Abstract
Schlaganfall ist eine der Hauptursachen von Morbidität und Mortalität in der Welt. Schlaganfall wird durch Hirnödem und anderen pathophysiologischen Ereignisse kompliziert. Zu den wichtigsten Akteure in der Entwicklung und Evolution von Schlaganfall-evozierte Hirnödem ist das Hormon Arginin-Vasopressin und seine Rezeptoren, V1a und V2. Vor kurzem hat die V1a und V2-Rezeptorblockers Conivaptan Aufmerksamkeit als potentielle Arzneimittelangezogen Hirnödem nach Schlaganfall zu reduzieren. Allerdings Tiermodelle, die conivaptan Anwendungen in der Schlaganfallforschung einbeziehen müssen basierend auf machbar Verabreichungswege geändert werden. Hier werden die Ergebnisse des 48 Stunden kontinuierlicher intravenöser (IV) sind gegenüber intraperitoneal (IP) Conivaptan Behandlungen nach experimentellem Schlaganfall in Mäusen. Wir entwickelten ein Protokoll, in dem mittleren zerebralen Arterienverschluss mit Katheter Einbau in die Jugularvene zur intravenösen Behandlung von Conivaptan (0,2 mg) oder Vehikel kombiniert wurde. Verschiedene Kohorten von Tieren wurden mit 0,2 behandeltmg-Bolus von conivaptan oder Fahrzeug IP täglich. Experimentelle Schlaganfall-evozierte Hirnödem wurde bei Mäusen nach einer kontinuierlichen IV und IP-Behandlungen ausgewertet. Vergleich der Ergebnisse zeigte, dass die kontinuierliche Verabreichung von IV Conivaptan mildert post-ischämische Hirnödem in Mäusen, im Gegensatz zu der IP-Verabreichung von Conivaptan. Wir schließen daraus, dass unser Modell für zukünftige Studien von Conivaptan Anwendungen im Zusammenhang mit Schlaganfall und Hirnödem verwendet werden kann.
Protocol
Die Experimente wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien der National Institutes of Health für die Pflege und Verwendung von Tieren in der Forschung und wurden von der schwedischen Medical Center Animal Care und Use Committee genehmigt durchgeführt. Alle Verfahren wurden mit geeigneten aseptischen Bedingungen durchgeführt. Versuchstiere für die Studie verwendet wurden, männlich, 3 Monate alt, Wildtyp-C57-Mäuse mit einem Körpergewicht von 25 bis 27 g.
1. In - vivo - Stroke Induction
- Pre-Mantel der Glühfaden mit Dental Harz vor der Operation.
- Schneiden Sie ein 12 mm langes Stück Faden aus einer 7-0 Nylonnaht. Mix 2 Teile des Harzes mit 1 Teil des Härtungsmittels und dann tauchen unmittelbar um die Spitze des Filaments in die Mischung etwa 1/3 der gesamten Länge abdeckt. Entfernen Sie es schnell und stellen Sie sicher, dass es mit einem glattflächigen Mantel von Dentalharz bedeckt ist.
- Luft trocknen das Filament 2 Stunden vor dem Gebrauch.
- Platzieren Sie die Maus in einen Anästhesie Induktionskammer (2 l Volumen), und den Fluss von 1,5% Isofluran in 25% Sauerstoff angereicherte Raumluft eingestellt auf 2 l / min in die Kammer gehen.
- Lassen Sie die Maus in die Induktionskammer zu bleiben , bis sie vollständig anästhesiert, 8 , wie durch Fehlen einer Antwort auf tail pinch bestimmt.
- Platzieren Sie die Maus auf den OP-Tisch mit einem Heizkissen, und stellen Sie die Isofluran-Konzentration auf 1% für die Aufrechterhaltung der Anästhesie spontan durch die Nase Kegel geliefert.
- Clip Haar auf der Vorder- und der Rückseite des Halses, und sprühen Sie den Hals mit Alkohol. Bewerben Veterinäraugensalbe auf beiden Augen.
- Um kontinuierlich die Körpertemperatur zu überwachen, verwenden Sie eine Sonde Rektaltemperatur mit Digitalanzeige während der Operation.
