Introduction
Dobbelt emulsioner består af dråber adskilt fra et luftfartsselskab fase ved en mellemliggende, blandbar væske lag, og er af særlig interesse på grund af deres potentielle anvendelser i industrielle, farmaceutiske og biologiske anvendelser 1. I nogle tilfælde, evnen til at indkapsle høje kemiske forbindelser i en dobbelt emulsion kerne muliggør materiale, der skal beskyttes, og frigives på en kontrolleret måde. For eksempel kan medikamenter indkapsles under opløselighed betingelser ikke er egnede til den eksterne bærevæske 2. Derudover kan det mellemliggende olielag anvendes som en kapsel skabelon for indkapsling og afgivelse af lægemidler, kosmetik og næringsstoffer 3. I biologi, dobbelt emulsioner er også egnede til screening med højt gennemløb, fordi de tillader en massiv antal sub-nanoliter eksperimenter, der skal udføres, detekteres derefter og sorteres ved hjælp af en fluorescens-aktiveret cellesortering (FACS) instrument 4,5.
ent "> Udformningen af dobbelte emulsioner med ønskede ydelsesegenskaber kræver præcis styring af dobbelt emulsion størrelse, sammensætning og ensartethed. Selv om bulk-emulgering processer, såsom membran emulgering anvendes i industrien, er de resulterende emulsioner er meget polydisperse, der udviser en lang række funktionelle egenskaber 1. Feltet af dråber mikrofluidik naturligt velegnet generering af monodisperse emulsioner med nøje kontrolleret sammensætning 6. Mikrofluid dobbelt emulsion generation er blevet opnået med to strategier, sekventiel drop making og glas kapillar flow fokusering. Dobbelte emulsioner kan genereres på plane PDMS enheder ved hjælp af en totrins-drop beslutningsproces. Først vandig-i-olie-emulsioner er skabt ved hjælp af en vand-i-olie drop-making region af en indretning med hydrofobe kanalvæggene. Desuden kan emulsionen være flød eller reinjiceret i en drop-making region med hydrofile vægge velegnet til olie i vanddrop-making 4. Men hydrofil overfladebehandling af PMDS kræver en ekstra fremstillingstrin og er ofte midlertidig 7. Den mest styrbar og reproducerbar metode til at danne dobbeltstrengede emulsioner ved co-axial flow fokusering, en teknik banebrydende hjælp af glas kapillar mikrofluidik, hvorved en koncentrisk jet indeholdende de tre faser er forskudt gennem en lille åbning til frembringelse af monodisperse dråber 8. Denne teknik giver mulighed for fremstilling af dråber meget mindre end kanaldimensioneme, med den nøjagtige størrelse og sammensætning af den dobbelte emulsion er en funktion af strømningshastighederne for hver fase. Den store forskel mellem dråber og kanal størrelse og den beskyttende ydre kappe flow forhindrer dråber i at kontakte kanalvæggene, rendering overfladebehandling unødvendig. Men sådanne glas enheder kræver brugerdefinerede fremstilling af koniske kapillære tips, sammen med omhyggelig montering og forsegling. Tidligere efterforskere har brugt 3D blød litografigrafi at generere dobbelt emulsioner hjælp flow fokus fysik, men disse enheder produceret emulsioner med diametre> 150 um 9,10, omtrent en størrelsesorden større end objekter typisk sorteret med FACS. Et attraktivt alternativ ville omfatte den robuste funktionalitet og lille dråbe generation af glas kapillar koaksial flow fokus med den lethed af fremstillingen af PDMS blød litografi.I denne artikel beskriver vi en dobbelt emulsion generator, der anvender co-axial flow fokus at producere ≤ 50 um emulsioner og er konstrueret udelukkende ved hjælp 3D blød litografi 11. Vores enhed bruger et clamshell tilgang til at fremstille anordninger, der omfatter en lille forskydning kanal (figur 1) for at tilnærme emulsionsdannelsen processer på en trukket glas kapillardyse. Endnu vigtigere er, disse enheder kræver ingen specifik overfladebehandling, og alle polymere konstruktion giver nem og gentagelig fabrikation scalable til et stort antal identiske enheder. Her vil vi skitsere design, fabrikation, og test af den dobbelte emulsion generator. Double emulsion generation vist sig at være robust og gentagelig ned til dråbediametre af 14 um. Koblingen af funktionalitet med henblik på nem fremstilling gør denne enhed en attraktiv mulighed for udvikling af nye dobbeltemulsion applikationer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. SU8 Master Fabrication
- Design af mikrofluide strukturer til to lag fabrikation AutoCAD-software og har design trykt af en sælger på printkort film med 10 um opløsning. Detaljerne i enhedens design er givet i en vedhæftet henvisning 11 og kanal geometrier er vist i figur 1. Lagene bør omfatte opretningsmærker at hjælpe sammenstillet funktioner fra hver fabrikation lag 12.
