Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

المستمر الرابع التسريب هو معاملة طريق خيار لارجينين فاسوبريسين-مستقبلات مانع Conivaptan في الفئران لدراسة أثار السكتة الدماغية الدماغ وذمة

doi: 10.3791/54170 Published: September 1, 2016

Abstract

السكتة الدماغية هي واحدة من الأسباب الرئيسية للمراضة والوفيات في العالم. معقد السكتة الدماغية عن طريق ذمة الدماغ والأحداث المرضية الأخرى. ومن بين أهم اللاعبين في تنمية وتطور، أثار السكتة الدماغية وذمة الدماغ هو هرمون أرجينين فاسوبريسين ومستقبلاته، V1A وV2. في الآونة الأخيرة، وV1A وV2 مستقبلات مانع conivaptan تم جذب الانتباه كدواء المحتملة للحد من وذمة الدماغ بعد السكتة الدماغية. ومع ذلك، النماذج الحيوانية التي تتضمن تطبيقات conivaptan في مجال البحوث السكتة الدماغية تحتاج إلى تعديل استنادا على الطرق الممكنة للإدارة. هنا تتم مقارنة النتائج من 48 ساعة عن طريق الحقن الوريدي المستمر (الرابع) مع العلاجات داخل الصفاق (IP) conivaptan بعد السكتة الدماغية التجريبية في الفئران. قمنا بتطوير بروتوكول الذي تم الجمع بين انسداد الشريان الدماغي الأوسط مع تركيب قسطرة في الوريد الوداجي لتلقي العلاج الرابع من conivaptan (0.2 ملغم) أو مركبة. وعولج أفواج مختلفة من الحيوانات مع 0.2البلعة ملغ من conivaptan أو مركبة IP يوميا. تم تقييم التجريبية-أثار السكتة الدماغية وذمة الدماغ لدى الفئران بعد الرابع المستمر والعلاجات الملكية الفكرية. كشفت المقارنة بين النتائج إلى أن الإدارة الرابع مستمرة من conivaptan يخفف ذمة الدماغ بعد الدماغية لدى الفئران، على عكس إدارة الملكية الفكرية من conivaptan. نخلص إلى أن نموذجنا يمكن أن تستخدم في الدراسات المستقبلية من التطبيقات conivaptan في سياق السكتة الدماغية وذمة الدماغ.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

أجريت التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة للرعاية واستخدام الحيوانات في البحوث وتمت الموافقة من قبل لجنة رعاية الحيوان واستخدام المركز الطبي السويدي. تم تنفيذ كافة الإجراءات مع تقنيات التعقيم المناسبة. كانت حيوانات التجارب التي استخدمت في الدراسة من الذكور و 3 أشهر من العمر، النوع البري C57 الفئران مع وزن الجسم من 25 إلى 27 غرام.

