This article illustrates how the expression of neurotransmitter receptors can be quantified and the pattern analyzed at synapses with identified pre and postsynaptic elements using a combination of viral transduction of optogenetic tools and the freeze-fracture replica immunolabeling technique.
وقد تم تجميد كسر الإلكترون المجهري تقنية كبيرة في مجال البحوث التركيبية لأكثر من 40 عاما. ومع ذلك، فإن عدم وجود وسائل فعالة لدراسة التركيب الجزيئي للأغشية تنتج انخفاضا كبيرا في استخدامها. في الآونة الأخيرة، كان هناك انتعاش كبير في تجميد كسر المجهر الإلكتروني وذلك بفضل تطور وسائل فعالة للكشف عن البروتينات الغشاء لا يتجزأ من العلامات immunogold. واحدة من هذه الطرق كما هو معروف المنظفات بالفاعلات-تجميد كسر طبق الاصل Immunolabeling (FRIL).
الجمع بين تقنية FRIL مع علم البصريات الوراثي يسمح تحليل مترابط من الخصائص الهيكلية والوظيفية من نقاط الاشتباك العصبي المركزي. باستخدام هذا النهج فمن الممكن لتحديد وتوصيف الخلايا العصبية على حد سواء قبل وبعد المشبكي من التعبير كل منهما من channelrhodopsin المعلمة والواسمات الجزيئية محددة. ظهور مميز للتخصص الغشاء بعد المشبكي من glutamatergic المشابك مزيد يسمح، على وضع العلامات على مستقبلات الغلوتامات ionotropic، لتحديد وتحليل توزيع intrasynaptic هذه المستقبلات. هنا، نقدم وصفا خطوة بخطوة الإجراءات اللازمة لإعداد النسخ المتماثلة تقرن وكيفية immunolabel لهم. سنناقش أيضا المحاذير والقيود المفروضة على تقنية FRIL، ولا سيما تلك المرتبطة التحيز أخذ العينات المحتملة. استنساخ عالية وبراعة تقنية FRIL، عندما جنبا إلى جنب مع علم البصريات الوراثي، ويوفر طريقة فعالة جدا لتوصيف مختلف جوانب انتقال متشابك في رقائق الخلايا العصبية التي تم تحديدها في الدماغ.
هنا، ونحن نقدم مثالا كيف تم استخدام هذا النهج لاكتساب فهم أعمق للعلاقات هيكل وظيفة من نقاط الاشتباك العصبي مثير في الخلايا العصبية للجماهير الخلية مقحم من اللوزة الماوس. على وجه الخصوص، قمنا بدراسة التعبير عن مستقبلات الغلوتامات ionotropic في المدخلات المحددة أوiginated من داخل الصفيحة الخلفية المهادية ونوى الركبي الإنسي. عرضت هذه المشابك لنقل المعلومات الحسية ذات الصلة للتعلم الخوف والخضوع التغييرات البلاستيك على تكييف الخوف.
وقد تحدى تعريف العمارة الوظيفية biomembranes على نطاق واسع نانومتر في السنوات الأخيرة من خلال تطوير عدد من التقنيات immunolabeling مناسبة لانتقال المجهر الإلكتروني. ومع ذلك، هذه التقنيات، على سبيل المثال، قبل وimmunogold التضمين آخر، لديها عدد من القيود الهامة، والتي تشمل الكشف عن الفقراء من المستضدات و / أو تقييم كمي محدود من البروتينات بغشاء. هذه القيود تصبح حرجة ولا سيما في التحقيق في التركيب الدقيق للجهاز العصبي، والتي تتميز بدرجة عالية من التنوع الخلية وعدم التجانس المشبك. نتائج هذا التباين من التنوع على حد سواء الهيكلية والوظيفية التي تمليها العناصر قبل وبعد المشبكي والتعبير التفاضلية، والإثراء، أو تفاعل يشير البروتينات، مثل المستقبلات، النقل، والجزيئات المستجيب.