- Placere en forhånds-renset 3 inch diameter silicium wafer på et spin coater og tænd for vakuum til at anbringe det til patronen. Anvend 1 ml SU8-3035 i centrum af skiven og spin for 20 sekunder ved 500 rpm, derefter 30 sekunder ved 2.000 rpm, hvilket giver en lagtykkelse på 50 um.
- Fjern skiven og bages på en 135 ° C varmeplade i 30 minutter. Lad wafer at afkøle til stuetemperatur, før man går videre til det næste trin.
- Udsætte coatede wafer til den 1. lagmaske (figur 2A
- Placer skiven på spin coater og tænd for vakuum til at anbringe det til patronen. Anvend 1 ml SU8-2050 i centrum af skiven og spin for 20 sekunder ved 500 rpm, derefter 30 sekunder ved 1375 rpm, hvilket resulterer i et lag, som giver en ekstra tykkelse på 135 um.
- Fjern wafer og bages på en 135 ° C varmeplade i 30 min, derefter afkøles til stuetemperatur, før du flytter til næste trin.
- Juster 2. lagmaske (figur 2B) på geometri mønstrede i 1.3 og udsætte den coatede wafer til en kollimeret 190 mW, 365 nm LED i 3 min. Efter eksponering, placere på en 135 ° C varmeplade i 1 minut, derefter afkøles til stuetemperatur, før du fortsætter til næste trin.
- Udvikling af masker ved at nedsænke i en omrørt bad af propylenglycolmonomethylether acetat i 30 minutter. Vask waferi isopropanol og bages på en 135 ° C varmeplade i 1 min. Placer udviklede mester i en 100 mm petriskål til PDMS støbning.
2. PDMS Device Fabrication
- Forbered 10: 1 PDMS ved at kombinere 50 g af siliconen med 5 g hærder i et plastbæger. Blande indholdet med en roterende værktøj udstyret med en rørepind. Afgasses blandingen i en ekssikkator i 30 minutter, eller indtil alle luftbobler fjernes.
- Hæld PDMS til at give en tykkelse på 3 mm over master og læg tilbage i ekssikkator til yderligere afgasning. Når alle boblerne fjernes, bage enheden ved 60 ° C i 2 timer.
- Skær enheden fra formen ved hjælp af en skalpel og sted på en ren overflade med mønstrede side opad. Skær PDMS formen i halvdel med et barberblad til at adskille Master 1 fra Master 2 (figur 3a). På det stykke, som indeholder 50 um væskehåndtering geometri præget af Mester 1, punch de strømningstekniske ind- og udgange med en 0,75 mm biopsi punch.
- Plasma behandle enheder på 1 mbar O 2 plasma i 60 sekunder i en 300 W plasma renere. Fugt overfladen af unpunched stykke PDMS med en dråbe deioniseret vand til midlertidigt at forsinke PDMS-PDMS binding og tjene som et smøremiddel. Mens du ser gennem et stereoanlæg mikroskop, sted Master 1 på Master 2 overflade og skub overfladerne relativt indtil en mekanisk lås opnås, når de forsænkede rammer og udstående rammer i figur 3A mate.
- Placer enheden i en 60 ° C varm ovn og bages den samlede enhed (figur 3B) i to dage ved 60 ° C for at afdampe vandet og komplet binding.
3. Fremstilling af reagenser
- Fyld 1 ml sprøjte med destilleret vand til den indre fase.
- Fyld 1 ml sprøjte med HFE 7500 fluorholdige olie med 1 vægt. % Biokompatibel overfladeaktivt overfladeaktivt 13 for den midterste fase.
- Fyld 10 ml sprøjte med 10 vægt. % Polyethylene glycol (PEG) i vand indeholdende 1 vægt. % Tween 20 og 1 vægt. % Natriumdodecylsulfat for den kontinuerlige fase.
4. System Forberedelse
- Placer mikrofluid chip på scenen af et omvendt mikroskop kombineret med et digitalt kamera i stand til <100 mikrosekunder lukkerhastigheder.
