Introduction
Dubbla emulsioner består av droppar separerade från en bärare fas av en mellanliggande, oblandbar vätskelager, och är av särskilt intresse på grund av deras potentiella användningsområden inom industri, läkemedel och biologiska tillämpningar 1. I vissa fall, förmågan att inkapsla höga föreningar värde på en dubbelemulsion kärna möjliggör materialet som skall skyddas och frisättas på ett kontrollerat sätt. Exempelvis kan läkemedel inkapslas under förhållanden som inte är lämpliga för det yttre bärarfluidum 2 löslighetsegenskaper. Dessutom kan det mellanliggande oljeskiktet användas som en kapsel mall för inkapsling och leverans av läkemedel, kosmetika och näringsämnen 3. I biologi, dubbla emulsioner är också användbara vid högeffektiv screening eftersom de tillåter ett mycket stort antal undernanoliter experiment som skall utföras, sedan detekteras och sorteras med användning av en fluorescensaktiverad cellsortering (FACS) instrumentet 4,5.
ent "> Utformningen av dubbla emulsioner med önskade prestandaegenskaper kräver exakt kontroll av dubbelemulsion storlek, sammansättning, och enhetlighet. Fastän bulkemulsionsprocesser, såsom membran emulgering, används inom industrin, de resulterande emulsionerna är mycket polydispersa, som uppvisar en brett utbud av funktionella egenskaper 1. Fältet dropp mikrofluidik är naturligtvis lämpad generering av monodispersa emulsioner med noggrant kontrollerad sammansättning 6. mikroflödesdubbelemulsion generation har uppnåtts med två huvudstrategier, sekventiell nedgång gör och glas kapillär flödes fokusering. Dubbla emulsioner kan genereras i plana PDMS enheter med en två-stegs droppe tillverkningsprocessen. Först vattenhaltig-i-olja-emulsioner är skapade med användning av en vatten-i-olja-droppe-making region av en enhet med hydrofoba kanalväggarna. Därefter kan emulsionen vara flödade eller återinjiceras i en drop-making region med hydrofila väggar anpassade för olja i vattendrop-making 4. Men hydrofila ytbehandling av PMDS kräver ytterligare tillverkningssteg och är ofta tillfälliga 7. Den mest kontrollerbar och repeterbar metod för att bilda dubbla emulsioner är genom koaxiell flödes fokusering, en teknik banat väg med användning glaskapillär mikrofluidik, varigenom en koncentrisk stråle innehållande de tre faserna skjuvas genom en liten öppning för att producera monodispersa droppar 8. Denna teknik tillåter för produktion av droppar är mycket mindre än kanaldimensioner, med den exakta storleken och sammansättningen av den dubbla emulsionen är en funktion av flödeshastigheterna för varje fas. Den stora skillnaden mellan dropp och kanalstorlek och skyddande yttre mantelflöde hindrar droppar från kontakt med kanalväggarna, vilket gör ytbehandling onödig. Sådana glas anordningar kräver anpassade tillverkning av avsmalnande kapillärer tips, tillsammans med noggrann montering och tätning. Tidigare forskare har använt 3D mjuk lithografi för att generera dubbel emulsioner med hjälp av flödesfokuserings fysik, men dessa enheter producerade emulsioner med diametrar> 150 pm 9,10, ungefär en storleksordning större än objekt typiskt sorterade med FACS. Ett attraktivt alternativ skulle omfatta den robusta funktioner och små dropp generation glaskapillär koaxial flöde fokusering med lättheten att tillverka PDMS mjuk litografi.I detta dokument beskriver vi en dubbelemulsion generator som använder koaxial flöde fokus att producera ≤ 50 pm emulsioner och är konstruerad helt med hjälp av 3D mjuk litografi 11. Vår enhet använder en vikbar strategi att tillverka enheter som innehåller en liten klippning kanal (figur 1) för att närma emulsionsbildningsprocesser i en drog glaskapillär munstycke. Ännu viktigare, dessa enheter kräver ingen specifik ytbehandling, och alla polymerkonstruktion ger enkel och repeterbar tillverkning scalable till ett stort antal duplicerade anordningar. Här, vi beskriva konstruktion, tillverkning och provning av den dubbla emulsionsgeneratorn. Dubbelemulsions generationen visar sig vara robusta och repeterbar ner till droppdiametrar av 14 | j, m. Kopplingen av funktionalitet med enkel tillverkning gör denna anordning en tilltalande alternativ för utveckling av nya dubbla emulsions tillämpningar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. SU8 Mästare Fabrication
- Utforma mikroflödesstrukturer för två skikt tillverkning med hjälp av AutoCAD och har mönster tryckta av en leverantör på kretskort film med 10 mikrometer upplösning. Detaljerna för enheten utformning ges i en bifogad referens 11 och kanalgeometrier visas i figur 1. Lagren bör innefatta inriktningsmärken för att samlokalisera funktioner från varje tillverkningsskiktet 12.
