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Behavior

एक दो विकल्प प्लेबैक परीक्षण का उपयोग कर चूहे में अल्ट्रासोनिक वोकलिज़ेशन प्राथमिकताएं निर्धारण

Published: September 3, 2015 doi: 10.3791/53074

Introduction

कई जानवरों intraspecific संचार के लिए स्वरों के उच्चारण का उपयोग करें। माउस मस मस्कुलस में, संचार संकेत में से एक महत्वपूर्ण प्रकार 20 किलो हर्ट्ज से अधिक आवृत्तियों है जो अल्ट्रासोनिक स्वरों के उच्चारण (USVs), है। चूहों द्वारा उत्सर्जित USVs स्त्री-पुरुष, 1-4 महिला-महिला 1, 5, और पुरुष पुरुष 1, 6 बातचीत में सामाजिक मान्यता का एक घटक माना जाता है। USVs वे उसे पिल्ला-पुन: प्राप्त करने व्यवहार बढ़ जाती है जो उनकी मां से अलग कर रहे हैं, जब भी पिल्ले द्वारा उत्सर्जित, और इसलिए अस्तित्व 7 पिल्ला कर रहे हैं। कई रिपोर्टों कम, 10 दर्ज किया गया है का विश्लेषण किया और माउस USVs 8, 9, व्यवहार प्रतिक्रियाओं और प्राप्त जानवर के तंत्रिका तंत्र को वर्गीकृत किया है हालांकि 11। उत्तरार्द्ध USVs के विभिन्न विशेषताओं की जैविक महत्व को स्पष्ट करने के लिए आवश्यक है। इन तंत्र प्रकट करने के लिए, प्लेबैक प्रयोग एक कारगर तरीका है। हाल ही प्लेबैक के अध्ययन से पता चला है कि महिलाचूहों USVs 12 करने के लिए आकर्षित कर रहे हैं, और वे अपने माता-पिता को 13, 14 से अलग कर रहे हैं कि पुरुषों से USVs पसंद करते हैं।

यह लेख चूहों में USV वरीयता का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल प्लेबैक परीक्षण बताते हैं। एक दो विकल्प परीक्षण बॉक्स चित्रा 1 में दिखाया गया है, जिसमें दो अलग USVs, एक परीक्षण के बाड़े के दो डिब्बों में एक साथ वापस खेला जा सकता है विकसित किया गया था। परीक्षण बॉक्स के इस प्रकार के तीन उप-कक्षों में परीक्षण क्षेत्र को विभाजित करके ध्वनि संक्रमण से बचाता है , सीसा दीवारों का उपयोग। अल्ट्रासाउंड उत्सर्जकों प्रत्येक कमरे के बाहर स्थित हैं। कमरे और अल्ट्रासाउंड उत्सर्जकों के बीच दीवार में तार की जाली के साथ कवर छेद कर रहे हैं। चूहे तीन कमरों में स्वतंत्र रूप से ले जाते हैं, और अल्ट्रासाउंड उत्सर्जकों द्वारा वापस खेला USVs करने के लिए प्रतिक्रिया करने के लिए है, जैसे कि एक "जाल" खोज व्यवहार दिखा सकते हैं। इस परीक्षण में, चूहों एक ध्वनि emitter या दूसरे के करीब विभिन्न अवधि की अवधि के लिए रहते हैं। इन मानकों को एक संवेदनशील measu प्राप्त करने के लिए लॉग इन किया जा सकता है ध्वनि वरीयता के पुन।