- Monter alle sprøjter på sprøjtepumper og vedhæfte 27 g nåle. Vedhæft ~ 30 cm længder af PE-2 rør på p og sæt de løse ender i den passende udstansede huller i enheden.
- Indsæt en længde på PE-2 10 cm ind i udgangsport på enheden, og placer den anden ende i en samling affaldsbeholder.
- Prime enheden ved at køre sprøjtepumper ved høje hastigheder (2.000 ul / min), indtil væske i slangesegmenterne når indløbsportene på enheden.
5. Emulsion Generation
- Fokus mikroskopet på en region, der indeholder 50 um x 50 um åbning ognedstrømsudgang kanal.
- Indstil sprøjtepumper at levere fluid til det dobbelte emulsion generator ved strømningshastigheder på 250 pl / time for den indre fase, 100 pl / time for den midterste fase, og 700 pl / time for den kontinuerlige fase og vente 10 minutter for ækvilibrering.
- Vedligehold strømningshastigheder af de indre og midterste faser ved 250 ul / time og 100 ul / time, hhv. Indstil strømningshastigheden af den ydre fase ved 1.050 pi / time. Vent 3-5 min for den dobbelte emulsioner generation til at stabilisere under denne sæt strømningsforhold.
- Erhverve 5 sek af videobilleder ved 30 Hz for offline behandling via manuel billedanalyse.
- Gentag 5.3 og 5.4 med strømningshastigheder i tabel 1. De indre og midterste fase strømningshastigheder holdes konstant og bærebølgefasen strømningshastigheden varieres ved at justere indstillingen af sprøjtepumpe.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den dobbelte emulsion generator består af en co-aksial strømning fokuseringsindretning skabt ved hjælp af 3D PDMS fabrikation (figur 1A). Geometrien muliggør, at dannelsen af en trefaset koaksial jet, der skal klippes i en firkant, 50 um x 50 um åbning, således at dannelsen af vand / olie / vand-emulsioner dobbelte (figur 1B, 1C). Den indre vandige fase og den midterste oliefase bringes sammen ved en forbindelse med kanaldimensioneme af 10 um x 50 um (figur 1D, punkt "1"). På grund af hydrofobicitet PDMS, de fluorerede olie knus kanalvæggene og indre fase forbliver i midten af kanalen som fluiderne bevæger sig i en kontinuerlig stråle, indtil en pludselig ekspansion kanal ekspansion er nået (figur 1 D, punkt "2" ). På dette sted, er de indre to faser injiceret i midten af en 320 um høj junction, der tillader relativt koncentriske indførelse af den vandige bærer fase. De tre faser er tvunget ind i en 50 um x 50 um åbning (figur 1D, punkt "3"), hvorved den høje strømningshastighed bærebølgefasen sakse de indre to faser i en lang, tynd hårlok, der nedbrydes til fra ensartede dråber ( Figur 1E).
3D PDMS fabrikation kræver koblingen af to unikke PDMS forme i en clamshell konfiguration efter støbning på tolags litografiske mestre. En 50 um høje lag anvendes til at danne de indre og midterste fluidhåndtering kanaler, sammen med klipning åbningen på Master 1 (figur 2A), sammen med en gratis fremspringende og forsænkede rammer på modstående herre. En yderligere 135 um høje lag bruges til at oprette bærevæsken og udgangskanaler (figur 2B). Montering af den dobbelte emulsion generator udnytter than forsænket og rager rammer (figur 3A) for geometrisk tilpasning efter plasmabehandling (figur 3B).
Den dobbelte emulsion indretning blev testet ved en række strømningsforholdene at påvise dannelsen af varieret størrelse, monodisperse dobbelt emulsioner. Til disse eksperimenter blev de indre og midterste fase strømningshastigheder holdes konstant og bærebølgefasen Strømningshastigheden blev modificeret til at påvirke forskydningskraften under dråber generation. Eksperimentelle betingelser er parameteriseret ved forholdet bærebølgefasen flow (Q c) og summen af de indre to faser strømmer (Q sum). Billeder af dråber generation til eksperimenter udført ved Q c / Q sum fra 3 til 57 er vist i figur 4. Et langstrakt område, der indeholder de indre to faser er observeret at rage ind i 50 um x 50 um åbning og bryder i små dråber, der er konvektionsvarme nedstrøms. jegncreasing strømmen af bærebølgefasen (stigende Q c / Q sum) fører til de indre faser klippes i gradvis tyndere regioner, der producerer mindre dråber. Dobbelt emulsioner fremstillet ved enheden ved forskellige strømningshastigheder viser en gennemsnitlig diameter variationskoefficient på 5,2%. Histogrammer af dråbediametre for udvalgte værdier af Q C / Q summen viser også den relative ensartethed i størrelsen af dråberne frembringes (Figur 5). Enheden viser en evne til at danne dobbeltstrengede emulsioner betydeligt mindre åbningen bredde og viser en klar faldende tendens med øget Q c / Q sum (figur 6). Ved højeste bærebølgefase flow testet, 14 um dobbelt emulsioner blev dannet ved hjælp af 50 um x 50 um åbning.