نهج جديد لimmunolabe مباشرةوقدم لينغ من بروتينات الغشاء لا يتجزأ أو عبر ربط في النسخ المتماثلة للتجمد كسر المنظفات بالفاعلات (FRIL) في الأصل من قبل فوجيموتو عقدين من الزمن منذ 1. هذه الطريقة الأصلي كان، ومع ذلك، العديد من القيود، أي تجزئة شديد من النسخ المتماثلة، مما أعاق الارتباطات ذات مغزى من الجزيئات المسمى مع خلايا معين بشكل فردي في الأنسجة المعقدة مثل الدماغ. منذ ما يقرب من 10 عاما، Shigemoto وFukazawa تحسن تدريجيا تقنية 2. وبموازاة ذلك عن طريق جهود من مجموعة أخرى من العلماء في مختبرات بولدر في جامعة ولاية كولورادو، الذي أيضا تحسن كبير في التقنية، ولا سيما لدراسة تقاطعات الفجوة 3.
التحسن في بروتوكولات تجميد كسر والآلات، وكذلك إدخال التجميد السريع (تحت ضغط عال)، والآن يسمح للمحققين لإنتاج نسخ طبق الأصل متصلة من العينات من الحجم الكبير نسبيا ومرحباصور ذات جودة غ من معظم المكونات الخلوية من دون قيود والتحف التي تنتجها تثبيتات الكيميائية القوية.
تقدم تقنية FRIL ميزة كبيرة من كمي للغاية في تحديد الموقع من واحد أو أكثر من البروتينات (في نفس الوقت) في تشريحيا معين والخلايا التي تم تحديدها cytologically داخل أنسجة معقدة مثل الدماغ، مع ميزة إضافية من وجهة نظر مستو من قبل وبعد المشبكي عناصر في نسخة طبق الأصل واحد. ولذلك، فإن تقنية FRIL، رغم ما تتمتع به العديد من العقبات التقنية، يبشر لعدد من الاكتشافات العلمية الهامة جدا، لا سيما بالنسبة للارتباط الخصائص التركيبية والوظيفية من نقاط الاشتباك العصبي الفردية. خلال العقود القليلة الماضية، وقد تم الحصول على الكثير من المعلومات عن هيكل، الجزيئية الماكياج، وظيفة فسيولوجية من نقاط الاشتباك العصبي. بعد نقاط الاشتباك العصبي هي شكليا وجزيئيا متنوعة للغاية اعتمادا على السلطة الفلسطينية قبل وبعد المشبكيالخلايا العصبية الإيجار 4. فقط من أجل حفنة من أنواع المشبك كانت دراسات هيكل الوظائف أنجزت حتى الآن 5-7. يعزى هذا بشكل كبير إلى القيود التقنية التي حالت دون تحديد دقيق لطبيعة العناصر قبل وبعد المشبكي.
وقد وفرت تحليل التركيبية الأفكار الهامة في تنوع التخصصات الغشاء بعد المشبكي عبر متشابك اتصالات متميزة سواء من حيث حجم متشابك والمحتوى في المستقبلات العصبية 6، والتي لديها تأثير كبير على قوة ومرونة انتقال متشابك. وعلاوة على ذلك، مجموعة كبيرة من البحوث تشير إلى أن عدد ionotropic مستقبلات الغلوتامات التي أعرب عنها في أنواع مختلفة من المشبك وينظم بطريقة afferent- والهدف التي تعتمد 7-10.
هنا، ويرد الأسلوب الذي يسمح تحليل هيكل ومستقبلات تكوين التخصصات الغشاء بعد المشبكي ممن يملكون تحديدالعناصر قبل المشبكي د وظيفة. ويستغل هذا التوجه التعبير قبل المشبكي من البروتينات الحساسة للضوء وضعت مؤخرا الطحالب، مثل channelrhodopsin2 (ChR2)، وتقنية FRIL لتحليل نمط التعبير بعد المشبكي من α-أمينو-3-هيدروكسي-5-ميثيل-4-isoxazolepropionic حمض (أمبا روبية) و N-ميثيل مد اسبارتاتي (NMDA روبية) مستقبلات الغلوتامات. ويتجلى هذا في نقاط الاشتباك العصبي التي شكلتها المحاور القادمة من الخلفية نوى الركبي مهادي-وسطي (PIN / MGN) على الخلايا العصبية للجماهير الخلية مقحم من اللوزة (ITC). الخلايا العصبية ITC صغيرة خلايا GABAergic شائك تنظيمهم في مجموعات المحيطة بمجمع اللوزية basolateral (جيش تحرير بلوشستان) 11، 12. ومن المعروف أن الخلايا العصبية المركز للحصول على مدخلات مثير من الخلايا العصبية الرئيسية جيش تحرير بلوشستان واستهداف النواة المركزية (CEA)، وبالتالي يعمل بمثابة بوابة المثبطة لتدفق المعلومات بين جيش تحرير بلوشستان وCEA 12-15.