वापस USVs खेलने के लिए, nanocrystalline सिलिकॉन थर्मामीटरों ध्वनिक उत्सर्जकों (यानी, "नेकां-सी emitter") पिछले अध्ययनों 15-17 में के रूप में इस्तेमाल किया गया। इन उपकरणों एक पतली फिल्म हीटर इलेक्ट्रोड, एक नैनो झरझरा सिलिकॉन परत है, और एक एकल क्रिस्टलीय सिलिकॉन वेफर से बना रहे हैं। डिजिटल ध्वनि फ़ाइल एक अनुरूप संकेत करने के लिए बदल दिया और फिर हीटर इलेक्ट्रोड के माध्यम से पारित कर दिया है। डिवाइस कम विरूपण के साथ महत्वपूर्ण ध्वनि दबाव में जिसके परिणामस्वरूप वोल्टेज पर निर्भर थर्मल संकेत धर्मान्तरित। यांत्रिक कंपन पर निर्भर करती है कि आम ध्वनि जनरेटर, यह एक डायाफ्राम की आवश्यकता के बिना ध्वनि पुन: पेश कर सकते हैं के विपरीत इस डिवाइस, कि आप में अनूठा है। emitter के 20 से 160 किलोहर्ट्ज़ (चित्रा 2) के लिए आवृत्तियों पर एक फ्लैट ध्वनि दबाव स्तर दर्शाती है, और अवधि, आवृत्ति, और ध्वनि दबाव स्तर 15, 18, ​​19 के संदर्भ में बहुत सही डिजिटल दर्ज murine USVs पुन: पेश कर सकते हैं।

3 चित्र में दिखाया एक प्रतिनिधि प्रयोग में ve_content ">, C57BL / 6 (बी -6) महिलाओं BALB / ग (BALB) के बीच पुरुष USVs और पृष्ठभूमि शोर चुनने के लिए अनुमति दी गई। इसके अलावा, चित्रा के बीच 4 बी -6 और BALB महिलाओं की पसंद से पता चलता है एक BALB और एक बी -6 पुरुष से एक साथ USV प्लेबैक, पिछले एक अध्ययन की रिपोर्ट में 14। पुरुष USVs की विशेषताओं -6 के बीच मतभेद है और BALB 20 उपभेदों। इन परिणामों से, USVs के आकर्षण में वर्तमान प्रोटोकॉल के साथ मूल्यांकन किया जा सकता दिखाया गया है, जिसमें लगता है, एक जीवित व्यक्ति से दर्ज ध्वनिक का विश्लेषण किया है, और अन्य व्यक्तियों को वापस खेला जाता है।

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Protocol

सभी प्रक्रियाओं Azabu विश्वविद्यालय की आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया। सभी प्रयोगों एक ध्वनिरहित कक्ष में किए गए।

1. पशु तैयारी

  1. रिकॉर्डिंग के लिए नर
    1. संभोग में अनुभवी यौन परिपक्व नर चूहों प्राप्त करते हैं।
  2. महिला विषयों
    1. (- वर्ष 12 सप्ताह आम तौर पर 8) पिंजरे प्रति 2-5 littermates के साथ रखे कर दिया है कि कुंवारी मादा चूहों प्राप्त करते हैं।
    2. मैकलीन 21 के अनुसार, परीक्षण से पहले estrous चक्र के चरण का निर्धारण करने के लिए दैनिक योनि स्मीयरों प्राप्त करते हैं। देखभाल pseudopregnancy से बचने के लिए योनि उत्तेजना कम करने के लिए लिया जाना चाहिए।
    3. नेल्सन 22 के अनुसार, Giemsa साथ स्मीयर दाग, और उपस्थिति या ल्यूकोसाइट्स, शल्कित उपकला कोशिकाओं, और केन्द्रक उपकला कोशिकाओं के अभाव के आधार पर estrous चक्र के चरण निर्धारित करते हैं।

2. डिवाइस (चित्रा 1)

_content "> चित्र 1
चित्रा दो विकल्प परीक्षण बॉक्स और उपकरणों के 1. योजनाबद्ध। चूहे उन्हें और तटस्थ क्षेत्र के बीच स्थित छोटे फाटकों के माध्यम से कमरे ए और बी का उपयोग कर सकते हैं। दो विकल्प बॉक्स और दो अल्ट्रासाउंड उत्सर्जकों एक ध्वनिरहित कक्ष के फर्श पर रखा जाता है। माइक्रोफोन ध्वनिरहित कक्ष के अंदर निलंबित कर दिया है। संक्षिप्त:। पीसी, पर्सनल कंप्यूटर के लिए यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

