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सतत चतुर्थ आसव चूहे अध्ययन करने के लिए स्ट्रोक पैदा ब्रेन एडेमा में Arginine-वैसोप्रेसिन रिसेप्टर अवरोधक Conivaptan के लिए विकल्प उपचार मार्ग है

Published: September 1, 2016 doi: 10.3791/54170
Automatic Translation
1, 1, 2
1Neurotrauma Research, Swedish Medical Center, 2Neurosurgery, Colorado Brain and Spine Institute

Abstract

स्ट्रोक रुग्णता और मृत्यु दर दुनिया में के प्रमुख कारणों में से एक है। स्ट्रोक मस्तिष्क शोफ और अन्य pathophysiological घटनाओं से जटिल है। विकास और स्ट्रोक पैदा मस्तिष्क शोफ के विकास में सबसे महत्वपूर्ण खिलाड़ियों के बीच हार्मोन arginine-वैसोप्रेसिन और उसके रिसेप्टर्स, V1a और V2 है। हाल ही में, V1a और V2 रिसेप्टर अवरोधक conivaptan एक संभावित दवा स्ट्रोक के बाद मस्तिष्क शोफ को कम करने के रूप में ध्यान आकर्षित किया गया है। हालांकि, पशु मॉडल जो स्ट्रोक अनुसंधान के क्षेत्र में conivaptan अनुप्रयोगों को शामिल प्रशासन के संभव मार्गों पर आधारित संशोधित करने की जरूरत है। यहां 48 घंटे के सतत अंतःशिरा (चतुर्थ) के परिणामों चूहों में प्रयोगात्मक स्ट्रोक के बाद intraperitoneal (आईपी) conivaptan उपचार के साथ तुलना कर रहे हैं। हम एक प्रोटोकॉल जिसमें मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा conivaptan (0.2 मिलीग्राम) या वाहन के चतुर्थ उपचार के लिए गले नस में कैथेटर स्थापना के साथ जोड़ दिया गया था विकसित किया है। जानवरों के विभिन्न साथियों 0.2 के साथ इलाज किया गयादैनिक conivaptan या वाहन आईपी के मिलीग्राम सांस। प्रायोगिक स्ट्रोक पैदा मस्तिष्क शोफ निरंतर चतुर्थ और आईपी उपचार के बाद चूहों में मूल्यांकन किया गया था। परिणामों की तुलना से पता चला है कि conivaptan के निरंतर चतुर्थ प्रशासन alleviates चूहों में पोस्ट-इस्कीमिक मस्तिष्क शोफ conivaptan के आईपी प्रशासन के विपरीत,। हम निष्कर्ष है कि हमारे मॉडल स्ट्रोक और मस्तिष्क शोफ के संदर्भ में conivaptan अनुप्रयोगों के भविष्य के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

Protocol

प्रयोगों अनुसंधान के क्षेत्र में देखभाल और जानवरों के इस्तेमाल के लिए राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के दिशा निर्देशों के अनुसार किया गया था और स्वीडिश मेडिकल सेंटर पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया। सभी प्रक्रियाओं उचित सड़न रोकनेवाला तकनीक के साथ प्रदर्शन किया गया। अध्ययन के लिए उपयोग प्रायोगिक पशुओं 25 से 27 जी के लिए पुरुष, 3 महीने पुरानी है, शरीर के वजन के साथ जंगली प्रकार C57 चूहों थे।

