This article illustrates how the expression of neurotransmitter receptors can be quantified and the pattern analyzed at synapses with identified pre and postsynaptic elements using a combination of viral transduction of optogenetic tools and the freeze-fracture replica immunolabeling technique.
Freeze-breuk elektronenmicroscopie is een belangrijke techniek in de ultrastructurele onderzoek al meer dan 40 jaar. Echter, het gebrek aan effectieve middelen om de moleculaire samenstelling van membranen bestuderen een significante daling in het gebruik. Onlangs is er een grote opleving vries-breuk elektronenmicroscopie dankzij de ontwikkeling van effectieve manieren om integrale membraaneiwitten openbaren door immunogold labeling geweest. Eén van deze werkwijzen is bekend als detergens gesolubiliseerde Freeze-breuk Replica immunokleuring (FRIL).
De combinatie van de FRIL techniek optogenetics laat een gecorreleerde analyse van de structurele en functionele eigenschappen van de centrale synapsen. Met deze aanpak kan men identificeren en karakteriseren van zowel pre- en postsynaptische neuronen door hun expressie van een gelabeld channelrhodopsin en specifieke moleculaire merkers. De opvallende verschijning van de postsynaptische membraan specialisatie van glutamaterge synapsen maakt verder, bij het kenmerken van ionotrope glutamaatreceptoren, te kwantificeren en analyseren intrasynaptic verdeling van deze receptoren. Hier geven we een stap-voor-stap beschrijving van de vereiste om gepaarde replica's en hoe ze te immunolabel bereiden procedures. We zullen ook praten over de valkuilen en de beperkingen van de FRIL-techniek, met name die in verband met potentiële sampling vooroordelen. De hoge reproduceerbaarheid en veelzijdigheid van de FRIL techniek in combinatie met optogenetics, biedt een zeer krachtige benadering voor de karakterisering van de verschillende aspecten van synaptische transmissie bij die neuronale microcircuits in de hersenen.
Hier geven we een voorbeeld hoe deze benadering werd gebruikt om inzicht in de structuur-functie relatie van exciterende synapsen krijgen op neuronen van de geïntercaleerde celmassa's van de muis amygdala. In het bijzonder hebben we de expressie van ionotrope glutamaatreceptoren onderzocht op geïdentificeerde ingangen ofiginated van de thalamus posterior intra-laminaire en mediale geniculate kernen. Deze synapsen werden getoond aan zintuiglijke informatie doorgeven die relevant zijn voor angst leren en om plastische veranderingen op angst conditionering ondergaan.
De definitie van de functionele architectuur van biomembranen op nanometerschaal is de laatste jaren uitgedaagd door de ontwikkeling van een aantal immunokleuring technieken geschikt voor transmissie elektronenmicroscopie. Maar deze technieken, bijvoorbeeld voor en na de inbedding immunogold, hebben een aantal belangrijke beperkingen, die slechte detectie van antigenen en / of beperkte kwantitatieve beoordeling van membraangebonden eiwitten bevatten. Deze beperkingen worden bijzonder kritisch bij het onderzoek van de fijnstructuur van het zenuwstelsel, die wordt gekenmerkt door een hoge mate van cel- diversiteit en heterogeniteit synaps. Deze heterogeniteit resultaten van beide structurele en functionele diversiteit bepaald door de pre- en postsynaptische elementen en de differentiële expressie, verrijking, of interactie van signalering eiwitten, bijvoorbeeld receptoren, transporters en effectormoleculen.
Een nieuwe aanpak voor de directe immunolabeling van integrale of verknoopte membraaneiwitten in detergens gesolubiliseerde vries-breuk replica (FRIL) werd oorspronkelijk geïntroduceerd door Fujimoto twintig jaar geleden 1. Deze originele methode heeft echter een aantal beperkingen, dat wil zeggen, ernstige fragmentatie replica die betekenisvolle correlaties van gelabelde moleculen met individueel toegewezen cellen in complexe weefsels zoals de hersenen belemmerd. Ongeveer 10 jaar geleden, en Shigemoto Fukazawa geleidelijk de techniek 2 verbeterd. Dit ging gepaard met inzet van een andere groep wetenschappers bij Boulder laboratoria van de Colorado State University, die ook aanzienlijk de techniek verbeterd, met name voor de studie van gap junctions 3.