  1. रिकॉर्डिंग के लिए
    1. एक यूएसबी ए / डी कनवर्टर का उपयोग कर एक पीसी के लिए एक अल्ट्रासोनिक कंडेनसर माइक्रोफोन कनेक्ट करें।
    2. "7" के लिए ए / डी कनवर्टर का लाभ स्तर सेट करें।
    3. ऑडियो कब्जा सॉफ्टवेयर का उपयोग कर 400 किलोहर्ट्ज़ का एक नमूना दर के साथ 16-बिट प्रारूप फाइलों में रिकार्ड ध्वनिक डेटा।
  2. प्लेबैक के लिए
    1. एक डी / का उपयोग कर पीसी के लिए एक कनवर्टर कनेक्टएक यूएसबी इंटरफ़ेस।
    2. एक attenuator के माध्यम से विकास करने के लिए दो एम्पलीफायरों / एक कनवर्टर कनेक्ट करें। (उत्तरार्द्ध डिवाइस अधिभार को रोकने के लिए कार्य करता है।)
    3. प्रत्येक एम्पलीफायर को एक अल्ट्रासाउंड emitter कनेक्ट करें।

3. USV रिकॉर्डिंग

  1. Sidewall में एक 6 सेमी व्यास छेद और एक 0.5 सेमी तार जाल के साथ कवर छेद के साथ एक एक छोटे (17 x 10 x 11 सेमी) में पुरुष माउस या मध्यम आकार (21 x 14 x 13 सेमी) पिंजरे रखें। एक मध्यम आकार के पिंजरे का उपयोग करते समय, क्षेत्र को कम करने के लिए पिंजरे के बीच में एक विभाजन का निर्माण।
  2. रिकॉर्डिंग को दूषित कर सकता है कि rustling शोर से बचने के लिए पिंजरे में बिस्तर का प्रयोग न करें।
  3. जाल के बगल में एक माइक्रोफोन रखें।
  4. 2.1 चरण में दिखाया गया रिकॉर्डिंग सेटअप के साथ अल्ट्रासोनिक वोकलिज़ेशन निगरानी शुरू करो।
  5. पुरुष माउस के साथ पिंजरे में metestrus या diestrus में या तो एक यौन परिपक्व महिला माउस रखें।
  6. 5 मिनट - 3 रिकॉर्ड USVs।

4. टीस्था बॉक्स

  1. एक्रिलिक बोर्ड (चित्रा 1) का उपयोग कर परीक्षण बॉक्स का निर्माण।
    नोट: (एक्स 20 35, और x 20 सेमी उच्च) तीन डिब्बों में बांटा गया है परीक्षण बॉक्स: एक तटस्थ क्षेत्र (15 x 20 सेमी), और कमरों में ए और बी (20 x 10 सेमी, प्रत्येक)। कमरे ए और बी प्रत्येक एक 0.5cm तार जाल के साथ कवर किया जाता है कि एक 4 सेमी व्यास छेद है। छेद और जाल तटस्थ क्षेत्र और कमरे ए और बी के बीच कमरे ए और बी के प्रत्येक के अंत बनाने के फाटकों (5 एक्स 5 सेमी प्रत्येक) में स्थित हैं
  2. ध्वनि रिसाव प्रत्येक जाल की परिधि के आसपास बॉक्स के लिए उन्हें सील, रबर प्लेट का उपयोग कर, जाल का सामना करना पड़ पक्ष के अलावा, प्रत्येक अल्ट्रासाउंड emitter बचाने रोकने के लिए।
  3. ध्वनि इन्सुलेशन के लिए कमरे ए और बी के बीच दीवार के दोनों किनारों पर जगह ले जवानों।

