Abstract
Dictyostelium discoideum amoebe zijn te vinden in de bodem en voeden zich met bacteriën. Toen voedselbronnen schaars geworden, ze scheiden factoren een meercellige ontwikkelingsprogramma, waarin enkele cellen chemotax richting aggregatie centra 1-4 te starten. Dit proces is afhankelijk van de afgifte van cyclisch adenosine monofosfaat (cAMP) 5. cAMP wordt in golven door de gecoördineerde werking van adenylaatcyclase en fosfodiësterasen en bindt aan G-eiwit gekoppelde receptoren cAMP 6,7. Een veel gebruikte bepaling voor de bij de ontwikkelingscyclus van de lagere eukaryote Dictyostelium discoideum mechanismen is gebaseerd op de waarneming van celaggregatie in ondergedompelde omstandigheden 8,9 analyseren. Dit protocol beschrijft de analyse van de rol van coronin A in de ontwikkelingscyclus door verhongering in weefselkweek platen ondergedompeld in gebalanceerde zoutoplossing (BSS) 10. Coronin A is een lid van de zeer geconserveerde protein familie van coronins die zijn betrokken bij een breed scala aan activiteiten 11,12. Dictyostelium cellen die coronin A zijn niet multicellulaire aggregaten, en dit gebrek kan worden gered door pulsen toevoeren van cAMP, wat suggereert dat coronin Een handelingen stroomopwaarts van de cAMP cascade 10. De in deze studies beschreven technieken krachtige hulpmiddelen om de functies van eiwitten te onderzoeken in de beginfase van de ontwikkelingscyclus van Dictyostelium discoideum stroomopwaarts van de cAMP cascade. Daarom is het gebruik van deze samenvoeging test kan de verdere studie van coronin Een functie mogelijk te maken en ons begrip van coronin biologie.
Introduction
De coronin familie van eiwitten is sterk geconserveerd hele eukaryoten. Deze eiwitten worden gekenmerkt door de aanwezigheid van een amino-eindstandige tryptofaan-aspartaat (WD) herhaling-bevattend gebied, gevolgd door een unieke regio verbonden met een carboxy-eindstandig coiled-coil domein 13,14 (Figuur 1). Coronins zijn betrokken bij diverse celfuncties, waaronder cytoskelet regulatie en signaaltransductie 12. In zoogdieren, tot zes korte coronin moleculen (coronin 1-6) en een "tandem" coronin 7, samen worden uitgedrukt 12,15. Coronin 1 is de meest uitgebreid onderzochte familielid, en bleek betrokken te zijn bij de vernietiging pathogene T celoverleving en neuronale signalering. Hoe precies, coronin 1 voert deze werkzaamheden blijft onduidelijk. Terwijl coronin 1 werd aangetoond dat Ca2 + en cAMP-afhankelijke signalering en F-actine cytoskelet modulatie 16-18, de eventuele co reguleren-expressie tot 7 familieleden in zoogdieren heeft het een uitdaging om de moleculaire functie van coronins bestuderen deze systemen, vanwege mogelijke ontslagen. In tegenstelling tot zoogdieren organismen, hoe lager eukaryoot Dictyosteliumcellen discoideum uitdrukt slechts twee coronin familieleden (coronin A, de ortholoog van zoogdier coronin 1 en coronin B, de ortholoog van zoogdier coronin 7) met schijnbaar niet-redundante functies 15,19,20. Dit feit maakt Dictyostelium discoideum een krachtig model om de functie van coronins bestuderen.