في الآونة الأخيرة، أثبتنا أن تكنولوجيا المعلوماتالخلايا العصبية C الموجود في الكتلة ميديو الظهري بين جيش تحرير بلوشستان وCEA أيضا الحصول على المدخلات مثير مباشرة ومتقاربة من المناطق القشرية المهادية والزمانية الحسية، والتي يتم تعديلها على الخوف التعلم خلال بافلوف السمعي تكييف خوف 16. تكييف الخوف هو واحد من أشكال فهم أفضل للتعلم النقابي من حيث آليات الدماغ. في تكييف الخوف، حافزا مشروط محايد في البداية (CS، على سبيل المثال، لهجة) يقترن مع التحفيز مكره غير المشروط (الولايات المتحدة، على سبيل المثال، صدمة القدم معتدل) مما أدى إلى وجود ارتباط CS-الولايات المتحدة ومكيفة استجابة الخوف 17، 18. مثير المدخلات من كل من المناطق المهادية والقشرة المخية الحديثة، التي تحمل المعلومات التي تمثل CS والولايات المتحدة، على التوالي، كانت معروفة لتتلاقى على الخلايا العصبية الهرمية للنواة الجانبية من اللوزة (LA)، والخضوع ليونة 19. كشفت عملنا السابق أن إدخال المعلومات الحسية هي أيضا بالتوازي تنقل إلى الخلايا العصبية ITC <sتصل> 16.
وكخطوة أولى على طريق التحليل الجزيئي الآلية من المدخلات الحسية الفردية نقاط الاشتباك العصبي على الخلايا العصبية مركز التجارة الدولية، وكنا فيروس الغدة المرتبطة (AAV) للتعبير عن ChR2 الكلمات الدلالية مع بروتين فلوري أصفر (YFP). تم حقن AAV في PIN / MGN وتم تحديد محطات محوار من قبل التعبير عنها من ChR2-YFP. كنا على حد سواء وجوه الناتجة عن تقنية FRIL لتقييم كثافة بعد المشبكي أمبا-R و NMDA روبية في نقاط الاشتباك العصبي شكلت مع الخلايا العصبية مركز التجارة الدولية عن طريق محطات محوار PIN / MGN.
وقد تم تجميد كسر الإلكترون المجهري تقنية كبيرة في مجال البحوث التركيبية لأكثر من 40 عاما. ومع ذلك، فإن عدم وجود وسائل فعالة لدراسة التركيب الجزيئي للأغشية تنتج انخفاضا كبيرا في استخدامها. في الآونة الأخيرة، كان هناك انتعاش كبير في تجميد كسر المجهر الإلكتروني ويرجع ذلك إلى تطوير وسائل فعالة للكشف عن البروتينات الغشاء لا يتجزأ من immunogold وسم 1، 2، وهي تقنية FRIL.
تقنية FRIL تمتلك العديد من المزايا مقارنة مع الطرق التركيبية immunogold أخرى. أولا، بروتينات يمكن الوصول إليها بسهولة إلى أجسام زيادة حساسية. ثانيا، تعرض جزء كبير من التخصصات غشاء البلازما، مثل الغشاء بعد المشبكي، على سطح ثنائي الأبعاد النسخة المتماثلة يسمح التفتيش على التوزيع المكاني والتواصل الجسدي من جزيئات الفائدة دون إعادة الإعمار شاقة وتستغرق وقتا طويلا من سيريأقسام آل سامسونج. ثالثا، توفر كل شطر من غشاء البلازما يزيد من عدد من البروتينات التي يمكن أن توصف عن كل بنية الفرد، وقدم الأجسام المضادة المناسبة المتاحة. على كسر، وهي مغلفة وجه مسعور من الغشاء انقسام مع الكربون البلاتين أن يرسخ المجالات البروتين المتبقية على سطح كسر. وهذا ما يمنع وصول الأجسام المضادة لمستضدات في هذه المجالات. على سبيل المثال على P-وجه نسخة طبق الأصل فقط الحواتم التي تواجه الفضاء جبلي يمكن الكشف عنها بواسطة الأجسام المضادة، في حين على وجه E الحواتم فقط التي تواجه الفضاء exoplasmic يمكن أن تكون ملزمة من قبل الأجسام المضادة (انظر الشكل 2).