- Platzieren Sie die Maus in Rückenlage, gelten Povidonjod 10% Waschlösung zur Desinfektion, Deckel mit einem sterilen Tuch, und dann einen Mittelschnitt machen entlang des Halses mit einer Größe 10 chirurgische Skalpell. <li> vorübergehend die linke Arteria carotis communis (CCA) mit 6,0 Seidennaht abzubinden.
- Legen Sie eine andere Bindung auf der linken Arteria carotis externa (ECA).
- Legen Sie eine mikrovaskuläre Clip auf der A. carotis interna (ICA).
- Schneiden Sie ein kleines Loch an der A. carotis externa mit mikrovaskulären Schere. Setzen Sie einen Faden 7-0 Nylonnaht beschichtet mit Dentalharz in die Öffnung in der ECA gemacht, und es kranial vorrücken, während der Clip zu entfernen, bis ein Widerstand (etwa 5-7 mm von der Gabelung des CCA) zu spüren ist.
- Legen Sie eine temporäre Bindung an die A. carotis interna des Filaments in Position zu sichern. Siehe Diagramm 1A. Schließen die Haut mit Seidennaht und infiltrieren die Wunde auf der Vorderseite des Halses mit 0,2 ml 0,5% Bupivacain, wie in Schritt 2.6.
- Lassen Sie die Maus aus der Narkose und wieder das Bewusstsein in einer Erholungsraum für 60 min zu wecken. Nicht das Tier unbeaufsichtigt lassen, bis er wiedergewonnen hatausreichend Bewusstsein sternal recumbence zu halten.
- Testen Sie die Maus für die neurologische Defizit Scoring (NDS) wie folgt: 0 = normale motorische Funktion, 1 = Beugung des Rumpfes und der kontralateralen forelimb auf Hubladebühne, 2 = auf der Gegenseite kreisen aber normale Haltung in Ruhe, 3 = stützte sich auf Kontralaterale Seite in Ruhe, 4 = keine spontane motorische Aktivität. 4,9
- Für die NDS-Tests, heben Maus am Schwanz und auf einer ebenen Fläche für die Beobachtung (2-3 min). Alternativ beobachten Mäuse in der Rückgewinnungskammer. Ausschließen Mäuse, die NDS unter 2 aus dem Experiment aufgrund unzureichender Verschluss der MCA aufweisen.
Hinweis: Laser - Doppler - Flowmetrie Technik verwendet werden kann , MCA - Okklusion zu bestätigen 11.09.
- Für die NDS-Tests, heben Maus am Schwanz und auf einer ebenen Fläche für die Beobachtung (2-3 min). Alternativ beobachten Mäuse in der Rückgewinnungskammer. Ausschließen Mäuse, die NDS unter 2 aus dem Experiment aufgrund unzureichender Verschluss der MCA aufweisen.
- Re-betäuben das Tier nach 60 Minuten der Erholung in der Kammer Induktion, wie oben beschrieben, resterilisieren die vorherige Hautschnitt mit 10% Povidon-Iod-Peeling-Lösung, und öffnen Sie die Operationswunde auf derVorderseite des Halses durch Schneiden und Entfernen der Seidennaht.
- den Faden aus der ECA die folgenden Schritte zu entfernen:
- Legen Sie eine mikrovaskuläre Clip auf der ICA. Lösen Sie die Naht auf der ICA und ziehen Sie den Faden, während Klammer offen zu halten.
- Schließen Sie den Clip und legen Sie eine Bindung an die ECA proximal zu dem Schnitt.
- Entfernen Sie den Clip und aus der CCA die Ligatur den Blutfluss zum Gehirn wieder herzustellen. Siehe Diagramm 1B.
2. Installation von IV-Katheter in die Jugularvene für die kontinuierliche 48 h Behandlung
Hinweis: Gehen Sie zur Installation des Katheters unmittelbar nach dem Schritt 1.16.3 ohne Erwachen der Maus.
- Verwenden Sie zwei verschiedene Größen von flexiblen Schlauch: Legen Sie die innere Schlauch (0,94 mm Außendurchmesser, um das Medikament zu enthalten wird infundiert) in den äußeren Schlauch (3,18 mm Außendurchmesser, für den Schutz des Innendurchmesser).