Om de rol van coronin A in Dictyostelium discoideum bestuderen, geïnduceerd we de ontwikkelingscyclus door verhongering in weefselkweek platen met gebalanceerde zoutoplossing (BSS) buffer met behulp van wildtype cellen of cellen zonder coronin A 10. We vonden dat cellen zonder coronin A waren niet in staat om meercellige aggregaten op hongerdood te vormen. Voor een nauwkeurige kwantitatieve beoordeling van dit fenotype hetgeautomatiseerde live cell imaging beschreven in dit protocol is een essentieel instrument. Het defect in de inleiding van het begin van de hongerdood reactie in cellen zonder coronin A kan worden gered door het leveren van pulsen van cAMP, wat suggereert dat coronin Een handelingen stroomopwaarts van de cAMP cascade. De exogene toepassing van cAMP pulsen op de inleiding van de ontwikkeling van de simulatie is gebruikt door verschillende laboratoria in het verleden 8,9. Maar deze procedure ook bekend sterk afhankelijk celdichtheden en timing zijn. Daarom is het protocol hier beschreven beoogd deze variabiliteit om een hoge mate van reproduceerbaarheid te garanderen verminderen. Samengevat, de technieken toegepast in deze studies krachtige hulpmiddelen om de functies van eiwitten onderzocht tijdens de vroege stadia van de ontwikkelingscyclus van Dictyostelium discoideum en hebben het potentieel om up- identificeren en effectoren van coronin Een functie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
- Let op de vroege hongerdood reactie van Dictyostelium discoideum door time-lapse microscopie.
- Groeien DH1.10 cellen of corA deficiënte cellen in een conische kolf die HL-5 medium (voor 1 L: 5 g proteosepepton, 5 g thiotone E pepton, 10 g glucose, 5 g gistextract, 0,35 g Na 2 HPO 4 * 7H 2 O, 0,35 g KH 2PO 4, 0,05 g dihydrostreptomycine sulfaat, pH 6,6) bij 22 ° C in een schudincubator met een rotatie van 160 opm. Houd cellen met een dichtheid tussen 0,01 x 10 6 cellen / ml en 2 x 10 6 cellen / ml.
- Onderzoek cel aggregatie, door het oogsten log-fase groeiende DH1.10 cellen 21 of corA deficiënte cellen 10 gegenereerd in de DH1.10 achtergrond, geteeld in schudden cultuur met HL-5 medium bij 22 ° C. Hiervoor passende hoeveelheid cellen (meestal tussen 10 en 50 ml), centrifugeer gedurende 3 min bij 400 xg en was de cellen tweemaal BSS (10 mM NaCl, 10 mM KCl, 2,5 mM CaCl2, pH 6,5).
- Aantal cellen met een hemocytometer. Vervolgens plaat cellen bij een dichtheid van (5, 10, 20 of 40) x 10 4 cellen / cm2 in een 24-wells plaat. Laat ze hechten gedurende 1 uur bij 22 ° C in BSS.
- Visualiseer aggregatie door time-lapse microscopie, zoals beschreven voor 10, het nemen van beelden elke 135 sec. met een live cell imaging opgezet met 5x objectief en een elektronen vermenigvuldigen ladingsgekoppelde inrichting camera automatisch de juiste software (zie Materialen tabel).
- cAMP pulserende van Dictyostelium discoideum cellen tijdens de hongerdood.
- Onderzoekt het effect van extern aangelegde cAMP pulsen op de ontwikkeling van DH1.10 cellen 21 of DH1.10 corA deficiënte cellen 10, door het oogsten van cellen. Hiervoor passende hoeveelheid cellen (meestal tussen 10 en 50 ml), centrifugeer gedurende 3 min bij 400 x g en tweemaal wassen BSS.
- Count cellen met een hemocytometer en resuspendeer de cellen tot een dichtheid van 1 x 10 7 cellen / ml in BSS. Schud de cultures (160 rpm) bij 22 ° C gedurende 2 uur voordat pulsen. Voeg cAMP pulsen met behulp van een timer gestuurde peristaltische pomp. Programmeer de pomp op een 5 sec puls te leveren elke 6,5 min van 15 ul van 50 nM cAMP (uiteindelijke concentratie) over een periode van 5 uur.
- Aantal cellen met een hemocytometer. Vervolgens plaat de cellen bij een dichtheid van (5, 10, 20 of 40) x 10 4 cellen / cm2 in een 24-wells plaat. Laat zich te houden gedurende 1 uur in BSS.