1. في فيفو السكتة الدماغية التعريفي

  1. قبل معطف الشعيرة مع الراتنج الأسنان قبل الجراحة.
    1. قطع قطعة طويلة 12 ملم خيوط من خياطة 7-0 النايلون. مزيج 2 أجزاء من الراتنج مع 1 جزء من تصليب، ثم تراجع فورا غيض من خيوط إلى الخليط لتغطية حوالي 1/3 من طول. إزالته بسرعة وتحقق من أن يتم تغطيتها بطبقة السطح على نحو سلس من الراتنج الأسنان.
    2. الهواء الجاف خيوط لمدة 2 ساعة قبل الاستخدام.
  2. ضع الماوس إلىن غرفة التخدير تحريض (2 حجم L)، ومجموعة تدفق 1.5٪ الأيزوفلورين في 25٪ هواء الغرفة التخصيب الأوكسجين في 2 لتر / دقيقة الخوض في الغرفة.
  3. السماح للماوس على البقاء في غرفة الاستقراء حتى تخدير كامل و 8 على النحو الذي يحدده عدم الاستجابة لقرصة الذيل.
  4. ضع الماوس على طاولة العمليات مع وسادة ساخنة، وتعيين تركيز الأيزوفلورين على 1٪ للصيانة من التخدير تسليمها بشكل عفوي من خلال مخروط الأنف.
  5. مقطع الشعر على الجبهة والجزء الخلفي من الرقبة، ورذاذ الرقبة مع فرك الكحول. تطبيق مرهم البيطرية في كلتا العينين.
  6. لمراقبة بشكل مستمر درجة حرارة الجسم، واستخدام مسبار درجة حرارة المستقيم مرتبطة إلى العرض الرقمي خلال عملية جراحية.
  7. ضع الماوس في موقف ضعيف، وتطبيق بوفيدون اليود 10٪ من محلول تنظيف للتطهير، وتغطي مع ثنى العقيمة، ومن ثم إجراء شق خط الوسط على طول العنق مع حجم 10 الجراحية شفرة المشرط.
  8. <لى> مؤقتا ligate اليسار الشريان السباتي المشترك (CCA) مع خياطة 6.0 الحرير.
  9. وضع آخر التعادل على اليسار الشريان السباتي الخارجي (ECA).
  10. وضع مقطع الاوعية الدموية الدقيقة على الشريان السباتي الداخلي (ICA).
  11. قطع ثقب صغير في الشريان السباتي الخارجي مع مقص الاوعية الدموية الدقيقة. اضافة الى وجود خيوط مصنوعة 7-0 خياطة النايلون المغلفة مع الراتنج الأسنان في فتح في اللجنة الاقتصادية لأفريقيا، ودفع ذلك cephalically، في حين إزالة مقطع، حتى يشعر المقاومة (حوالي 5-7 ملم من نقطة التشعب من CCA).
  12. وضع التعادل مؤقت على الشريان السباتي الداخلي لتأمين خيوط في الموقف. الرجوع إلى الرسم البياني، الشكل 1A. إغلاق الجلد مع خياطة الحرير، والتسلل الجرح على الجزء الأمامي من الرقبة مع 0.2 مل من 0.5٪ بوبيفكين، كما في الخطوة 2.6.
  13. السماح الماوس لتوقظ من التخدير واستعادة وعيه في غرفة الإنعاش لمدة 60 دقيقة. لا تترك الحيوان غير المراقب حتى استعادتهاالوعي الكافي للحفاظ على رقود القصية.
  14. اختبار الماوس لالعصبية العجز التهديف (NDS) على النحو التالي: 0 وظيفة = العادية المحرك، 1 = ثني الجذع وforelimb المقابل على رفع المؤخرة، 2 = تدور على الجانب المقابل ولكن الموقف الطبيعي في بقية، 3 = يميل إلى المقابل الجانب في بقية، 4 = لا النشاط الحركي العفوي. 4،9
    1. لاختبار NDS، ورفع الماوس من ذيله ومكان على سطح مستو للمراقبة (2-3 دقائق). بدلا من ذلك، نلاحظ الفئران في غرفة الإنعاش. استبعاد الفئران التي تظهر NDS أقل من 2 من التجربة بسبب انسداد كافية من مولودية الجزائر.
      ملاحظة: ليزر دوبلر flowmetry تقنية يمكن استخدامها لتأكيد MCA انسداد 9-11.
  15. إعادة تخدير الحيوان بعد 60 دقيقة من الانتعاش في غرفة الاستقراء كما هو موضح أعلاه، إعادة تعقيم شق الجلد السابقة مع 10٪ بوفيدون اليود حل فرك، وإعادة فتح الجروح علىأمام العنق عن طريق القص وإزالة خياطة الحرير.
  16. لإزالة خيوط من اللجنة الاقتصادية لأفريقيا بتنفيذ الخطوات التالية:
    1. وضع مقطع الاوعية الدموية الدقيقة على ICA. فك خياطة على ICA وسحب خيوط من حين عقد كليب مفتوحة.
    2. إغلاق مقطع ووضع ربطة عنق على اللجنة الاقتصادية لأفريقيا بشكل قريب إلى قطع.
    3. إزالة مقطع وإزالة ربطة من التقييم القطري المشترك لاستعادة تدفق الدم الى المخ. الرجوع إلى الرسم البياني، 1B الشكل.

2. تركيب رابعا قسطرة في الوريد الوداجي الوريد لعلاج مستمر 48 ساعة

ملاحظة: انتقل إلى تركيب القسطرة مباشرة بعد الخطوة 1.16.3 دون صحوة الماوس.