1. विवो स्ट्रोक प्रेरण में

  1. प्री-कोट सर्जरी से पहले दंत चिकित्सा राल के साथ रेशा।
    1. 7-0 नायलॉन सीवन से फिलामेंट की एक 12 मिमी लंबा टुकड़ा काट। hardener के भाग 1 के साथ राल के 2 भागों मिश्रण, और फिर तुरंत मिश्रण में रेशा की नोक डुबकी पूरी लंबाई के बारे में 1/3 कवर करने के लिए। इसे जल्दी से निकालें और सत्यापित करें कि यह दंत राल की एक चिकनी सतह कोट के साथ कवर किया जाता है।
    2. एयर उपयोग करने से पहले 2 घंटे के लिए रेशा सूख।
  2. माउस एक में रखेंn संज्ञाहरण प्रेरण कक्ष (2 एल मात्रा), और 2 एल / मिनट चैम्बर में जाने पर 25% ऑक्सीजन समृद्ध कमरे में हवा में 1.5% isoflurane के प्रवाह को निर्धारित किया है।
  3. माउस प्रेरण कक्ष में रहने के लिए जब तक पूरी तरह anesthetized, 8 के रूप में पूंछ चुटकी करने के लिए प्रतिक्रिया की कमी के द्वारा निर्धारित की अनुमति दें।
  4. ऑपरेटिंग मेज पर माउस एक गर्म पैड के साथ प्लेस, और नाक शंकु के माध्यम से अनायास छुड़ाया संज्ञाहरण के रखरखाव के लिए 1% पर isoflurane एकाग्रता निर्धारित किया है।
  5. आगे और गर्दन के पीछे के बाल क्लिप, और मलाई शराब के साथ गर्दन स्प्रे। दोनों आंखों पर पशु चिकित्सा नेत्र मरहम लागू करें।
  6. लगातार शरीर के तापमान पर नजर रखने के लिए, सर्जरी के दौरान डिजिटल प्रदर्शन से जुड़ा एक गुदा तापमान जांच का उपयोग करें।
  7. लापरवाह स्थिति में माउस जगह है, कीटाणुशोधन के लिए povidone आयोडीन 10% हाथ धोने के समाधान को लागू करने, एक बाँझ कपड़ा के साथ कवर, और फिर एक आकार 10 शल्य चिकित्सा स्केलपेल ब्लेड के साथ गर्दन के साथ एक midline चीरा बनाते हैं।
    8. <li> अस्थायी रूप से 6.0 रेशम सीवन के साथ छोड़ दिया आम मन्या धमनी (सीसीए) ligate।
  8. बाएं बाहरी कैरोटिड धमनी (ईसीए) पर एक और टाई रखें।
  9. आंतरिक मन्या धमनी (आईसीए) पर एक microvascular क्लिप रखें।
  10. microvascular कैंची के साथ बाहरी मन्या धमनी पर एक छोटा सा छेद कट। , 7-0 नायलॉन सीवन ईसीए में खोलने में दंत राल के साथ लेपित से बना एक रेशा डालें, और cephalically यह अग्रिम, जबकि क्लिप को हटाने तक प्रतिरोध (सीसीए के विभाजन के बिंदु से के बारे में 5-7 मिमी) लगा है।
  11. आंतरिक मन्या धमनी पर एक अस्थायी टाई की स्थिति में रेशा सुरक्षित करने के लिए रखें। आरेख, चित्रा 1 ए का संदर्भ लें। रेशम सीवन के साथ त्वचा को बंद करें, और 0.5% Bupivacaine के 0.2 मिलीलीटर के साथ गर्दन के मोर्चे पर घाव घुसपैठ, 2.6 चरण में के रूप में।
  12. माउस 60 मिनट के लिए एक वसूली कक्ष में संज्ञाहरण से जगाने और होश में आने की अनुमति दें। पशु पहुंच से बाहर मत छोड़ो जब तक यह आ गया हैपर्याप्त चेतना स्टर्नल लेटना बनाए रखने के लिए।
  13. न्यूरोलॉजिकल घाटा स्कोरिंग (एनडीएस) के लिए माउस का परीक्षण इस प्रकार है: 0 = सामान्य मोटर समारोह, 1 = धड़ की और पूंछ लिफ्ट पर contralateral forelimb के बल, 2 बाकी है, 3 पर contralateral पक्ष लेकिन सामान्य मुद्रा के लिए = चक्कर = contralateral को झुकाव बाकी 4 पर पक्ष = कोई सहज मोटर गतिविधि। 4,9
    1. एनडीएस परीक्षण के लिए, अवलोकन (2-3 मिनट) के लिए पूंछ और एक सपाट सतह पर जगह से माउस उठा। वैकल्पिक रूप से, वसूली कक्ष में चूहों का पालन। चूहों कि एनडीएस प्रयोग से 2 की तुलना में कम एमसीए की अपर्याप्त रोड़ा के कारण प्रदर्शन कर खाये।
      नोट: लेजर डॉपलर Flowmetry तकनीक एमसीए रोड़ा पुष्टि करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता 9-11।
  14. पुनः anesthetize के रूप में ऊपर वर्णित प्रेरण कक्ष में वसूली के 60 मिनट के बाद पशु, 10% povidone आयोडीन हाथ धोने के समाधान के साथ पिछले त्वचा चीरा फिर से बाँझ, और पर सर्जिकल घाव फिर से खोलनाकाटने और रेशम सीवन को हटाने से गर्दन के सामने।
  15. ईसीए से रेशा निकालने के लिए निम्न चरणों का पालन:
    1. आईसीए पर एक microvascular क्लिप रखें। आईसीए पर सिवनी खोल और क्लिप खुले धारण करते हुए रेशा बाहर खींच।
    2. क्लिप बंद करो और कटौती करने के लिए proximally ईसीए पर एक टाई जगह है।
    3. क्लिप निकालें और मस्तिष्क में रक्त प्रवाह को बहाल करने के लिए सीसीए से संयुक्ताक्षर को हटा दें। आरेख, चित्रा 1 बी को देखें।

