FeBTC cycles de coordination.. Pics MS résultant de phosphopeptides sont indiqués par des astérisques, tandis que des fragments déphosphorylés sont indiqués avec des hashs. Phosphopeptides ont été attribués à l'aide des références de la littérature 23-27. (Tiré de ref. 21 avec la permission de John Wiley & Sons.)
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Discussion
Le monolithe de polymère d'origine contient des groupes fonctionnels carboxyliques capables de se lier aux métaux. Coordonner les sites métalliques initiales sur le matériau d'origine, nous sommes en mesure de développer un revêtement de PCP (figure 1A), intégrant un certain nombre de sites métalliques supplémentaires de mise en forme d'un réseau microporeux. Cela rend les matériaux de MDSP présentés attractifs pour les procédures d'extraction ou de purification, où les espèces métalliques sont impliqués, tels que la technique de chromatographie d'affinité métal-ionique immobilisé (IMAC). Le mode opératoire général utilisant une colonne capillaire pour l'enrichissement de phosphopeptides est représenté sur la figure 1B.
La préparation des monolithes de poudre en vrac a permis la caractérisation du matériau monolithique d'origine et ses homologues modifiés. Nous avons mesuré les N 2 isothermes d'absorption à 77 K (figure 2A), qui montre que, après 30 cycles de PCP le N 2 d'absorption à faible P / P o largementaugmenté, ce qui indique la présence de nouveaux micropores dans le matériau. La surface des augmentations de monolithes d'origine près de quatre fois, à partir de 106 m 2 / g à 389 m 2 / g. Il suffit d'effectuer un petit nombre de cycles (10 cycles PCP) une augmentation de la porosité du matériau à une surface spécifique de 156 m 2 / g a été mesurée. La préparation de matériaux poreux en utilisant l'approche détaillée ne se limite pas à PCP à base de fer. La substitution de Fe par Cu, à seulement 10 cycles du revêtement résultant CuBTC ont été nécessaires pour accroître l'aire de surface de la MSP à partir de 106 m 2 / g à 219 m 2 / g. Les nouveaux pores présents dans le matériau modifié ont un diamètre inférieur à 3 nm comme représenté dans la distribution de taille de pore (figure 2A). La répartition de la couche de PPC sur la surface du monolithe de polymère a été examinée par MEB. La figure 2B, montre un monolithe après 30 cycles de PCP, qui se compose d'une structure poreuse à base d'un microglobular réseau, conservant ainsi la morphologie initiale du monolithe polymère d'origine. Les grandes méso- et macropores restent intactes après modification en maintenant les excellentes propriétés d'écoulement du monolithe polymère organique. Utilisation de FT-IR, nous avons confirmé l'incorporation initiale de groupes fonctionnels carboxyliques (bande à 1 707 cm -1) pour la fixation de la FeBTC PCP, ainsi que de suivre la croissance du revêtement par l'augmentation des bandes 1382, 1449, 1627 et 3400 cm - 1 (figure 2C). Exécution TGA nous avons mesuré l'augmentation de la quantité de Fe (III) dans le matériau (figure 2D). Utilisation de poudre de diffraction des rayons X nous avons confirmé que le résidu TGA à 600 ° C est α-Fe 2 O 3, et sur la base de la masse du résidu, on calcule le% en masse de Fe sur le monolithe polymère d'origine et les MSPA. A titre d'exemple indicatif, le% Fe initiale sur le monolithe initial est de 1,1%, et cette valeur a augmenté à 10,5% par uneprès avoir 30 cycles de PCP.
