Abstract
Dyremodeller er vigtige redskaber til at studere patofysiologien og farmakologi af neuropatisk smerte. Dette manuskript beskriver de kirurgiske og adfærdsmæssige procedurer til at studere trigeminus neuropatiske smerter hos rotter. For at imødekomme den specificitet trigeminale neuropatisk smerte syndromer, er infraorbitale nerven (ion) udsættes for en kronisk indsnævring skade (CCI) ved løst ligere nerven. Præsenteres en intra-orbital tilgang her for at afsløre og ligere ion i orbital hulrum. Efter ion ligation, rotter udviser ændringer i spontan adfærd og som reaktion på von Frey hår stimulation, der er tegn på vedvarende smerter og mekanisk allodyni. To faser kan defineres i udviklingen af de adfærdsmæssige ændringer. I den første uge efter Ion-CCI (fase 1), rotter viser en øget og asymmetrisk ansigt grooming aktivitet, dvs., med ansigt vask slagtilfælde primært rettet til nerven-skadet ion område. Der skelnes mellem ansigt grooming adfærd, der er en del af en mere generel krop grooming adfærd, som stadig er stort set upåvirket af Ion-CCI, og ansigt plejemidler der hverken forud eller efterfulgt af kroppen grooming, som er væsentligt forøget efter Ion-CCI. I denne periode er at reagere på mekanisk stimulering af ionen område reduceres. Denne mindre reaktivitet er brat erstattet af en ekstrem hyperresponsivitet hvorved endog meget svage stimulus intensiteter provokere nocifensive adfærd (fase 2). Den fænomenologiske ligheder mellem disse adfærdsændringer og rapporteret tegn på smerter i ansigtet (dvs. reaktioner på skadelig stimulering af ansigtet) antyder tilstedeværelsen af dysæstesi / paræstesi og mekanisk allodyni i den ligerede ion område.
Introduction
Skader på somatosensoriske nerver fører oftest til tab af følelse. Det er ikke særlig godt forstået, hvorfor og hvordan, i nogle tilfælde, perifer nerveskade fører til kronisk smerte. Som et resultat, forbliver en udfordrende tilstand at behandle 1 og medføre betydelige reduktioner i patienternes livskvalitet 2-3 smertefulde neuropatier. Dyremodeller er et vigtigt redskab til at undersøge effekten af eksisterende og nyudviklede medicin og til at identificere de patofysiologiske mekanismer, der er involveret i udvikling og vedligeholdelse af neuropatisk smerte. Blandt de centrale udfordringer for translationel smerter forskning er at identificere og måle spontane smerter hos dyr (dvs. fysiologiske, adfærdsmæssige eller andre manifestationer, der indikerer tilstedeværelsen af smerte hos dyr, der ikke bliver udfordret med sondering stimulationer der er akut oven på fagets basale tilstand ). Det overordnede mål med denne procedure er at kirurgisk fremkalde eninfraorbitale nerveskade i en rotte, der fører til udvikling af både spontane og fremkaldte nocifensive adfærd, der kan bruges til at studere de mekanismer, der er involveret i trigeminus neuropatisk smerte og dens behandling.
Rettet, isoleret face grooming er et unikt mål for spontan neuropatisk smerte hos rotter. Efter kronisk konstriktion skade (CCI) af det infraorbitale nerve (ion), rotter udviser ændringer i spontan adfærd og som reaktion på taktil stimulation, der er tegn på vedvarende smerter og mekanisk allodyni 4. Efter Ion-CCI, rotter viser en øget og asymmetrisk ansigt grooming aktivitet, dvs med ansigt vask slagtilfælde primært rettet til nerven-skadede ion territorium. I modsætning til skadelig stimulering af ansigtet (f.eks formalin injektion) 5, ikke-smertefuld sensoriske forstyrrelser (dvs. ensidige vibrissae klipning, bedøvende infraorbitale nerveblokade, anvendelsen af mineralsk olie på vibriSSAE) ikke eller kun meget kort (dvs. de første minutter efter indtræden) medføre en betydelig ændring i ansigtet soigneringsadfærd 6. Det blev konkluderet, at denne unormale pelspleje efter Ion-CCI er en adfærdsmæssig manifestation af spontane, stærkt afskrækningsmiddel fornemmelser i den skadede nerve territorium. Denne adfærd i Ion-CCI rotter bærer stærk lighed med spontane smerter hos patienter. Yderligere undersøgelser har identificeret en vigtig forskel mellem ansigt grooming adfærd, der er en del af en mere generel krop grooming adfærd (dvs. "ansigt grooming under kroppen grooming"), som stort set er upåvirket af Ion-CCI og nocifensive ansigt grooming som hverken forud heller ikke efterfulgt af kroppen grooming (dvs. "isoleret ansigt grooming"), som er væsentligt forøget efter Ion-CCI 7-9. Farmakologisk, ansigt grooming under kroppen grooming udgør en fremragende måling kontrol for ikke-specifikke lægemiddelvirkninger ( Efter ion-CCI, rotter udviser også ændringer som reaktion på taktil stimulering, der er indikative for mekanisk allodyni 4, 10. I den første uge (r) efter Ion-CCI, rotter ikke længere svare mild eller moderat taktilt (dvs. Von Frey- ) stimuli. Denne hyporesponsiv derefter brat erstattet af en ekstrem hyperresponsivitet hvorved selv meget svage stimulus intensiteter provokere nocifensive adfærd. Starten på hyperreaktivitet kan variere mellem rotter, men de fleste rotter er blevet hyperreaktiv efter tre til fire uger efter operation.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Etik erklæring: Dyrene behandles og plejes i overensstemmelse med retningslinjerne af Udvalget for Forskning og etiske spørgsmål af IASP 11. Protokollen godkendes af institutionelle komitésystem.
1. Emner
- Brug Sprague-Dawley-rotter (250-300 g ved ankomst).
- House rotter i fast bund bure i en koloni værelse med en fugtighed på 40-60% og en RT på 21 ± 1 ° C.
- Foretag vand og mad til rådighed på libitum.
- Hold rotter under en omvendt 00:12 timers mørke / lys cyklus (lys på i 20 timer).
2. Kirurgi
- Per rotte, forberede to stykker chrom gut ligatur (5-0) på ca. 6 cm lang og placere dem i sterilt saltvand for at undgå udtørring og blive stiv og skør.
- Bedøver dyret med pentobarbital (60 mg / kg, ip) og behandles med atropin (0,1 mg / kg, ip). Overvåge niveauet af anæstesi ved at udvide det ene ben og PINCHIng banen af huden mellem tæerne med en negl for at sikre tilstrækkelig tryk påføres. Sørg for, at dyret ikke flex dens lemmer. Hvis det er nødvendigt, administrere yderligere pentobarbital.
- Barbere hovedet på rotter, således at en midterlinie hovedbunden indsnit kan være fremstillet af ca. 25 mm med ens afstande forreste og bageste til centrum af øjnene.
- Fastgør rottens hoved i en stereotaktisk ramme eller på anden måde fiksere rottens hoved. Placer rotte på en opvarmet pude for at opretholde legemstemperatur.
- Påfør oftalmologiske salve på begge øjne for at forhindre skader fra tørring.
- Skrub barberede hoved område med alkohol, så betadine.
- Lav en mid-line hovedbund snit, udsætter kranie og nasal knogle.
- Brug en operation mikroskop for at udføre trin 2,9-2,16.
- Dissekere kanten af bane fri, dannet af maxillary, frontal, lacrimal og zygomatic knogler ved hjælp af en vatpind og et par Dumont pincet. Brug podepinden til såak blod op fra eventuel blødning.
- At give adgang til ion, forsigtigt afbøjer orbitale indhold med en præcision vatpind, pas på ikke at overstrække den forreste etmoidal nerve, som krydser overlegen Ion. Dissekerer ion fri fra det omgivende bindevæv, ved hjælp af en præcision vatpind og et par Dumont pincet ved hjælp af en spreder bevægelse. Brug vatpinden til at opsuge blod fra mulige blødning.
- For at udføre en ligatur, skubbe den ene ende af et enkelt stykke chrom tarm nedad langs den frontale knogler, mediale til-ion og rykke et par millimeter parallelt og ringere ion. Ligaturen er nu holdes på plads mellem-ion og den frontale knogler.
- Slip spidsen af en 45 graders vinklet Dumont pincet under ion at placere den i nærheden af ligatur. Forsigtigt trække ionen lateralt at afsløre ligatur og spidsen af tangen. Grip ligaturen med pincet og trække pincet sideværts fra under Ion. Træk ligatur fra orbital hulrummet, indtil begge ender af ligatur er mere eller mindre lige langt fra Ion.
- Lav en "slip knude" fra de to ender af ligatur at tillade perfekt kontrol over graden af konstriktion og skub knuden mod Ion. Skub knuden yderligere at snøre ionen, således at diameteren af nerven reduceres med et lige mærkbar mængde. Gøre en normal knude oven på skridsikker knude, således at mængden af konstriktion forbliver konstant (dvs. at forhindre spalten knude glider).
- Skær ligaturer at forlade ca. 2 mm frie ender fra knuden.
- Gentag den samme procedure (trin 2.11 til 2.15) for at foretage et andet ligering 2 mm fra den første.
- For fingeret operation, udføre trin 2,2-2,10.
- Luk hovedbunden snit ved hjælp af polyester suturer (4-0), og lad rotten til at inddrive på en opvarmet pude. Lad ikke dyret uden opsyn, indtil det har genvundet tilstrækkelige ulemperciousness at opretholde brystleje og ikke sende dyret tilbage til selskab med andre dyr, indtil den er fuldt tilbagebetalt.
- For at undgå forebyggende smertestillende effekter på udviklingen af neuropatisk smerte, ikke administrere analgesi for post-operative smerter.
3. Behavioral testprocedure
- Tillad rotter at akklimatisere i mindst 8 dage til boligforhold før præoperativ test.
- Vænne rotter til testproceduren mindst én gang dagligt i tre dage før præoperativ test.
- Adfærd test i et mørkelagt rum med lys fra en 60 W rødt lys pære suspenderet 1 m over centrum af testområdet belysning centrum, men forlader omkredsen dim og resten af Værelset mørke.
- Sørg for, at der er tilstrækkelig baggrundsstøj for at mindske interferens fra pludselige auditive stimulation. Hvis det er nødvendigt, giver hvid støj.
- Observation af ansigt grooming adfærd
- TRANSPORT en enkelt rotte fra koloni til prøverummet i en overdækket plastik bur uden strøelse. Bemærk: Ideelt set bør dette være en kort tur med minimale ydre stimuli.
- Placer rotte i en overdækket, gennemsigtig plast bur uden strøelse (LxBxH: 24 cm x 14 cm x 17 cm) med en spejlet tilbage foran et videokamera.
- Foretag en 10 min registrering af dyrets adfærd. Under optagelse, skal du sørge for forsøgslederen ikke er til stede i prøverummet.
- Rengør observation buret før du placerer det næste dyr.
- Sørg for, indspillede adfærd analyseres af en eksperimentator, der er blind for den eksperimentelle tilstand rotten.
- Lav en registrering af hver flade grooming episode under 10 min optagelse. Bemærk: Face grooming defineres som bevægelsesmønstre, hvor forpoterne bringes i kontakt med områder i ansigtet.
- Skelne mellem to typer af ansigtet grooming adfærd. Hvis en sekvens hverken forud eller efterfulgt afkrop grooming (dvs. grooming af et organ område andet end ansigtet), kategorisere episoden som isolerede ansigt grooming. Hvis kroppen grooming udføres umiddelbart før eller efter ansigt grooming, kategorisere episoden som ansigt grooming under kroppen grooming.
- Bestem antallet af ansigtet grooming episoder.
- Kategoriser en tidsperiode mellem ansigt grooming handlinger, der ikke overstiger 4 sek som en intra-episode plads (dvs. en pause mellem ansigt grooming handlinger inden for en enkelt episode).
- Kategoriser en tidsperiode mellem ansigt grooming handlinger, der overstiger 4 sek som en inter-episode plads (dvs. en komplet afbrydelse af ansigt grooming handlinger mellem to episoder).
- Mekanisk stimulering test
- Transport rotter i grupper på op til 6 dyr fra kolonien til prøverummet i en overdækket bur med strøelse. Sørg for, at dette er en kort tur med minimale ydre stimuli.
- Placerrotter individuelt i gennemsigtige plastbure med strøelse (LxBxH: 24 cm x 14 cm x 17 cm) med et hængslet låg, så den let kan åbnes og lukkes.
- Brug en gradueret serie af fem von Frey-hår. Bemærk: Den nødvendige kraft til at bøje hårene er 0,015 g, 0,127 g, 0,217 g, 0,745 g og 2.150 g.