5. ध्वनि प्लेबैक के लिए तैयारी

  1. प्लेबैक ध्वनि का निर्माण
    1. डिजिटल ऑडियो संपादन सॉफ्टवेयर का उपयोग कर दर्ज की गई फ़ाइल से USV की एक 20 सेकंड खंड पर कब्जा।
    2. का चयन करें और कोई पृष्ठभूमि पर कब्जाआईएसई 20 सेकंड USV खंड फ़ाइल से (0.35 सेकंड)। शोर खंड दोहरा द्वारा एक 20 सेकंड पृष्ठभूमि शोर फ़ाइल बनाएँ।
    3. "बाएं कान" और के लिए अन्य फ़ाइल के लिए एक फ़ाइल के साथ, एक स्टीरियो साउंड फाइल के रूप में उन्हें निर्यात, एक साथ दो ध्वनि फ़ाइलें वापस खेलने के लिए "सही कान।"
    4. 40 kHz के एक कटऑफ के साथ के रूप में उच्च पास फिल्टर का उपयोग कर ध्वनि फ़ाइलों को फ़िल्टर।
    5. बाद के प्रसंस्करण सॉफ्टवेयर में शोर में कमी उपकरण का उपयोग कर शोर को कम। का चयन करें और शोर में कमी प्रोफ़ाइल के रूप में कोई USVs जिसमें फ़ाइल का एक खंड पर कब्जा है, और 40 के स्तर के साथ शोर में कमी चलाते हैं।
  2. प्लेबैक ध्वनि की कैलिब्रेशन
    1. अल्ट्रासाउंड emitters और माइक्रोफोन के बीच की जगह 10 सेमी है कि सुनिश्चित करें।
    2. अल्ट्रासाउंड emitters से ध्वनि दबाव स्तर जांचना, 2.1 चरण में वर्णित विन्यास का उपयोग अल्ट्रासोनिक निगरानी करते हैं। डेसीबल में माइक्रोफोन (डीबी) द्वारा ध्वनि दबाव स्तर को मापने।
    3. Usiattenuator और एम्पलीफायरों एनजी, चरण 3 में दर्ज पुरुष USVs रूप में एक ही ध्वनि दबाव स्तर के लिए अल्ट्रासाउंड उत्सर्जकों द्वारा उत्पन्न USVs की मात्रा समायोजित करें।
    4. दो अल्ट्रासाउंड emitters और USVs और पृष्ठभूमि शोर से बना एक ध्वनि फ़ाइल का उपयोग करते समय, दो अल्ट्रासाउंड उत्सर्जकों व्यवहार परीक्षण के प्रदर्शन से पहले एक अंशांकन ध्वनि (जैसे, एक 75 किलोहर्ट्ज़ शुद्ध स्वर) का उपयोग कर एक ही ध्वनि दबाव स्तर है कि प्रदर्शन की पुष्टि करें।
    5. USVs की दो धाराओं से बना एक ध्वनि फ़ाइल reproducing है, तो परीक्षण से पहले, एक ही स्तर के दो उत्पन्न ध्वनि दबाव स्तर को समायोजित।

6. दो विकल्प परीक्षण

  1. परीक्षण बॉक्स के meshes के पीछे अल्ट्रासाउंड उत्सर्जकों रखें।
  2. एक एक्रिलिक बोर्ड के साथ कमरे ए और बी के लिए द्वार बंद करें, और 30 मिनट के लिए तटस्थ क्षेत्र के लिए महिला विषय आदत डालना। माउस से बच सकते हैं से बचने के लिए एक्रिलिक बोर्ड के साथ बॉक्स कवर।
  3. एक सीसी का उपयोग वीडियो रिकॉर्डिंग शुरूडी कैमरा बॉक्स के ऊपर रखा होगा। कैमरा नहीं है (चित्र 1 में दिखाया गया है) सभी तीन डिब्बों के क्षेत्र शामिल हैं।
  4. गेट और कवर-बोर्ड निकालें और महिला ध्वनि क्षेत्रों सहित स्वतंत्र रूप से परीक्षण बॉक्स, पता लगाने के लिए अनुमति देते हैं।
  5. महिला दोनों मेश जांच की है, और तटस्थ क्षेत्र को लौट जाने के बाद, 5 या 10 मिनट के लिए बार-बार एक 20 सेकंड ध्वनि फ़ाइल खेल शुरू।
  6. 5 या 10 मिनट के लिए व्यवहार की निगरानी का संचालन।
  7. , पिछले विषय से जमा अवांछित घ्राण संकेतों को कम 70% इथेनॉल के साथ परीक्षण के बीच परीक्षण पिंजरों को साफ करने के लिए।
  8. अल्ट्रासाउंड उत्सर्जकों एक के स्थान पर स्विच और बी बेतरतीब ढंग से कमरे में एक या बी की दिशा में निहित पक्ष पूर्वाग्रह प्रभाव से बचने के लिए