- Placera en förren 3 tum kisel diameter skiva på en spinnbeläggare och slå på vakuum att fästa den på chucken. Applicera 1 ml av SU8-3035 i centrum av skivan och snurra i 20 sekunder vid 500 varv per minut, sedan 30 sekunder vid 2000 varv per minut, vilket ger en skikttjocklek av 50 um.
- Avlägsna skivan och baka på en 135 ° C värmeplatta i 30 min. Låt skivan svalna till RT innan vi går vidare till nästa steg.
- Exponera belagda skivan till den 1: a lagermasken (Figur 2A
- Placera skivan på spinnbeläggare och slå på vakuum att fästa den på chucken. Applicera 1 ml av SU8-2050 i centrum av skivan och snurra i 20 sekunder vid 500 varv per minut, sedan 30 sekunder vid 1375 varv per minut, vilket resulterar i ett skikt som ger en ytterligare tjocklek av 135 | im.
- Ta ut skivan och grädda på 135 ° C kokplatta under 30 minuter och sedan svalna till RT innan du flyttar till nästa steg.
- Rikta in 2: a lagermasken (Figur 2B) på geometrin mönstrade i 1.3 och exponera den belagda skivan till en kollimerad 190 mW, 365 nm LED för 3 min. Efter exponering, placera på en 135 ° C kokplatta under 1 min och sedan svalna till RT innan du fortsätter till nästa steg.
- Utveckla maskerna genom nedsänkning i ett omrört bad av propylenglykol monometyleteracetat för 30 minuter. Tvätta skivani isopropanol och baka på en 135 ° C värmeplatta i 1 min. Placera den utvecklade mästare i en 100 mm petriskål för PDMS gjutning.
2. PDMS Device Fabrication
- Preparera 10: 1 PDMS genom att kombinera 50 g av silikonbas med 5 g av härdare i en plastkopp. Blanda innehållet med ett roterande verktyg försedd med en omrörningsstav. Avlufta blandningen i en exsickator under 30 minuter, eller tills alla luftbubblor avlägsnas.
- Häll PDMS för att ge en tjocklek av 3 mm på mastern och placera tillbaka in i torkapparat under ytterligare avgasning. När väl alla bubblor avlägsnas, baka anordningen vid 60 ° C under 2 h.
- Klipp enheten från formen med hjälp av en skalpell och plats på en ren yta med mönstrade sidan uppåt. Skär PDMS formen på mitten med ett rakblad för att separera Master 1 från Master 2 (figur 3a). På pjäsen innehåller 50 um flödeshantering geometri präglade av Master 1, punsch fluidic inlopp och utlopp med 0,75 mm biopsi punch.
- Plasma behandla enheter 1 mbar O 2 plasma för 60 sekunder i en 300 W plasma renare. Blöt ytan av ohålat stycke PDMS med en droppe avjonat vatten för att temporärt fördröja PDMS-PDMS bindning och fungera som ett smörjmedel. Medan du tittar genom ett stereomikroskop, plats Master 1 på Master 2 yta och skjut ytorna relativt tills ett mekaniskt lås uppnås när de infällda ramar och utskjutande ramar i figur 3A mate.
- Placera enheten i en ugn vid 60 ° och grädda den monterade anordningen (figur 3B) under två dagar vid 60 ° C för att avdunsta vattnet och fullständig bindning.
3. Beredning av reagens
- Fyll 1 ml spruta med destillerat vatten för den inre fasen.
- Fyll 1 ml spruta med HFE 7500 fluorerade olja med en vikt. % Biokompatibla ytaktiva tensiden 13 för mittfasen.
- Fyll 10 ml spruta med 10 vikt. % Polyetene-glykol (PEG) i vattenlösning innehållande 1 vikt-. % Tween 20 och 1 vikt-. % Natriumdodecylsulfat för den kontinuerliga fasen.
4. System Preparation
- Placera mikroflödes chip på scenen av ett inverterat mikroskop i kombination med en digital kamera som kan <100 ^ sek slutartider.