Figur 1. Geometri af dobbe emulsion generator. (A) 3D-model af fremstillede enhed. (B) vertikalt tværsnit af den centrale kanal, der viser indførelsen af den indre (grå), midterste (røde) og bærer (blå) faser. (C) Tværsnit der viser jet indeholdende de indre to faser ind i pladsen åbning. (D) Ovenfra af emulsion generation i enheden. Ved junction (1) injektion af den hydrofobe midterste fase hjulpet af de hydrofile PDMS, som får den til at overtrække kanalvæggene. Ved junction (2) udvider kanalen og en stråle af de indre to faser forskydes i åbningen (3) ved den højere strømningshastigheden af den kontinuerlige fluid til et punkt, hvor fysiske årsag dråbedannelse. (E) En mikroskop billede af dobbelt emulsion generation i enheden. Klik her for at se en større version af dette tal. </ p>
Figur 2. Litografisk produktion af mestrene. (A) Masken anvendes til fremstilling af 50 um funktioner. Master 1 anvendes til at støbe de strømningstekniske indløb, den indre / midterste fase junction, emulsionen generation orifice, og en forsænket trug til tilpasning. Master 2 indeholder en hævet kant bruges til justering. (B) Masken anvendes til fremstilling af 135 um funktioner. Førerne er spejlbilleder, der indeholder bærerfluiden kredsløb og exit-kanalen. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. Montering af PDMS-enheden. (
Figur 4. Billeder af genererede dobbelt emulsioner ved forskellige strømningshastigheder. Strømningshastigheden af den ydre fase er ændret for at ændre Q c / Q sum, som gives til venstre for hvert billede. Stigende Q c / Q sum indsnævrer stråle af de indre væsker bliver klippet gennem åbningen, hvilket skaber mere og mere små dråber. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5. Histogrammer dobbelte emulsionssmådråber størrelser ved forskellige strømningshastigheder. Den gennemsnitlige variationskoefficient af diameteren af emulsionsdråber produceret på et givet sæt af strømningsforhold er 5,2%. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 6. dråbediameter versus normaliseret strømningshastighed parameter. Justering af strømningshastigheden af den kontinuerlige fase tillader produktion af dobbelte emulsioner, der er 30% -100% af åbningen diameter. Klik her for at se en større version af dette tal.
Tabel forrentede parametre 1. Flow anvendt til forsøgene. Den indre fase og midterste fase strømningshastigheder (Q I, Q m) holdes konstant, giver en konstant kombineret strømningshastighed (Q sum). Bærebølgefasen strømningshastighed (Qc) varieres for at frembringe dobbelt emulsioner med forskellige diametre. Forholdet Q c / Q sum er den vigtigste parameter, der beskriver nondimensional eksperimentelle betingelser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den dobbelte emulsion genererer geometri beskrevet her er designet til at efterligne fysik glas kapillar enheder 8. I disse er rettet cylindriske glas kapillærer anvendes til at skabe et trefaset koaksial stråle, der er klippet i ensartede dobbelt emulsionssmådråber. Funktionen af vores 3D PDMS enhed er afhængig af den centrale tilpasning af små features dannet med 50 um høje fabrikation med bærebølgefasemålinger kanaler, der er 320 um i totalhøjde. Der er et betydeligt potentiale for at misaligning de højere funktioner mønstrede af 2. lagmaske i trin 1.7 med hensyn til 50 um høje geometri, hvis masker ikke nøjagtigt på linie. Korrekt justering kan blive hjulpet ved at designe opretningsmærker, såsom koncentriske cirkler i masker til at blive placeret under foto mønster. Plasma binding af to PDMS halvdele af enheden er en anden proces, der kan føre til betydelige forskydninger af den endelige indretning. Plasma limningPDMS til PDMS er generelt øjeblikkelig, så i trin 2.4 beskriver vi befugtningen af en anordning overflade med DI-vand at forsinke binding og tillade manipulation, således at tilpasningen rammer vist i figur 3A kan tillades at låse. Hvis dette forsøges uden tilstrækkelig befugtning, vil PDMS overflader irreversibilitet obligation, før de kom ind i korrekt justering, og enheden skal bortskaffes og nye PDMS forme lavet.