- Pein 1 cm langer Schnitt auf der Rückseite des Halses mit einer Größe 10 chirurgische Skalpell Spitze die Maus in die Bauchlage, gelten für die Desinfektion 10% PVP-Jod-Peeling-Lösung und machen. Drehen Sie die Maus in die Rückenlage, resterilisieren die Vorderseite des Halses mit 10% Povidon-Iod-Peeling-Lösung, und öffnen Sie die Operationswunde auf der Vorderseite des Halses. Tunnel der Schlauch unter der Haut von dem Einschnitt auf der Rückseite auf die Vorderseite des Halses gemacht und exteriorisieren es aus der offenen Wunde 1 cm.
- Entfernen subkutane Fettgewebe von der linken Seite der Vorderseite des Halses etwa 1 cm seitlich von der Mittellinie. Suchen Sie die Halsvene links, indem Sie zwei Bindungen entlang der Vene 5 mm voneinander entfernt, und leicht in die Vene zu strecken. Machen Sie ein kleines Loch an der Halsvene zwischen den beiden Verbindungen mit mikrovaskulären Schere; Legen Sie die Spitze der inneren Röhre 5 mm tief kaudal (zum Herzen hin).
- Befestigen Sie den Schlauch mit beiden Bindungen an die Halsvene. Schließen die Haut an der Vorderseite des Halses mitein 3-0 Seidennaht. Siehe Diagramm 1C.
- Befestigen Sie den Schlauch auf die Haut auf der Rückseite des Halses mit einer Naht, und verbinden Sie den Schlauch auf eine Mikroinfusions IV-Pumpe durch ein Drehgelenk. Der Schwenk ermöglicht die freie Bewegung von Mäusen innerhalb des Käfigs mit vollen Zugriff auf die Nahrung und Wasser.
- Infiltrieren die Hauteinschnitte auf der Vorderseite und der Rückseite des Halses mit 0,2 ml 0,5% Bupivacain postoperative Schmerzen zu verhindern.
Hinweis: Je nach institutionellen spezifischen Tier Protokolle, Tiere mit Opioiden behandelt werden können, NSAIDs oder Antibiotika prä- und postoperativ. Allerdings erwähnten Behandlungen können die Ergebnisse des ischämischen Schlaganfalls Ergebnis ändern (siehe Diskussion Sektion). 11-14 - Lassen Sie das Tier in der Rückgewinnungskammer zu wecken, und Haus dann das Tier in einem separaten Käfig bis zum Endpunkt des Experiments. Lassen Sie das Tier unbeaufsichtigt, bis es genügend Bewusstsein zu halten sternal wiedergewonnen hatrecumbence.
- Stellen Sie die Infusionsrate für die kontinuierliche 48 h IV Behandlung von conivaptan (0,14 mg / ml in 5% Dextrose) oder Vehikel bei 1,5 ml / kg / h, 4 und die Infusion zu starten.
Anmerkung: Die Gesamtmenge der IV infundiert Conivaptan sollte etwa 0,2 mg / Maus / Tag in einem Gesamtvolumen von 1,44 ml sein.
Hinweis: Führen intraperitoneale (ip) Injektion von Conivaptan zweimal täglich mit Gesamtmenge von 0,2 mg in 1,44 ml 5% Dextrose. Umsetzung IP Injektion wurde wie zuvor beschrieben. 15 Mäusen zurückhalten durch die Haut der Hinterfläche des Körpers und dem Schwanz Greif. Injizieren conivaptan oder Fahrzeug in den linken unteren Quadranten des Abdomens eine 26 G / 1/2 - Zoll - Nadel. 15 - Beachten Sie die Tiere zweimal pro Tag für die gesamte Dauer des Experiments (48 h). Lassen Sie die Tiere vollen Zugang zu Nahrung und Wasser zu haben. Wenn das Tier Anzeichen von Leiden oder Dyspnoe zeigt einen Tierarzt zu konsultieren. Wenn Euthanasie ist notwendig für das Tier in schweren distverweisen Ress auf den Schritt unter 3,1, und schließen Sie das Tier von der Studie.
3. Bewertung der Stroke-evozierte Hirnödem am Endpunkt
- Opfere die Maus durch Über anesthetizing mit 5% Isofluran.