De verbetering in vorst-breken protocollen en machines, alsmede de invoering van snel invriezen (onder hoge druk), kan nu onderzoekers replica ononderbroken produceren van specimens van relatief grote omvang en high kwaliteit beelden van de meeste cellulaire componenten zonder de beperkingen en artefacten geproduceerd door sterke chemische fixaties.
De FRIL techniek biedt het grote voordeel van een zeer kwantitatieve in situ identificatie van één of meer eiwitten (gelijktijdig) in kaart gebracht histologisch en cytologisch geïdentificeerde cellen in complex weefsels zoals de hersenen, met als bijkomend voordeel een bovenaanzicht van pre- en postsynaptische elementen in een replica. Daarom is de FRIL techniek, ondanks de vele technische obstakels, belooft een aantal zeer belangrijke wetenschappelijke doorbraken, met name voor de correlatie van de structurele en functionele eigenschappen van individuele synapsen. Gedurende de laatste decennia, heeft een groot deel van de informatie is verkregen over de structuur, de moleculaire make-up, en de fysiologische functie van synapsen; Nog synapsen morfologisch en moleculair zeer divers afhankelijk van de pre- en postsynaptische pahuur neuronen 4. Alleen voor een handvol synaps types waren structuur-functie studies tot nu toe 5-7 bereikt. Dit was vooral te wijten aan technische beperkingen die een nauwkeurige identificatie van de aard van de pre- en postsynaptische elementen voorkomen.
Ultrastructurele analyse kritische inzichten opgeleverd in de variabiliteit van postsynaptische membraan specialisaties over verschillende synaptische contacten zowel qua synaptische omvang en inhoud neurotransmitterreceptoren 6, die een grote invloed op de sterkte en de plasticiteit van synaptische transmissie. Verder is een groot aantal onderzoeken blijkt dat het aantal ionotrope glutamaatreceptoren uitgedrukt op verschillende soorten synaps is geregeld in een afferent- en target-afhankelijke manier 7-10.
Hier wordt een methode geschetst dat de analyse van de structuur en de samenstelling van de receptor postsynaptische membraan specialisaties mogelijk maakt met definiërend presynaptische elementen en functie. Deze benadering maakt gebruik van presynaptische expressie van recent ontwikkelde lichtgevoelige algen eiwitten, zoals Channelrhodopsin2 (ChR2), en de FRIL techniek om het patroon van postsynaptische expressie van α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic analyseren zuur (AMPA-R's) en N-methyl-D-aspartaat (NMDA-R's) glutamaatreceptoren. Dit blijkt bij synapsen gevormd door axonen afkomstig van het achterste mediale geniculate thalamische kernen (PIN / MGN) op neuronen van de geïntercaleerde celmassa's van de amygdala (ITC). ITC neuronen zijn klein stekelige GABAergic cellen georganiseerd in clusters rond het basolaterale amygdalae complex (BLA) 11, 12. ITC neuronen is bekend dat prikkelende input te ontvangen van BLA hoofdsom neuronen en te richten op de centrale kern (CEA), waardoor het als een remmende gate voor de informatiestroom tussen de BLA en Cea 12-15.
Onlangs hebben we aangetoond dat hetC neuronen gelegen in het medio-dorsale cluster tussen BLA en CEA krijgen ook direct en convergente prikkelende input van sensorische thalamus en temporale corticale gebieden, die worden aangepast aan het leren van angst tijdens Pavlov auditieve vreesconditionering 16. Vreesconditionering is één van de best begrepen vormen van associatief leren qua hersenen mechanismen. In vreesconditionering, een aanvankelijk neutraal geconditioneerde stimulus (CS, bijvoorbeeld een toon) is gekoppeld aan een aversieve ongeconditioneerde stimulus (US, bijvoorbeeld een milde voet shock) resulteert in een CS-Amerikaanse vereniging en geconditioneerde angstreactie 17, 18. Prikkelende inbreng van zowel thalamische en neocortical gebieden, die representeert de KS en VS dragen, respectievelijk, waren bekend te convergeren op piramidale neuronen van de laterale nucleus van de amygdala (LA) en plasticiteit 19 ondergaan. Onze eerdere werk is gebleken dat zintuiglijke informatie is ook in parallel doorgegeven aan ITC neuronen <sup> 16.