La préparation de MSPA est facilement adaptable à un format de colonne capillaire pour le développement de l'écoulement à travers les applications. Dans ce cas, le MSP préparés contenant une abondance élevée de Fe (III) sites sur la surface des pores en fait un excellent candidat pour l'enrichissement de l'IMAC faibles phosphopeptides abondantes. On observe une augmentation progressive de la performance de la matière d'origine lorsque le support immobilisé avec Fe (III), est comparé à un support analogue au bout de 5 ou 10 cycles de 21 PCP. L'étape critique dans la préparation d'une colonne capillaire de MSP consiste à veiller à ce que le nombre de cycles du polymère de coordination FeBTC est approprié pour l'application ultérieure de la colonne MDSP. A titre d'exemple, la figure 3 montre le résultat obtenu pour l'enrichissement de phosphopeptides de digérée lait écrémé commercial, en utilisant une colonne capillaire de MDSP. Dans cet exemple, une colonne de MDSP après 10 cycles FeBTC présentait unesélectivité remarquable pour phosphopeptides. Par une analyse directe de l'échantillon sans enrichissement, aucun des faibles phosphopeptides abondantes sont détectés. Après l'enrichissement de l'échantillon en utilisant le même matériau de MDSP développé, 12 phosphopeptides différents sont extraits de manière sélective permettant leur détection satisfaisante. La capacité d'une colonne capillaire modifié avec 30 cycles est de 3,25 umol FeBTC ATP / ml, ce qui est supérieur à disponibles dans le commerce gels d'affinité de fer à base d'acide nitriloacétique 28. La MSP développé à base de fer peut être potentiellement réalisable pour l'extraction d'autres composés organophosphorés, tels que les pesticides organophosphorés et des agents neurotoxiques. La sélectivité de la MSP vers enrichissement de biomolécules peut être réglée par la sélection d'un métal avec des propriétés de liaison différentes pour la préparation du polymère de coordination.
Nous avons démontré une procédure simple pour la croissance des revêtements très poreux PCP en un monolithe de polymère poreux, quiest le premier exemple d'un support à écoulement continu contenant un revêtement fonctionnel PCP uniformément les macropores polymères. Les MSPA résultant de surmonter la limitation de diffusion de transport de masse associée à l'écoulement à travers les vides entre les particules, ainsi que la pénétration dans les pores de petits solides poreux, lorsqu'elles sont emballées dans un format de colonne ou sont noyés dans les polymères poreux. Nous avons montré l'utilité de ces matériaux pour l'enrichissement de phosphopeptides par IMAC. La procédure présentée ici peut être implémentée en utilisant de nombreux médecins généralistes et des matériaux similaires. La principale limitation de cette technique est laborieuse la préparation manuelle du revêtement. Cependant, la recherche actuelle par les auteurs se concentre vers l'automatisation de cette méthode en utilisant des techniques d'écoulement commandés par ordinateur.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polyimide-coated capillaries | Polymicro Technologies | TSP100375 | 100 μm i.d. |
| 3-(trimethoxysilyl)propyl methacrylate, 98% | Sigma-Aldrich | 440159 | |
| Styrene, 99% | Sigma-Aldrich | W323306 | Technical grade |
| Divinylbenzene, 80% | Sigma-Aldrich | 414565 | |
| Methacrylic acid, 98% | Mallinckrodt | MK150659 | |
| Toluene, ≥99.5% | EMD chemicals | MTX0735-6 | |
| Isooctane, ≥99.5% | Sigma-Aldrich | 650439 | |
| 2,2'-azobisisobutyronitrile, 98% | Sigma-Aldrich | 441090 | |
| Aluminium oxide (basic alumina) | Sigma-Aldrich | 199443 | |
| Iron (III) chloride hexahydrate, 97% | Sigma-Aldrich | 236489 | |
| 1,3,5-benzenetrycarboxylic acid, 95% | Sigma-Aldrich | 482749 | |
| Acetonitrile, ≥99.5% | Sigma-Aldrich | 360457 | |
| Ammonium bicarbonate, ≥99.5% | Sigma-Aldrich | 9830 | |
| Trifluoroacetic acid, ≥99% | Sigma-Aldrich | 302031 | |
| Ethanol, ≥99.8% | Sigma-Aldrich | 2854 | |
| Iodoacetamide, ≥99% | Sigma-Aldrich | I1149 | |
| Dithiothreitol, ≥99% | Sigma-Aldrich | 43819 | |
| Monobasic sodium phosphate dihydrate, ≥99% | Sigma-Aldrich | 71505 | |
| Dibasic sodium phosphate dihydrate, ≥99% | Sigma-Aldrich | 71643 | |
| Phosphoric acid, ≥85% | Sigma-Aldrich | 438081 | |
| 2,5-dihydroxybenzoic acid, ≥99% | Sigma-Aldrich | 85707 | |
| Trypsin | Sigma-Aldrich | T8003 | Bovine pancreas |
| β-casein | Sigma-Aldrich | C6905 | Bovine milk |
| ZipTip pipette tips | Merck Millipore | ZTC18S096 | C18 resin |
References
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