  1. استخدام اثنين من أحجام مختلفة من أنابيب مرنة: إدراج أنابيب الداخلي (0.94 ملم خارج القطر، لاحتواء المخدرات التي غرست) في أنابيب الخارجي (3.18 ملم خارج القطر، لحماية الأنبوب الداخلي).
  2. Pالحذاء الماوس في وضعية الانبطاح، وتطبيق 10٪ بوفيدون اليود حل فرك لتطهير، وجعل شق 1 سم في الجزء الخلفي من الرقبة مع حجم 10 الجراحية شفرة المشرط. بدوره الماوس في موقف ضعيف، وإعادة تعقيم الأمامي من الرقبة مع 10٪ بوفيدون اليود حل فرك، وإعادة فتح الجروح في الجزء الأمامي من الرقبة. نفق أنابيب تحت الجلد من شق على العودة إلى الجزء الأمامي من الرقبة، والداخل للظاهر أنه من جرح مفتوح 1 سم.
  3. إزالة الأنسجة الدهنية تحت الجلد من الجانب الأيسر للجزء الأمامي من الرقبة حوالي 1 سم أفقيا من خط الوسط. تحديد موقع حبل الوريد اليسار، وضع اثنين من العلاقات على طول الوريد 5 مم وبصرف النظر، وتمتد قليلا الوريد. جعل ثقب صغير في الوريد الوداجي بين العلاقات مع اثنين من مقص الاوعية الدموية الدقيقة. إدراج غيض من داخل الأنبوب 5 مم caudally العميق (نحو القلب).
  4. تأمين أنابيب مع كل العلاقات إلى الوريد الوداجي. إغلاق الجلد في الجزء الأمامي من الرقبة معخياطة 3-0 الحرير. الرجوع إلى الرسم البياني، الشكل 1C.
  5. تأمين أنابيب إلى الجلد في الجزء الخلفي من الرقبة مع خياطة، وتوصيل أنابيب إلى مضخة microinfusion الرابع من خلال قطب. يسمح للقطب حرية حركة الفئران داخل القفص مع الوصول الكامل إلى الغذاء والماء.
  6. اختراق شقوق الجلد على الجبهة والجزء الخلفي من الرقبة مع 0.2 مل من 0.5٪ بوبيفكين لمنع الألم بعد العمليات الجراحية.
    ملاحظة: اعتمادا على بروتوكولات الحيوان محددة المؤسسية، يمكن علاج الحيوانات مع المواد الأفيونية، مضادات الالتهاب غير الستيروئيدية، أو المضادات الحيوية قبل وبعد العملية. ومع ذلك، والعلاجات المذكورة قد يغير نتائج نتيجة السكتة الدماغية (انظر القسم مناقشة) 11-14
  7. السماح للحيوان لتوقظ في غرفة الإنعاش، ثم إيواء الحيوانات في قفص منفصل حتى نقطة نهاية التجربة. لا تترك الحيوان غير المراقب حتى استعاد وعيه كافية للحفاظ على القصيةرقود.
  8. تعيين معدل التسريب لالمستمرة 48 ساعة العلاج الرابع من conivaptan (0.14 ملغ / مل في 5٪ سكر العنب) أو مركبة في 1.5 مل / كغ / ساعة، 4 وبدء ضخ.
    ملاحظة: المبلغ الإجمالي من الرابع conivaptan غرست يجب أن يكون حوالي 0.2 ملغ / الماوس / يوم في إجمالي حجم 1.44 مل.
    ملاحظة: إجراء داخل الصفاق (IP) حقن conivaptan مرتين يوميا مع المبلغ الإجمالي من 0.2 ملغ في 1.44 مل من 5٪ سكر العنب. تنفيذ وصفت حقن IP كما في السابق. 15 كبح الفئران التي تجتاح الجلد من السطح الخلفي من الجسم والذيل. حقن conivaptan أو مركبة في الربع السفلي الأيسر من البطن باستخدام 26 G / 1/2 بوصة إبرة 15
  9. مراقبة الحيوانات مرتين في اليوم لكامل مدة التجربة (48 ساعة). السماح للحيوانات لديها حق الوصول الكامل إلى الغذاء والماء. إذا يسلك الحيوان علامات الضيق أو ضيق التنفس استشارة الطبيب البيطري. إذا الرحيم ضروري للحيوان في حي شديدريس الرجوع إلى الخطوة 3.1 أدناه، واستبعاد الحيوان من الدراسة.