Den dobbelte emulsion enheden er konstrueret til at drage fordel af fremstillingsteknik, at dette fører til ensartet hydrofobe overfladeegenskaber. Men drift uden for de parametre, der er beskrevet i protokollen kræver en vis forståelse for de krævede strømningstekniske processer. En krydset af de indre og midterste faser (figur 1D, punkt "1"), en relativt høj strøm af den indre fase og lavt flow af den midterste fase skabe en tofaset stråle, med den hydrofobe midterste fase coating kanalvæggene. Hvisden forholdsmæssige flow af den midterste fase forøges, generering af diskrete vand-i-olie dråber vil begynde at forekomme, hvilket eliminerer evnen til at danne en sammenhængende trefaset jet til dråbedannelse i åbningen (figur 1D, punkt "3" ). Efter kanalen ekspansion (figur 1D, punkt "2"), en betydelig mængde af bærefase flow kræves for at skabe geometriske adskillelse mellem den midterste fase og de hydrofobe kanalvæggene. Reduktioner i bærerfase flow vil i sidste ende føre til midten fase befugtning de hydrofobe enhed vægge. Betydelige reduktioner i luftfartsselskabet fase flow kan skabe flow forhold, der er tilstrækkelige til at klippe de indre faser ind i en lang, tynd glødetråd, og dermed radikalt ændre fysik dobbelt emulsion dråbedannelse.
Når bygget, er denne enhed designet til at producere dobbelt emulsioner fra 14 til 50 pm, en bekvem størrelse til sortering ved hjælp kommercielle FACSinstrumenter. Hvis der ønskes dobbelt emulsioner uden for dette størrelsesområde, skal skaleres fra 50 um x 50 um størrelse her anvendte orifice dimensioner. Da enheden er designet til at producere vand / olie / vand dobbelte emulsioner med ensartet hydrofobe overfladeegenskaber, kan olie / vand / olie-dobbelte emulsioner ikke skabt, medmindre der var en overfladebehandling påføres gøre enheden ensartet hydrofile.
Dette arbejde viser en nem at fremstille PDMS anordning, der kan den robuste dannelsen af vand / olie / vand dobbelt emulsioner. Selvom tidligere efterforskere har rapporteret dannelsen af dobbelte emulsioner i enheder, der er oprettet ved hjælp af 3D-litografi 14,15, de dobbelte emulsioner dannet i deres enheder havde diametre, der blev målt i 100'erne af um. Indretningen rapporteret her er velegnede til at danne dobbelt emulsioner en størrelsesorden mindre end dette, hvilket giver mængder svarende til pattedyrceller og velegnet til sortering af FAKS.
Selv om disse resultater også kan opnås ved hjælp af glas kapillar mikrofluidik, opdigte glas enheder er besværlig og kræver mange hands-on trin pr enhed. Til vores alle PDMS enhed, fabrikation hovedsageligt består af molding, limning, og bagning PDMS plader, processer, der er enkel, reproducerbar og let at skalere til store antal.