2. सतत 48 घंटे के उपचार के लिए गले नस में चतुर्थ कैथेटर की स्थापना

नोट: तुरंत माउस की जागृति के बिना कदम 1.16.3 के बाद कैथेटर की स्थापना करने के लिए आगे बढ़ें।

  1. लचीला टयूबिंग की दो अलग अलग आकार का उपयोग करें: भीतरी ट्यूबिंग डालने (व्यास के बाहर 0.94 मिमी, दवा को रोकने के लिए किया जा रहा संचार) बाहरी ट्यूबिंग में (व्यास के बाहर 3.18 मिमी, भीतरी ट्यूबिंग के संरक्षण के लिए)।
  2. पीप्रवण स्थिति में माउस फीता, कीटाणुशोधन के लिए 10% povidone आयोडीन हाथ धोने के समाधान लागू होते हैं, और एक आकार 10 शल्य चिकित्सा स्केलपेल ब्लेड के साथ गर्दन के पीछे एक 1 सेमी चीरा बनाते हैं। लापरवाह स्थिति में माउस की बारी, 10% povidone आयोडीन हाथ धोने के समाधान के साथ गर्दन के सामने फिर से बाँझ, और गर्दन के मोर्चे पर सर्जिकल घाव फिर से खोलना। सुरंग गर्दन के सामने करने के लिए पीठ पर बनाया चीरा से त्वचा के नीचे ट्यूबिंग, और खुले घाव 1 सेमी से यह अमल में।
  3. midline से लगभग 1 सेमी laterally गर्दन के सामने के बाईं ओर से चमड़े के नीचे वसा ऊतकों निकालें। छोड़ गले नस जानें, 5 मिमी के अलावा नस साथ दो संबंधों जगह है, और थोड़ा नस में खिंचाव। microvascular कैंची के साथ दो संबंधों के बीच गले नस पर एक छोटा सा छेद करें; भीतरी ट्यूबिंग 5 मिमी गहरी दुमदारी की नोक (दिल की ओर) डालें।
  4. गले नस करने के लिए दोनों के साथ संबंधों को ट्यूबिंग सुरक्षित। साथ गर्दन के मोर्चे पर त्वचा को बंद करें3-0 रेशम सीवन। आरेख, चित्रा 1C का संदर्भ लें।
  5. एक सीवन के साथ गर्दन के पीछे त्वचा के लिए ट्यूबिंग सुरक्षित, और एक कुंडा के माध्यम से एक microinfusion चतुर्थ पंप करने के लिए ट्यूबिंग कनेक्ट। कुंडा भोजन और पानी के लिए पूर्ण पहुँच के साथ पिंजरे के अंदर चूहों की मुक्त आवाजाही की अनुमति देता है।
  6. मोर्चे पर त्वचा चीरों और 0.5% Bupivacaine पोस्ट ऑपरेटिव दर्द को रोकने के लिए 0.2 मिलीलीटर के साथ गर्दन के पीछे घुसपैठ।
    नोट: संस्थागत विशिष्ट पशु प्रोटोकॉल पर निर्भर करता है, जानवरों को नशीले पदार्थों, एनएसएआईडी, या एंटीबायोटिक दवाओं के पूर्व और बाद के ऑपरेशन के साथ इलाज किया जा सकता है। हालांकि, उल्लेख उपचार इस्कीमिक स्ट्रोक परिणाम के परिणाम बदल सकता है (चर्चा अनुभाग देखें)। 11-14
  7. पशु प्रयोग के अंत बिंदु तक एक अलग पिंजरे में वसूली कक्ष में जगाने, और फिर घर के लिए पशु की अनुमति दें। जब तक यह पर्याप्त होश आ गया है स्टर्नल बनाए रखने के लिए पशु पहुंच से बाहर मत छोड़ोलेटना।
  8. 1.5 मिलीग्राम / किग्रा / घंटा, 4 पर निरंतर 48 घंटे के चतुर्थ conivaptan का उपचार (5% डेक्सट्रोज में 0.14 मिलीग्राम / एमएल) या वाहन के लिए अर्क दर निर्धारित करने और जान फूंकना शुरू करते हैं।
    नोट: चतुर्थ संचार conivaptan की कुल राशि 1.44 मिलीलीटर की कुल मात्रा में लगभग 0.2 मिलीग्राम / माउस / दिन होना चाहिए।
    नोट: 1.44 5% की मिलीलीटर डेक्सट्रोज में 0.2 मिलीग्राम की कुल राशि के साथ दो बार दैनिक प्रदर्शन इंट्रापेरिटोनियल (आईपी) conivaptan का इंजेक्शन। को लागू आईपी इंजेक्शन के रूप में पहले से वर्णित किया गया था। 15 शरीर और पूंछ के पीछे सतह की त्वचा मनोरंजक द्वारा चूहों को नियंत्रित। पेट एक 26 जी / 1/2 इंच सुई का उपयोग कर के छोड़ दिया कम वृत्त का चतुर्थ भाग में conivaptan या वाहन इंजेक्षन। 15
  9. प्रयोग (48 घंटा) की पूरी अवधि के लिए जानवरों को दिन में दो बार निरीक्षण करें। जानवरों के भोजन और पानी के लिए पूरा उपयोग की अनुमति है। पशु संकट या श्वास कष्ट के लक्षण दर्शाती हैं एक पशु चिकित्सक से परामर्श करें। तो इच्छामृत्यु गंभीर जिले में पशुओं के लिए आवश्यक हैress नीचे 3.1 कदम का उल्लेख है, और अध्ययन से पशु बाहर।