- Verwenden Sie ein Skalpell, um einen Hautschnitt über den Schädelknochen machen entlang der Mittellinie und einfahren die Haut den ganzen Schädel über das Gehirn zu belichten. Beginnend am Foramen magnum, schneiden Sie den Schädelknochen seitlich entlang des Umfangs des Gehirns auf jeder Seite, und heben Sie sie vorsichtig, ohne das Gehirn darunter zu berühren. Sever das Gehirn von der Wirbelsäule und die auf der Basis des Schädels befestigt Nerven.
- Entfernen des Gehirns, trennen sie von den Riechkolben und dem Kleinhirn und sezieren das Cerebrum entlang der Interhemisphärenspalt in den ischämischen und nicht-ischämischen zerebralen Hemisphären, wie zuvor beschrieben. 9
- Beurteilen Hirnödem durch Vergleich wet-zu-Trocken - Verhältnisse (WDR) , wie zuvor beschrieben , 4,9. Wiegen Sie Gewebevor und 3 Tage nach dem in einem Ofen bei 100 ° C für die Trocknung. Berechnen Gehirnwassergehalt (BWC) in% H 2 O = (1-Trockengewicht. / Nassgewicht.) X 100%.
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Representative Results
Die Körpertemperatur der Tiere wurde im physiologischen Bereich und stabil während des gesamten chirurgischen Eingriffs von Schlaganfall Induktion. Zwei Mäuse, die NDS zeigte weniger als 2 unmittelbar nach MCAO von der Studie ausgeschlossen wurden.
MCAO in Mäusen erzeugt bei 48 h in der ipsilateralen Hemisphäre Infarktvolumen. Die Auswertung der TTC-gefärbten Scheiben zeigt , dass etwa 50% der Hemisphäre durch Infarkt nach MCAO (1D) beeinflusst wird, wie durch Zeynalov, E. und Dore veröffentlicht, S., 2009. 10 Der Beginn des Gehirns ischämischen Schlaganfall schweren verursacht Entzug von Hirngewebe in Sauerstoff und Nährstoffen. Als Folge dieser lokalen Hypoxie Hirngewebe, Neuronen und Glia - Zellen absterben, was die infarzierte Teil des Gehirns bilden. 1D zeigt repräsentative slices Mausgehirn beeinflußt durch MCAO-induzierten Infarkt und gibt eine Abschätzung der Größe einer Verletzung. Auswertung von Hirnwassergehalt (BWC) bei 48 h nach 60 min MCAO Induktion ergab , dass conivaptan verabreicht IV (0,2 mg / Tag) Hirnödem in beiden ipsilateralen und contralateralen Hemisphären deutlich reduziert, (2A). Im Gegensatz dazu IP-Behandlung von conivaptan von 0,2 mg Bolus gescheitert täglich ähnlich positive Auswirkungen auf Schlaganfall-evozierte Hirnödem (2B) zu erzeugen. Bestätigung der Conivaptan Wirkung auf Plasma und Urin-Osmolalität wurde bei allen Versuchstieren am Endpunkt des Experiments erreicht. Conivaptan behandelt IV oder IP erhöhten Plasma und verminderte Urin Osmolalität in allen Mäusen 4 Plasmaosmolalität Werte bei Mäusen waren wie folgt:. 313 ± 4,4 mOsm / kg (Vehikel, IV) vs. 355 ± 7.5 * mOsm / kg (Conivaptan, IV) wie bereits veröffentlicht, 4 und 340 ± 7,7 mOsm / kg (Vehikel, IP) vs.383 ± 8,8 * mOsm / kg (Conivaptan, IP). Urinosmolalität Werte bei Mäusen waren wie folgt: 1210,6 ± 13,4 mOsm / kg (Vehikel, IV) gegenüber 595,0 ± 57,4 * mOsm / kg (Conivaptan, IV), wie bereits veröffentlicht, 4 und 1535,0 ± 80,9 mOsm / kg (Vehikel, IP) vs. 242,0 ± 23,2 * mOsm / kg (Conivaptan, IP). Alle präsentierten Daten als Mittelwert ± SEM, * p ≤0.05 vs. Kontrolle entspricht. 