7. सांख्यिकीय विश्लेषण

  1. निम्नलिखित मापदंडों का विश्लेषण, व्यवहार घटना-स्कोरिंग सॉफ्टवेयर का प्रयोग: प्रत्येक कमरे में प्रविष्टियों की कुल संख्या; प्रत्येक मध्य क्षेत्र में रहने की कुल अवधि; प्रत्येक ध्वनि क्षेत्र में रहने की कुल अवधि; औरअल्ट्रासाउंड emitter के सामने एक जाल की खोज की कुल अवधि। चित्रा 1 "मध्य क्षेत्र" और से क्या मतलब है दिखाता है "ध्वनि क्षेत्र।"
    नोट: मामलों में माउस दो क्षेत्रों के बीच विभाजन रेखा (चित्रा 1, धराशायी लाइन) सिर की दिशा से स्थान तय पर रहता है। सिर जाल पक्ष का सामना करना पड़ता है, यह ध्वनि क्षेत्र में रहने के रूप में रन बनाए है।
  2. प्रत्येक व्यवहार पैरामीटर के लिए, 0.05 की एक महत्व स्तर के साथ कमरे में एक के लिए प्रतिक्रियाओं और बी एक Wilcoxon हस्ताक्षर किए रैंक परीक्षण का उपयोग कर, या बनती टी -tests की तुलना करें।

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Representative Results

USVs 3 चित्र में दिखाया प्रतिनिधि प्रयोग में लगता प्लेबैक के रूप में इस्तेमाल किया गया एक BALB-पुरुष (20 प्रति सेकंड 161 अक्षरों), साथ ही पृष्ठभूमि शोर से दर्ज की गई। इस प्रयोग में, 7 महिला -6 चूहों की उम्र के 9 सप्ताह में इस्तेमाल किया गया । आवाज़ प्लेबैक के लिए महिला प्रतिक्रिया के परीक्षण का सबसे अच्छा अवधि निर्धारित करने के लिए, व्यवहार मापदंडों के कुल 10 मिनट के परीक्षण के समय की पहली और आखिरी पांच मिनट के लिए अलग से विश्लेषण किया गया।

सबसे पहले, कोई साइड bias.The परिणाम भी पृष्ठभूमि शोर पक्ष के बीच कोई अंतर नहीं था कि पता चला था कि वहाँ का प्रदर्शन, प्लेबैक (चित्रा 3) से पहले जांच के समय के दौरान कमरे ए या बी में रहने की कुल अवधि में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था और पहली बार 5 मिनट, पिछले 5 मिनट, और कुल परीक्षण के समय (चित्रा 3 बी) का विश्लेषण कमरे प्रविष्टियों की संख्या में पुरुष-USVs ओर। चित्रा -3 सी durat की संचयी सेकंड से पता चलता हैप्लेबैक के दौरान प्रत्येक कमरे में रहने के आयन (यानी, कुल मध्य क्षेत्र में रहने की अवधि, और ध्वनि के क्षेत्र में)। पहले 5 मिनट (पी = 0.043), या कुल के परीक्षण के समय (पी = 0.043) का विश्लेषण करते समय विषयों पृष्ठभूमि शोर पक्ष की तुलना में BALB पुरुष-USV पक्ष में काफी लंबा समय बिताया। इन मापदंडों पिछले 5 मिनट से विश्लेषण करते समय में कोई महत्वपूर्ण मतभेद थे। मध्य क्षेत्र (चित्रा 3 डी) में पृष्ठभूमि शोर पक्ष और पुरुष-USVs पक्ष के बीच कोई महत्वपूर्ण मतभेद थे। हालांकि, बी -6 महिलाओं ध्वनि के क्षेत्र में काफी लंबा समय बिताया और पृष्ठभूमि शोर ओर, पहले 5 मिनट (ध्वनि क्षेत्र, पी = 0.018 का विश्लेषण करते समय, चित्रा 3E की तुलना में, BALB पुरुष-USV पक्ष में जाल खोज; जाल , पी = 0.018, चित्रा 3F) या कुल परीक्षण के समय (ध्वनि क्षेत्र, पी = 0.028, चित्रा 3E, मेष, पी = 0.043, चित्रा 3F)। परिणाम स्पष्ट रूप से एक बी -6 महिला को दिखाना है किविशेष रूप से पहले 5 मिनट में, पृष्ठभूमि शोर से ज्यादा reproduced पुरुष-USVs दृष्टिकोण।