3. تقييم، أثار السكتة الدماغية الدماغ وذمة في نقطة النهاية

  1. التضحية الماوس عن طريق الإفراط في التخدير مع 5٪ الأيزوفلورين.
  2. استخدام مشرط لجعل شق الجلد فوق عظم الجمجمة على طول خط الوسط، وسحب الجلد لفضح الجمجمة كلها على الدماغ. ابتداء من الثقبة العظمى، وقطع عظم الجمجمة أفقيا على طول محيط الدماغ على كل جانب، ورفع بعناية دون لمس الدماغ تحتها. قطع الدماغ من العمود الفقري والأعصاب تعلق على قاعدة الجمجمة.
  3. إزالة الدماغ، فصلها عن البصلة الشمية والمخيخ، وتشريح المخ على طول الشق بين نصفي المخ في نصفي الكرة المخية الدماغية وغير الدماغية، كما هو موضح سابقا. 9
  4. تقييم ذمة الدماغ بمقارنة الرطب إلى الجاف نسب (WDR) كما هو موضح سابقا 4،9. وزن الأنسجةقبل وبعد التجفيف لمدة 3 أيام في 100 درجة مئوية في الفرن. حساب محتوى الماء في الدماغ (اتفاقية الأسلحة البيولوجية) كنسبة مئوية H 2 O = (وزن 1 الجافة. / بالوزن الرطب) × 100٪.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

وكانت درجة حرارة الجسم من الحيوانات ضمن نطاق الفسيولوجية ومستقرة طوال العملية الجراحية الحث السكتة الدماغية. اثنين من الفئران التي عرضت NDS أقل من 2 مباشرة بعد استبعدت MCAO من الدراسة.

MCAO في الفئران تنتج حجم احتشاء في نصف الكرة المماثل في 48 ساعة. تقييم شرائح الملطخة عقاري تشير إلى أن حوالي 50٪ من نصف الكرة يتأثر احتشاء بعد MCAO (1D الشكل)، والتي نشرتها زينالوف، E. ودوري، S.، 2009. (10) بداية من الدماغ السكتة الدماغية يسبب شديد الحرمان من أنسجة المخ في الأوكسجين والمواد المغذية. ونتيجة لهذا نقص الأكسجة أنسجة المخ المحلي، الخلايا العصبية والخلايا الدبقية تموت، والتي تشكل جزءا محتشية من الدماغ. ويبين الشكل 1D شرائح دماغ الفأر التمثيلي تتأثر احتشاء الناجم MCAO، ويعطي تقدير حجم الاصابة.

وكشف تقييم محتوى الماء في الدماغ (اتفاقية الأسلحة البيولوجية) في 48 ساعة بعد 60 دقيقة MCAO تحريض أن conivaptan تدار الرابع (0.2 ملغ / يوم) يقلل بشكل ملحوظ وذمة الدماغ في كل من نصفي الكرة الأرضية المماثل والمقابل، (الشكل 2A). في المقابل، IP-علاج conivaptan بنسبة 0.2 ملغ البلعة فشلت يوميا لإنتاج آثار إيجابية مماثلة على أثار السكتة الدماغية وذمة الدماغ (الشكل 2B).

وقد تحقق تأكيدا لتأثير conivaptan في البلازما والبول الأسمولية في جميع حيوانات التجارب عند نقطة نهاية التجربة. تعامل Conivaptan الرابع أو زيادة IP البلازما وانخفضت البول الأسمولية في كل الفئران 4 القيم الأسمولية البلازما في الفئران كانت على النحو التالي: 313 ± 4.4 ملي أوزمول / كغ (مركبة، والرابع) مقابل 355 ± 7.5 * الميلي أسمول / كغ (conivaptan والرابع) ، كما نشرت سابقا و 4 و 340 ± 7.7 ملي أوزمول / كغ (مركبة، IP) مقابل383 ± 8.8 * الميلي أسمول / كغ (conivaptan، IP). وكانت القيم الأسمولية البول في الفئران كما يلي: 1210.6 ± 13.4 ملي أوزمول / كغ (مركبة، والرابع) مقابل 595.0 ± 57.4 * الميلي أسمول / كغ (conivaptan والرابع)، كما نشرت سابقا و 4 و 1535.0 ± 80.9 ملي أوزمول / كغ (مركبة، IP) مقابل 242.0 ± 23.2 * الميلي أسمول / كغ (conivaptan، IP). جميع البيانات المقدمة كما يعني ± SEM، * ص ≤0.05 مقابل السيطرة المقابلة.