- Visualiseren aggregatie na 16 uur bij 22 ° C met helderveld microscopie met een 5X doel.
- Inductie van Dictyostelium discoideum ontwikkeling door middel van blootstelling aan geconditioneerd medium.
- Bereid verse geconditioneerd medium zoals beschreven 22. Verzamel log-fase DH1.10 cellen 21 of DH1.10 corA deficiënte cellen 10, van het schudden cultgelen met HL-5 medium bij 22 ° C met een pipet, centrifugeer gedurende 3 min bij 400 xg en wassen cellen drie keer in PBM (0,02 M kaliumfosfaat, 10 pM CaCl2 en 1 mM MgCl2, pH 6,1).
- Aantal cellen met een hemocytometer, resuspendeer in deze PBM bij een dichtheid van 1 x 10 7 cellen / ml en schud gedurende 20 uur bij 110 rpm / 22 ° C.
- Verzamelen geconditioneerd medium na centrifugatie bij 400 xg gedurende 3 min en verhelderen door centrifugeren bij 8000 xg gedurende 15 min bij 4 ° C.
- Filter geconditioneerd medium door een 0,45 pm filter (zie Materialen Table) en verdun drievoudige in PBM.
- Aantal cellen met een hemocytometer en plaat bij een dichtheid van (5, 10, 20 of 40) x 10 4 cellen / cm2 in een 24-wells plaat. Laat ze hechten gedurende 1 uur bij 22 ° C.
- Uitwisseling supernatant van de cellen met de eerder bereide geconditioneerde medium.
- Visualiseer een aggregatieN a 16 uur door heldere-microscopie met behulp van een 5X doelstelling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Cellen deficiënt coronin A tonen een defect in de vroege ontwikkeling (figuur 2). Aangezien coronin A cellen niet in staat om multicellulaire aggregaten, die de eerste stap in de ontwikkelingscyclus van Dictyostelium discoideum vormen. Daarom coronin A lijkt een rol te spelen tijdens de vroege respons hongerdood en / of cAMP-signalering. Inderdaad is het ontbreken van meercellige aggregaatvorming in afwezigheid van coronin A gepaard met verlaagde cAMP signalering 10. De toepassing van exogene cAMP pulsen volledig herstelt het wildtype fenotype (Figuur 3). Dit impliceert dat coronin A, in plaats van direct betrokken bij cAMP signalering, functies stroomopwaarts van de cAMP cascade (Figuur 5). Dictyostelium wanneer cellen worden blootgesteld aan honger omstandigheden induceren zij de secretie van factoren vroege honger 22,23. Een van de beste characterized factoren die betrokken zijn bij het begin van de hongerdood reactie wordt geconditioneerd medium factor (CMF) 22. Op basis van onze resultaten veronderstelden we dat coronin A reguleert ofwel de afscheiding van deze vroege honger factoren of betrokken is bij de signaaltransductie veroorzaakt door deze factoren. Om te kunnen maken tussen deze twee effecten voerden we geconditioneerd medium experimenten. Wildtype of corA deficiënte cellen werden blootgesteld aan supernatanten van zowel uitgehongerde wildtype of corA deficiënte cellen 10 (Figuur 4). Deze supernatanten zijn krachtige initiatiefnemers van meercellige aggregaat vorming en bevatten dus factoren die stroomafwaarts ontwikkelingsstoornissen signaalroutes, met inbegrip van cAMP signalering initiëren. Onze resultaten tonen aan dat supernatant van corA deficiënte cellen was ook in staat om de ontwikkeling te induceren zoals bij supernatant van wildtype cellen (figuur 4) was. Dit impliceert dat corA -deficiënte cellen zijn in staat om te produceren en uitscheiden vroeg verhongering factoren op een vergelijkbaar niveau met hun wild-type controles. Echter Cora deficiënte cellen zijn niet in staat om te reageren op hun eigen supernatant noch op bovenstaande voorzien van wild-type cellen (figuur 4). Daarom lijkt coronin A te zijn betrokken bij signaleringsroutes geïnduceerd door vroege verhongering factoren, in plaats van hun expressie / uitscheiding 10 (figuur 5).