من ناحية أخرى، يعاني تقنية FRIL أيضا من بعض القيود 2. كما تحدث كسور بشكل عشوائي، فإنه قد يكون من الصعب على استهداف الخلايا أو هياكل محددة. وهذا يمكن أن يؤدي أيضا إلى وجود تحيز أخذ العينات، على سبيل المثال، في جمع المشبك، نظرا لاحتمال مختلفة من FRActuring على طول الغشاء هياكل مع انحناء مختلفة (على سبيل المثال، العمود الفقري مقابل مهاوي). وعلاوة على ذلك، وتخصيص بروتينات الغشاء إلى واحد من وجوه اثنين لا يمكن التنبؤ بها. ولذلك، فإن توزيع البروتين إلى P وجه أو وجه E، ولا سيما بالنسبة للدراسات الكمية، يجب أن يكون بعناية فحص باستخدام الأجسام المضادة رد الفعل إلى مجالات الخلايا وخارج الخلية. وأخيرا، وتحديد في النسخة المتماثلة من بعض الهياكل، مثل محطات محوار قبل المشبكي، يمكن أن يكون صعبا عندما تستند فقط على ملامح شكلية. ومع ذلك، فإن استخدام أجسام مضادة محددة للبروتينات علامة أو تنبيغ من بروتينات الغشاء لا يتجزأ الموسومة أو القنوات باستخدام ناقلات فيروسية العروض أدوات إضافية لتسهيل التعرف على الأغشية الممزقة. على سبيل المثال، أخذت هذه الدراسة الاستفادة من تنبيغ ChR2-YFP في الخلايا العصبية المهادية لتحديد efferents محور عصبي في اللوزة المخية أو وصفها لمستقبلات μ-الأفيونية لتكشف لي بعد المشبكيmbranes من الخلايا العصبية مركز التجارة الدولية.
من أجل أداء هذه التقنية FRIL بنجاح، يجب توخي الحذر خاصة فيما يتعلق تثبيت الأنسجة. تثبيت الأنسجة قوي (> 2٪ امتصاص العرق) يمكن أن يؤدي إلى ارتفاع معدل الاصابة بكسور عبر وانخفاض في حساسية وضع العلامات. من ناحية أخرى، تثبيتات ضعيفة تجعل التعامل مع الأنسجة وإعداد (على سبيل المثال، قطع أجزاء) صعبا. ومن المهم أيضا للسيطرة على أن سمك الكتل قلص يطابق سمك الشريط على الوجهين. إذا كان سمك العينة أقل من ذلك الشريط، قد أسطح الأنسجة لا نعلق على سطح حاملات معدنيين، وليس بكسر بالتالي العينة المجمدة. إذا كان النسيج هو أكثر سمكا، وسوف يتم ضغطها مع التشوهات الهيكلية التي لا مفر منها عندما يتم شطيرة من شركات الطيران النحاس اثنين. درجة الحرارة التي يتم تقسيم العينة (في هذا البروتوكول، -115 درجة مئوية) يلعب أيضا دورا هاماعلى بنية متماثلة. ارتفاع درجات الحرارة قد تؤدي إلى ارتفاع معدل القطع الأثرية مثل تكاثف بخار الماء على سطح الأنسجة قبل أو أثناء عملية التبخير. درجات حرارة منخفضة (<-125 درجة مئوية) قد تزيد من خطر تقسيم الخروج من المواد خلال كسر. هذه المواد قد تقع على سطح العينة أو البقاء على اتصال به. هذه رقائق من المواد هي أيضا المغلفة وتتناقض إنتاج البقع الداكنة على الصورة. يمكن كسر في درجات حرارة منخفضة أيضا تؤثر على وتيرة من كسور عبر وخاصة لهياكل غرامة صغيرة مثل العمود الفقري شجيري. خطوة مهمة أخرى في إعداد النماذج المقلدة هي المنظفات الهضم. إذا كان الهضم غير مكتمل، تظهر الأنسجة غير المهضومة بقع غامقة على النسخة المتماثلة وهو يفند تحليل هيكل في تيم. وعلاوة على ذلك، يمكن للأنسجة غير مهضوم غير تحديدا فخ أو ربط الأجسام المضادة، مما يزيد من العلامات الخلفية. من ناحية أخرى، واستخدام المنظفاتالصورة للهضم الأنسجة يمكن أن تفسد الجزيئات المرتبطة النسخة المتماثلة تغيير هياكلها الثانوية والثالثية. لذلك، بالنسبة لبعض المضادات قد يكون من الضروري لتخفيف تدريجيا تركيز SDS مع خطوات الغسيل إضافية.