شكل 1
الشكل 1: رسم تخطيطي لنموذج تجريبي السكتة الدماغية، وتركيب القسطرة الرابع، وحجم احتشاء التمثيلي في 48 ساعة بعد السكتة الدماغية موقف خيوط (كما هو موضح باللون الأزرق) قبل المغلفة مع الراتنج (الأخضر) في الشريان السباتي الداخلي الأيسر (ICA) خلال الانسداد (A) والوقت ضخه (B). الموقف الصحيح من طرف أنابيب مرنة في الوريد الوداجي الأيسر (C). Experimentaل السكتة الدماغية لدى الفئران تنتج حجم احتشاء في نصف الكرة المماثل في 48 ساعة. تمت التضحية الفئران في 48 ساعة بعد MCAO، وأزيلت العقول، وكما هو موضح في البروتوكول (الخطوات 3،1-3،3). قطعت العقول في أقسام سميكة 2 مم، وملطخة TTC (D). تم تعديل الرقم 1D من المادة الأصلية التي زينالوف، E. ودوري، S.، 2009. 10 الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2
الشكل 2: آثار الوريد المستمر (IV) وداخل الصفاق (IP) conivaptan (0.2 ملغ / يوم) العلاجات على أثار السكتة الدماغية وذمة الدماغ كانت تدار Conivaptan العلاج الرابع لمدة 48 ساعة. العلاج Conivaptan تدار الرابع انخفاض وذمة الدماغ بعد الدماغية في ساعة المماثل والمقابلemisphere (A). لقد تم تعديل الشكل 2A من المادة الأصلية التي زينالوف وآخرون، فشلت 2015. العلاج 4 Conivaptan IP لمدة 48 ساعة للحد من وذمة الدماغ الناجم عن السكتة الدماغية التجريبية، ن = 10 في كل مجموعة. خضع الفئران MCAO مع ضخه كما هو موضح في البروتوكول أعلاه (خطوات 1.1.1-1.15.3). ثم كانت تدار الحقن IP من conivaptan (0.2 ملغم) على الفور، في 22 ساعة و 46 ساعة من ضخه. تم التضحية الفئران. أزيلت العقول وتجفيفها في الفرن، كما هو موضح في البروتوكول (الخطوات 3،1-3،4). (ب) يتم تقديم جميع البيانات كما يعني ± SEM، * ف <0.05 مقابل السيطرة المقابلة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

هذه الدراسة لها قيمة هامة لأبحاث السكتة الدماغية قبل السريرية. وتكشف هذه الدراسة أن استمرار ضخ الرابع من conivaptan (0.2 ملغ / يوم) بعد السكتة الدماغية التجريبية في الفئران يقلل كفاءة الدماغ وذمة بعد 48 ساعة من العلاج. تم أيضا دراسة تأثير الحقن IP من نفس الجرعة من conivaptan على ذمة الدماغ. العلاج Conivaptan من قبل كل من الرابع والملكية الفكرية طرق تنتج aquaresis في الفئران كما هو مشار إليه عن طريق: 1) زيادة في الأسمولية البلازما أعلى قليلا من المستويات الفسيولوجية. و2) انخفاض في الأسمولية البول بسبب انسداد استيعاب المياه في الكلى. لذلك، استنادا إلى نتائج العلاج، ونحن التقرير أن طريقة التسليم الرابع له آثار مفيدة إضافية هامة على تشكيل ذمة-أثار السكتة الدماغية.

لدينا النتيجة الرئيسية هي أن العلاج الرابع أنتجت أفضل تأثير على التخفيف من حدة ذمة الدماغ من الطريق IP لconivaptan. Conivaptan هو المشترك V1A وV2 مستقبلات، وهي متاحة للاستخدام السريري لمجلس النوابنقص صوديوم الدم مصحح، وحجم الدم والأسمولية. وقد تبين 16 Conivaptan لتصحيح نقص صوديوم الدم في المرضى الذين يعانون من ظروف مختلفة. 17 توافر السريرية conivaptan تشير إلى أن التنقيب في سياق ذمة الدماغ يمكن أن يؤدي إلى سرعة ترجمة مقاعد البدلاء إلى السرير. وقد ثبت استخدام التجريبية انتقائية حاصرات مستقبلات V1A تسليمها intracerebroventricularly للحد من تشكيل وذمة الدماغ بعد الدماغية وصفها من قبل باحثين آخرين. 3،18 ومع ذلك، لا دواء يستخدم في هذه الدراسات ولا طريق لعلاج المخدرات تشير الممكن التطبيق السريري في المستقبل القريب.