- Montera alla sprutor på sprutpumpar och fäst 27 G nålar. Fäst ~ 30 cm längder av PE-2 slangar på st och sätt de lösa ändarna i lämpligt stansade hål i enheten.
- Sätt en 10 cm längd av PE-2 till utgångsporten på enheten och placera den andra änden i en samling avfallsbehållare.
- Prime anordningen genom att köra sprutpumpar vid höga hastigheter av hastigheter (2000 | il / min) tills vätska i slangsegmenten når inloppsportarna hos anordningen.
5. Emulsion Generation
- Fokusera mikroskopet på ett område som innehåller 50 ^ m x 50 ^ m öppning ochnedströms utloppskanalen.
- Ställ in sprutpumpar för att leverera fluid till dubbelemulsions generatorn vid flödeshastigheter av 250 | j, l / h under den inre fasen, 100 | il / h under mittfasen, och 700 | j, l / h under den kontinuerliga fasen och vänta 10 min för ekvilibrering.
- Bibehålla flödeshastigheterna hos de inre och mellersta faser vid 250 | j, l / timme och 100 | j, l / timme, respektive. Ställ in flödeshastigheten för den yttre fasen vid 1050 | il / timme. Vänta 3-5 min för dubbel emulsioner generation stabiliseras enligt denna uppsättning av flödesförhållanden.
- Förvärva 5 sek videobilder vid 30 Hz för offline bearbetning via manuell bildanalys.
- Upprepa 5,3 och 5,4 med de flödeshastigheter som anges i tabell 1. De inre och mittfasen flödeshastigheter hålls konstanta och bärarfasen flödeshastigheten varieras genom att justera inställningen av sprutpumpen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den dubbla emulsionsGeneratorn består av en koaxial flödesfokuseringsanordning som skapats med hjälp av 3D PDMS tillverkning (Figur 1A). Geometrin gör det möjligt att bildning av en tre-fas koaxiell stråle som skall skjuvas till en fyrkant, 50 ^ m x 50 ^ m öppning, vilket tillåter bildningen av vatten / olja / vatten dubbla emulsioner (Figur 1B, Figur 1C). Den inre vattenfasen och den mellersta oljefasen bringas samman vid en korsning med kanaldimensioner av 10 | j, m x 50 | im (figur 1D, punkt "1"). På grund av hydrofobiciteten hos PDMS, de fluorerade olje kramar kanalväggarna och de inre fas vistelser i mitten av kanalen som fluiderna färdas i en kontinuerlig stråle, till dess att en plötslig expansion expansionskanalen har uppnåtts (figur 1D, punkt "2" ). På denna plats, de inre två faser injiceras i mitten av en 320 um lång juncning som gör den relativt koncentriska införandet av den vattenhaltiga bärarfasen. De tre faserna tvingas in i en 50 ^ m x 50 ^ m öppning (figur 1D, punkt "3"), varigenom den höga flödeshastigheten för bärarfasen sax de inre två faser till en lång, tunn tendril som sönderdelas till från enhetliga droppar ( Figur 1E).
3D PDMS tillverkningen kräver kopplingen av två unika PDMS formar i en vikbar konfiguration efter gjutning på två lager litografiska mästare. En 50 | j, m lång skikt används för att bilda de inre och mellersta fluidhanterande kanaler, tillsammans med kapenöppningen på masterregulatorn en (figur 2A), tillsammans med en gratis utskjutande och nedsänkta ramar på motstående herre. En ytterligare 135 ^ m lång skikt används för att skapa bärarvätskan och utträdeskanalerna (figur 2b). Montering av dubbelemulsions generatorn utnyttjar than infälld och utskjutande ramar (Figur 3A) geometriska anpassning efter plasmabehandling (Figur 3B).