In het algemeen kunnen de signalen afgegeven door honger Dictyosteliumcellen cellen die de ontwikkelingscyclus induceren verder te onderzoeken, het aggregatie-assay onder ondergedompelde omstandigheden is een krachtige uitlezing. Cellen gezaaid bij hogere spontaan aggregaat door een overvloed aan alle benodigde signalen. Maar bij lagere dichtheden alleen de toevoeging van geconditioneerd medium zal cellulaire aggregatie induceren (figuur 4) 22,24
Figuur 1: Coronin eiwitten in zoogdieren en Dictyostelium discoideum coronin De familie wordt gekenmerkt door de aanwezigheid van N-terminale WD-repeat regio gevolgd door uniek domein en een C-eindstandig coiled coil gebied.. Terwijl zoogdieren express 7 coronin eiwitten (A), Dictyostelium discoideum bevat slechts twee familieleden (B), waardoor de kans op ontslag minder waarschijnlijk wanneer het bestuderen van de functie. Coronin A is de ortholoog van zoogdier coronin 1 en coronin B toont een soortgelijke domeinnaam structuur coronin 7. Afkortingen: CC, ook indien opgerold-coil domein; UD, unieke domeinnaam; WD herhaalt, tryptofaan -aspartate herhalingen. Lengte gegeven muizensequenties (A) aminozuren (aa). Gewijzigd ten opzichte van Pieters et al., 2013 12. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2:. CorA - Dictyostelium discoideum niet kunnen aggregeren tijdens de vroege respons hongerdood Wildtype (A) of corA deficiënte (B) Dictyostelium cellen werden gezaaid in platen met meerdere putjes bij een dichtheid van 2 x 10 5 cellen / cm 2, uitgehongerd in BSS, en afgebeeld gedurende 20 uur. Schaal bar = 100 micrometer..jpg "target =" _ blank "> Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Extern toegepast cAMP pulsen red de vroege ontwikkelingsdefect CORA - Dictyostelium discoideum Vegetatieve wild-type (A en B) en corA deficiënte cellen (C en D) werden gewassen en uitgehongerd gedurende 2 uur alvorens te worden gepulst met (B. en D) of zonder (A en C) 50 nM cAMP gedurende 5 uur met intervallen van 6,5 minuten in suspensie. Cellen werden vervolgens gewassen, opnieuw gesuspendeerd in BSS, en geplaatst op een petrischaal met een dichtheid van 10 x 10 4 cellen / cm2. Beelden werden genomen 20 uur na het enten van de cellen. Schaal bar = 100 urn. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4 Cora deficiënte Dictyosteliumcellen discoideum in staat zijn om alle vereiste factoren voor de ontwikkelingsbiologie inductie produceren, maar zijn niet in staat om te reageren op hen Exponentieel groeiende wild-type en corA deficiënte cellen werden gewassen in PBM en uitgezet in multiwell platen bij een dichtheid van (. 5, 10, 20 of 40) x 10 4 cellen / cm 2, geïncubeerd in geconditioneerd medium verkregen uit wild-type (A) of uitgehongerde corA deficiënte cellen (B). De beelden werden genomen 16 uur na het zaaien van de cellen. Schaal bar = 100 micrometer.tp_upload / 53972 / 53972fig4large.jpg "target =" _ blank "> Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 5:. De huidige model van Coronin Een functie in Dictyostelium discoideum Coronin A is betrokken bij de signaaltransductie van factor (en) afgescheiden tijdens de vroege hongerdood leidend tot de inductie van cAMP cascade en het doorlopen van de ontwikkelingscyclus. Gewijzigd ten opzichte van Vinet et al., 2014 10. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De coronin eiwitten worden gevonden in de meeste taxa van de eukaryote clade. Dictyostelium discoideum coronin A, het homoloog van zoogdier coronin 1, is betrokken bij de vroege hongerdood reactie, aangezien coronin A-deficiënte cellen zijn niet in staat om aggregatie maken samen tijdens de vroege ontwikkeling cyclus 10. In staat zijn om de vertraging in ontwikkeling tussen de stammen kwantitatief en nauwkeurig te beoordelen, een microscoop live cell imaging set-up met de geautomatiseerde podium controller is een essentieel instrument.
