Abstract
Dictyostelium discoideum amøbe finnes i jord, fôring på bakterier. Når mat kilder bli knappe, de skiller faktorer for å sette i gang en flercellet utviklingsprogram, der enkeltceller chemotax mot aggregering sentre 1-4. Denne prosessen er avhengig av frigjøring av cyklisk adenosin monofosfat (cAMP) 5. cAMP er produsert i bølger gjennom den felles virkning av adenylatsyklase og fosfodiesteraser, og binder seg til G-protein-koblede cAMP-reseptorer 6,7. En mye brukt analyse for å analysere de mekanismene som er involvert i den utviklingsmessige syklus av den nedre eukaryot Dictyostelium discoideum er basert på observasjon av celle aggregering i neddykkede betingelser 8,9. Denne protokollen beskriver analysen av rollen til coronin A i det utviklingsmessige syklus ved sult i vev-kulturplater nedsenket i balansert saltoppløsning (BSS) 10. Coronin A er medlem av allment bevart protein familie av coronins som har blitt implisert i en rekke aktiviteter 11,12. Dictyostelium celler som mangler coronin A er i stand til å danne flercellede aggregater, og denne feil kan reddes ved å tilføre pulser av cAMP, som tyder på at coronin A opptrer oppstrøms for cAMP kaskade 10. Teknikkene som beskrives i disse studiene gir robuste verktøy for å undersøke funksjoner av proteiner i de innledende stadier av utviklingssyklusen Dictyostelium discoideum oppstrøms av cAMP kaskade. Derfor utnytte denne aggregering analysen kan tillate videre studier av coronin En funksjon og fremme vår forståelse av coronin biologi.
Introduction
Den coronin familie av proteiner er svært konservert gjennom eukaryoter. Disse proteinene er karakterisert ved nærværet av et amino-terminalt tryptofan-aspartat (WD) gjenta-inneholdende region fulgt av en unik region som er koblet til en karboksy-terminal kveil-spole domene 13,14 (figur 1). Coronins har vært implisert i en rekke cellulære funksjoner, inkludert cytoskeletal regulering og signaltransduksjon 12. I pattedyr opptil seks korte coronin molekyler (coronin 1-6) samt en "tandem" coronin 7, kan være co-uttrykt 12,15. Coronin 1 er den mest omfattende studert familiemedlem, og ble vist å være involvert i patogen ødeleggelse, T-celle overlevelse og neuronal signalering. Hvor, nøyaktig, coronin en gjennomfører disse aktivitetene er fortsatt uklart. Mens coronin en ble vist å regulere Ca 2+ og cAMP-avhengige signalering samt F-aktin cytoskjelettet modulasjon 16-18, potensialet co-ekspresjon på opp til 7 familiemedlemmer i pattedyr har gjort det vanskelig å studere de molekylære funksjon av coronins i disse systemer på grunn av mulige redundanser. I motsetning til pattedyr organismer, uttrykker lavere eukaryote Dictyostelium discoideum bare to familiemedlemmer coronin (coronin A, den ortolog av pattedyr coronin en og coronin B, den ortolog av pattedyr coronin 7) med tilsynelatende ikke-redundante funksjoner 15,19,20. Dette faktum gjør Dictyostelium discoideum en potent modell for å studere funksjonen av coronins.
For å studere rollen til coronin A i Dictyostelium discoideum, induserte vi utviklingssyklus ved sult i vev-kultur-skåler inneholdende balanserte saltoppløsning (BSS) buffer ved bruk av enten villtype-celler eller celler som mangler coronin A 10. Vi fant ut at cellene mangler coronin A ikke var i stand til å danne flercellede aggregater ved sult. For en nøyaktig kvantitativ vurdering av denne fenotype iautomatisert levende celle bildebehandling beskrevet i denne protokollen er et viktig verktøy. Feilen i initiering av tidlig sult respons i celler som mangler coronin A kan bli reddet ved å levere pulser av cAMP, som tyder på at coronin A fungerer oppstrøms av cAMP kaskade. Den eksogene anvendelse av cAMP pulser å simulere oppstart av utvikling har blitt utnyttet av flere laboratorier i det siste 8,9. Imidlertid er denne framgangsmåten også er kjent for å være sterkt avhengig av celletetthet og timing. Derfor er den protokoll som er beskrevet her tar sikte på å redusere disse variabilities for å sikre en høy grad av reproduserbarhet. Tatt sammen, de teknikker som benyttes i disse studiene gir robuste verktøy for å undersøke funksjonene til proteiner under tidlige stadier av den utviklingsmessige syklus av Dictyostelium discoideum, og har potensial til å identifisere opp- og nedstrøms effektorer av coronin En funksjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
- Observer tidlig sult svar av Dictyostelium discoideum av time-lapse mikroskopi.