Den dubbla emulsions enheten testades vid en mängd olika flödesförhållanden att visa bildandet av varierande storlek, monodispergerade dubbla emulsioner. För dessa experiment var de inre och mellersta fas flödeshastighetema hållas konstant och flödeshastigheten bärvågsfasen modifierades för att påverka skjuvkraften under droppgenerering. Experimentella förhållanden är parametriseras av förhållandet bärarfasen flödet (Q c) och summan av de inre två faserna strömmar (Q summa). Bilder av droppgenerering för experiment utförda vid Q c / Q summa från tre till 57 visas i figur 4. En långsträckt region innehållande de inre två faser observeras att skjuta in i 50 | j, m x 50 | im öppning och pauser i droppar som konvektion nedströms. jagncreasing flödet av bärarfasen (ökande Q c / Q summa) leder till de inre faserna skjuvas in progressivt tunnare regioner som producerar mindre droppar. Dubbla emulsioner som framställs av anordningen vid olika flödeshastigheter visar en koefficient medeldiameter av variation av 5,2%. Histogram av droppdiametrar för utvalda värden för Q c / Q summan visar också den relativa enhetlighet i storleken på dropparna som alstras (Figur 5). Enheten visar en förmåga att bilda dubbla emulsioner betydligt mindre öppningen bredd och visar en tydlig nedåtgående trend med ökad Q c / Q sum (Figur 6). Vid högsta bärvågsfas flöde testas, 14 um dubbla emulsioner bildades med hjälp av 50 um x 50 um öppning.
Figur 1. Geometri för dubbee emulsionsgenerator. (A) 3D-modell av den tillverkade anordningen. (B) vertikalt tvärsnitt av den centrala kanalen som visar införandet av den inre (grå), mitten (röd), och bäraren (blå) faser. (C) Tvärsnitt visar strålen innehåller de inre två faser in torget öppningen. (D) Uppifrån av emulsionsgenerering i anordningen. Vid korsning (1) injektion av den hydrofoba mittfasen underlättas av de hydrofila PDMS, som orsakar det att belägga kanalväggarna. Vid korsning (2) kanalen expanderar och en stråle av de inre två faserna skjuvas in i öppningen (3) av det högre flödeshastigheten hos den kontinuerliga fluid till en punkt där fysik orsaken droppbildning. (E) En mikroskopbild av dubbelemulsion generation i enheten. Klicka här för att se en större version av denna siffra. </ p>
Figur 2. Litografisk produktion av mästarna. (A) Den mask som används för framställning av 50 fim funktioner. Master 1 används för att forma fluidic inlopp, den inre / mellanfasen junction, emulsionen generationen mynnings, och en försänkt tråg för uppriktning. Master 2 innehåller en upphöjd ås som används för justering. (B) Masken används för framställning av 135 um funktioner. Befälhavarna är spegelbilder som innehåller bärarfluid kabelkanalerna och utloppskanalen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Montering av PDMS-enheten. (
Figur 4. Bilder av genererade dubbla emulsioner vid olika flödeshastigheter. Flödeshastigheten för den yttre fasen ändras för att ändra Q c / Q summa, som ges till vänster om varje bild. Ökad Q c / Q summan smalnar strålen av de inre vätskor som klippta genom öppningen och skapar allt små droppar. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5. Histogram av dubbla emulsionsdroppar storlekar vid olika flödeshastigheter. Den genomsnittliga variationskoefficient för diameter emulsionsdroppar som produceras vid en given uppsättning av strömningsförhållanden är 5,2%. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 6. Dropp diameter kontra normaliserade parametern flöde. Justera flödeshastigheten hos den kontinuerliga fasen möjliggör produktion av dubbla emulsioner som är 30% -100% av öppningens diameter. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Tabell 1. En flödeshastighet parametrar som används för experimenten. Den inre fasen och mittfasen flödeshastigheter (Qi, Q m) hålls konstanta, vilket ger en konstant kombinerad flödeshastighet (Q summa). Flödeshastigheten bärarfasen (Qc) varieras för att producera dubbla emulsioner med olika diametrar. Förhållandet Q c / Q summa är den huvudsakliga nondimensional beskrivande parameter experimentella betingelser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den dubbla emulsionen genere geometri som beskrivs här är utformad för att efterlikna fysiken i glaskapillär anordningar 8. I dessa är inriktade cylindriska glaskapillärer används för att skapa en trefas koaxial stråle som klippt in enhetliga dubbla emulsionsdroppar. Funktionen hos vår 3D PDMS enheten är beroende av den centrala inriktningen av små funktioner bildade med 50 | j, m lång tillverkning med bärarfasen kanaler som är 320 um i totalhöjd. Det finns en betydande potential för att misaligning de högre funktioner mönstrade av 2: a lagermasken i steg 1,7 i förhållande till 50 um höga geometri om masker inte exakt i linje. Korrekt placering kan underlättas genom att utforma inriktningsmärken, såsom koncentriska cirklar i masker för att placeras tillsammans under foto mönstring. Plasma bindning av två PDMS halvorna av enheten är en andra process som kan leda till betydande avvikelser i den slutliga anordningen. Plasma bindningPDMS till PDMS är generellt ögonblicklig, så i steg 2,4 vi beskriver vätningen av en anordning yta med DI-vatten för att retardera bindning och tillåta manipulering så att inriktningsramar som visas i figur 3A kan tillåtas att låsa. Om detta försök utan tillräcklig vätning kommer PDMS ytorna oåterkallelig bindning innan man kommer in i rätt inriktning, och enheten måste tas om hand och nya PDMS formar gjort.