- Vænne rotterne til observation buret og nå bevægelser i 10 minutter. Hvert 30. sek, åbne låget og forsigtigt røre væggen i bur med en plaststang.
- Når dyret er i en sniffing / ingen bevægelsesevne tilstand (dvs. med fire poter placeret på jorden, hverken bevægende eller frysning, men udviser sniffing adfærd), anvende første von Frey hår inden ion område nær centrum af den vibrissal pad , på den behårede hud omkring mystacial vibrissae.
- Score respons dyret til stimulering at tilhøre en af følgende svarkategorier 4.
- Kategoriser en fuldstændig mangel på respons somscore 0.
- Kategoriser en stimulus detektion (dvs. rotten vender hovedet mod stimulerende objektet og stimulus objekt derefter udforskes) som score 1.
- Kategoriser en tilbagetrækning reaktion (dvs.., Rotten drejer hovedet langsomt væk eller trækker det rask baglæns, når stimuleringen anvendes, nogle gange en enkelt ansigt tørre ipsilateral til det stimulerede område opstår) som score 2.
- Kategorisere en flugt / angreb respons (dvs.., Rotten undgår yderligere kontakt med stimulus objekt, enten passivt ved at flytte sin krop væk fra den stimulerende formål at indtage en sammenkrøbet stilling mod buret væggen, eller aktivt ved at angribe stimulus objekt, hvilket gør bidende og opsigtsvækkende bevægelser) som score 3.
- Kategorisere asymmetrisk ansigt grooming (dvs. viser rotten en uafbrudt række af mindst tre face-vask slag rettet mod den stimulerede ansigtet) som scorede til 4.
- Inden for hvert dyr, gælder stimuli i en stigende rækkefølge intensitet. Efter en stimulus intensitet er blevet anvendt til den ene side, anvende det til den anden side, før man går videre til den næste stimulus intensitet. Tilfældig den rækkefølge, som de ipsilaterale og kontralaterale sider stimuleres. Bemærk, at dyret skal være i en sniffing / ingen bevægelsesevne tilstand før hver stimulation.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ion-CCI rotter viser en stærk postoperativ stigning i mængden af tid brugt på isolerede flade grooming (figur 1). Stigningen toppe ved udgangen af den første postoperative uge og derefter aftager i de følgende uger. De fleste nyere undersøgelser har fundet ansigt grooming at være væsentligt forøget i op til tre uger. Face soigneringsadfærd i sham-opererede rotter er mere eller mindre upåvirket.
Ion-CCI rotter viser også en næsten fuldstændig mangel på modtagelighed for ipsilaterale mekanisk stimulering af ionen område i den første postoperative uge (figur 2). I løbet af næste uge, er denne hyporesponsiv erstattet af en hyperresponsivitet. Starten på hyperreaktivitet kan variere mellem rotter, som det fremgår af den stigende gennemsnitlige scores og aftagende variation. Hyperresponsivitet har vist sig at vare op til 120 dage efter operationen. Der er også en lille stigning i modtagelighed for contralateral mekanisk stimulering i Ion-CCI rotter, men det kan være næsten statistisk signifikant fra den i sham-opererede rotter.
. Figur 1. Post-operative ændringer i isolerede ansigt grooming adfærd efter Ion-CCI Datapunkter repræsenterer middelværdien (± SEM, n = 12 pr gruppe) mængde tid brugt på isolerede ansigt grooming (A) og den gennemsnitlige (± SEM; n = 12 pr gruppe) antal isolerede ansigt grooming episoder (B) en dag før ion kirurgi (præ) og postoperative dage 5 til 26.
. Figur 2. Postoperative ændringer i reaktionsevne til mekanisk stimulering efter Ion-CCI Datapunkter repræsenterer middelværdien (± SEM; n= 12 pr gruppe) respons score von Frey hår stimulering af det ligerede ion område en dag før ion kirurgi (Pre) og post-operative dage 4 til 15 (tilpasset fra Deseure et al, 2003).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det mest interessante aspekt af ionen-CCI-modellen er, at den giver en enestående grad af spontan, ikke-fremkaldt (neuropatisk) smerter. De fleste dyreforsøg af neuropatisk smerte, ved hjælp af spinal nerve modeller, udelukkende behandle nocifensive adfærd (f.eks., Vokalisering og tilbagetrækning reaktioner), hvilket afspejler overfølsomhed over for mekaniske eller termiske stimuleringer 12. Men chefen klinisk klage hos patienter pågår smerte, ikke hyperalgesi eller allodyni 13.
Nærværende artikel beskriver to mål for neuropatisk smerte efter Ion-CCI, isoleret ansigt grooming (spontane smerter) og lydhørhed over for von Frey hår stimulation (mekanisk allodyni). Andre mål for neuropatisk smerte adfærd efter Ion-CCI er også blevet beskrevet andetsteds, dvs. termisk hyperalgesi 14 og kuldeallodyni 15. Desuden nyudviklede metoder til orofaciale smerter vurdering såsom Orofacial Pain Assessment Device (OPAD) 16-17 eller et måltid varighed som et mål for orofaciale nociceptive responser 18, kan vise sig at være værdifulde foranstaltninger af smerter efter Ion-CCI.
Nærværende artikel beskriver en intra-orbital tilgang til Ion. Bemærk, at to andre fremgangsmåder, dvs., en perifer tilgang via et snit i den behårede hud caudale til vibrissal pad og en intraoral tilgang, er også mulige. Selvom det perifere tilgang er langt den nemmeste teknik, intra-orbital fremgangsmåde har den klare fordel, at forlade den fine muskulatur, der styrer vibrissal bevægelser intakt og måske endnu vigtigere, det undgår et snit sår i det område af den skadede nerve, der kan alvorligt hæmme sensorisk test i denne region. Andre forfattere har med succes anvendt den intra-oral tilgang 14. Men den tætte kontakt mellem den ventrale side af-ion og en knoklet højderyg på den ventrale ende af maxilLary knogle gør intra-oral tilgang synes mere kompliceret for os og kirurgisk udfordrende end den intra-orbital tilgang.
I betragtning af den tætte nærhed af det kirurgiske felt til mundingen af rotter, anæstesi via IP injektion (ic pentobarbital) blev valgt frem for inhalationsanæstetika (f.eks isofluran). Men i betragtning ulemperne ved pentobarbital såsom risiko for overdosering, respirationsdepression, opbygning af væske i de øvre luftveje, andre anæstetika eller endda inhalationsanæstesi via en gas anæstesi maske for stereotaksiske rammer, kan overvejes. Det er vores erfaring, omhyggelig dosering, rettidig administration af atropin, så snart dyret bliver bedøvet (selv delvist), korrekt vedligeholdelse af kropstemperatur, og aspiration af væske fra de øvre luftveje minimerer de risici der er forbundet med pentobarbital.
Variabiliteten mellem ion-CCI rotter i en mængde påansigt soigneringsadfærd kan være ganske høj. For nylig er det blevet vist, at en del af denne variation kan elimineres ved at observere rotter oftere 9. To gange daglige observationer forøgede signifikant statistisk styrke, hvilket reducerer antallet af dyr, der er nødvendige. Svar på von Frey hår stimulering af ion territorium er kategoriseret i henhold til en række rang-ordnet beskrivende svarkategorier (jf ovenfor). Det kan betragtes som en ulempe, at de data, der skal analyseres nonparametrically og repræsenteret af nonparametriske foranstaltninger af central tendens (fx median) og variation (f.eks interquartiles). Det er blevet hævdet, at resultaterne af parametrisk analyse viser en meget god overensstemmelse med de ikke-parametrisk analyse, og at median scoringer ikke passende visualisere effekterne af eksperimentelle betingelser på respons scores 10.
De vigtigste anvendelser af Ion-CCI-modellen er i Pharmacological afprøvning af eksisterende eller nyudviklede smertestillende medicin, udvikling af nye terapeutiske strategier og studiet af de patofysiologiske mekanismer, der er involveret i udvikling og vedligeholdelse af (trigeminus) neuropatisk smerte.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chromic catgut | Dynek | CG504 | |
| Nembutal (pentobarbital) | Pharmacy | ||
| Atropine | Pharmacy | ||
| Clippers for small animals - Favorita II | Aesculap | GT104 | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51600 | |
| Ophthalmic ointment (Liposic) | Pharmacy | ||
| Homeothermic monitor system | Harvard Apparatus | PY8 50-7221-F | |
| Cotton applicator | Pharmacy | ||
| Precision cotton swab | Qosina | 10225 | |
| Operation microscope | Kaps | SOM 62 | |
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
| Dumont forceps - Micro-blunted tips (#5/45) | Fine Science Tools | 11253-25 | |
| Scissors - blunt tips | Fine Science Tools | 14574-09 | |
| Polyester sutures - Mersilene (4-0) | Ethicon | R871H | |
| Digital video camera | Sony | HDR-CX330E | |
| Semmes-Weinstein Von Frey Aesthesiometer kit | Stoelting | 58011 |
References
- Jensen, T. S., Gottrup, H., Sindrup, S. H., Bach, F. W. The clinical picture of neuropathic pain. Eur J Pharmacol. 429 (1-3), 1-11 (2001).
- Meyer Rosberg, K., et al. Neuropathic pain a multidimensional burden for patients. Eur J Pain. 5 (4), 379-389 (2001).
- Meyer Rosberg, K., et al. Comparison of the SF 36 and Nottingham Health Profile in patients with chronic neuropathic pain. Eur J Pain. 5 (4), 391-403 (2001).
- Vos, B. P., Strassman, A. M., Maciewicz, R. J. Behavioral evidence of trigeminal neuropathic pain following chronic constriction injury to the rats infraorbital nerve. J Neurosci. 14, 2708-2723 (1994).
- Clavelou, P., Pajot, J., Dallel, R., Raboisson, P. Application of the formalin test to the study of orofacial pain. Neurosci Lett. 103, 349-353 (1989).
- Vos, B. P., Hans, G., Adriaensen, H. Behavioral assessment of facial pain in rats face grooming patterns after painful and non-painful sensory disturbances in the territory of the rats infraorbital nerve. Pain. 76 (1-2), 173-178 (1998).
- Deseure, K. R., Adriaensen, H. F. Comparison between two types of behavioral variables of non evoked facial pain after chronic constriction injury to the rat infraorbital nerve. Comp Med. 52 (1), 44-49 (2002).
- Deseure, K., Adriaensen, H. Nonevoked facial pain in rats following infraorbital nerve injury a parametric analysis. Physiol Behav. 81 (4), 595-604 (2004).
- Deseure, K., Hans, G. Behavioral study of non evoked orofacial pain following different types of infraorbital nerve injury in rats. Physiol Behav. 138, 292-296 (2015).
- Deseure, K., Koek, W., Adriaensen, H., Colpaert, F. C. Continuous administration of the 5 hydroxytryptamine1A agonist (3-Chloro-4-fluoro-phenyl)-[4-fluoro-4-[[(5-methyl-pyridin-2-ylmethyl) -amino]-methyl]piperidin-1-yl]-methadone (F 13640) attenuates allodynia like behavior in a rat model of trigeminal neuropathic pain. J Pharmacol Exp Ther. 306 (2), 505-514 (2003).
- Zimmerman, M. Ethical Guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals. Pain. 16, 109-110 (1983).
- Mogil, J. S., Crager, S. E. What should we be measuring in behavioral studies of chronic pain in animals. Pain. 112 (1-2), 12-15 (2004).
- Backonja, M. M., Stacey, B. Neuropathic pain symptoms relative to overall pain rating. J Pain. 5 (9), 491-497 (2004).
- Imamura, Y., Kawamoto, H., Nakanishi, O. Characterization of heat hyperalgesia in an experimental trigeminal neuropathy in rats. Exp Brain Res. 116, 97-103 (1997).
- Chichorro, J. G., Zampronio, A. R., Souza, G. E., Rae, G. A. Orofacial cold hyperalgesia due to infraorbital nerve constriction injury in rats reversal by endothelin receptor antagonists but not non steroidal anti inflammatory drugs. Pain. 123 (1-2), 64-74 (2006).
- Kramer, P. R., Bellinger, L. L. Meal Duration as a Measure of Orofacial Nociceptive Responses in Rodents. J Vis Exp. (83), e50745 (2014).
- Rossi, H. L., et al. Characterization of bilateral trigeminal constriction injury using an operant facial pain assay. Neuroscience. 224, 294-306 (2012).
- Anderson, E. M., et al. Use of the Operant Orofacial Pain Assessment Device (OPAD) to Measure Changes in Nociceptive Behavior. J Vis Exp. (76), 50336 (2013).