- Grow DH1.10 celler eller Cora -deficient celler i en Erlenmayer kolbe med HL-5 medium (for 1 L: 5 g proteose pepton, 5 g thiotone E pepton, 10 g glukose, 5 g gjærekstrakt, 0,35 g Na 2 HPO 4 * 7H 2 O, 0,35 g KH 2PO 4, 0,05 g Dihydrostreptomycin-sulfat, pH 6,6) ved 22 ° C i en risteinkubator med en rotasjon på 160 opm. Holde-celler med en tetthet mellom 0,01 x 10 6 celler / ml og 2 x 10 6 celler / ml.
- Undersøk celle aggregering, etter høsting log-fase voksende DH1.10 celler 21 eller Cora -deficient celler 10 genereres i DH1.10 bakgrunn, dyrket i ristekultur med HL-5 medium ved 22 ° C. For å gjøre dette, ta riktig mengde celler (vanligvis mellom 10 og 50 ml), sentrifuger for 3 min ved 400 xg og vaske cellene to ganger i BSS (10 mM NaCl, 10 mM KCl, 2,5 mM CaCl2, pH 6,5).
- Telle celler ved hjelp av en hemocytometer. Deretter plate celler ved en tetthet på (5, 10, 20, eller 40) x 10 4 celler / cm2 i en 24-brønns plate. Tillate dem å forholde seg til en time ved 22 ° C i BSS.
- Visualiser aggregering av time-lapse mikroskopi som beskrevet før 10, tar bilder hver 135 sek. ved hjelp av en levende celle bildebehandling satt opp utstyrt med 5x objektiv og et elektron-multiplisere CCD kamera automatiseres ved den aktuelle programvaren (se Materialer tabell).
- cAMP pulserende av Dictyostelium discoideum celler under sult.
- Undersøke effekten av eksternt påførte cAMP pulser på utvikling av DH1.10 celler 21 eller DH1.10 Cora -deficient celler 10, ved å høste celler. For å gjøre dette, ta passende mengde celler (vanligvis mellom 10 og 50 ml), sentrifuger for 3 min ved 400 xg og vask to ganger i BSS.
- Count celler ved hjelp av et hemocytometer og resuspender cellene til en tetthet på 1 x 10 7 celler / ml i BSS. Rist kulturene (160 rpm) ved 22 ° C i 2 timer før påføring av pulser. Legg cAMP pulser med en tidtaker kontrollert peristaltisk pumpe. Programmere pumpe for å levere en 5 sekunder puls hvert 6,5 min av 15 ul 50 nM cAMP (sluttkonsentrasjon) i løpet av en periode på 5 timer.
- Telle celler ved hjelp av en hemocytometer. Deretter plate cellene ved en tetthet på (5, 10, 20, eller 40) x 10 4 celler / cm2 i en 24-brønns plate. Tillat å følge for en time i BSS.
- Visualiser aggregering etter 16 timer ved 22 ° C ved lys-felt mikroskopi ved hjelp av en 5X objektiv.
- Induksjon av Dictyostelium discoideum utvikling gjennom eksponering for kondisjonert medium.
- Forbered fersk kondisjonert medium som beskrevet 22. Samle log-fase DH1.10 celler 21 eller DH1.10 Cora -deficient celler 10, rister kultures med HL-5 medium ved 22 ° C ved hjelp av en pipette, sentrifuger i 3 minutter ved 400 xg og vaske cellene tre ganger i PBM (0,02 M kaliumfosfat, 10 mM CaCl2 og 1 mM MgCl2, pH 6,1).
- Cellene telles ved hjelp av et hemocytometer, resuspender disse i PBM i en tetthet på 1 x 10 7 celler / ml og det hele rystes i 20 timer ved 110 opm / 22 ° C.
- Samle kondisjonert medium etter sentrifugering ved 400 x g i 3 min og klar ved sentrifugering ved 8000 x g i 15 min ved 4 ° C.
- Filter kondisjonert medium gjennom et 0,45 mikrometer filter (se Materialer tabell) og fortynne tredoblet i PBM.