Anvendeligheden af en litografisk fabrikeret enhed at generere dobbelt emulsioner ved hjælp af co-axial flow fokusering er blevet påvist. Vi håber, at den ligefremme fabrikation og robuste funktionerne på dette dobbelte emulsion generator design bør føre til dets tilpasning til videnskabelige og industrielle applikationer. Efterforskere tidligere afskrækket af de specialiserede færdigheder, der kræves for at arbejde i glas kapillar mikrofluidik, bør være mere trygge ved at bruge PDMS blød litografi, nu en fælles laboratorieteknik. Endvidere er de små dråbestørrelser, der kan fremstilles er velegnet til forbedre præstationenm celle og biologiske assays i dråber, og kvantificering og sortering ved hjælp af FACS. Til industrielle applikationer, er det allerede blevet vist, at disse typer af enheder kan fremstilles i arrays og paralleliseret 10, muliggør dobbelt emulsion generation satser at stige med størrelsesordener i forhold til enkelte enheder. Desuden, evnen til at danne små dobbelt emulsioner i store koaksiale flow fokuserer kanaler bør gøre enheden modstandsdygtig over for tilsmudsning og tilstopning, hvilket er kritisk, når parallelizing enhederne skal køre i lange varigheder uden indgriben.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Dette arbejde blev understøttet af en Research Award fra California Institute for Kvantitative Biosciences (QB3), den Bridging the Gap Award fra Rogers Family Foundation, UCSF / Sandler Foundation Program til Gennembrud Biomedical Research, et tilskud fra BASF, og NSF gennem fakultetet Tidlig Karriereudvikling (KARRIERE) Program (DBI-1.253.293).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Photomasks | CadArt Servcies | ||
| 3" silicon wafers, P type, virgin test grade | University Wafers | 447 | |
| SU-8 3035 | Microchem | Y311074 | |
| SU-8 2050 | Microchem | Y111072 | |
| Sylgard 184 silicone elastomer kit | Krayden | 4019862 | |
| 1 ml syringes | BD | 309628 | |
| 10 ml syringes | BD | 309604 | |
| 27 gaugue needles | BD | 305109 | |
| PE 2 polyethylene tubing | Scientific Commodities, Inc. | B31695-PE/2 | |
| Novec 7500 | Fisher Scientific | 98-0212-2928-5 | Commonly knowns as HFE 7500 |
| Biocompatable surfactant | Ran Biotechnologies | 008-FluoroSurfactant | |
| 35,000 MW PEG | Sigma Aldrich | 1546660 | |
| Tween 20 | Sigma Aldrich | P1369 | |
| Sodium dodecyl sulfate | Sigma Aldrich | L3771 |
References
- Van Der Graaf, S., Schroën, C. G. P. H., Boom, R. M. Preparation of double emulsions by membrane emulsification - A review. J. Membrane Sci. 251 (1-2), 7-15 (2005).
- Laugel, C., Baillet, A. P., Youenang Piemi, M., Marty, J., Ferrier, D. Oil-water-oil multiple emulsions for prolonged delivery of hydrocortisone after topical application: comparison with simple emulsions. Int. J. Pharm. 160 (1), 109-117 (1998).
- Kim, S. H., Kim, J. W., Cho, J. C., Weitz, D. A. Double-emulsion drops with ultra-thin shells for capsule templates. Lab Chip. 11 (18), 3162-3166 (2011).
- Lim, S. W., Abate, A. R. Ultrahigh-throughput sorting of microfluidic drops with flow cytometry. Lab Chip. 13 (23), 4563-4572 (2013).
- Bernath, K., Hai, M., Mastrobattista, E., Griffiths, A. D., Magdassi, S., Tawfik, D. S. In vitro compartmentalization by double emulsions: sorting and gene enrichment by fluorescence activated cell sorting. Anal. Biochem. 325 (1), 151-157 (2004).
- Seemann, R., Brinkmann, M., Pfohl, T., Herminghaus, S.
- Bauer, W. A. C., Fischlechner, M., Abell, C., Huck, W. T. S. Hydrophilic PDMS microchannels for high-throughput formation of oil-in-water microdroplets and water-in-oil-in-water double emulsions. Lab Chip. 10 (14), 1814-1819 (2010).
- Utada, A. S., Lorenceau, E., Link, D. R., Kaplan, P. D., Stone, H. A., Weitz, D. A. Monodisperse double emulsions generated from a microcapillary device. Science. 308 (5721), 537-541 (2005).
- Chang, F. C., Su, Y. C. Controlled double emulsification utilizing 3D PDMS microchannels. J. Micromech. Microeng. 18 (6), 065018 (2008).
- Romanowsky, M. B., Abate, A. R., Rotem, A., Holtze, C., Weitz, D. A. High throughput production of single core double emulsions in a parallelized microfluidic device. Lab Chip. 12 (4), 802-807 (2012).
- Tran, T. M., Cater, S., Abate, A. R. Coaxial flow focusing in poly(dimethylsiloxane) microfluidic devices. Biomicrofluidics. 8 (1), 016502 (2014).
- Lithography. , Available from: https://www.memsnet.org/mems/processes/lithography.html (2015).
- O'Donovan, B., Eastburn, D. J., Abate, A. R.
- Chang, F. C., Lin, H. H., Su, Y. C. Controlled W/O/W double emulsification in 3-D PDMS micro-channels. 3rd IEEE Int. Conf. Nano/Micro Eng. Mol. Syst. NEMS, , 792-795 (2008).
- Romanowsky, M. B., Abate, A. R., Rotem, A., Holtze, C., Weitz, D. A. High throughput production of single core double emulsions in a parallelized microfluidic device. Lab Chip. 12 (4), 802 (2012).