Den dubbla emulsions enheten är utformad för att dra fördel av de tillverkningstekniker som som leder till jämnt hydrofoba ytegenskaper. Men drift utanför de parametrar som beskrivs i protokollet kräver viss förståelse för de nödvändiga fluid processer. En förbindningen av de inre och mittre faser (figur 1D, punkt "1"), ett relativt högt flöde av den inre fasen och lågt flöde av mittfasen skapar en två fas stråle, med den hydrofoba mittfasen beläggning av kanalväggarna. Omden proportionella flödet av den mellersta fasen ökas, generering av diskreta vatten-i-olja-droppar kommer att börja uppträda, vilket eliminerar möjligheten att bilda en koherent tre-fas stråle för droppbildning i öppningen (figur 1D, punkt "3" ). Efter expansionskanalen (figur 1D, punkt "2"), en signifikant mängd bärarfas flöde krävs för att skapa geometriska avståndet mellan mittfasen och de hydrofoba kanalväggarna. Minskningar i bärarfas flöde kommer så småningom att leda till mitten fasen vätning de hydrofoba enheten väggarna. Betydande minskningar av bärvågsfas flödet kan skapa flödesförhållanden som är tillräckliga för att klippa de inre faserna i en lång, smal filament, vilket radikalt förändrar fysik dubbelemulsion droppbildning.
När byggdes, är denna enhet konstruerad för att producera dubbel emulsioner mellan 14 till 50 um, en lämplig storlek för att sortera användning av kommersiella FACSinstrument. Om dubbla emulsioner utanför detta storleksområde önskas, mynningsdimensioner måste skalas från 50 ^ m x 50 | im storlek användas här. Eftersom enheten har utvecklats för att producera vatten / olja / vatten dubbla emulsioner med jämnt hydrofoba ytegenskaper, kan olja / vatten / olja dubbla emulsioner inte skapat om det inte fanns en ytbehandling appliceras för att göra enheten enhetligt hydrofila.
Detta arbete visar en enkel att tillverka PDMS enhet kan den robusta bildningen av vatten / olja / vatten dubbla emulsioner. Även tidigare forskare har rapporterat bildningen av dubbel emulsioner i enheter som skapats med hjälp av 3D litografi 14,15, de dubbla emulsioner bildas i sina enheter hade diametrar som mättes i 100-tals pm. Anordningen redovisas här lämpar sig för framställning av dubbel emulsioner en storleksordning mindre än detta, vilket ger volymer liknar däggdjursceller och väl lämpade för sortering av FACS.
Även om dessa resultat kan också uppnås med hjälp av glaskapillär mikrofluidik, tillverka glasanordningar är arbetskrävande och kräver många praktiska steg per enhet. För vår alla PDMS enhet, tillverkning består till stor del av gjutning, limning, och bakning PDMS plattor, processer som är enkla, repeterbara, och lätt att skala till ett stort antal.