- Cellene telles ved hjelp av et hemocytometer og plate ved en tetthet på (5, 10, 20, eller 40) x 10 4 celler / cm2 i en 24-brønns plate. Tillate dem å forholde seg til en time ved 22 ° C.
- Utveksling supernatanten av cellene med det tidligere fremstilte kondisjonert medium.
- Visualiser aggregering enfter 16 timer etter lyse felt mikroskopi ved hjelp av en 5X objektiv.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Celler som mangler coronin Et show en defekt i tidlig utvikling (figur 2). I fravær av coronin A-celler er ikke i stand til å danne flercellede aggregater, som er det første skritt i løpet av den utviklingsmessige syklus av Dictyostelium discoideum. Derfor synes coronin A for å spille en rolle under den tidlige sult respons og / eller cAMP signalering. Faktisk er mangelen på flercellede aggregatdannelse i fravær av coronin A ledsaget av redusert cAMP signale 10. Imidlertid er anvendelse av eksogene cAMP pulser som gjenoppretter full villtype-fenotype (figur 3). Dette impliserer at coronin A, i stedet for å være direkte involvert i cAMP-signalering, funksjoner oppstrøms for cAMP kaskade (figur 5). Når Dictyostelium cellene blir utsatt for sultende forholdene de indusere utskillelsen av tidlig sult faktorer 22,23. En av de beste characterized faktorer involvert i den tidlige sult svar er betinget medium faktor (CMF) 22. På grunnlag av våre resultater, hypotese vi at coronin A enten regulerer utskillelsen av disse tidlige sult faktorene eller er involvert i signaltransduksjon indusert av disse faktorene. For å være i stand til å skille mellom disse to effektene vi utført kondisjonert medium eksperimenter. Wild-type eller Cora -deficient celler ble eksponert for supernatanter fra enten sultet villtype eller Cora -deficient celler 10 (figur 4). Disse supernatanter er potente initiativtakerne flercellet aggregatdannelse og derfor inneholde faktorer som setter i gang nedstrøms utviklingssignalveier, inkludert cAMP signalering. Våre resultater viser at supernatant fra cora -deficient celler var like i stand til å indusere utvikling som tilfellet var for supernatanten fra villtype-celler (figur 4). Dette impliserer at Cora -manglende celler er i stand til å produsere og skille ut tidlig sult faktorer på samme nivå i sine villtype kontroller. Imidlertid cora -deficient cellene er heller ikke i stand til å svare på sin egen supernatant og heller ikke å supernatant tilgjengelig fra villtype-celler (figur 4). Derfor synes coronin A for å være involvert i signalveier indusert av tidlige sult faktorer, i stedet for deres ekspresjon / sekresjon 10 (figur 5).
Generelt, for å være i stand til å undersøke signalene utskilt av sult Dictyostelium celler som induserer utviklingssyklus, aggregering analysen under submerse betingelser er en potent utlesning. Celler seeded ved høyere tettheter vil spontant samlet på grunn av en overflod av alle nødvendige signaler. Men ved lavere densiteter bare tilsetningen av kondisjonerte medium vil indusere cellulær aggregering (figur 4) 22,24
Figur 1: Coronin proteiner i pattedyr og Dictyostelium discoideum Den coronin familien er karakterisert ved tilstedeværelse av N-terminale WD-vendende regioner, etterfulgt av et unikt domene og et C-terminalt kveilet spiral region.. Mens pattedyr uttrykker 7 coronin proteiner (A), inneholder Dictyostelium discoideum bare to familiemedlemmer (B), slik at risikoen for redundans mindre sannsynlig når man vil studere deres funksjon. Coronin A er ortolog av pattedyr coronin en og coronin B viser en lignende domene struktur som coronin 7. Forkortelser: CC, coiled-spole domene; UD, unik domene; WD gjentar, tryptofan -aspartate repetisjoner. Lengde er gitt for mus sekvenser (A) i aminosyrer (aa). Modifisert fra Pieters et al., 2013 12. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Fig. 2: Cora - Dictyostelium discoideum er ikke i stand til å aggregere under den tidlige responsen sult Vill-type (A), eller CORA -deficient (B) Dictyostelium celler ble sådd inn i multibrønnplater ved en tetthet på 2 x 10 5 celler / cm 2, sultet i BSS, og avbildes i løpet av en periode på 20 timer. Scale bar = 100 mikrometer..jpg "target =" _ blank "> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: eksternt påført cAMP pulser redde de tidlige utviklingsdefekt av Cora - Dictyostelium discoideum Vegetativ vill-type (A og B) og CORA -deficient celler (C og D) ble vasket og sultet i 2 timer før den ble pulsert med (B. og D) eller uten (A og C) 50 nM cAMP i løpet av 5 timer hver 6,5 min i suspensjon. Cellene ble deretter vasket, resuspendert i BSS, og plassert på en petriskål med en tetthet på 10 x 10 4 celler / cm2. Bilder ble tatt 20 timer etter utsåing av cellene. Scale bar = 100 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: Cora -deficient Dictyostelium discoideum er i stand til å produsere alle nødvendige faktorer for utviklings induksjon, men er ikke i stand til å svare på dem eksponentielt voksende villtype og Cora -deficient cellene ble vasket i PBM og sådd på multibrønnplater i en tetthet på (. 