Abstract
Dictyostelium discoideum amiplerin beslenen toprak bulunur. Besin kaynakları kıt hale geldiğinde, tek hücre toplama merkezlerine 1-4 doğru chemotax sırasında bir çok hücreli geliştirme programını başlatmak için faktörleri salgılar. Bu işlem, siklik adenozin monofosfat (cAMP) 5 serbest bağlıdır. cAMP adenilat siklaz ve fosfodiesterazlarm birlikte hareket dalgasından üretilen ve G protein-eşli reseptör cAMP 6,7 ile bağlanır. Yaygın olarak kullanılan deney, daldırılmış koşullar 8,9 hücre toplanmasının gözlemine dayanır Alt düzey ökaryot Dictyostelium discoideum gelişimsel döngüsünde yer alan mekanizmaların analiz etmek. Bu protokol, dengelenmiş tuz çözeltisi (BSS) 10 içine daldırılmış doku kültürü plakaları içinde açlık gelişim döngüsünde Koronin A rolünün analizine açıklanmaktadır. Koronin bir yaygın korunmuş pr üyesidirfaaliyetleri 11,12 çeşitli suçlanmıştır coronins bir otein ailesi. A Koronin eksik Dictyostelium hücreleri çok hücreli agrega oluşturamamaktadırlar ve bu kusur düşündüren, cAMP bakliyat tedarik tarafından kurtarıldı olabilir üst baş eylemleri Koronin cAMP 10 basamakla. Bu çalışmalarda tarif edilen teknikler cAMP kaskadının yukan Dictyostelium discoideum gelişimsel döngüsünün ilk aşamalarında proteinlerin işlevleri araştırmak için güçlü araçlar sağlar. Bu nedenle, bu toplama tahlil kullanan bir fonksiyon Koronin ve daha fazla çalışma izin ve Koronin biyoloji anlayışımızı ilerleyebilir.
Introduction
Proteinlerin Koronin aile çok ökaryotlarda boyunca muhafaza edilir. Bu proteinler, bir amino-terminali triptofan-aspartat (WD) tekrar-ihtiva eden bir karboksi-terminal halkalaştırılmış halka etki 13,14 bağlı eşsiz bir bölgesi takip bölge (Şekil 1) bulunması ile karakterize edilir. Coronins iskelet düzenlemesi ve sinyal iletimi 12 de dahil olmak üzere hücresel fonksiyonların çeşitli implike edilmiştir. Memelilerde, altı adede kadar kısa Koronin molekülleri (Koronin 1-6) ve 7 Koronin bir tandem, 12,15 birlikte ifade edilebilir. Koronin 1 üzerinde en çok çalışılan aile üyesi ve patojen yok, T hücre hayatta kalma ve nöronal sinyal dahil olduğu gösterilmiştir. Nasıl, tam, Koronin 1 bu faaliyetleri yürütmektedir belirsizliğini koruyor. 1 Koronin Ca 2+ ve cAMP bağımlı sinyal yanı sıra F-aktin olarak hücre iskeleti modülasyonu 16-18, potansiyel işbirliği düzenleyen gösterilmiştir ikenMemelilerde kadar 7 aile üyelerinin -Anlatım zorlu nedeniyle potansiyel işten çıkarmalara, bu sistemlerdeki coronins moleküler fonksiyonunu incelemek için yapmıştır. Memeli organizmalardan farklı, alt ökaryot Diktiyostelyum diskodeyum görünüşte olmayan gereksiz fonksiyonları 15,19,20 ile sadece iki Koronin aile üyelerini (Koronin A, memeli Koronin 1 ve Koronin B ortologunu, memeli Koronin 7 ortologu) ifade eder. Bu durum, Dictyostelium discoideum coronins fonksiyonu çalışma güçlü bir model haline getirir.