Abb . 1: Schematische Darstellung des experimentellen Schlaganfallmodell Installation IV - Katheter und repräsentative Infarktvolumen bei 48 Stunden nach einem Schlaganfall Position des Filaments (dargestellt in blau) vorbeschichtet mit Harz (grün) in der linken Arteria carotis interna (ICA) während der Okklusion (A) und der Reperfusionszeit (B). Korrekte Position des flexiblen Schlauchspitze in die linke Jugularvene (C). Experimental Schlaganfall bei Mäusen produziert Infarktvolumen in der ipsilateralen Hemisphäre bei 48 Stunden. Die Mäuse wurden nach 48 h nach MCAO getötet und Gehirne wurden entfernt, wie in dem Protokoll beschrieben (Schritte 3,1-3,3). Die Gehirne wurden in 2 mm dicke Schnitte geschnitten und gefärbt mit TTC (D). 1D wurde von Zeynalov, E. und Dore, S. 2009 aus dem ursprünglichen Artikel geändert 10 Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen. 
Abbildung 2: Wirkungen von kontinuierlichen intravenösen (IV) und intraperitoneal (IP) Conivaptan (0,2 mg / Tag) Behandlungen auf Schlaganfall-evozierte Hirnödem Conivaptan IV Behandlung für 48 Stunden verabreicht wurde.. Conivaptan Behandlung verabreicht IV reduziert post-ischämische Hirnödem in der ipsilateralen und kontralateralen hEmispheres (A). 2A wurde von dem ursprünglichen Artikel von Zeynalov et al modifiziert. 2015. 4 Conivaptan IP - Behandlung für 48 Stunden ausgefallen Hirnödem durch experimentellem Schlaganfall zu reduzieren, n = 10 in jeder Gruppe. Mäuse unterzog MCAO mit der Reperfusion wie in dem obigen Protokoll (Schritte 1.1.1-1.15.3) beschrieben. Dann Injektionen IP von conivaptan (0,2 mg) wurden sofort verabreicht, bei 22 h und 46 h Reperfusion. Die Mäuse wurden getötet; Die Gehirne wurden in dem Ofen entnommen und getrocknet, wie in dem Protokoll beschrieben (Schritte 3.1-3.4). (B) Alle Daten werden präsentiert als Mittelwert ± SEM, * p <0,05 vs entsprechende Kontrolle. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
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Discussion
Diese Studie hat wichtige Wert für die präklinische Schlaganfallforschung. Diese Studie zeigt, dass eine kontinuierliche intravenöse Infusion von conivaptan (0,2 mg / Tag) nach experimentellem Schlaganfall bei Mäusen effizient Hirnödem nach 48 Stunden der Behandlung reduziert. Die Wirkung der IP-Injektion der gleichen Dosis von Conivaptan auf Hirnödem wurde ebenfalls untersucht. Conivaptan Behandlung sowohl von IV und IP-Routen erzeugt aquaresis in Mäusen, wie durch: 1) Erhöhung der Plasma Osmolalität leicht über physiologischen Ebenen; und 2) Abnahme der Urinosmolalität durch Verstopfung von Wasser Reabsorption in der Niere. Daher basiert auf den Behandlungsergebnisse berichten wir, dass die IV Liefermethode weitere wichtige positive Auswirkungen auf die Schlaganfall-evozierte Ödembildung hat.
Unsere wichtigste Ergebnis ist, dass IV-Behandlung für conivaptan bessere Wirkung auf Hirnödem Linderung als die IP-Route hergestellt. Conivaptan ist ein kombiniertes V1a und V2-Rezeptor-Antagonist, für den klinischen Einsatz zu correct Hyponatriämie, Blutvolumen und der Osmolalität. 16 Conivaptan wurde Hyponatriämie bei Patienten mit verschiedenen Bedingungen zu korrigieren. 17 gezeigt Klinische Verfügbarkeit von conivaptan schlägt vor , dass die Explorations- im Zusammenhang mit Hirnödem in schnellen Bank-zu-Bett - Übersetzung zur Folge haben kann. Die Verwendung von experimentellen selektive Blocker V1a Rezeptor geliefert intracerebroventricularly ist nachgewiesen worden , post-ischämische Bildung Hirnödem von anderen Forschern beschrieben zu reduzieren. 3,18 Doch weder das Medikament in diesen Studien verwendet noch die Behandlung Weg für die Medikamente schlägt mögliche klinische Anwendung in der nahe Zukunft.