D. discoideum maakt gebruik van cAMP als een essentieel signaalmolecuul tijdens de verschillende fasen van de levenscyclus 1-4. Een van de checkpoints waarin cAMP nodig is de overgang van een enkele cel om de vorming van multicellulaire structuren. Het begin van cAMP golven na ~ 6 uur van honger wordt waargenomen door de cellen en geeft het chemotactische signaal gezet om tot een aggregatie centrum 5. deze cAMPgolven kunnen experimenteel worden nagebootst door pulseren honger D. discoideum cellen met cAMP elke 6,5 minuten over een periode van 5 uur 8,9. Deze procedure is het belangrijk om de cellen verhongeren tot 2h voordat de cAMP pulsen, om betrouwbare resultaten te verkrijgen. Gebruik van deze experimentele zetten we konden dat coronin A handelt bovenstrooms van cAMP-signalering tonen, aangezien deze extern aangelegde pulsen redde de ontwikkeling corA deficiënte cellen (figuur 3 en 5). Deze resultaten geven ook aan dat hoewel coronin A blijkt een essentiële rol speelt bij het waarnemen van de vroege respons hongerdood, is overbodig voor processen zoals chemotaxis en celaggregatie zodanig 10.
De aggregatietest zelf is een robuuste methode voor het bestuderen van de vroege ontwikkeling van Dictyostelium discoideum. Er zijn echter verschillende valkuilen dat de reproduceerbaarheid van deze e beïnvloedenxperiments, en daarom is het belangrijk dat een aantal factoren rekening worden gehouden: de leeftijd van de cellen speelt een belangrijke rol bij het analyseren corA deficiënte cellen. Deze cellen hebben de neiging om het fenotype en opnieuw samengevoegde compenseren ongeveer na 2 weken vanaf het moment ze ontdooid. De dichtheid van de cellen is een belangrijke factor en als cellen die een signalering gebrek en vertonen een chemotactische defect zou neigen te aggregeren bij hogere vanwege de verhoogde concentratie van vroege honger factoren. Het belang van de nauwkeurige telling en verdunning van cellen in deze testen kan niet worden overschat. Voor verschillende stammen, een aanpassing van meerdere variabelen van de test, zoals celdichtheden, tijdstip van hechting, ontwikkeltijd, is vereist. De aggregatie-assay zoals hier beschreven is een veelzijdige techniek die kan worden aangepast aan verschillende onderzoeken passen: de cellen worden uitgehongerd of ontwikkeling kan worden gestimuleerd of geremd met verschillende verbindingen, allevanwege een specifieke modulatie van aggregatie. De hier beschreven opstelling laat ook onpartijdige benaderingen stammen te identificeren met vroege ontwikkelingsstoornissen, en voor de identificatie van genen of factoren die belangrijk zijn voor de vroege ontwikkeling. Dit is ook de methode groot nadeel: het aggregatie-assay is een gereduceerde versie van de volledige ontwikkelingscyclus. Daarom is het niet geschikt voor de analyse van fenotypes beïnvloeden latere stadia van de ontwikkelingscyclus. Het belangrijkste voordeel is de mogelijkheid om de aggregatie-assay Een grondige en geautomatiseerde vorm aannemen: in 48-well platen met 16 hr ontwikkeling die tijdens geautomatiseerde beeldvorming, de aggregatietest blijkt meer tijd en hulpbronnen efficiënter dan ontwikkeling zijn ingeschakeld agarplaten.