इस दो विकल्प परीक्षण USVs की विशेषताओं की तुलना करने के लिए उपयोगी है। पिछले एक अध्ययन में, इस परीक्षण इन उपभेदों 11 के पुरुषों से USVs के लिए बी -6 और BALB मादा चूहों की USV वरीयता निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। एक बी -6 (133 अक्षरों सेकंड 20 प्रति) और एक BALB पुरुष (20 प्रति सेकंड 108 अक्षरों), इन उपभेदों में से प्रत्येक की मादा चूहों से USVs की एक प्लेबैक संयोजन का उपयोग करते समय अन्य तनाव से की पुरुषों की USVs के लिए कई बार खोज अब पता चला अपने स्वयं के एक के (चित्रा 4)।

चित्र 2
चित्रा 2. मापा ध्वनि दबाव स्तर (एसपीएल) आवृत्ति के एक समारोह के रूप में नेकां-सी Emitter द्वारा सृजित लगभग 80 के एक लगभग निरंतर SPL -। 90 डीबी 40 और 160 किलोहर्ट्ज़ के बीच मनाया जाता है। एसी इनपुट पाउएर इस मामले में 1.3 डब्ल्यू है। emitter के एक उच्च आवृत्ति संघनित्र माइक्रोफोन से 20 मिमी की दूरी पर रखा गया है और इसके केंद्र के साथ गठबंधन किया था। यह आंकड़ा Kihara 19 से संशोधित किया गया है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3. पृष्ठभूमि शोर और BALB नर USVs करने के लिए बी -6 महिला रिस्पांस। (ए) प्लेबैक से पहले जांच के समय के दौरान कमरे ए या बी में रहने की कुल अवधि। (बी) के प्लेबैक के दौरान कमरे प्रविष्टियों की संख्या। (सी) के कमरे में रहने की कुल अवधि। (डी) मध्य क्षेत्र में रहने की कुल अवधि (ड।) ध्वनि क्षेत्र में रहने की कुल अवधि। (एफ) मेश खोज की कुल अवधि। प्रत्येक की मापव्यक्तिगत डॉट भूखंडों में दिया जाता है; प्रत्येक भूखंड में क्षैतिज सलाखों मतलब संकेत मिलता है; एन = 7; * पृष्ठभूमि शोर और विश्लेषण मापदंडों के लिए पुरुष USVs के बीच महत्वपूर्ण अंतर (पी <0.05) से संकेत मिलता है; Wilcoxon हस्ताक्षर किए रैंक परीक्षण। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4. महिला ही तनाव बनाम एक अलग तनाव से पुरुषों के USVs के लिए प्रतिक्रिया। बी -6 (एन = 6) और BALB (एन = 10) के परीक्षण से पहले पुरुष-गंदे बिस्तर से अवगत कराया diestrus में महिलाओं से पता चला है के लिए लंबी अवधि खोज बार अन्य तनाव USVs। दिखाया मूल्यों मतलब + मानक त्रुटि कर रहे हैं; * महत्वपूर्ण मतभेद (पी <0.05) से संकेत मिलता है; Wilcoxon हस्ताक्षर किए रैंक परीक्षण। यह आंकड़ा Asaba से संशोधित किया गया है यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Acknowledgments