अंत बिंदु पर स्ट्रोक पैदा मस्तिष्क edema के 3. मूल्यांकन

  1. 5% isoflurane के साथ खत्म-anesthetizing द्वारा माउस बलिदान।
  2. midline के साथ खोपड़ी की हड्डी पर एक त्वचा चीरा बनाने के लिए एक छुरी का प्रयोग करें, और मस्तिष्क पर पूरी खोपड़ी को बेनकाब करने के लिए त्वचा वापस लेना। रंध्र मैग्नम में शुरू हुए laterally प्रत्येक पक्ष पर मस्तिष्क की परिधि के साथ खोपड़ी की हड्डी में कटौती, और यह नीचे मस्तिष्क को छूने के बिना सावधानी से इसे उठा। रीढ़ की हड्डी से मस्तिष्क और नसों खोपड़ी के आधार पर संलग्न तोड़।
  3. मस्तिष्क निकालें, घ्राण बल्ब और सेरिबैलम से अलग, और इस्कीमिक और गैर इस्कीमिक मस्तिष्क गोलार्द्धों में interhemispheric विदर साथ मस्तिष्क काटना, जैसा कि पहले वर्णन किया। 9
  4. के रूप में पहले 4,9 वर्णित गीला करने वाली शुष्क की तुलना अनुपात (WDR) द्वारा मस्तिष्क शोफ का आकलन करें। ऊतकों वजनपहले और एक ओवन में 100 डिग्री सेल्सियस पर 3 दिनों के लिए सुखाने के बाद। % एच 2 ओ = के रूप में मस्तिष्क पानी की मात्रा (BWC) की गणना (1-सूखी गुम्मट। / गीला गुम्मट।) X 100%।

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Representative Results

जानवरों के शरीर के तापमान शारीरिक सीमा के भीतर थी और स्ट्रोक प्रेरण की शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के दौरान स्थिर है। दो चूहों कि एनडीएस 2 से कम प्रदर्शन किया तुरंत बाद MCAO अध्ययन से बाहर रखा गया था।

चूहों में MCAO 48 घंटा में ipsilateral गोलार्द्ध में रोधगलितांश मात्रा पैदा करता है। टीटीसी से सना हुआ स्लाइस के मूल्यांकन से पता चलता है कि गोलार्द्ध के बारे में 50% MCAO (चित्रा -1) के बाद रोधगलितांश से प्रभावित होता है, के रूप में Zeynalov, ई और डोर, एस, 2009 10 मस्तिष्क इस्कीमिक स्ट्रोक की शुरुआत गंभीर का कारण बनता द्वारा प्रकाशित ऑक्सीजन और पोषक तत्वों में मस्तिष्क के ऊतकों के अभाव। इस स्थानीय मस्तिष्क के ऊतकों हाइपोक्सिया का एक परिणाम के रूप में, न्यूरॉन्स और glial कोशिकाओं मर जाते हैं, जो मस्तिष्क के infarcted हिस्सा है। चित्रा -1 प्रतिनिधि माउस मस्तिष्क स्लाइस MCAO प्रेरित रोधगलितांश से प्रभावित पता चलता है, और एक चोट के आकार के एक अनुमान देता है।