الآليات التي تروية الدماغ وAVP ذمة قضية الدماغ معقدة. ومع ذلك، بعض اللاعبين الجزيئي المهم والصوديوم وكلوريد شارك في النقل 19،20 ومستقبلات V1A التي تكون مترجمة في جدران الأوعية الدموية في واجهة BBB. وV2 منع تأثير conivaptan هو المسؤول عن إفراز excesالصورة الماء عن طريق الكلى وارتفاع الأسمولية في الدم، والتي قد تساعد أيضا في منع تطوير وذمة الدماغ. 21 هذه الآليات قد يكون لا يزال في اللعب عندما يتم تسليم conivaptan مباشرة إلى الدورة الدموية لتجنب الحواجز الأنسجة التي قد تقلل من توافر conivaptan. ومع ذلك، استند تبرير الجرعة ومدة العلاج على الملاحظات التي تم نشرها مسبقا. 4 ويبقى أن يحدد ما إذا conivaptan يصل الموقع نقص تروية الدماغ بعد انخفاض الاصابة التي يسببها تدفق الدم الإقليمي. ويحتاج أيضا إلى أن التحقيق ما إذا كان الدماغ يتلقى كمية كافية من conivaptan لإنتاج الآثار المحلية المرغوبة، مثل الوقاية من تضيق الأوعية من خلال منع مستقبلات V1A في الشرايين الدماغية.

تم تصميم بروتوكول تجريبي لمعالجة مسألة اختيار للمسار علاج conivaptan. وبناء على هذه النتائج، تقدم الدراسة دعما قويا للمسار الرابع من إعلان conivaptanإسعاف. ومع ذلك، هناك حاجة الخطوات الأكثر أهمية في البروتوكول المزمع إنشاؤها وضبطها غرامة من أجل الكشف عن اختلافات كبيرة في نتائج العلاج بعد السكتة الدماغية لدى الفئران. ومن بين تلك الخطوات هي: 1) مدة MCAO (60 دقيقة). 2) الجرعة اليومية (0.2 ملغ)، ومعدل ضخ (1.5 مل / كغ / ساعة)؛ و3) مدة العلاج (48 ساعة). مدة MCAO تحدد درجة الإهانة الدماغية وهو أمر حاسم للغاية لأنه لا رجعة فيه الأضرار أنسجة المخ البروتوكول. شديدة جدا من اصابة شأنه أن يجعل من الصعب على الحيوانات من أجل البقاء لمدة 48 ساعة، أو الحيوانات يمكن أن تصبح أقل استجابة للعلاج conivaptan ضد ذمة الدماغ. من ناحية أخرى، ومدة MCAO قد تكون أقل من 60 دقيقة كافية للحث على اهانة الدماغية في الماوس، وبالتالي، لن تنتج ذمة الدماغ. الجرعة ومدة العلاج كان اختيار بناء على توصيات ادارة الاغذية والعقاقير للاستخدام conivaptan. 16 ومع ذلك، فقد ذكر أنوكانت الجرعة الإنسان لconivaptan يست فعالة في الفئران للحد من وذمة الدماغ بعد السكتة الدماغية. لذلك، كانت الجرعة إلى أن زيادة 10 مرات عن الفئران التي يسببها حماية كبيرة ضد ذمة الدماغ بعد الدماغية. (4) أهمية اختيار معدل ضخ الصحيح هو أنه يمكن أن يؤثر على إجمالي حجم الدم وضغط الدم وتراكم السائل الخلالي إذا معدل يفوق كثيرا معدل المقترحة. ومع ذلك، فإن قياسات مجموع حجم الدم وضغط الدم يكون مفيدة للغاية.

الحث الجراحي للMCAO هو إجراء الغازية، ويتطلب الاهتمام الدقيق لجميع الخطوات من البروتوكول، وأنه من المهم أن نعرف النصائح حل لمشاكل تقنية. بعض المضاعفات الجراحية غير متوقعة، مثل النزيف الشرياني المفرط بسبب الشريان الذي مزقته قصد الحد من نسبة النجاح للتجربة وزيادة معدل الوفيات. ومع ذلك، والنزيف الوريدي يمكن وقفها عن طريق الضغط الخفيف ثإيث اسفنجة العقيمة.

يصف هذا البروتوكول تحريض من جانب واحد نقص التروية الدماغية، مما يعني أن يتم إنتاج انسداد MCA إما على اليمين أو اليسار MCA. ومع ذلك، فإن البروتوكول يمكن تعديلها حسب الجانب المفضل الجراح من MCA انسداد وتركيب القسطرة رابعا الشكل 1 رسم بياني يصور الرسم من الأجزاء الأكثر أهمية من إجراء MCAO، الشكل 1A و وبروتوكول تركيب القسطرة رابعا، الشكل 1C، وشرائح تمثيلية الدماغ من احتشاء الدماغ الناجم عن MCAO-في-نقطة نهاية التجربة (48 ساعة)، كما نشرت سابقا، 10 1D الشكل. على الرغم من أن الرسم البياني وشرائح الدماغ تمثيلية يعني أن MCAO كان المستحث على الجانب الأيسر من الدماغ، فإننا لا نتوقع الاختلافات الكبيرة في النتائج إذا كان المستحث MCAO على الجانب الأيمن من الدماغ طالما الاتساق في جميع أنحاء أونيتم الاحتفاظ دراسة الإطارات.