Dictyostelium discoideum'da Koronin A'nın rolünü incelemek için, 10 Koronin barındırmayan vahşi tipli hücreler veya hücre kullanılarak dengelenmiş tuz çözeltisi (BSS) tampon içeren doku kültürü plakaları içinde açlık gelişim döngüsü neden olmuştur. Biz Koronin A eksik hücreler açlık üzerine çok hücreli agrega oluşturmak mümkün olduğunu bulmuşlardır. Bu fenotip doğru kantitatif bir değerlendirme içinBu protokol açıklanan otomatik canlı hücre görüntüleme önemli bir araçtır. Bir Koronin eksik hücrelerin erken açlık tepkisinin başlamasında kusur cAMP çağlayan yukarı bir eylemleri Koronin düşündüren, cAMP bakliyat tedarik tarafından kurtarıldı edilebilir. Gelişiminin başlaması simüle etmek için, cAMP darbelerinin egzojen uygulaması son 8,9 çeşitli laboratuarlar tarafından kullanılmıştır. Bununla birlikte, bu prosedür, aynı zamanda, hücre yoğunlukları ve zamanlaması büyük ölçüde bağlı olduğu bilinmektedir. Bu nedenle, burada açıklanan protokol tekrarlanabilirliği yüksek derecede garanti altına almak için, bu bir değişkenliğe azaltmayı amaçlamaktadır. Birlikte ele alındığında, bu çalışmalarda kullanılan teknikler Dictyostelium discoideum gelişimsel döngüsünün erken evrelerinde proteinlerin işlevleri araştırmak için güçlü araçlar sağlar ve yukarı tespit hem de bir işlevi Koronin aşağı doğru efektör potansiyeline sahiptir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
- Time-lapse mikroskobu ile Dictyostelium discoideum erken açlık yanıtı gözlemlemek.
- HPO 4 5 g proteoz pepton, 5g thiotone e pepton, 10 g glukoz 5 g maya özütü, 0.35 g 2 Na: 1 L için HL-5 ortamı (ihtiva eden bir Erlen bölgesi DH1.10 hücreleri ya da CORA-eksikli hücrelerin büyümesine * 7H 2 O, 0.35 gr KH 160 rpm'lik bir rotasyon ile bir çalkalama inkübatöründe 22 ° C'de 2 PO 4, 0.05 g dihidrostreptomisin-sülfat, pH 6.6). 0.01 x 10 6 hücre / ml ve 2 x 10 6 hücre / ml arasında bir yoğunlukta hücreler tutun.
- Hasat log-faz büyüyen DH1.10 hücreleri 21 ya da 22 ° C 'de HL-5 orta kültür çalkalama yetiştirilen CORA-eksikli hücrelerin DH1.10 arka oluşturulan 10, hücre toplama inceleyin. Bunu yapmak için, 400 x g'de 3 dakika boyunca hücreler (genellikle 10 ila 50 mi), santrifüj, uygun miktarda almak ve BSS (10 mM NaCI, 10 mM KCl hücreler iki kez yıkayın, 2.5 mM CaCl2, pH 6.5).
- Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak. Daha sonra, (5, 10, 20, ya da 40) bir yoğunlukta plaka hücreleri 24 oyuklu bir plaka içerisinde 10 4 hücre / cm2 x. bunları BSS 22 ° C de 1 saat yapışmaya izin verin.
- Görüntüleri her 135 sn alarak, 10 daha önce açıklandığı gibi zaman atlamalı mikroskobu ile toplanmasını gözünüzde canlandırın. kurmak 5X objektif ve uygun yazılım tarafından otomatik bir elektron-çarparak şarj çiftli aygıt kamera ile donatılmış bir canlı hücre görüntüleme kullanarak (Malzeme Tablo).
- açlık sırasında Diktiyostelyum diskodeyum hücrelerinin cAMP nabız gibi atan.
- Hücrelerin hasat tarafından DH1.10 hücreleri 21 veya DH1.10 Cora -açıklı hücrelerin 10 gelişimine dışarıdan uygulanan cAMP darbelerinin etkisini incelemek. Bunu yapmak için, 400 x g'de 3 dakika boyunca, uygun hücre miktarı (genellikle 10 ila 50 mi), santrifüj almak ve BSS içinde iki kez yıkayın.
- couBSS 1 x 10 7 hücre / ml bir yoğunluğa hücreler bir hemasitometre kullanılarak ve tekrar süspansiyon nt hücreleri. bakliyat uygulamadan önce 2 saat boyunca 22 ° C 'de kültür (160 rpm) çalkalayın. Bir zamanlayıcı kontrollü peristaltik pompa kullanılarak cAMP darbeleri ekleyin. 5 saatlik bir süre boyunca 5 sn darbe 50 nM cAMP (son konsantrasyon) 15 ul, her 6.5 dakikada bir Pompayı programlayın.
- Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak. Daha sonra, (5, 10, 20, ya da 40) bir yoğunlukta hücreler plaka 24 oyuklu bir plaka içerisinde 10 4 hücre / cm 2 x. BSS 1 saat yapışmaya izin verin.
- 5X objektif kullanılarak parlak alan mikroskopi ile 22 ° C de 16 saat sonra toplama görselleştirme.
- Durumunu ortama maruz kalma ile Dictyostelium discoideum gelişme indüksiyonu.
- 22 tarif edildiği gibi, taze koşullu ortam hazırlar. Kült sallayarak gelen log-faz DH1.10 hücreleri 21 veya DH1.10 Cora -açıklı hücreleri 10 topla400 x g'de 3 dakika boyunca bir pipet, santrifüj kullanılarak 22 ° C'de HL-5 ortamı ile etmiş olur ve PBM hücreleri üç defa yıkamak (0.02 M potasyum fosfat, 10 uM CaCl2, 1 mM MgCl2, pH 6.1).
- Bir hemasitometre kullanarak hücreleri sayın mi, 1 x 10 7 hücre / yoğunluğunda PBM bu tekrar süspansiyon ve 110 rpm / 22 ° C'de 20 saat süre ile çalkalanır.
- 3 dakika boyunca 400 x g'de santrifüj işleminden sonra koşullu ortam toplayın ve 4 ° C'de 15 dakika boyunca 8000 x g'da santrifüjleme ile belirler.
- 0.45 um'lik bir filtreden filtre koşullu ortam (Malzeme Tablo) ve PBM üç kat seyreltilir.
- (5, 10, 20, ya da 40) bir yoğunlukta bir hemasitometre ve plaka kullanarak hücreleri sayın 24 oyuklu bir plaka içerisinde 10 4 hücre / cm2 x. bunları 22 ° C de 1 saat yapışmaya izin verin.
- önceden hazırlanmış uygulanmış madde ile hücre değişimi yüzer.
- toplama a görselleştirmek5X objektif kullanarak parlak alan mikroskobu ile fter 16 saat.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Erken gelişme bir gösterisi bir kusur Koronin eksik hücreleri (Şekil 2). Bir hücre Koronin yokluğunda Dictyostelium discoideum gelişim devri sırasında ilk adımdır çok-agregatlar oluşturmak için mümkün değildir. Bu nedenle, Koronin erken açlık yanıtı ve / veya cAMP sinyali sırasında önemli bir rol oynadığı görülmektedir. Gerçekten de, Koronin A'nın olmaması çok hücreli agrega oluşumunun olmaması, indirgenmiş cAMP 10 sinyal eşlik eder. Bununla birlikte, dış kaynaklı cAMP palslarının tatbiki tamamen doğal tipte fenotipi (Şekil 3) yükler. Bu bir Koronin yerine doğrudan cAMP sinyalizasyon, cAMP kaskad yukarı işlevleri (Şekil 5) müdahil olma olduğunu implicates. Dictyostelium hücreleri açlıktan koşullara maruz kaldıklarında erken açlık salgılanması 22,23 faktörleri neden olur. En iyi Chara birErken açlık yanıt olarak yer cterized faktörler orta faktör (CMF) 22 şartına bağlıdır. Bu bulgulara dayanarak, bir Koronin da bu ilk açlık faktörlerin sekresyonunu regüle ya da bu faktörlerin neden olduğu sinyal iletimi dahil olduğunu varsaydık. Amacıyla biz orta deneyler şartına gerçekleştirilir Bu iki etkinin ayırt edebilmek için. Yabani tip veya Cora -açıklı hücreleri aç yabani tip veya Cora -açıklı hücreleri 10 (Şekil 4) birinden süpernatantlar maruz bırakıldı. Bu süpernatantlar çok hücreli agrega oluşumu güçlü başlatanlar ve bu nedenle cAMP sinyalizasyon dahil mansap gelişimsel sinyal yollarını başlatmak faktörleri içerir. Bulgularımız, vahşi tip hücrelerinin süpernatanıyla durum (Şekil 4) olarak CORA -açıklı hücrelerden alınan üst faz gelişimini azaltmak için eşit sahip olduğunu göstermektedir. Bu, CORA implicates -eksik hücreler üretmek ve onların yabani tip kontrollere benzer seviyelerde erken açlık faktörleri salgılar edebiliyoruz. Ancak, CORA -açıklı hücreleri ne kendi süpernatant ne de vahşi tip hücrelerin (Şekil 4) sağlanan süpernatant cevap edebiliyoruz. Bu nedenle, Koronin bir yerine kendi ekspresyon / sekresyon 10 (Şekil 5) daha erken açlık faktörleri ile uyarılan sinyal yolları dahil olduğu görülmektedir.