48 घंटा 60 मिनट के बाद MCAO प्रेरण पर मस्तिष्क पानी की मात्रा (BWC) के मूल्यांकन से पता चला है कि conivaptan प्रशासित चतुर्थ (0.2 मिलीग्राम / दिन) काफी दोनों ipsilateral और contralateral गोलार्द्धों में मस्तिष्क सूजन, (2A चित्रा) कम कर देता है। इसके विपरीत, 0.2 मिलीग्राम सांस द्वारा conivaptan के आईपी उपचार दैनिक स्ट्रोक पैदा मस्तिष्क शोफ (चित्रा 2 बी) पर समान सकारात्मक प्रभाव उत्पन्न करने में विफल रहा।

प्लाज्मा और मूत्र परासरणीयता पर conivaptan प्रभाव की पुष्टि प्रयोग के अंत बिंदु पर सभी प्रायोगिक पशुओं में हासिल की थी। Conivaptan चतुर्थ इलाज या आईपी प्लाज्मा वृद्धि हुई है और चूहों में सभी चूहों में मूत्र परासरणीयता में कमी आई 4 प्लाज्मा परासरणीयता मान रहे थे इस प्रकार है:। 313 ± 4.4 mOsm / किलो (वाहन, चतुर्थ) बनाम 355 ± 7.5 * mOsm / किलो (conivaptan, चतुर्थ) , के रूप में पहले से प्रकाशित, 4 और 340 ± 7.7 mOsm / किलो (वाहन, आईपी) बनाम383 ± 8.8 * mOsm / किलो (conivaptan, आईपी)। चूहों में मूत्र परासरणीयता मान निम्नानुसार थे: 1210.6 ± 13.4 mOsm / किलो (वाहन, चतुर्थ) बनाम 595.0 ± 57.4 * mOsm / किलो (conivaptan, चतुर्थ), के रूप में पहले से प्रकाशित, 4 और 1535.0 ± 80.9 mOsm / किलो (वाहन, आईपी) बनाम 242.0 ± 23.2 * mOsm / किलो (conivaptan, आईपी)। के रूप में प्रस्तुत सभी डेटा ± SEM मतलब है, * पी ≤0.05 नियंत्रण इसी बनाम।

आकृति 1
चित्रा 1:। प्रयोगात्मक स्ट्रोक मॉडल, चतुर्थ कैथेटर स्थापना, और बाद स्ट्रोक फिलामेंट की स्थिति में 48 घंटा प्रतिनिधि रोधगलितांश मात्रा का आरेख (नीले रंग में दिखाया गया है) छोड़ आंतरिक मन्या धमनी में राल (हरा) के साथ पूर्व में लिपटे (आईसीए) रोड़ा (ए) और reperfusion समय (बी) के दौरान। बाईं गले नस (सी) में लचीला ट्यूबिंग टिप की सही स्थिति। Experimentaचूहों में एल स्ट्रोक 48 घंटा में ipsilateral गोलार्द्ध में रोधगलितांश मात्रा पैदा करता है। चूहे MCAO के बाद 48 घंटा में बलिदान किया गया, और दिमाग प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में हटा दिया गया था (3.1-3.3 कदम)। दिमाग में 2 मिमी मोटी वर्गों में कटौती, और टीटीसी (डी) के साथ दाग रहे थे। चित्रा -1 Zeynalov, ई और डोर, एस, 2009 तक मूल लेख से संशोधित किया गया है 10 यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2:। सतत अंतःशिरा (चतुर्थ) और intraperitoneal (आईपी) conivaptan (0.2 मिलीग्राम / दिन) स्ट्रोक पैदा मस्तिष्क शोफ पर उपचार Conivaptan चतुर्थ उपचार 48 घंटे के लिए दिलाई के प्रभाव। Conivaptan उपचार प्रशासित चतुर्थ में ipsilateral और contralateral घंटे के बाद इस्कीमिक मस्तिष्क शोफ कम होemisphere (ए)। चित्रा 2A द्वारा Zeynalov एट अल। मूल लेख से संशोधित किया गया है, 2015 के 48 घंटे के लिए 4 Conivaptan आईपी उपचार प्रयोगात्मक स्ट्रोक की वजह से मस्तिष्क शोफ कम करने के लिए एन = 10 प्रत्येक समूह में विफल रहा है। (कदम 1.1.1-1.15.3) ऊपर प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में चूहे reperfusion साथ MCAO कराना पड़ा। तब conivaptan (0.2 मिलीग्राम) के आईपी इंजेक्शन के 22 घंटा और reperfusion के 46 घंटा पर तुरंत दिलाई गई। चूहों का बलिदान कर रहे थे; प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में दिमाग से हटा दिया गया और ओवन में सूख (3.1-3.4 कदम)। (ख) सभी डेटा ± SEM के मतलब के रूप में प्रस्तुत किया है, * पी ​​<0.05 इसी नियंत्रण बनाम। कृपया यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