इस काम के द्वारा समर्थित किया गया एक अनुदान सहायता में ए.ए. को JSPS अध्येताओं के लिए; अनुदान सहायता वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए JSPS अध्येताओं के लिए अभिनव क्षेत्रों (संख्या 4501 और नंबर 25132712) टी पर से; और Azabu विश्वविद्यालय। चित्रा 2 द्वारा सम्मानित किया गया एक शोध परियोजना अनुदान द्वारा Kihara, टी, Harada, टी, और Koshida, एन वेफर-संगत निर्माण और nanocrystalline सिलिकॉन thermally प्रेरित अल्ट्रासाउंड उत्सर्जकों की विशेषताओं से reprinted है। सेंसर और Actuators एक: शारीरिक, मात्रा 125, एल्सेविअर, पी। 426, (2006), एल्सेविअर से अनुमति के साथ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Soundproof chamber Muromachi Kikai
Small cage CLEA Japan CL-0113-1
Middle cage CLEA Japan CL-0103-1
Ultrasound condenser microphones Avisoft Bioacoustics CM16/CMPA
A/D converter Avisoft Bioacoustics UltraSoundGate116H
Audio software Avisoft Bioacoustics RECORDER USGH
Adobe Audition 3.0 / Audio editing software Adobe Systems Adobe Audition 3.0
Nc-Si emitter Original not commercially available but it is planned to be so in near future
D/A converter National Instruments NI USB-6251 BNC
Attenuator Original
Amplifier Yamatake
PC Windows 7 professional Intel® core i7-2600K CPU @ 3.4GHz, 8GB RAM, 64-bit operating system
Event recorder Excel-macro / Event-scoring software original Programmed by Naoto Akagawa & Takeru Yamamoto
CCD Camera
Rubber plates (made of elastomer resin) Tokyo bouon TI-75BK B4 Cut them to the proper size http://www.piano-bouon.jp/shopping/?pid=1329272401-447630&ca=6&p=3
Giemsa's azur eosin methylene blue solution Merck Millipore 1.09204.0500