Nyttan av en litografiskt tillverkad enhet för att generera dubbel emulsioner med hjälp av co-axial flow fokus har visats. Vi hoppas att den enkla tillverkning och robust funktionalitet denna dubbla emulsion generator design bör leda till anpassning för vetenskapliga och industriella applikationer. Utredarna som tidigare avskräckt av de specialiserade kunskaper som krävs för att arbeta i glas kapillär mikrofluidik, borde vara mer bekväma med att använda PDMS mjuk litografi, nu en gemensam laboratorieteknik. Vidare är de små droppstorlekar som kan produceras är väl lämpad för att utför litenm cellen och biologiska analyser i droppar, och kvantifiering och sortering med FACS. För industriella applikationer, har det redan visat sig att dessa typer av enheter kan tillverkas i uppsättningar och parallelliseras 10, vilket möjliggör dubbelemulsions generation priser öka med storleksordningar jämfört med enskilda enheter. Dessutom att möjligheten att bilda små dubbla emulsioner i stora koaxialflödesfokuserings kanaler bör göra enheten resistent mot nedsmutsning och igensättning, vilket är avgörande när parallelizing de anordningar som är avsedda att köra för långa löptider utan ingripande.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av en Research Award från California Institute for Kvantitativa Biosciences (QB3), den Bridging the Gap Award från Rogers Family Foundation, UCSF / Sandler Foundation Program för Genombrott biomedicinsk forskning, ett bidrag från BASF, och NSF genom fakulteten tidiga karriär utveckling (KARRIÄR) Program (DBI-1253293).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Photomasks | CadArt Servcies | ||
| 3" silicon wafers, P type, virgin test grade | University Wafers | 447 | |
| SU-8 3035 | Microchem | Y311074 | |
| SU-8 2050 | Microchem | Y111072 | |
| Sylgard 184 silicone elastomer kit | Krayden | 4019862 | |
| 1 ml syringes | BD | 309628 | |
| 10 ml syringes | BD | 309604 | |
| 27 gaugue needles | BD | 305109 | |
| PE 2 polyethylene tubing | Scientific Commodities, Inc. | B31695-PE/2 | |
| Novec 7500 | Fisher Scientific | 98-0212-2928-5 | Commonly knowns as HFE 7500 |
| Biocompatable surfactant | Ran Biotechnologies | 008-FluoroSurfactant | |
| 35,000 MW PEG | Sigma Aldrich | 1546660 | |
| Tween 20 | Sigma Aldrich | P1369 | |
| Sodium dodecyl sulfate | Sigma Aldrich | L3771 |
References
- Van Der Graaf, S., Schroën, C. G. P. H., Boom, R. M. Preparation of double emulsions by membrane emulsification - A review. J. Membrane Sci. 251 (1-2), 7-15 (2005).
- Laugel, C., Baillet, A. P., Youenang Piemi, M., Marty, J., Ferrier, D. Oil-water-oil multiple emulsions for prolonged delivery of hydrocortisone after topical application: comparison with simple emulsions. Int. J. Pharm. 160 (1), 109-117 (1998).
- Kim, S. H., Kim, J. W., Cho, J. C., Weitz, D. A. Double-emulsion drops with ultra-thin shells for capsule templates. Lab Chip. 11 (18), 3162-3166 (2011).
- Lim, S. W., Abate, A. R. Ultrahigh-throughput sorting of microfluidic drops with flow cytometry. Lab Chip. 13 (23), 4563-4572 (2013).
- Bernath, K., Hai, M., Mastrobattista, E., Griffiths, A. D., Magdassi, S., Tawfik, D. S. In vitro compartmentalization by double emulsions: sorting and gene enrichment by fluorescence activated cell sorting. Anal. Biochem. 325 (1), 151-157 (2004).
- Seemann, R., Brinkmann, M., Pfohl, T., Herminghaus, S.
- Bauer, W. A. C., Fischlechner, M., Abell, C., Huck, W. T. S. Hydrophilic PDMS microchannels for high-throughput formation of oil-in-water microdroplets and water-in-oil-in-water double emulsions. Lab Chip. 10 (14), 1814-1819 (2010).
- Utada, A. S., Lorenceau, E., Link, D. R., Kaplan, P. D., Stone, H. A., Weitz, D. A. Monodisperse double emulsions generated from a microcapillary device. Science. 308 (5721), 537-541 (2005).
- Chang, F. C., Su, Y. C. Controlled double emulsification utilizing 3D PDMS microchannels. J. Micromech. Microeng. 18 (6), 065018 (2008).
- Romanowsky, M. B., Abate, A. R., Rotem, A., Holtze, C., Weitz, D. A. High throughput production of single core double emulsions in a parallelized microfluidic device. Lab Chip. 12 (4), 802-807 (2012).
- Tran, T. M., Cater, S., Abate, A. R. Coaxial flow focusing in poly(dimethylsiloxane) microfluidic devices. Biomicrofluidics. 8 (1), 016502 (2014).
- Lithography. , Available from: https://www.memsnet.org/mems/processes/lithography.html (2015).
- O'Donovan, B., Eastburn, D. J., Abate, A. R.
- Chang, F. C., Lin, H. H., Su, Y. C. Controlled W/O/W double emulsification in 3-D PDMS micro-channels. 3rd IEEE Int. Conf. Nano/Micro Eng. Mol. Syst. NEMS, , 792-795 (2008).
- Romanowsky, M. B., Abate, A. R., Rotem, A., Holtze, C., Weitz, D. A. High throughput production of single core double emulsions in a parallelized microfluidic device. Lab Chip. 12 (4), 802 (2012).