Mechanismen, durch die Hirnischämie und AVP Ursache Hirnödem sind komplex. Allerdings sind einige wichtige molekulare Spieler Natrium und Chlorid Co-Transporter 19,20 und V1a - Rezeptoren , die in die Gefäßwände an der BBB - Schnittstelle lokalisiert sind. Der V2-Effekt von conivaptan blockiert ist verantwortlich für die Ausscheidung von excess Wasser durch die Niere und Erhöhung des Blut Osmolalität, die auch die Entwicklung von Hirnödem kann helfen zu verhindern. 21 Diese Mechanismen können noch im Spiel sein , wenn conivaptan direkt in den Kreislauf zugeführt wird , um Gewebebarrieren zu vermeiden , die conivaptan Verfügbarkeit reduzieren. Allerdings Rechtfertigung der Dosis und der Behandlungsdauer wurde auf zuvor veröffentlichten Beobachtungen. 4 Es bleibt zu prüfen , ob conivaptan die ischämische Stelle des Gehirns nach der Verletzung induzierten Abnahmen der regionalen Blutfluss erreicht. Es muss auch untersucht werden, ob das Gehirn ausreichende Menge an Conivaptan empfängt die erwünschte lokale Effekte, wie beispielsweise Verhinderung von Vasokonstriktion durch Blockieren V1a-Rezeptoren in Hirnarterien zu erzeugen.
Das experimentelle Protokoll wurde entwickelt, um die Frage der Wahl für die Behandlung Route Conivaptan zu adressieren. Basierend auf den Ergebnissen liefert die Studie eine starke Unterstützung für die IV-Route von conivaptan administration. Allerdings sind die meisten kritischen Schritte des Protokolls erforderlich festgelegt werden und fein abgestimmt, um signifikante Unterschiede in der Behandlungsergebnisse nach einem Schlaganfall bei Mäusen zu erkennen. Zu diesen Schritten sind: 1) die Dauer der MCAO (60 min); 2) die tägliche Dosis (0,2 mg) und die Infusionsgeschwindigkeit (1,5 ml / kg / h); und 3) die Dauer der Behandlung (48 h). Dauer der MCAO bestimmt den Grad des ischämischen Insult, die für das Protokoll äußerst wichtig ist, weil es das Hirngewebe irreversibel schädigt. Zu schweren einer Verletzung wäre es schwierig für das Tier für 48 Stunden, um zu überleben zu machen, oder die Tiere weniger auf conivaptan Behandlung gegen Hirnödem werden könnte. Auf der anderen Seite, die Dauer der MCAO weniger als 60 min einen ischämischen Insult in der Maus zu induzieren, und daher würde unzureichend sein, Hirnödem nicht erzeugen. Die Dosis und die Dauer der Behandlung wurden an den FDA Empfehlungen für Conivaptan Verwendung ausgewählt basiert. 16 Es wurde jedoch berichtet, dassdie menschliche Dosis für conivaptan war nicht effizient bei Mäusen Hirnödem nach einem Schlaganfall zu reduzieren. Daher hatte die Dosis 10mal für Mäuse erhöht werden, was einen signifikanten Schutz gegen post-ischämische Hirnödem induziert. 4 Die Bedeutung der richtigen Infusionsrate zu wählen ist , dass es die Gesamtblutvolumen beeinflussen können, Blutdruck und interstitieller Flüssigkeitsansammlung , wenn die Rate übersteigt bei weitem die vorgeschlagene Rate. Allerdings Messungen der Gesamtblutvolumen und Blutdruck wäre sehr informativ sein.
Chirurgische Induktion des MCAO ist ein invasives Verfahren, und erfordert eine genaue Aufmerksamkeit auf alle Schritte des Protokolls, und es ist wichtig, die Tipps zur Fehlerbehebung für die Technik kennen zu lernen. Einige unerwartete chirurgischen Komplikationen, wie übermäßige arterielle Blutung aufgrund eines versehentlich zerrissen Arterie reduzieren die Erfolgsrate für das Experiment und erhöhen die Sterblichkeit. Jedoch kann venösen Blutung durch leichten Druck gestoppt werden wit einem sterilen Schwamm.