इस अध्ययन preclinical स्ट्रोक अनुसंधान के लिए महत्वपूर्ण महत्व है। इस अध्ययन से पता चलता है कि conivaptan (0.2 मिलीग्राम / दिन) चूहों में प्रयोगात्मक स्ट्रोक के बाद से निरंतर चतुर्थ संचार कुशलता से इलाज के 48 घंटे के बाद मस्तिष्क शोफ कम कर देता है। मस्तिष्क शोफ पर conivaptan की एक ही खुराक के आईपी इंजेक्शन का असर भी जांच की गई। Conivaptan उपचार चतुर्थ और आईपी दोनों मार्गों से चूहों के रूप ने संकेत में aquaresis का उत्पादन: 1) थोड़ा शारीरिक स्तर से ऊपर प्लाज्मा परासरणीयता में वृद्धि; और 2) गुर्दे में पानी पुनःअवशोषण की रुकावट के कारण मूत्र परासरणीयता में कमी। इसलिए, उपचार के परिणामों के आधार पर, हम रिपोर्ट है कि चतुर्थ वितरण पद्धति स्ट्रोक पैदा शोफ गठन पर अतिरिक्त महत्वपूर्ण फायदेमंद असर पड़ता है।

हमारा प्रमुख लग रहा है कि चतुर्थ उपचार conivaptan के लिए आईपी मार्ग से मस्तिष्क शोफ उन्मूलन पर बेहतर प्रभाव का उत्पादन किया है। Conivaptan नैदानिक ​​इस्तेमाल भ्रष्टाचार के लिए एक संयुक्त V1a और V2 रिसेप्टर प्रतिपक्षी, उपलब्ध हैरंगरूट hyponatremia, रक्त की मात्रा और परासरणीयता। 16 Conivaptan विभिन्न शर्तों के साथ रोगियों में hyponatremia सही करने के लिए दिखाया गया है। conivaptan 17 क्लिनिकल उपलब्धता चलता है कि मस्तिष्क शोफ के संदर्भ में अपने अन्वेषण तेजी से बेंच-टु-बिस्तर अनुवाद में परिणाम कर सकते हैं। प्रयोगात्मक चयनात्मक V1a रिसेप्टर intracerebroventricularly छुड़ाया ब्लॉकर्स का उपयोग पद इस्कीमिक मस्तिष्क शोफ गठन के अन्य शोधकर्ताओं द्वारा वर्णित को कम करने के लिए सिद्ध किया गया है। 3,18 लेकिन, न तो दवा उन अध्ययनों में इस्तेमाल किया है और न ही दवाओं के लिए इलाज के मार्ग में संभव नैदानिक ​​आवेदन का सुझाव निकट भविष्य।

तंत्र है जिसके द्वारा मस्तिष्क ischemia और AVP कारण मस्तिष्क शोफ जटिल हैं। हालांकि, कुछ महत्वपूर्ण आणविक खिलाड़ियों सोडियम और क्लोराइड सह-ट्रांसपोर्टरों 19,20 और V1a रिसेप्टर्स जो बीबीबी इंटरफेस में संवहनी दीवारों में अनुवादित कर रहे हैं। V2 अवरुद्ध conivaptan के प्रभाव Exces के उत्सर्जन के लिए जिम्मेदार हैपानी गुर्दे और रक्त परासरणीयता, जो भी मदद मिल सकती है मस्तिष्क शोफ के विकास को रोकने के उन्नयन। 21 ये तंत्र द्वारा अभी भी खेलने में हो सकता है जब conivaptan ऊतक बाधाओं कि conivaptan उपलब्धता कम हो सकता है से बचने के लिए संचलन में सीधे दिया जाता सकता है। हालांकि, खुराक और उपचार की अवधि का औचित्य पहले प्रकाशित टिप्पणियों के आधार पर किया गया था। 4 यह है कि क्या conivaptan क्षेत्रीय रक्त के प्रवाह की चोट प्रेरित घटने के बाद मस्तिष्क की इस्कीमिक साइट तक पहुँच जाता निर्धारित किया जाना बना रहता है। यह भी जांच की जानी है कि क्या मस्तिष्क conivaptan के लिए पर्याप्त मात्रा मस्तिष्क धमनियों में V1a रिसेप्टर्स को अवरुद्ध करके ऐसे वाहिकासंकीर्णन की रोकथाम के रूप में वांछनीय स्थानीय प्रभाव, उत्पादन करने के लिए प्राप्त की जरूरत है।