5, 10, 20, eller 40) x 10 4 celler / cm 2, inkubert i kondisjonert medium oppnådd fra villtype (A) eller CORA -deficient sultende celler (B). Bildene ble tatt 16 timer etter utsåing av cellene. Scale bar = 100 mikrometer.tp_upload / 53972 / 53972fig4large.jpg "target =" _ blank "> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Fig. 5: Current modell av Coronin En funksjon i Dictyostelium discoideum Coronin A er involvert i signaltransduksjon av faktor (er) som skilles ut i løpet av den tidlige sult reaksjon som fører til induksjonen av cAMP kaskade og progresjon gjennom utviklingssyklus. Modifisert fra Vinet et al., 2014 10. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De coronin proteiner finnes i de fleste arter av den eukaryotiske clade. Dictyostelium discoideum coronin A, homolog av pattedyr coronin 1, er involvert i de tidlige sult respons, ettersom coronin A-manglende celler er ikke i stand til å danne samlings sentre i løpet av den tidlige utviklings syklus 10. For å kunne kvantitativt og nøyaktig vurdere forsinkelsen i utviklingen mellom stammene, et mikroskop levende celle bildebehandling satt opp med den automatiserte scenen kontrolleren er et viktig verktøy.
D. discoideum utnytter cAMP som en viktig signalmolekyl i flere faser av sin livssyklus 1-4. En av de sjekkpunkter i løpet av hvilken cAMP er nødvendig er overgangen fra en enkelt celle til dannelse av flercellede strukturer. Utbruddet av cAMP bølger etter ~ 6 timer av sult avføles av cellene og gir den kjemotaktiske signal for å bevege seg mot et samlingssenter 5. disse cAMPbølger kan etterlignet eksperimentelt ved å pulsere sultne D. discoideum celler med cAMP hvert 6,5 min over en periode på 8,9 5 timer. Ved hjelp av denne fremgangsmåten er det viktig å sulte cellene i opp til 2t før påføring av cAMP-pulser, for å oppnå pålitelige resultater. Utnytte denne eksperimentelle satt opp var vi i stand til å vise at coronin A opptrer oppstrøms cAMP signalering, da disse eksternt påførte pulsene reddet utviklingen i Cora -deficient celler (figur 3 og 5). Disse resultatene indikerer også at mens coronin A synes å ha en viktig rolle i å avføle den tidlige responsen sult, er det unnværlig for prosesser slik som kjemotaxis og celle-aggregering og for seg 10.
Aggregering analyse i seg selv er en robust metode for å studere den tidlige utviklingen av Dictyostelium discoideum. Det er imidlertid flere fallgruver som kan innvirke på reproduserbarheten av disse experiments, og det er derfor viktig at flere faktorer er tatt hensyn til: I en alder av cellene spiller en viktig rolle når analysere Cora -deficient celler. Disse cellene har en tendens til å kompensere fenotype og re-samlet ca etter 2 uker fra det tidspunkt de er tint. Tettheten av cellene er en avgjørende faktor, så vel som celler som viser en signaldefekt og ikke en kjemotaktisk defekter kan tendens til å aggregere ved høyere tettheter på grunn av den økte konsentrasjonen av tidlige sult faktorer. Betydningen av den nøyaktige telling og fortynning av celler i disse analyser kan ikke overvurderes. For forskjellige stammer, en justering av flere variabler av analysen, slik som celletettheter, tidspunktet for tilslutning, tid for utvikling, vil være nødvendig. Aggregering analyse som beskrevet her er en allsidig teknikk som kan endres for å passe ulike henvendelser: cellene kan sultet, eller utvikling kan bli stimulert eller hemmet ved hjelp av ulike forbindelser, allgrunn for en bestemt modulering av aggregering. Den her beskrevne oppsett gir også mulighet for objektive metoder for å identifisere stammer med tidlig utviklingsdefekter, så vel som for identifisering av gener eller faktorer som er viktige for tidlig utvikling. Dette er også metodens store ulempe: aggregeringen analysen er en redusert versjon av den komplette utviklingssyklus. Derfor er det ikke egnet for analyse av fenotyper som påvirker senere trinn av utviklingssyklus. Den største fordelen er muligheten til å adoptere aggregering analysen i stor skala og automatisert format: i 48-brønners plater og med 16 timer i utviklingen registrert under automatisert bildebehandling, beviser aggregering analysen skal være mer tids- og ressurseffektive enn utviklingen på agar plater.