لimmunolabeling، وتوافر أحجام مختلفة من جسيمات الذهب مترافق الأجسام المضادة الثانوية يسمح للكشف في نفس الوقت، ولكن فقط نوعيا، بروتينات متعددة، حتى في microdomains محددة من غشاء البلازما، مثل التخصص بعد المشبكي. ولكن نظرا لعائق الفراغية، الدراسات الكمية وتقتصر عادة على الكشف عن جزيء واحد فقط. حجم الجسيمات الذهب يمكن أن تؤثر أيضا على وضع العلامات فعالية.
لتفسير وصفها في FRIL، ينبغي أن يوضع في الاعتبار أن الجسيمات immunogold يمكن أن يكون موجودا في أي مكان داخل نصف الكرة الأرضية مع دائرة نصف قطرها 20-25 نانومتر من المستضد نتيجة لشكل معقد مرنةإد بواسطة الأجسام المضادة الأولية والثانوية 26. لمزيد من المعلومات حول نظرية وممارسة FRIL والتقنيات ذات الصلة، نشير للقارئ أيضا على المواد المنهجية الأخرى 27، 28.
وقد استخدمت هذه التقنية FRIL مؤخرا عن التحليلات الكمية عالية الدقة للتوطين مستقبلات الغلوتامات في السكان المشبك متنوعة 29، 30. وعلاوة على ذلك، قدرت حساسية الكشف عن تقنية FRIL لأمبا روبية تصل إلى الجسيمات immunogold واحد لكل أمبا وظيفي واحد قناة -R 29. وبالتالي، فإن هذا النهج هو عموما مفيد جدا لقياس وتحليل نمط التعبير بعد المشبكي من أمبا-R و NMDA روبية في نقاط الاشتباك العصبي المركزي. هنا، أثبتنا إمكانية تطبيقه في نقاط الاشتباك العصبي PIN / MGN ومركز التجارة الدولية، وهو موقع أهم المرجح لنقل المعلومات الولايات المتحدة خلال تكييف الخوف. باستخدام الأجسام المضادة التي أثيرت ضد بقايا الأحماض الأمينية الخلية الحفظ جدا من مفارز أمبا مستقبلات حمض الغلوتاميكA1-GluA4، وجدنا حتى توزيع جزيئات الذهب ضمن مجموعات IMP الموافق التخصصات الغشاء بعد المشبكي. وكانت كثافة أمبا روبية في العمود الفقري المركز أعلى بكثير بالمقارنة مع نقاط الاشتباك العصبي رمح مستهدفة من قبل PIN / MGN afferents المهادية. في كل من العمود الفقري ورمح نقاط الاشتباك العصبي، تم الكشف عن وجود علاقة إيجابية بين وضع العلامات لأمبا-R و المنطقة بعد المشبكي، وهي سمة مشتركة لنقاط الاشتباك العصبي glutamatergic أخرى 25. التباين المنخفض في كثافة أمبا روبية في نقاط الاشتباك العصبي PIN / MGN ومركز التجارة الدولية يشير إلى توزيع متجانس مماثلة لنقاط الاشتباك العصبي الأخرى التي شكلتها efferents مهادي 7، ولكنها مختلفة من نقاط الاشتباك العصبي القشرية 25. على العكس من ذلك، كانت كثافة NMDA روبية أكثر تنوعا ولم تختلف بين العمود الفقري ورمح نقاط الاشتباك العصبي مما يشير إلى تنظيم مختلفة من أمبا روبية. في المستقبل، فإن استنساخ عالية من التقنية FRIL لا تسمح فقط لتقييم التركيب الجزيئي القاعدية من نقاط الاشتباك العصبي المركزي ولكن قد يسهل الكشف عن جhanges في أعداد مستقبلات الغلوتامات ionotropic والتوزيع تحت المشبك بعد التعلم الخوف، واستكمال التسجيلات السابقين فيفو من خصائص قبل وبعد المشبكي هذه المدخلات.
وفي الختام، فإن هذا النهج يمكن أن تستخدم من قبل باحثين آخرين للحصول على نظرة ثاقبة العلاقات هيكل وظيفة من نقاط الاشتباك العصبي مثير المدخلات المحددة في العديد من الدوائر العصبية الأخرى التي عملت على تفكيك أصل المدخلات وطبيعة وتكوين العناصر بعد المشبكي أمر بالغ الأهمية ولكن مشكلة .
The authors have nothing to disclose.
Funding was provided by the Austrian Science Fund FWF grant No. P-22969-B11 to F. Ferraguti, and by the Charitable Hertie Foundation and the Werner Reichardt Centre for Integrative Neuroscience and by the DFG (CIN-Exc. 307) to I. Ehrlich.
Surgery | |||
Stereotactic frame | Stoelting, USA | 51670 | can be replaced by other stereotactic frame for mice |
Steretoxic frame mouse adaptor | Stoelting, USA | 51625 | |
Gas anesthesia mask for mice | Stoelting, USA | 50264 | no longer available, replaced by item no. 51609M |
Pressure injection device, Toohey Spritzer | Toohey Company, USA | T25-2-900 | other pressure injection devices (e.g. Picospritzer) can be used |
Kwik Fill glass capillaries | World Precision Instruments, Germany | 1B150F-4 | |
Anesthesia machine, IsoFlo | Eickemeyer, Germany | 213261 | |
DC Temperature Controler and heating pad | FHC, USA | 40-90-8D | |
Horizontal Micropipette Puller Model P-1000 | Sutter Instruments, USA | P-1000 | |
Surgical tool sterilizer, Sterilizator 75 | Melag, Germany | 08754200 | |
rAAV-hSyn-ChR2(H134R)-eYFP (serotype 2/9) | Penn Vector Core, USA | AV-9-26973P | |
fast green | Roth, Germany | 0301.1 | |
Isoflurane Anesthetic, Isofuran CP (1ml/ml) | CP Pharma, Germany | ||
Antiseptic, Betadine (providone-iodine) | Purdure Products, USA | BSOL32 | can be replaced by other disinfectants |
Analgesic, Metacam Solution (5mg/ml meloxicam) | Boehringer Ingelheim, Germany | can be replaced by other analgesics | |
Bepanthen eye ointment | Bayer, Germany | 0191 | can be replaced by other eye ointments |
Drill NM3000 (SNKG1341 and SNIH1681) | Nouvag, Switzerland | ||
Sutranox Suture Needle | Fine Science Tools, Germany | 12050-01 | |
Braided Silk Suture | Fine Science Tools, Germany | 18020-60 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tissue preparation | |||
Paraformaldehyde EM grade | Agar Scientific Ltd., United Kingdom | AGR1018 | |
Saturated picric acid solution | Sigma-Aldrich, USA | P6744-1GA | |
Na2HPO4-2H20 | Merck Millipore, Germany | 1065860500 | |
NaH2PO4-2H2O | Merck Millipore, Germany | 1063451000 | |
NaCl | Merck Millipore, Germany | 1064041000 | |
4N NaOH | Carl Roth, Germany | T198.1 | |
Thiopental | Sandoz, Austria | 5,133 | |
Glycerol | Sigma-Aldrich, USA | G5516-500ML | |
GenPure ultrapure water system | Thermo Fisher Scientific, USA | 50131235 | |
Peristaltic pump | ISMATEC, Germany | ISM 930C | |
Filter Paper | MACHEREY-NAGEL, Germany | MN 615 1/4 | |
Vibroslicer, VT1000S | Leica Microsystems, Austria | ||
Ophthalmic scalpel | Alcon Laboratories, USA | can be replaced by other ophthalmic scalpels | |
Perfusion cannula | Vieweg, Germany | F560088-1 | can be replaced by similar items from other companies |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
High-pressure Freezing | |||
Copper carriers | Engineering Office M. Wohlwend, CH | 528 | |
Sidol Polish | Henkel, Germany | can be replaced by same item from other companies | |
Chamois skin | Household supply store | ||
Hole punch, 1,5mm | Stubai, Austria | can be replaced by same item from other companies | |
Denatured ethanol | Donauchem, Austria | can be replaced by same item from other companies | |
Aceton | Roth, Germany | 9372.5 | CAUTION! |
High Pressure Freezing Machine HPM 010 | BalTec, CH; now Leica Microsystems | HPM010 | not produced any more, substituted by LeicaEM HPM100 |
Stereo-microscope | Olympus, Japan | SZX10 | |
Liquid nitrogen | CAUTION! | ||
Cryo-vials | Roth, Germany | E309.1 | can be replaced by same item from other companies |
CryoCane | Nalge Nunc International,USA | 5015-0001 | can be replaced by same item from other companies |
CryoSleeve | Nalge Nunc International,USA | 5016-0001 | can be replaced by same item from other companies |
Liquid nitrogen storage vessel | Cryopal, France | GT38 | can be replaced by same item from other companies |
Non-ionic detergent (Lavocid) | Werner & Mertz Professional, Germany | ||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Freeze-fracture and Replication | |||
Sandblaster, Mikromat 200-1 | JOKE Joisten & Kettenbaum, Germany | SANDURET 2-K | can be replaced by same item from other companies |
Siliciumcarbid SIC 360, grain size 25 – 21µ | JOKE Joisten & Kettenbaum, Germany | 955932 | |
Freeze Fracture System BAF 060 | BalTec, CH; now Leica Microsystems | BAF060 | |
Ceramic 12 well plate | Gröpel, Austria | 14511 | can be replaced by same item from other companies |
Trizma base | SIGMA, USA | T1503 | can be replaced by same item from other companies |
Trizma hydrochloride | SIGMA, USA | T3253 | can be replaced by same item from other companies |
Sodium chloride | Merck, Germany | 1,064,041,000 | can be replaced by same item from other companies |
SDS, Sodium lauryl sulfate | Roth, Germany | 5136.1 | CAUTION! ; can be replaced by same item from other companies |
Sucrose | Merck, Germany | 1,076,871,000 | can be replaced by same item from other companies |
TRIS | Roth, Germany | 5429.3 | can be replaced by same item from other companies |
Universal Hybridization Oven | Binder, Germany | 7001-0050 | can be replaced by same item from other companies |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Immunolabelling | |||
BSA | SIGMA, USA | A9647 | can be replaced by same item from other companies |
Anti-GFP Antibody | Molecular Probes, USA | A11122 | |
Anti-pan-AMPAR Antibody | Frontier Institute, Japan | pan AMPAR-GP-Af580-1 | |
Anti-NMDAR1 Antibody, clone 54.1 | Merck Millipore, Germany | MAB363 | |
Opioid Receptor-Mu (MOR) Antibody | ImmunoStar, USA | 24216 | |
EM goat anti-guinea pig, 5nm; secondary antibody | BBInternational, | EM.GAG5 | |
EM goat anti-rabbit, 15nm; secondary antibody | BBInternational, | EM.GAR15 | |
Donkey anti-rabbit, 10nm, secondary antibody | AURION, Netherlands | DAR 10nm | |
Copper grids, 100 Parallel Bar | Agar scientific, UK | G2012C | |
Incubator | Major Science, USA | MO-RC | can be replaced by same item from other companies |
Pioloform Powder | Agar scientific, UK | R1275 | |
Chloroform | Roth, Germany | 3313.1 | CAUTION! ; can be replaced by same item from other companies |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
EM analysis | |||
Philips CM120 TEM | Philips/FEI | ||
Morada CCD camera | Soft Imaging Systems, Germany | ||
iTEM Ver. 5.2, imaging software | Soft Imaging Systems, Germany |