وخلال فترة النقاهة بعد الجراحة والتخدير، قد الحيوانات تعاني ضائقة بسبب الألم بعد العمليات الجراحية والعجز عصبية حادة. في كثير من الحالات، وإدارة الألم بعد الجراحة قد تكون محدودة لاستخدام التخدير الموضعي فقط مثل 0.5٪ بوبيفكين. السكتة الدماغية بسبب الحوادث الدماغية الوعائية في البشر وكذلك السكتة الدماغية التجريبية في الفئران وتتضمن العوامل المرضية مثل التهاب، احتشاء الدماغ، وذمة الدماغ. 9 وتعمل هذه الأحداث الفيزيولوجية المرضية من قبل اللاعبين الجزيئي الرئيسيين مثل cyclooxygenases (كوكس) 13 و G-البروتين ذات الصلة مستقبلات. قد يكون سبب 22 التدخل في المسارات الجزيئية التي تنطوي كوكس بواسطة الأدوية الأدوية المضادة للالتهاب، 13 إذا كانت تستخدم في هذه الإعدادات. المواد الأفيونية تعمل على المستقبلات التي ترتبط G-البروتين والثانية الرسل 12 ويمكن أن يغير النتائج المرضية في جسم المريض من السكتة الدماغية و 11 و النتيجةالصورة من هذه الدراسة. هذه العوامل تحد من استخدام دواء مسكن للألم في الفئران بعد العمل الجراحي.

وباختصار، يستكشف دراستنا إمكانية تطويعها لأغراض أخرى conivaptan كهدف بعيد. وقد تبين لدينا نموذج حيواني من تحريض السكتة الدماغية التجريبية يتبعها تسريب الرابع المستمر للconivaptan لتحقيق نتائج متسقة التي تشير إلى إمكانية استخدام في مرضى السكتة الدماغية. وبشكل أكثر تحديدا، لقد أثبتنا أن هذا النموذج من العلاج الرابع مستمرة من conivaptan بعد السكتة الدماغية لمنع إصابات الدماغ الثانوية يمكن استخدامها لدراسة ما قبل السريرية في الفئران. وكان الغرض من هذه الدراسة إلى تقديم طلب بديل العلاج conivaptan كأداة إضافية لدراسة وذمة الدماغ لدى الفئران بعد السكتة الدماغية بسبب الترجمة السريعة إلى إعدادات السريرية قد تساعد على إنقاذ حياة المرضى وحدة العناية المركزة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Acknowledgments

نشكر المركز الطبي السويدي لتوفير التمويل والتسهيلات. كما نشكر مستشفى كريغ لاستخدام السخي من مساحة المختبرات.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Heated Pad K&H Manufacturing Inc 1060
Temperature Monitor with Rectal Probe Physitemp 7029
Silk Suture Spool, 6-0 Surgical Specialties Corporation SP114
Silk Suture on a Needle, 3-0 Ethicon 1684G
Nylon Suture, 7-0 Ethicon 1696G
Dental Resin Polysiloxane with Hardener Heraeus Kulzer 65817930
Microinfusion IV Pump Kent Scietific GT0897
Swivel 22GA Instech 375/22PS
Laboratory Tubing, 0.94 mm x 0.51 mm Dow Corning 508-002
Laboratory Tubing, 3.18 mm x 1.98 mm Dow Corning 508-009