I forsøk hvor vi omgås tidlig sult reaksjon, ved hjelp av eksternt påførte cAMP-pulser, viste vi at coronin A er involvert i gjenkjenning av utskilt faktorer ved <em> Dictyostelium celler ved sult. Den eksakte mekanismen for coronin A-mediert signalering i løpet av tidlig sult svar er fortsatt uklart. Flere faktorer involvert i denne fasen av utviklingen har blitt studert, særlig kondisjonert medium faktor (CMF) 25,26. Men om CMF opptrer på egen hånd eller sammen med co-faktorer er fortsatt uklart og dets signalkaskade er bare delvis forstått. Bruk av aggregering kapasitet på Dictyostelium celler under submerse betingelser som her er beskrevet som en positiv avlesning for utvikling gjør det mulig å gjennomføre i stor skala screeningforsøk på en tidsbesparende måte sammenlignet med samlings analyser på agar overflater. Imidlertid aggregering analyser under submerse betingelser har den ulempe at de ikke oppfyller hele utviklingssyklus som celler vil bli arrestert i den innledende fasen aggregering. Derfor er den teknikk som er beskrevet her er ikke egnet for undersøkelse av senere utviklings processes. Oppsummert kan den eksperimentelle metode dokumentert her tillate ytterligere karakterisering av potensielle tidlig sult faktor (er) som induserer coronin A avhengig inntreden i den tidlige sult respons.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| HL-5 media (for 1 L: 5 g proteose peptone, 5 g thiotone E peptone, 10 g glucose, 5 g yeast extract, 0.35 g Na2HPO4*2H2O, 0.35 g KH2PO4, 0.05 g dihydrostreptomycin-sulfate, pH 6.6) | |||
| Proteose peptone | BD Bioscience | 211693 | |
| Thiotone E peptone | BD Bioscience | 211684 | |
| Yeast extract | BD Bioscience | 212750 | |
| Glucose | AppliChem | A3666 | |
| Na2HPO4*2H2O | Fluka | 71643 | |
| KH2PO4 | AppliChem | A1043 | |
| dihydrostreptomycin-sulfate | Sigma-Aldrich | D1954000 | |
| PBM (0.02 M potassium phosphate, 10 μM CaCl2, and l mM MgCl2, pH 6.1) | self made | ||
| BSS (10 mM NaCl, 10 mM KCl, 2.5 mM CaCl2, pH 6.5) | self made | ||
| 0.45-μm Filtropure S filter | Sarstedt | 83.1826 | |
| Falcon 24-well Tissue culture plate | Fisher Scientific | 08-772-1H | |
| Cellobserver microscope | Zeiss | custom built | |
| AxioVision software | Zeiss | ||
| IPC Microprocessor–controlled dispensing pump | ISMATEC | ISM 931 | |
| Axiovert 135M microscope | Zeiss | 491237-0001-000 | |
| Incubation Shaker | Inforst HT Minitron |
References
- Weijer, C. J.
- Devreotes, P. Dictyostelium discoideum: a model system for cell-cell interactions in development. Science. 245, 1054-1058 (1989).
- Kimmel, A. R., Firtel, R. A. cAMP signal transduction pathways regulating development of Dictyostelium discoideum. Curr Opin Genet Dev. 1, 383-390 (1991).
- Clarke, M., Gomer, R. H. PSF and CMF, autocrine factors that regulate gene expression during growth and early development of Dictyostelium. Experientia. 51, 1124-1134 (1995).