In experimenten waarin we de vroege hongerdood reactie omzeild met behulp extern aangebrachte cAMP pulsen toonden we aan dat coronin A is betrokken bij de detectie van uitgescheiden factoren door <em> Dictyosteliumcellen cellen na de hongerdood. Het precieze mechanisme van coronin-A-gemedieerde signalering in het begin van de hongerdood reactie blijft onduidelijk. Verschillende factoren die betrokken zijn in deze fase van ontwikkeling zijn onderzocht, in het bijzonder geconditioneerd medium factor (CMF) 25,26. Echter, of CMF handelt op eigen of met co-factoren blijft onduidelijk en de signalerende cascade is slechts gedeeltelijk begrepen. Met behulp van de aggregatie capaciteit van Dictyosteliumcellen cellen onder ondergedompelde omstandigheden beschreven als een positief uitlezing voor ontwikkeling maakt het mogelijk om grootschalige screening experimenten in een tijd-efficiënte manier ten opzichte van aggregatie assays op agar oppervlak. Echter, aggregatie-assays onder ondergedompelde omstandigheden hebben het nadeel dat ze niet voldoen aan de volledige ontwikkelingscyclus als cellen worden aangehouden in de eerste fase aggregatie. Daarom is de hier beschreven techniek is niet geschikt voor het onderzoek van latere ontwikkeling processes. Samenvattend, kan de experimentele benadering hier gedocumenteerd verdere karakterisering van mogelijke vroege honger factor (en) die coronin A-afhankelijke binnenkomst in het begin van de hongerdood te induceren mogelijk te maken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| HL-5 media (for 1 L: 5 g proteose peptone, 5 g thiotone E peptone, 10 g glucose, 5 g yeast extract, 0.35 g Na2HPO4*2H2O, 0.35 g KH2PO4, 0.05 g dihydrostreptomycin-sulfate, pH 6.6) | |||
| Proteose peptone | BD Bioscience | 211693 | |
| Thiotone E peptone | BD Bioscience | 211684 | |
| Yeast extract | BD Bioscience | 212750 | |
| Glucose | AppliChem | A3666 | |
| Na2HPO4*2H2O | Fluka | 71643 | |
| KH2PO4 | AppliChem | A1043 | |
| dihydrostreptomycin-sulfate | Sigma-Aldrich | D1954000 | |
| PBM (0.02 M potassium phosphate, 10 μM CaCl2, and l mM MgCl2, pH 6.1) | self made | ||
| BSS (10 mM NaCl, 10 mM KCl, 2.5 mM CaCl2, pH 6.5) | self made | ||
| 0.45-μm Filtropure S filter | Sarstedt | 83.1826 | |
| Falcon 24-well Tissue culture plate | Fisher Scientific | 08-772-1H | |
| Cellobserver microscope | Zeiss | custom built | |
| AxioVision software | Zeiss | ||
| IPC Microprocessor–controlled dispensing pump | ISMATEC | ISM 931 | |
| Axiovert 135M microscope | Zeiss | 491237-0001-000 | |
| Incubation Shaker | Inforst HT Minitron |
References
- Weijer, C. J.
- Devreotes, P. Dictyostelium discoideum: a model system for cell-cell interactions in development. Science. 245, 1054-1058 (1989).
- Kimmel, A. R., Firtel, R. A. cAMP signal transduction pathways regulating development of Dictyostelium discoideum. Curr Opin Genet Dev. 1, 383-390 (1991).
- Clarke, M., Gomer, R. H. PSF and CMF, autocrine factors that regulate gene expression during growth and early development of Dictyostelium. Experientia. 51, 1124-1134 (1995).
- Robertson, A., Drage, D. J., Cohen, M. H. Control of Aggregation in Dictyostelium discoideum by an External Periodic Pulse of Cyclic Adenosine Monophosphate. Science. 175, 333-335 (1972).
- Konijn, T. M., Chang, Y. Y., Bonner, J. T. Synthesis of cyclic AMP in Dictyostelium discoideum and Polysphondylium pallidum. Nature. 224, 1211-1212 (1969).