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References

  1. Panksepp, J. B., et al. Affiliative behavior, ultrasonic communication and social reward are influenced by genetic variation in adolescent mice. PLoS One. 2 (4), e351 (2007).
  2. Scattoni, M. L., Ricceri, L., Crawley, J. N. Unusual repertoire of vocalizations in adult BTBR T+tf/J mice during three types of social encounters. Genes Brain Behav. 10 (1), 44-56 (2010).
  3. Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. The structure and usage of female and male mouse ultrasonic vocalizations reveal only minor differences. PLoS One. 7 (7), e41133 (2012).
  4. Merten, S., Hoier, S., Pfeifle, C., Tautz, D. A role for ultrasonic vocalisation in social communication and divergence of natural populations of the house mouse (Mus musculus domesticus). PLoS One. 9 (5), e97244 (2014).
  5. Amato, F. R., Moles, A. Ultrasonic vocalizations as an index of social memory in female mice. Behav. Neurosci. 115 (4), 834-840 (2001).
  6. Chabout, J., et al. Adult male mice emit context-specific ultrasonic vocalizations that are modulated by prior isolation or group rearing environment. PLoS One. 7 (1), e29401 (2012).
  7. Ehret, G. Infant rodent ultrasounds–a gate to the understanding of sound communication. Behav. Genet. 35 (1), 19-29 (2005).
  8. Holy, T. E., Guo, Z. Ultrasonic songs of male mice. PLoS Biol. 3 (1), e386 (2005).
  9. Portfors, C. V. Types and functions of ultrasonic vocalizations in laboratory rats and mice. J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 46 (1), 28-34 (2007).
  10. Holfoth, D. P., Neilans, E. G., Dent, M. L. Discrimination of partial from whole ultrasonic vocalizations using a go/no-go task in mice. J. Acoust. Soc. Am. 136 (6), 3401 (2014).
  11. Neilans, E. G., Holfoth, D. P., Radziwon, K. E., Portfors, C. V., Dent, M. L. Discrimination of ultrasonic vocalizations by CBA/CaJ mice (Mus musculus) is related to spectrotemporal dissimilarity of vocalizations. PLoS One. 9 (1), e85405 (2014).
  12. Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. Female mice respond to male ultrasonic ‘songs’ with approach behaviour. Biol. Lett. 5 (5), 589-592 (2009).
  13. Musolf, K., Hoffmann, F., Penn, D. J. Ultrasonic courtship vocalizations in wild house mice, Mus musculus musculus. Anim. Behav. 79 (3), 757-764 (2010).
  14. Asaba, A., et al. Developmental social environment imprints female preference for male song in iice. PloS one. 9 (2), e87186 (2014).
  15. Uematsu, A., et al. Maternal approaches to pup ultrasonic vocalizations produced by a nanocrystalline silicon thermo-acoustic emitter. Brain Res. 1163, 91-99 (2007).
  16. Okabe, S., et al. The effects of social experience and gonadal hormones on retrieving behavior of mice and their responses to pup ultrasonic vocalizations. Zoolog. Sci. 27 (10), 790-795 (2010).
  17. Okabe, S., et al. Pup odor and ultrasonic vocalizations synergistically stimulate maternal attention in mice. Behav. Neurosci. 127 (3), 432-438 (2013).
  18. Shinoda, H., Nakajima, T., Ueno, K., Koshida, N. Thermally induced ultrasonic emission from porous silicon. Nature. 400 (6747), 853-855 (1999).
  19. Kihara, T., Harada, T., Koshida, N. Wafer-compatible fabrication and characteristics of nanocrystalline silicon thermally induced ultrasound emitters. Sensor. Actuat. A-Phys. 125 (2), 422-428 (2006).
  20. Kikusui, T., et al. Cross fostering experiments suggest that mice songs are innate. PloS One. 6 (3), e17721 (2011).
  21. McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification. J. Vis. Exp. (67), e4389 (2012).
  22. Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology. Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).
  23. Tomihara, K., et al. Effect of ER-beta gene disruption on estrogenic regulation of anxiety in female mice. Physiol. Behav. 96 (2), 300-306 (2009).
  24. Zheng, Q. Y., Johnson, K. R. Hearing loss associated with the modifier of deaf waddler (mdfw) locus corresponds with age-related hearing loss in 12 inbred strains of mice. Hear. Res. 154 (1-2), 45-53 (2001).
  25. Haga, S., et al. The male mouse pheromone ESP1 enhances female sexual receptive behaviour through a specific vomeronasal receptor. Nature. 466 (7302), 118-122 (2010).
  26. Grimsley, J. M., Monaghan, J. J., Wenstrup, J. J. Development of social vocalizations in mice. PLoS One. 6 (3), e17460 (2011).
  27. Sugimoto, H., et al. A role for strain differences in waveforms of ultrasonic vocalizations during male-female interaction. PLoS ONE. 6 (7), (2011).
  28. Hanson, J. L., Hurley, L. M. Female presence and estrous state influence mouse ultrasonic courtship vocalizations. PLoS One. 7 (7), e40782 (2012).
  29. Wang, H., Liang, S., Burgdorf, J., Wess, J., Yeomans, J. Ultrasonic vocalizations induced by sex and amphetamine in M2, M4, M5 muscarinic and D2 dopamine receptor knockout mice. PLoS One. 3 (4), (2008).
  30. Moles, A., Kieffer, B. L., D'Amato, F. R. Deficit in attachment behavior in mice lacking the mu-opioid receptor gene. Science. 304 (5679), 1983-1986 (2004).
  31. Hiramoto, T., et al. Tbx1: identification of a 22q11.2 gene as a risk factor for autism spectrum disorder in a mouse. Hum. Mol. Genet. 20 (24), 4775-4785 (2011).
  32. Ey, E., et al. Absence of deficits in social behaviors and ultrasonic vocalizations in later generations of mice lacking neuroligin4. Genes Brain Behav. , (2012).
  33. Roy, S., Watkins, N., Heck, D. Comprehensive analysis of ultrasonic vocalizations in a mouse model of fragile X syndrome reveals limited, call type specific deficits. PLoS One. 7 (9), e44816 (2012).

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व्यवहार अंक 103 अल्ट्रासोनिक वोकलिज़ेशन मेट चुनाव यौन चयन सामाजिक मान्यता पिल्ला अलगाव कॉल BALB / ग चूहों C57BL / 6 चूहों अल्ट्रासाउंड emitter
एक दो विकल्प प्लेबैक परीक्षण का उपयोग कर चूहे में अल्ट्रासोनिक वोकलिज़ेशन प्राथमिकताएं निर्धारण
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Asaba, A., Kato, M., Koshida, N.,More

Asaba, A., Kato, M., Koshida, N., Kikusui, T. Determining Ultrasonic Vocalization Preferences in Mice using a Two-choice Playback Test. J. Vis. Exp. (103), e53074, doi:10.3791/53074 (2015).

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