Dieses Protokoll beschreibt ein einseitiges Induktion von Hirnischämie, was impliziert, dass der MCA-Okklusion entweder auf der rechten oder der linken MCA erzeugt wird. Jedoch kann das Protokoll in Abhängigkeit von der bevorzugten Seite der MCA - Okklusion des Chirurgen und der IV - Katheter Installation geändert werden. Figur 1 Diagramm zeigt eine Zeichnung der kritischsten Teile des MCAO Verfahren, Figur 1A und B, die IV - Katheter Installationsprotokoll, Figure 1C und die repräsentativen Hirnschnitten von MCAO-induzierten Gehirninfarkt am Endpunkt des Experiments (48 h), wie zuvor veröffentlicht, 10 1D. Obwohl das Diagramm und die repräsentativen Hirnschnitte bedeuten, dass die MCAO auf der linken Seite des Gehirns induziert wurde, rechnen wir nicht mit dramatischen Unterschiede in den Ergebnissen, wenn MCAO auf der rechten Seite des Gehirns, solange Konsistenz während des gesamten en induziert wurdeReifen Studie wird beibehalten.
Während der Erholungsphase nach der Operation und Anästhesie, können die Tiere Not wegen postoperativer Schmerzen und schwere neurologische Defizite erleben. In vielen Fällen kann die postoperative Schmerzmanagement unter Verwendung von nur Lokalanästhetika wie Bupivacain 0,5% begrenzt werden. Schlaganfall aufgrund zerebraler Insult beim Menschen sowie experimentellem Schlaganfall bei Mäusen beinhaltet pathophysiologischen Faktoren wie Entzündungen, Hirninfarkt und Hirnödem. 9 Diese pathophysiologischen Ereignisse durch molekulare Schlüsselspieler wie Zyklooxygenasen beschäftigt sind (COX) 13 und G-Protein verwandten Rezeptoren. 22 Interferenz mit den molekularen Mechanismen , die COX beinhalten kann durch die NSAID Medikamente verursacht werden, 13 , wenn sie in diesen Einstellungen verwendet wurden. Opioide wirken auf ihre Rezeptoren , die 12 bis G-Protein und zweiten Boten verbunden sind und pathophysiologischen Folgen von Schlaganfall verändern können, 11 und das Ergebniss dieser Studie. Diese Faktoren begrenzen Verwendung von Schmerzmitteln bei Mäusen postoperativ.
Zusammenfassend untersucht unsere Studie die Möglichkeit, conivaptan als weitreichende Ziel von Repurposing. Unser Tiermodell der experimentellen Schlaganfallinduktion durch kontinuierliche intravenöse Infusion von conivaptan gefolgt wurde, die ihr Potenzial vorschlagen Einsatz bei Schlaganfall-Patienten gezeigt, um konsistente Ergebnisse zu produzieren. Genauer gesagt, haben wir gezeigt, dass das Modell der kontinuierlichen IV Behandlung von conivaptan nach einem Schlaganfall sekundären Hirnschädigung zu verhindern, kann für die präklinische Studie an Mäusen verwendet werden. Diese Studie sollte eine alternative Anwendung von conivaptan Behandlung als zusätzliches Instrument zu bieten Hirnödem bei Mäusen nach einem Schlaganfall, weil schnelle Übersetzung in klinischen Studie kann für Intensivpatienten lebensrettend sein.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Acknowledgments
Wir danken Swedish Medical Center für die Finanzierung und Einrichtungen. Wir danken auch Craig-Krankenhaus für die großzügige Verwendung von Laborfläche.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Heated Pad | K&H Manufacturing Inc | 1060 | |
| Temperature Monitor with Rectal Probe | Physitemp | 7029 | |
| Silk Suture Spool, 6-0 | Surgical Specialties Corporation | SP114 | |
| Silk Suture on a Needle, 3-0 | Ethicon | 1684G | |
| Nylon Suture, 7-0 | Ethicon | 1696G | |
| Dental Resin Polysiloxane with Hardener | Heraeus Kulzer | 65817930 | |
| Microinfusion IV Pump | Kent Scietific | GT0897 | |
| Swivel 22GA | Instech | 375/22PS | |
| Laboratory Tubing, 0.94 mm x 0.51 mm | Dow Corning | 508-002 | |
| Laboratory Tubing, 3.18 mm x 1.98 mm | Dow Corning | 508-009 |
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