प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल conivaptan के इलाज के मार्ग के लिए चुनाव का सवाल को संबोधित करने के लिए डिजाइन किया गया था। परिणामों के आधार पर अध्ययन conivaptan विज्ञापन के चतुर्थ मार्ग के लिए मजबूत समर्थन प्रदान करता हैकार्य संपादन। हालांकि, प्रोटोकॉल का सबसे महत्वपूर्ण कदम स्थापित करने के लिए और आदेश में चूहों में स्ट्रोक के बाद उपचार के परिणामों में काफी अंतर का पता लगाने के लिए ठीक-देखते जरूरत है। उन कदमों में से हैं: 1) MCAO (60 मिनट) की अवधि; 2) दैनिक खुराक (0.2 मिलीग्राम), और अर्क दर (1.5 मिलीग्राम / किलो / घंटा); और 3) उपचार (48 घंटा) की लंबाई। MCAO की अवधि इस्कीमिक अपमान की डिग्री है जो प्रोटोकॉल क्योंकि यह अपरिवर्तनीय नुकसान मस्तिष्क के ऊतकों के लिए अत्यंत महत्वपूर्ण है निर्धारित करता है। एक चोट के गंभीर भी यह मुश्किल पशु 48 घंटे के लिए जीवित रहने के लिए, या जानवरों मस्तिष्क शोफ के खिलाफ conivaptan उपचार के लिए कम जिम्मेदार हो सकता है के लिए करना होगा। दूसरी ओर, MCAO की अवधि कम से कम 60 मिनट के लिए माउस में एक इस्कीमिक अपमान के लिए प्रेरित करने के लिए अपर्याप्त हो सकता है, और इसलिए, मस्तिष्क शोफ का उत्पादन नहीं होगा। खुराक और उपचार की लंबाई conivaptan उपयोग के लिए एफडीए की सिफारिशों के आधार पर चुने गए हैं। 16 हालांकि, यह बताया गया है किचूहों में स्ट्रोक के बाद मस्तिष्क शोफ को कम करने के लिए मानव conivaptan खुराक कुशल नहीं था। इसलिए, खुराक चूहों, जो बाद के इस्कीमिक मस्तिष्क शोफ के खिलाफ महत्वपूर्ण सुरक्षा प्रेरित करने के लिए 10 गुना वृद्धि हुई किया जा सकता था। 4 सही अर्क दर चुनने का महत्व यह है कि यह कुल रक्त की मात्रा, रक्तचाप और मध्य द्रव संचय यदि प्रभावित कर सकता है दर काफी सुझाव दर से अधिक है। हालांकि, कुल रक्त की मात्रा और रक्तचाप की माप बहुत जानकारीपूर्ण किया जाएगा।

MCAO के सर्जिकल प्रेरण एक इनवेसिव प्रक्रिया है, और प्रोटोकॉल के सभी चरणों के लिए सटीक ध्यान देने की आवश्यकता है, और यह तकनीक के लिए समस्या निवारण युक्तियों जानना महत्वपूर्ण है। एक गलती से फटे धमनी के कारण ऐसे अत्यधिक रक्तस्राव धमनी के रूप में कुछ अप्रत्याशित शल्य जटिलताओं, प्रयोग के लिए सफलता की दर को कम करने और मृत्यु दर में वृद्धि। हालांकि, शिरापरक खून बह आवेदन करने वाले प्रकाश दबाव W से रोका जा सकता हैएक बाँझ स्पंज ith।

इस प्रोटोकॉल मस्तिष्क ischemia, जिसका मतलब यह है कि एमसीए रोड़ा या तो सही है या छोड़ दिया एमसीए पर उत्पादन किया जाता है के एक एकतरफा प्रेरण का वर्णन है। हालांकि, प्रोटोकॉल एमसीए रोड़ा और चतुर्थ कैथेटर स्थापना के सर्जन के वरीय पक्ष के आधार पर संशोधित किया जा सकता है। चित्रा 1 आरेख MCAO प्रक्रिया, चित्रा 1 ए और बी, चतुर्थ कैथेटर स्थापना प्रोटोकॉल का सबसे महत्वपूर्ण भागों की एक बैठक को दर्शाया गया है, चित्रा 1 सी, और प्रयोग (48 घंटा) के अंत बिंदु पर MCAO प्रेरित मस्तिष्क रोधगलितांश के प्रतिनिधि मस्तिष्क स्लाइस, के रूप में पहले से प्रकाशित, 10 चित्रा -1। हालांकि आरेख और प्रतिनिधि मस्तिष्क स्लाइस मतलब है कि MCAO मस्तिष्क के बाईं ओर प्रेरित किया गया था, हम परिणामों में नाटकीय मतभेद यदि MCAO एन भर में स्थिरता के रूप में मस्तिष्क के दाईं ओर प्रेरित किया गया था जब तक आशा नहीं हैटायर अध्ययन बनाए रखा है।

सर्जरी और संज्ञाहरण के बाद वसूली की अवधि के दौरान, जानवरों के पोस्ट ऑपरेटिव दर्द और गंभीर न्यूरोलॉजिकल घाटा के कारण संकट का अनुभव कर सकता है। कई मामलों में, पश्चात दर्द प्रबंधन केवल स्थानीय anesthetics जैसे 0.5% Bupivacaine प्रयोग तक सीमित किया जा सकता है। मानव में cerebrovascular दुर्घटना के साथ ही चूहों में प्रयोगात्मक स्ट्रोक के कारण स्ट्रोक ऐसे सूजन, मस्तिष्क रोधगलितांश, और मस्तिष्क शोफ के रूप में pathophysiological कारक शामिल है। 9 इन pathophysiological घटनाओं ऐसे cyclooxygenases के रूप में महत्वपूर्ण आणविक खिलाड़ियों द्वारा लगे हुए हैं (कॉक्स) 13 और जी-प्रोटीन संबंधित रिसेप्टर्स। आणविक मार्ग है कि कॉक्स शामिल साथ 22 हस्तक्षेप, NSAID दवाओं की वजह से हो सकता है 13 यदि वे इन स्थितियों में इस्तेमाल किया गया। नशीले पदार्थों उनके रिसेप्टर्स जो जी-प्रोटीन और दूसरा दूत 12 से जुड़े होते हैं और स्ट्रोक, 11 और परिणाम के pathophysiological परिणामों को बदल सकते हैं पर कार्रवाईइस अध्ययन के एस। इन कारकों postoperatively चूहों में दर्द की दवा के उपयोग की सीमा।

सारांश में, हमारे अध्ययन के एक दूरगामी लक्ष्य के रूप में conivaptan repurposing की संभावना की पड़ताल। प्रयोगात्मक स्ट्रोक प्रेरण conivaptan के निरंतर चतुर्थ संचार के द्वारा पीछा के हमारे पशु मॉडल के अनुरूप परिणाम जो स्ट्रोक रोगियों में अपनी क्षमता का उपयोग का सुझाव उत्पादन करने के लिए दिखाया गया है। अधिक विशेष रूप से, हम दिखा दिया है कि स्ट्रोक के बाद conivaptan माध्यमिक मस्तिष्क की चोट को रोकने के लिए निरंतर चतुर्थ उपचार के मॉडल चूहों में preclinical अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इस अध्ययन स्ट्रोक के बाद चूहों में मस्तिष्क शोफ अध्ययन करने के लिए है क्योंकि नैदानिक ​​सेटिंग में तेजी से अनुवाद आईसीयू के मरीजों के लिए संजीवनी हो सकता है एक अतिरिक्त उपकरण के रूप में conivaptan उपचार के लिए एक विकल्प के आवेदन की पेशकश करने के उद्देश्य से किया गया था।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

हम धन और सुविधाएं प्रदान करने के लिए स्वीडिश मेडिकल सेंटर धन्यवाद। हम भी प्रयोगशाला अंतरिक्ष के उदार इस्तेमाल के लिए क्रेग अस्पताल धन्यवाद।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Heated Pad K&H Manufacturing Inc 1060
Temperature Monitor with Rectal Probe Physitemp 7029
Silk Suture Spool, 6-0 Surgical Specialties Corporation SP114
Silk Suture on a Needle, 3-0 Ethicon 1684G
Nylon Suture, 7-0 Ethicon 1696G
Dental Resin Polysiloxane with Hardener Heraeus Kulzer 65817930
Microinfusion IV Pump Kent Scietific GT0897
Swivel 22GA Instech 375/22PS
Laboratory Tubing, 0.94 mm x 0.51 mm Dow Corning 508-002
Laboratory Tubing, 3.18 mm x 1.98 mm Dow Corning 508-009

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References

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चिकित्सा अंक 115 माउस स्ट्रोक मॉडल मध्य मस्तिष्क धमनी रोड़ा मस्तिष्क एडेमा रक्त मस्तिष्क बाधा मस्तिष्क रोधगलितांश सतत चतुर्थ आसव
सतत चतुर्थ आसव चूहे अध्ययन करने के लिए स्ट्रोक पैदा ब्रेन एडेमा में Arginine-वैसोप्रेसिन रिसेप्टर अवरोधक Conivaptan के लिए विकल्प उपचार मार्ग है
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Zeynalov, E., Jones, S. M., Elliott, J. P. Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginine-vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mice to Study Stroke-evoked Brain Edema. J. Vis. Exp. (115), e54170, doi:10.3791/54170 (2016).

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