Als eerste stap op weg naar een mechanistische moleculaire analyse van individuele zintuiglijke input synapsen op ITC neuronen, gebruikten we een adeno-geassocieerd virus (AAV) uit te drukken ChR2 gelabeld met de gele fluorescerende eiwit (YFP). De AAV werd geïnjecteerd in de PIN / MGN en de axon terminals werden geïdentificeerd door hun expressie van ChR2-YFP. We gebruikten beide vlakken die door de FRIL techniek om de dichtheid van postsynaptische AMPA-R's en NMDA-Rs beoordeeld op synapsen gevormd met ITC neuronen PIN / MGN axon terminals.
Freeze-breuk elektronenmicroscopie is een belangrijke techniek in de ultrastructurele onderzoek al meer dan 40 jaar. Echter, het gebrek aan effectieve middelen om de moleculaire samenstelling van membranen bestuderen een significante daling in het gebruik. Onlangs is er een grote opleving vries-breuk elektronenmicroscopie als gevolg van de ontwikkeling van effectieve manieren om integrale membraaneiwitten openbaren door immunogold labeling 1, 2, namelijk de FRIL techniek.
De FRIL techniek bezit een aantal voordelen ten opzichte van andere immunogoud ultrastructurele methoden. Eerst, eiwitten gemakkelijk toegankelijk voor antilichamen verhogen van de gevoeligheid. Tweede blootstelling van groot deel van plasmamembraan specialisaties zoals de postsynaptische membraan op het tweedimensionale oppervlak van de replica maakt de controle van de ruimtelijke verdeling en de fysieke nabijheid van moleculen van interesse zonder omslachtige en tijdrovende reconstructie van serial ultradunne secties. Ten derde, de beschikbaarheid van beide helften van de plasmamembraan verhoogt het aantal eiwitten die voor elke individuele structuur kan worden gemerkt, mits geschikte antilichamen beschikbaar. Na breken wordt het hydrofobe oppervlak van het gesplitste membraan beklede koolstof bevatten platina eiwitdomeinen die achterblijft op het breukvlak verschanst. Dit voorkomt toegang van antilichamen tegen antigenen in deze domeinen. Bijvoorbeeld op P-gezicht van een replica enige epitopen tegenover het protoplasma ruimte kan worden gedetecteerd met antilichamen, terwijl de E-gezicht alleen epitopen tegenover de exoplasmatische ruimte kan worden gebonden door antilichamen (zie figuur 2).
Anderzijds, de FRIL techniek lijdt ook onder bepaalde beperkingen 2. Breuken willekeurige plaatsen, kan het moeilijk zijn om specifieke cellen of structuren te richten. Dit kan ook leiden tot een steekproef bias, bijvoorbeeld in synaps collectie, gezien de verschillende waarschijnlijkheid van fracturing langs het membraan structuren met verschillende kromming (bijvoorbeeld stekels versus assen). Bovendien is de verdeling van membraaneiwitten naar een van de twee vlakken is onvoorspelbaar. Daarom is de verdeling van een eiwit aan het P-face of E-face, in het bijzonder voor kwantitatieve studies moet zorgvuldigheid worden aangepakt met behulp van antilichamen reactief intracellulaire en extracellulaire domeinen. Tenslotte de identificatie in de replica van bepaalde structuren, zoals axon presynaptische terminals, kan moeilijk zijn indien alleen op morfologische kenmerken. Het gebruik van specifieke antilichamen voor marker proteïnen of transductie van gemerkte integrale membraaneiwitten of kanalen met virale vectoren biedt extra hulpmiddelen voor de identificatie van de gebroken membranen vergemakkelijken. Bijvoorbeeld, deze studie maakten gebruik van de transductie van ChR2-YFP in thalamische neuronen om hun axonen afferenten te identificeren in de amygdala en de etikettering van μ-opioïde receptoren postsynaptische me onthullenmbranes van ITC neuronen.
Met het oog op de FRIL techniek succes uit te voeren, moet bijzondere zorg worden genomen met betrekking tot weefsel fixatie. Sterke fixatie van het weefsel (> 2% paraformaldehyde) kan leiden tot een hoge mate van cross-breuken en een afname van labeling gevoeligheid. Anderzijds, zwakke fixaties maken het weefsel hanteren en de bewerking (bijvoorbeeld snijden van profielen) moeilijk. Het is ook belangrijk om te controleren of de dikte van de getrimde blokken overeenkomt met de dikte van het dubbelzijdige plakband. Indien de dikte van het monster lager is dan die van de band, zou het oppervlak van het weefsel niet hechten aan het oppervlak van de twee metalen dragers, wordt derhalve het bevroren monster niet gebroken. Als het weefsel dikker is, wordt deze gecomprimeerd onvermijdelijke structurele vervormingen wanneer de sandwich van de twee koperen dragers gemaakt. De temperatuur waarbij het monster is gebroken (in dit protocol, -115 ° C) speelt ook een belangrijke rolde structuur van de replica. Hogere temperaturen kunnen een hoger percentage van artefacten produceren zoals condensatie van waterdamp op het oppervlak van het weefsel voor of tijdens verdamping. Lagere temperaturen (<-125 ° C) kan het risico van splitsing te verhogen off van materiaal tijdens het breken. Dit materiaal kan vallen op het oppervlak van het monster of blijven aangesloten. Deze vlokken van het materiaal zijn ook gecoat en contrast produceren van donkere vlekken op de afbeelding. Breken bij lagere temperaturen kan ook invloed hebben op de frequentie van de cross-breuken in het bijzonder voor kleine fijne structuren zoals dendritische. Een verdere belangrijke stap bij de bereiding van replica's is het detergens-digestie. Als de vertering onvolledig is, de onverteerd weefsel verschijnt als donkere vlekken aan de replica verstorende de analyse van de structuur van de TEM. Bovendien onverteerd weefsel kan niet-specifiek vangen of te binden antilichamen, waardoor de achtergrond labeling. Anderzijds, het gebruik van detergenss voor weefsel spijsvertering kan de moleculen geassocieerd met de replica veranderen van hun secundaire en tertiaire structuren denatureren. Daarom is voor bepaalde antigenen, nodig kan zijn om geleidelijk verdunnen van de concentratie van SDS extra wasstappen.
Voor immunokleuring, de beschikbaarheid van verschillende maten gouddeeltje geconjugeerde secundaire antilichamen maakt het mogelijk om sporen tegelijk, maar kwalitatief verschillende eiwitten, ook in bepaalde microdomeinen van het plasmamembraan, zoals de postsynaptische specialisatie. Echter, als gevolg van sterische hindering, kwantitatieve studies meestal beperkt tot het opsporen van één molecuul. De grootte van de goud deeltjes kunnen ook invloed hebben op de etikettering werkzaamheid.
Voor de interpretatie van de etikettering in FRIL, moet er rekening mee dat de immunogoud deeltje overal kan worden geplaatst binnen een halve bol met een straal van 20-25 nm van het antigeen worden gehouden vanwege de flexibele complexe vormed door de primaire en secundaire antilichaam 26. Voor meer informatie over de theorie en praktijk van FRIL en aanverwante technieken, verwijzen wij de lezer ook naar andere methodologische artikelen 27, 28.
De FRIL techniek is recentelijk voor hoge resolutie kwantitatieve analyses van glutamaat receptor lokalisatie in diverse synaps populaties 29, 30. Bovendien, de detectiegevoeligheid van de FRIL techniek voor AMPA-Rs geschat zo hoog als een immuno- deeltje per één functionele AMPA -R kanaal 29. Daarom is deze benadering is algemeen zeer nuttig te kwantificeren en het patroon van postsynaptische expressie van AMPA-R's en NMDA-Rs bij de centrale synapsen analyseren. Hier hebben we aangetoond dat de toepasbaarheid bij PIN / MGN-ITC synapsen, een site het meest waarschijnlijk van belang zijn voor het doorgeven van de VS informatie tijdens angst conditionering. Toepassing van een antilichaam opgewekt tegen het extracellulaire sterk geconserveerde aminozuurresiduen van de AMPA receptor subunits GluA1-GluA4, vonden we een gelijkmatige verdeling van gouddeeltjes binnen IMP clusters gevonden volgens postsynaptische membraan specialisaties. De dichtheid van AMPA-R's in ITC stekels was significant hoger in vergelijking met de as synapsen doelwit van PIN / MGN thalamus afferenten. Zowel wervelkolom en schacht synapsen, een positieve correlatie tussen etikettering van AMPA-Rs en postsynaptische gebied werd gedetecteerd, een gemeenschappelijk kenmerk van andere glutamaat synapsen 25. De lage variatie in dichtheid van AMPA-R's in PIN / MGN-ITC synapsen duidt op een homogene verdeling vergelijkbaar met andere synapsen gevormd door thalamic afferenten 7, maar verschillend van corticale synapsen 25. Omgekeerd is de dichtheid van NMDA-Rs was variabeler en verschilde niet tussen de ruggengraat en de as synapsen suggereren een andere regeling dan AMPA-Rs. In de toekomst, zullen de hoge reproduceerbaarheid van het FRIL techniek niet alleen toe om de basale moleculaire samenstelling van centrale synapsen beoordelen, maar kan detectie van c gemakkelijkerijzigingen in ionotrope glutamaat receptor nummers en subsynaptic distributie na angst leren, als aanvulling op ex-vivo opnames van pre- en postsynaptische eigenschappen van deze ingangen.
Concluderend kan deze benadering worden gebruikt door andere onderzoekers inzichten in de structuur-functie relaties van de input-specifieke exciterende synapsen krijgen in veel andere neurale circuits waarin ontwarren de oorsprong van de ingangen en de aard en samenstelling van postsynaptische elementen cruciaal maar problematisch .
The authors have nothing to disclose.
Funding was provided by the Austrian Science Fund FWF grant No. P-22969-B11 to F. Ferraguti, and by the Charitable Hertie Foundation and the Werner Reichardt Centre for Integrative Neuroscience and by the DFG (CIN-Exc. 307) to I. Ehrlich.
Surgery | |||
Stereotactic frame | Stoelting, USA | 51670 | can be replaced by other stereotactic frame for mice |
Steretoxic frame mouse adaptor | Stoelting, USA | 51625 | |
Gas anesthesia mask for mice | Stoelting, USA | 50264 | no longer available, replaced by item no. 51609M |
Pressure injection device, Toohey Spritzer | Toohey Company, USA | T25-2-900 | other pressure injection devices (e.g. Picospritzer) can be used |
Kwik Fill glass capillaries | World Precision Instruments, Germany | 1B150F-4 | |
Anesthesia machine, IsoFlo | Eickemeyer, Germany | 213261 | |
DC Temperature Controler and heating pad | FHC, USA | 40-90-8D | |
Horizontal Micropipette Puller Model P-1000 | Sutter Instruments, USA | P-1000 | |
Surgical tool sterilizer, Sterilizator 75 | Melag, Germany | 08754200 | |
rAAV-hSyn-ChR2(H134R)-eYFP (serotype 2/9) | Penn Vector Core, USA | AV-9-26973P | |
fast green | Roth, Germany | 0301.1 | |
Isoflurane Anesthetic, Isofuran CP (1ml/ml) | CP Pharma, Germany | ||
Antiseptic, Betadine (providone-iodine) | Purdure Products, USA | BSOL32 | can be replaced by other disinfectants |
Analgesic, Metacam Solution (5mg/ml meloxicam) | Boehringer Ingelheim, Germany | can be replaced by other analgesics | |
Bepanthen eye ointment | Bayer, Germany | 0191 | can be replaced by other eye ointments |
Drill NM3000 (SNKG1341 and SNIH1681) | Nouvag, Switzerland | ||
Sutranox Suture Needle | Fine Science Tools, Germany | 12050-01 | |
Braided Silk Suture | Fine Science Tools, Germany | 18020-60 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tissue preparation | |||
Paraformaldehyde EM grade | Agar Scientific Ltd., United Kingdom | AGR1018 | |
Saturated picric acid solution | Sigma-Aldrich, USA | P6744-1GA | |
Na2HPO4-2H20 | Merck Millipore, Germany | 1065860500 | |
NaH2PO4-2H2O | Merck Millipore, Germany | 1063451000 | |
NaCl | Merck Millipore, Germany | 1064041000 | |
4N NaOH | Carl Roth, Germany | T198.1 | |
Thiopental | Sandoz, Austria | 5,133 | |
Glycerol | Sigma-Aldrich, USA | G5516-500ML | |
GenPure ultrapure water system | Thermo Fisher Scientific, USA | 50131235 | |
Peristaltic pump | ISMATEC, Germany | ISM 930C | |
Filter Paper | MACHEREY-NAGEL, Germany | MN 615 1/4 | |
Vibroslicer, VT1000S | Leica Microsystems, Austria | ||
Ophthalmic scalpel | Alcon Laboratories, USA | can be replaced by other ophthalmic scalpels | |
Perfusion cannula | Vieweg, Germany | F560088-1 | can be replaced by similar items from other companies |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
High-pressure Freezing | |||
Copper carriers | Engineering Office M. Wohlwend, CH | 528 | |
Sidol Polish | Henkel, Germany | can be replaced by same item from other companies | |
Chamois skin | Household supply store | ||
Hole punch, 1,5mm | Stubai, Austria | can be replaced by same item from other companies | |
Denatured ethanol | Donauchem, Austria | can be replaced by same item from other companies | |
Aceton | Roth, Germany | 9372.5 | CAUTION! |
High Pressure Freezing Machine HPM 010 | BalTec, CH; now Leica Microsystems | HPM010 | not produced any more, substituted by LeicaEM HPM100 |
Stereo-microscope | Olympus, Japan | SZX10 | |
Liquid nitrogen | CAUTION! | ||
Cryo-vials | Roth, Germany | E309.1 | can be replaced by same item from other companies |
CryoCane | Nalge Nunc International,USA | 5015-0001 | can be replaced by same item from other companies |
CryoSleeve | Nalge Nunc International,USA | 5016-0001 | can be replaced by same item from other companies |
Liquid nitrogen storage vessel | Cryopal, France | GT38 | can be replaced by same item from other companies |
Non-ionic detergent (Lavocid) | Werner & Mertz Professional, Germany | ||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Freeze-fracture and Replication | |||
Sandblaster, Mikromat 200-1 | JOKE Joisten & Kettenbaum, Germany | SANDURET 2-K | can be replaced by same item from other companies |
Siliciumcarbid SIC 360, grain size 25 – 21µ | JOKE Joisten & Kettenbaum, Germany | 955932 | |
Freeze Fracture System BAF 060 | BalTec, CH; now Leica Microsystems | BAF060 | |
Ceramic 12 well plate | Gröpel, Austria | 14511 | can be replaced by same item from other companies |
Trizma base | SIGMA, USA | T1503 | can be replaced by same item from other companies |
Trizma hydrochloride | SIGMA, USA | T3253 | can be replaced by same item from other companies |
Sodium chloride | Merck, Germany | 1,064,041,000 | can be replaced by same item from other companies |
SDS, Sodium lauryl sulfate | Roth, Germany | 5136.1 | CAUTION! ; can be replaced by same item from other companies |
Sucrose | Merck, Germany | 1,076,871,000 | can be replaced by same item from other companies |
TRIS | Roth, Germany | 5429.3 | can be replaced by same item from other companies |
Universal Hybridization Oven | Binder, Germany | 7001-0050 | can be replaced by same item from other companies |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Immunolabelling | |||
BSA | SIGMA, USA | A9647 | can be replaced by same item from other companies |
Anti-GFP Antibody | Molecular Probes, USA | A11122 | |
Anti-pan-AMPAR Antibody | Frontier Institute, Japan | pan AMPAR-GP-Af580-1 | |
Anti-NMDAR1 Antibody, clone 54.1 | Merck Millipore, Germany | MAB363 | |
Opioid Receptor-Mu (MOR) Antibody | ImmunoStar, USA | 24216 | |
EM goat anti-guinea pig, 5nm; secondary antibody | BBInternational, | EM.GAG5 | |
EM goat anti-rabbit, 15nm; secondary antibody | BBInternational, | EM.GAR15 | |
Donkey anti-rabbit, 10nm, secondary antibody | AURION, Netherlands | DAR 10nm | |
Copper grids, 100 Parallel Bar | Agar scientific, UK | G2012C | |
Incubator | Major Science, USA | MO-RC | can be replaced by same item from other companies |
Pioloform Powder | Agar scientific, UK | R1275 | |
Chloroform | Roth, Germany | 3313.1 | CAUTION! ; can be replaced by same item from other companies |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
EM analysis | |||
Philips CM120 TEM | Philips/FEI | ||
Morada CCD camera | Soft Imaging Systems, Germany | ||
iTEM Ver. 5.2, imaging software | Soft Imaging Systems, Germany |