- Robertson, A., Drage, D. J., Cohen, M. H. Control of Aggregation in Dictyostelium discoideum by an External Periodic Pulse of Cyclic Adenosine Monophosphate. Science. 175, 333-335 (1972).
- Konijn, T. M., Chang, Y. Y., Bonner, J. T. Synthesis of cyclic AMP in Dictyostelium discoideum and Polysphondylium pallidum. Nature. 224, 1211-1212 (1969).
- Iranfar, N., Fuller, D., Loomis, W. F. Genome-wide expression analyses of gene regulation during early development of Dictyostelium discoideum. Eukaryot Cell. 2, 664-670 (2003).
- Darmon, M., Brachet, P., Da Silva, L. H. Chemotactic signals induce cell differentiation in Dictyostelium discoideum. Proc Natl Acad Sci U S A. 72, 3163-3166 (1975).
- Mann, S. K., Firtel, R. A. Cyclic AMP regulation of early gene expression in Dictyostelium discoideum: mediation via the cell surface cyclic AMP receptor. Mol Cell Biol. 7, 458-469 (1987).
- Vinet, A. F., et al. Initiation of multicellular differentiation in Dictyostelium discoideum is regulated by coronin A. Mol Biol Cell. 25, 688-701 (2014).
- Eckert, C., Hammesfahr, B., Kollmar, M. A holistic phylogeny of the coronin gene family reveals an ancient origin of the tandem-coronin, defines a new subfamily, and predicts protein function. BMC Evol Biol. 11, 268 (2011).
- Pieters, J., Muller, P., Jayachandran, R. On guard: coronin proteins in innate and adaptive immunity. Nat Rev Immunol. 13, 510-518 (2013).
- Gatfield, J., Albrecht, I., Zanolari, B., Steinmetz, M. O., Pieters, J. Association of the Leukocyte Plasma Membrane with the Actin Cytoskeleton through Coiled Coil-mediated Trimeric Coronin 1 Molecules. Mol Biol Cell. 16, 2786-2798 (2005).
- Kammerer, R. A., et al. A conserved trimerization motif controls the topology of short coiled coils. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 13891-13896 (2005).
- Uetrecht, A. C., Bear, J. E.
- Jayachandran, R., et al. Coronin 1 Regulates Cognition and Behavior through Modulation of cAMP/Protein Kinase A Signaling. PLoS Biol. 12, e1001820 (2014).
- Suo, D., et al. Coronin-1 is a neurotrophin endosomal effector that is required for developmental competition for survival. Nat Neurosci. 17, 36-45 (2014).
- Mueller, P., et al. Regulation of T cell survival through coronin-1-mediated generation of inositol-1,4,5-trisphosphate and calcium mobilization after T cell receptor triggering. Nat Immunol. 9, 424-431 (2008).
- de Hostos, E. L., Bradtke, B., Lottspeich, F., Guggenheim, R., Gerisch, G. Coronin, an actin binding protein of Dictyostelium discoideum localized to cell surface projections, has sequence similarities to G protein beta subunits. EMBO J. 10, 4097-4104 (1991).
- Shina, M. C., et al. Redundant and unique roles of coronin proteins in Dictyostelium. Cell Mol Life Sci. 68, 303-313 (2011).
- Cornillon, S., et al. Phg1p is a nine-transmembrane protein superfamily member involved in dictyostelium adhesion and phagocytosis. J Biol Chem. 275, 34287-34292 (2000).
- Gomer, R. H., Yuen, I. S., Firtel, R. A. A secreted 80 x 10(3) Mr protein mediates sensing of cell density and the onset of development in Dictyostelium. Development. (112), 269-278 (1991).
- Iijima, N., Takagi, T., Maeda, Y. A proteinous factor mediating intercellular communication during the transition of Dictyostelium cells from growth to differentiation. Zoological science. 12, 61-69 (1995).
- Mehdy, M. C., Firtel, R. A. A secreted factor and cyclic AMP jointly regulate cell-type-specific gene expression in Dictyostelium discoideum. Mol Cell Biol. 5, 705-713 (1985).
- Jain, R., Yuen, I. S., Taphouse, C. R., Gomer, R. H. A density-sensing factor controls development in Dictyostelium. Genes Dev. 6, 390-400 (1992).
- Loomis, W. F. Cell signaling during development of Dictyostelium. Dev Biol. 391, 1-16 (2014).