- Iranfar, N., Fuller, D., Loomis, W. F. Genome-wide expression analyses of gene regulation during early development of Dictyostelium discoideum. Eukaryot Cell. 2, 664-670 (2003).
- Darmon, M., Brachet, P., Da Silva, L. H. Chemotactic signals induce cell differentiation in Dictyostelium discoideum. Proc Natl Acad Sci U S A. 72, 3163-3166 (1975).
- Mann, S. K., Firtel, R. A. Cyclic AMP regulation of early gene expression in Dictyostelium discoideum: mediation via the cell surface cyclic AMP receptor. Mol Cell Biol. 7, 458-469 (1987).
- Vinet, A. F., et al. Initiation of multicellular differentiation in Dictyostelium discoideum is regulated by coronin A. Mol Biol Cell. 25, 688-701 (2014).
- Eckert, C., Hammesfahr, B., Kollmar, M. A holistic phylogeny of the coronin gene family reveals an ancient origin of the tandem-coronin, defines a new subfamily, and predicts protein function. BMC Evol Biol. 11, 268 (2011).
- Pieters, J., Muller, P., Jayachandran, R. On guard: coronin proteins in innate and adaptive immunity. Nat Rev Immunol. 13, 510-518 (2013).
- Gatfield, J., Albrecht, I., Zanolari, B., Steinmetz, M. O., Pieters, J. Association of the Leukocyte Plasma Membrane with the Actin Cytoskeleton through Coiled Coil-mediated Trimeric Coronin 1 Molecules. Mol Biol Cell. 16, 2786-2798 (2005).
- Kammerer, R. A., et al. A conserved trimerization motif controls the topology of short coiled coils. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 13891-13896 (2005).
- Uetrecht, A. C., Bear, J. E.
- Jayachandran, R., et al. Coronin 1 Regulates Cognition and Behavior through Modulation of cAMP/Protein Kinase A Signaling. PLoS Biol. 12, e1001820 (2014).
- Suo, D., et al. Coronin-1 is a neurotrophin endosomal effector that is required for developmental competition for survival. Nat Neurosci. 17, 36-45 (2014).
- Mueller, P., et al. Regulation of T cell survival through coronin-1-mediated generation of inositol-1,4,5-trisphosphate and calcium mobilization after T cell receptor triggering. Nat Immunol. 9, 424-431 (2008).
- de Hostos, E. L., Bradtke, B., Lottspeich, F., Guggenheim, R., Gerisch, G. Coronin, an actin binding protein of Dictyostelium discoideum localized to cell surface projections, has sequence similarities to G protein beta subunits. EMBO J. 10, 4097-4104 (1991).
- Shina, M. C., et al. Redundant and unique roles of coronin proteins in Dictyostelium. Cell Mol Life Sci. 68, 303-313 (2011).
- Cornillon, S., et al. Phg1p is a nine-transmembrane protein superfamily member involved in dictyostelium adhesion and phagocytosis. J Biol Chem. 275, 34287-34292 (2000).
- Gomer, R. H., Yuen, I. S., Firtel, R. A. A secreted 80 x 10(3) Mr protein mediates sensing of cell density and the onset of development in Dictyostelium. Development. (112), 269-278 (1991).
- Iijima, N., Takagi, T., Maeda, Y. A proteinous factor mediating intercellular communication during the transition of Dictyostelium cells from growth to differentiation. Zoological science. 12, 61-69 (1995).
- Mehdy, M. C., Firtel, R. A. A secreted factor and cyclic AMP jointly regulate cell-type-specific gene expression in Dictyostelium discoideum. Mol Cell Biol. 5, 705-713 (1985).
- Jain, R., Yuen, I. S., Taphouse, C. R., Gomer, R. H. A density-sensing factor controls development in Dictyostelium. Genes Dev. 6, 390-400 (1992).
- Loomis, W. F. Cell signaling during development of Dictyostelium. Dev Biol. 391, 1-16 (2014).