Genel olarak, daha fazla gelişim döngüsü neden Dictyostelium hücreleri açlıktan tarafından salgılanan sinyalleri araştırmak için muktedir, su altı şartlarında toplama tahlil güçlü bir okuma-out. kendiliğinden agrega nedeniyle gerekli tüm sinyallerin bir bolluk olacak yüksek yoğunluklarda serpilmiş hücreleri. Bununla birlikte, düşük yoğunluklarda şartlandırılmış ortamın sadece ek hücre toplama neden olacaktır (Şekil 4) 22,24
Şekil 1: memeli ve Dictyostelium discoideum mevcut Koronin proteinler Koronin ailesi eşsiz alan ve bir C-ucu sarılmış bobin bölgesi takip N-terminali WD tekrar bölgelerinin varlığı ile karakterize edilir.. Memeliler 7 Koronin proteinleri (A) ifade ederken, Diktiyostelyum diskodeyum sadece kendi fonksiyonu çalışmalarında daha az muhtemel fazlalık riskini yaparak, iki aile üyeleri (B) içerir. Koronin bir memeli Koronin 1 ve Koronin B ortologu Koronin 7. Kısaltmalar benzer bir etki yapısını göstermektedir geçerli: CC, sarmal-coil etki; UD, benzersiz etki; WD, triptofan tekrar -aspartate tekrarlar. Boy amino asitler (aa) 'da, fare dizilerinin (A) verilir. Pieters ve diğ., 2013 12 Modifiye. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 2:. CORA - Dictyostelium discoideum, erken açlık yanıtı sırasında bir araya mümkün olan Yabani tip (A) ya da CORA-eksikli (B) Dictyostelium hücreleri, 2 x 10 5 hücre / cm2 yoğunluğunda çukurlu plakalara tohumlanmıştır, BSS mahrum bırakılır ve 20 saat arasında bir süre boyunca görüntülenmiştir. Ölçek çubuğu = 100 mikron..jpg "target =" _ blank "> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
. Şekil 3: Dışarıdan cAMP Cora erken gelişim kusuru kurtarmak bakliyat uygulanan - Diktiyostelyum diskodeyum Vejetatif vahşi tip (A ve B) ve Cora -açıklı hücreleri (C ve D) B (ile doldurulan önce yıkanır ve 2 saat hasret ve D) ya da 5 saat, süspansiyon içindeki her 6.5 dakika boyunca, A ve C), 50 nM cAMP (yoktur. Hücreler daha sonra BSS içinde yeniden süspanse yıkandı ve / cm2, 10 x 10 4 hücre yoğunluğunda bir Petri tabağına yerleştirilmiştir. Görüntüler hücrelerin tohumlama sonrası 20 saat alındı. Ölçek çubuğu = 100 um. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 4: Cora -açıklı Diktiyostelyum diskodeyum (gelişimsel indüksiyon için gerekli tüm faktörleri üretebiliriz ama onlara cevap veremiyoruz Üstel vahşi tip büyüyen ve Cora -açıklı hücreler PBM yıkanmış ve yoğunluğunda multiwell levhalara aşılandı. 5, 10, 20 ya da 40), vahşi tip (A) ya da CORA -açıklı açlıktan hücreleri (B) 'den elde kıvamlandırılmış ortam içinde inkübe / cm2 10 4 hücrelerini, x. görüntüleri hücrelerin ekim sonra 16 saat alındı. Ölçek çubuğu = 100 mikron.tp_upload / 53972 / 53972fig4large.jpg "target =" _ blank "> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 5:. Koronin mevcut modeli Dictyostelium discoideum bir fonksiyonu Koronin bir cAMP kademeli indüksiyonu ve gelişim döngüsü boyunca ilerlemesine neden olan erken açlık yanıtı sırasında salgılanan faktör (ler) arasında sinyal iletiminde rol oynar. Dan Vinet ve diğ. Modifiye 2014 10. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Koronin proteinler ökaryotik dalının en takson bulunurlar. Dictyostelium discoideum Koronin bir memeli Koronin 1 homologu hücreler erken gelişim sırasında çekiş merkezleri oluşturmak mümkün değildir bir eksikliği Koronin yana erken açlık yanıt olarak katılır döngüsü 10. nicel ve doğru bir suşları arasında gelişiminde gecikme değerlendirmek mümkün, otomatik sahne denetleyicisi ile bir mikroskop canlı hücre görüntüleme set-up önemli bir araçtır.
D. diskodeyum ömrü 1-4 çeşitli aşamalarında önemli bir sinyal molekülü olarak cAMP kullanır. cAMP gerekli süre boyunca kontrol noktası bir çok-yapıların oluşturulması için tek bir hücre geçiştir. Açlık ~ 6 saat hücreleri tarafından algılanır ve bir toplama merkezi 5 doğru hareket kemotaktik sinyali sağlar sonra cAMP dalgalarının başlangıcı. Bu cAMPdalgalar açlıktan D. darbe deneysel taklit edilebilir cAMP discoideum hücreler 5 saat 8,9 bir süre boyunca her 6.5 dakika. Bu prosedür kullanılarak, güvenilir sonuçlar elde etmek için, cAMP darbeleri uygulamadan önce 2 h kadar hücreleri açlıktan öldürmek için önemlidir. Kurmak bu deneysel kullanarak bu dıştan uygulanan darbeler Cora -açıklı hücrelerde gelişimini kurtarıldı olarak, cAMP sinyalizasyon üst akışında hareket ettiğini Koronin A gösterir başardık (Şekil 3 ve 5). Bu sonuçlar aynı zamanda Koronin erken açlık yanıt algılama önemli bir role sahip görünürken, bu tür kemotaksi ve hücre toplama başına 10 gibi işlemler için vazgeçilebilir olduğunu göstermektedir.
Birikme deneyi kendisi Dictyostelium discoideum erken gelişimini incelemek için sağlam bir yöntemdir. Ancak, bu e tekrarlanabilirliği etkileyebilecek çeşitli tuzaklar vardırxperiments ve çeşitli faktörler dikkate alınır bu nedenle önemlidir: Cora -açıklı hücreleri analiz ederken hücrelerin yaşı önemli bir rol oynar. Bu hücreler, yaklaşık çözüldükten noktadan sonra 2 hafta fenotip ve yeniden agrega telafi etmek eğilimindedir. Bir sinyal kusur ve göstermek hücreler kemotaktik kusur nedeniyle erken açlık faktörlerinin artan konsantrasyonu daha yüksek yoğunluklarda agrega eğilimi edebileceğiniz gibi hücrelerin yoğunluğu, hem de çok önemli bir faktördür. Bu deneylerde hücreler hassas sayım ve seyreltme önemi göz ardı edilemez. farklı suşlar, bu tür hücre yoğunluklarında, yapışma süresi, gelişme zamanı olarak tahlil çok sayıda değişkenler, bir ayarlama gereklidir. Tüm hücreler, farklı bileşikler kullanılarak aç olabilir, ya da gelişmesini stimüle ya önlenebildiği: burada tarif edildiği gibi birikme deneyi farklı sorular göre değiştirilebilir bir çok yönlü bir tekniktiragregasyonunun spesifik modülasyon sayesinde. tarafsız yaklaşımlar erken gelişimi için önemli olan genlerin ya da faktörlerin belirlenmesi yanı sıra, erken gelişim kusurları ile suşları tanımlamak için buraya açıklanan set-up da izin verir. Bu aynı zamanda yöntemin başlıca dezavantajı: birikme deneyi tam gelişimsel döngüsünün bir azaltılmış versiyonu. Bu nedenle, bu gelişim döngüsünün sonraki aşamalarında etki fenotipleri analizi için uygun değildir. , Birikme deneyi daha fazla zaman ve kaynak tasarrufu ile ilgili gelişme daha olmaktadır 48 oyuklu plakalarda ve otomatik görüntüleme sırasında kaydedilen gelişme 16 HR: ana avantajı agregasyonu büyük ölçekli deney ve otomatik biçimde kabul olasılığıdır agar plakaları.
Bu harici uygulanan cAMP darbeleri kullanılarak erken açlık yanıt baypas edildiği deneylerde, Koronin A <salgılanan faktörler algılama dahil olduğunu gösterdiem> açlık üzerine Dictyostelium hücreleri. Erken açlık yanıtı sırasında Koronin bir aracılı sinyallemenin hassas mekanizması hala açıklığa kavuşmamıştır. Bu gelişim aşamasında olan birkaç faktör özellikle koşullandırılmış ortam faktörü (CMF) 25,26 yılında, incelenmiştir. Ancak, CMF kendi başına veya ko-faktörler ile hareket edip belirsizliğini koruyor ve sinyal yolunun yalnızca kısmen anlaşılmıştır. Dictyostelium hücrelerinin toplama kapasitesini kullanarak su altı koşulları burada geliştirme için olumlu bir okuma olarak tarif altında agar yüzeylerinde birikme tahlilleri ile karşılaştırıldığında bir zaman etkili bir şekilde büyük ölçekli tarama deneyler sağlar. Ancak, su altı şartlarında toplama deneyleri hücrelerin ilk toplama aşamasında tutuklanan olacak gibi tam gelişim döngüsü yerine getirmeyen dezavantaj var. Bu nedenle, burada tarif edilen teknik, sonraki gelişim prosedürü incelenmesi için uygun değildirD eğ. Özetle, burada belgelenen deneysel yaklaşım erken açlık tepki içine Koronin A-bağımlı girişi neden potansiyel erken açlık faktörü (ler) daha fazla karakterizasyonu izin verebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| HL-5 media (for 1 L: 5 g proteose peptone, 5 g thiotone E peptone, 10 g glucose, 5 g yeast extract, 0.35 g Na2HPO4*2H2O, 0.35 g KH2PO4, 0.05 g dihydrostreptomycin-sulfate, pH 6.6) | |||
| Proteose peptone | BD Bioscience | 211693 | |
| Thiotone E peptone | BD Bioscience | 211684 | |
| Yeast extract | BD Bioscience | 212750 | |
| Glucose | AppliChem | A3666 | |
| Na2HPO4*2H2O | Fluka | 71643 | |
| KH2PO4 | AppliChem | A1043 | |
| dihydrostreptomycin-sulfate | Sigma-Aldrich | D1954000 | |
| PBM (0.02 M potassium phosphate, 10 μM CaCl2, and l mM MgCl2, pH 6.1) | self made | ||
| BSS (10 mM NaCl, 10 mM KCl, 2.5 mM CaCl2, pH 6.5) | self made | ||
| 0.45-μm Filtropure S filter | Sarstedt | 83.1826 | |
| Falcon 24-well Tissue culture plate | Fisher Scientific | 08-772-1H | |
| Cellobserver microscope | Zeiss | custom built | |
| AxioVision software | Zeiss | ||
| IPC Microprocessor–controlled dispensing pump | ISMATEC | ISM 931 | |
| Axiovert 135M microscope | Zeiss | 491237-0001-000 | |
| Incubation Shaker | Inforst HT Minitron |
References
- Weijer, C. J.
- Devreotes, P. Dictyostelium discoideum: a model system for cell-cell interactions in development. Science. 245, 1054-1058 (1989).
- Kimmel, A. R., Firtel, R. A. cAMP signal transduction pathways regulating development of Dictyostelium discoideum. Curr Opin Genet Dev. 1, 383-390 (1991).
- Clarke, M., Gomer, R. H. PSF and CMF, autocrine factors that regulate gene expression during growth and early development of Dictyostelium. Experientia. 51, 1124-1134 (1995).
- Robertson, A., Drage, D. J., Cohen, M. H. Control of Aggregation in Dictyostelium discoideum by an External Periodic Pulse of Cyclic Adenosine Monophosphate. Science. 175, 333-335 (1972).
- Konijn, T. M., Chang, Y. Y., Bonner, J. T. Synthesis of cyclic AMP in Dictyostelium discoideum and Polysphondylium pallidum. Nature. 224, 1211-1212 (1969).
- Iranfar, N., Fuller, D., Loomis, W. F. Genome-wide expression analyses of gene regulation during early development of Dictyostelium discoideum. Eukaryot Cell. 2, 664-670 (2003).
- Darmon, M., Brachet, P., Da Silva, L. H. Chemotactic signals induce cell differentiation in Dictyostelium discoideum. Proc Natl Acad Sci U S A. 72, 3163-3166 (1975).
- Mann, S. K., Firtel, R. A. Cyclic AMP regulation of early gene expression in Dictyostelium discoideum: mediation via the cell surface cyclic AMP receptor. Mol Cell Biol. 7, 458-469 (1987).
- Vinet, A. F., et al. Initiation of multicellular differentiation in Dictyostelium discoideum is regulated by coronin A. Mol Biol Cell. 25, 688-701 (2014).
- Eckert, C., Hammesfahr, B., Kollmar, M. A holistic phylogeny of the coronin gene family reveals an ancient origin of the tandem-coronin, defines a new subfamily, and predicts protein function. BMC Evol Biol. 11, 268 (2011).
- Pieters, J., Muller, P., Jayachandran, R. On guard: coronin proteins in innate and adaptive immunity. Nat Rev Immunol. 13, 510-518 (2013).
- Gatfield, J., Albrecht, I., Zanolari, B., Steinmetz, M. O., Pieters, J. Association of the Leukocyte Plasma Membrane with the Actin Cytoskeleton through Coiled Coil-mediated Trimeric Coronin 1 Molecules. Mol Biol Cell. 16, 2786-2798 (2005).
- Kammerer, R. A., et al. A conserved trimerization motif controls the topology of short coiled coils. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 13891-13896 (2005).
- Uetrecht, A. C., Bear, J. E.
- Jayachandran, R., et al. Coronin 1 Regulates Cognition and Behavior through Modulation of cAMP/Protein Kinase A Signaling. PLoS Biol. 12, e1001820 (2014).
- Suo, D., et al. Coronin-1 is a neurotrophin endosomal effector that is required for developmental competition for survival. Nat Neurosci. 17, 36-45 (2014).
- Mueller, P., et al. Regulation of T cell survival through coronin-1-mediated generation of inositol-1,4,5-trisphosphate and calcium mobilization after T cell receptor triggering. Nat Immunol. 9, 424-431 (2008).
- de Hostos, E. L., Bradtke, B., Lottspeich, F., Guggenheim, R., Gerisch, G. Coronin, an actin binding protein of Dictyostelium discoideum localized to cell surface projections, has sequence similarities to G protein beta subunits. EMBO J. 10, 4097-4104 (1991).
- Shina, M. C., et al. Redundant and unique roles of coronin proteins in Dictyostelium. Cell Mol Life Sci. 68, 303-313 (2011).
- Cornillon, S., et al. Phg1p is a nine-transmembrane protein superfamily member involved in dictyostelium adhesion and phagocytosis. J Biol Chem. 275, 34287-34292 (2000).
- Gomer, R. H., Yuen, I. S., Firtel, R. A. A secreted 80 x 10(3) Mr protein mediates sensing of cell density and the onset of development in Dictyostelium. Development. (112), 269-278 (1991).
- Iijima, N., Takagi, T., Maeda, Y. A proteinous factor mediating intercellular communication during the transition of Dictyostelium cells from growth to differentiation. Zoological science. 12, 61-69 (1995).
- Mehdy, M. C., Firtel, R. A. A secreted factor and cyclic AMP jointly regulate cell-type-specific gene expression in Dictyostelium discoideum. Mol Cell Biol. 5, 705-713 (1985).
- Jain, R., Yuen, I. S., Taphouse, C. R., Gomer, R. H. A density-sensing factor controls development in Dictyostelium. Genes Dev. 6, 390-400 (1992).
- Loomis, W. F. Cell signaling during development of Dictyostelium. Dev Biol. 391, 1-16 (2014).