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Gueniau, C., Oberlander, C. The kappa opioid agonist niravoline decreases brain edema in the mouse middle cerebral artery occlusion model of stroke. J Pharmacol Exp Ther. 282, 1-6 (1997).
  2. Krafft, P. R., et al. Etiology of stroke and choice of models. Int J Stroke. 7, 398-406 (2012).
  3. Vakili, A., Kataoka, H., Plesnila, N. Role of arginine vasopressin V1 and V2 receptors for brain damage after transient focal cerebral ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 25, 1012-1019 (2005).
  4. Zeynalov, E., Jones, S. M., Seo, J. W., Snell, L. D., Elliott, J. P. Arginine-Vasopressin Receptor Blocker Conivaptan Reduces Brain Edema and Blood-Brain Barrier Disruption after Experimental Stroke in Mice. PloS one. 10, e0136121 (2015).
  5. Med Lett Drugs Ther.. Conivaptan (Vaprisol) for hyponatremia. The Medical letter on drugs and therapeutics. 48, 51-52 (2006).
  6. Zhao, X. Y., et al. Effect of arginine vasopressin on the cortex edema in the ischemic stroke of Mongolian gerbils. Neuropeptides. 51, 55-62 (2015).
  7. Manaenko, A., Chen, H., Kammer, J., Zhang, J. H., Tang, J. Comparison Evans Blue injection routes: Intravenous versus intraperitoneal, for measurement of blood-brain barrier in a mice hemorrhage model. J Neurosci Methods. 195, 206-210 (2011).
  8. Adams, S., Pacharinsak, C. Mouse anesthesia and analgesia. Curr Protoc Mouse Biol. 5, 51-63 (2015).
  9. Zeynalov, E., et al. The perivascular pool of aquaporin-4 mediates the effect of osmotherapy in postischemic cerebral edema. Crit Care Med. 36, 2634-2640 (2008).
  10. Zeynalov, E., Dore, S. Low doses of carbon monoxide protect against experimental focal brain ischemia. Neurotox Res. 15, 133-137 (2009).
  11. Zeynalov, E., Nemoto, M., Hurn, P. D., Koehler, R. C., Bhardwaj, A. Neuroprotective effect of selective kappa opioid receptor agonist is gender specific and linked to reduced neuronal nitric oxide. J Cereb Blood Flow Metab. 26, 414-420 (2006).
  12. Ma, M. C., Qian, H., Ghassemi, F., Zhao, P., Xia, Y. Oxygen-sensitive {delta}-opioid receptor-regulated survival and death signals: novel insights into neuronal preconditioning and protection. J Biol Chem. 280, 16208-16218 (2005).
  13. Ahmad, M., Zhang, Y., Liu, H., Rose, M. E., Graham, S. H. Prolonged opportunity for neuroprotection in experimental stroke with selective blockade of cyclooxygenase-2 activity. Brain Res. 1279, 168-173 (2009).
  14. Meisel, C., et al. Preventive antibacterial treatment improves the general medical and neurological outcome in a mouse model of stroke. Stroke. 35, 2-6 (2004).
  15. Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. Intraperitoneal injection of mice. Appl Microbiol. 17, 250-251 (1969).
  16. Adis International Limited. Conivaptan: YM 087. Drugs in R&D. 5, 94-97 (2004).
  17. Murphy, T., Dhar, R., Diringer, M. Conivaptan bolus dosing for the correction of hyponatremia in the neurointensive care unit. Neurocrit Care. 11, 14-19 (2009).
  18. Liu, X., Nakayama, S., Amiry-Moghaddam, M., Ottersen, O. P., Bhardwaj, A. Arginine-vasopressin V1 but not V2 receptor antagonism modulates infarct volume, brain water content, and aquaporin-4 expression following experimental stroke. Neurocrit Care. 12, 124-131 (2010).
  19. Wallace, B. K., Jelks, K. A., O'Donnell, M. E. Ischemia-induced stimulation of cerebral microvascular endothelial cell Na-K-Cl cotransport involves p38 and JNK MAP kinases. Am J Physiol Cell Physiol. 302, C505-C517 (2012).
  20. O'Donnell, M. E., et al. Intravenous HOE-642 reduces brain edema and Na uptake in the rat permanent middle cerebral artery occlusion model of stroke: evidence for participation of the blood-brain barrier Na/H exchanger. J Cereb Blood Flow Metab. 33, 225-234 (2013).
  21. Walcott, B. P., Kahle, K. T., Simard, J. M. Novel treatment targets for cerebral edema. Neurotherapeutics. 9, 65-72 (2012).
  22. Shen, Z., et al. Inhibition of G protein-coupled receptor 81 (GPR81) protects against ischemic brain injury. CNS Neurosci Ther. 21, 271-279 (2015).
المستمر الرابع التسريب هو معاملة طريق خيار لارجينين فاسوبريسين-مستقبلات مانع Conivaptan في الفئران لدراسة أثار السكتة الدماغية الدماغ وذمة
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zeynalov, E., Jones, S. M., Elliott, J. P. Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginine-vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mice to Study Stroke-evoked Brain Edema. J. Vis. Exp. (115), e54170, doi:10.3791/54170 (2016).More

Zeynalov, E., Jones, S. M., Elliott, J. P. Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginine-vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mice to Study Stroke-evoked Brain Edema. J. Vis. Exp. (115), e54170, doi:10.3791/54170 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter