Summary
뇌졸중의 병태 생리를 이해하기 위해, 신뢰할 수있는 모델을 사용하는 것이 중요하다. 마우스에서 가장 자주 사용되는 뇌졸중 모델 중 하나를 설명한다 본 논문의 중간대 뇌동맥 폐색 (MCAO) 모델이라 재관류 (또한 관내 또는 필라멘트 봉합사 모델 지칭).
Abstract
스트로크 전세계 주요 사망 원인이며, 장기 성인 장애의 주요 원인 중 하나가되고 있습니다. 뇌졸중의 약 87 %는 원점에서 허혈성하고 중간 대뇌 동맥 (MCA)의 영역에서 발생한다. 현재 전용 식품 의약품 안전청 (FDA)은이 치명적인 질환을 치료하기위한 약물을 승인 조직 플라스 미노 겐 활성제 (TPA)이다. 그러나 만톤 관리를위한 작은 치료 창이 있습니다 (3-6 시간)을, 실제로 그것을받을 환자의 4 % 만 효과가있다. 현재의 연구는 잠재적 인 치료 표적을 발견하기 위해 스트로크 기전을 이해하는데에 초점을 맞춘다. 따라서, 안정적인 모델은 매우 중요하고, MCA 폐색 (MCAO) 모델은 허혈성 뇌졸중의 가장 임상 적 수술 모델로 간주된다 (도 관내 필라멘트 또는 봉합사 모델 지칭) 및 비교적 비 침습적 쉽게 재현 할 수있다. 일반적 MCAO 모델 때문에 특히 생쥐와 설치류 사용이 종에 사용할 수있는 모든 유전 적 변화에. 여기에서 우리는 기술 (비디오에 존재하는) 성공적으로 신뢰성과 재현성 데이터를 생성하는 쥐 (재관류 포함) MCAO 모델을 수행하는 방법에 대해 설명합니다.
Introduction
뇌졸중은 한 사람이 질병으로 매 4 분 죽어으로, 전 세계적으로 죽음의 다섯 번째 주요 원인이다. 80 만 이상의 미국인은 환자에 대한 파괴되지 않는 행정 매년, 고통뿐만 아니라 그 가족. 스트로크 성인 장애의 주요 원인이며, 세출이 가능한 것으로 매우 적은 치료법에도 불구 $ 36.5 억의 순서로 추정된다.
조직 플라스 미노 겐 활성제 (TPA)의 유일한 식품의 약국 (FDA)은 허혈성 뇌졸중에 대한 약물을 허가합니다. 뇌졸중의 발병에서 3~6시간 이내에 환자에게 투여하고, 이러한 경우에 환자 (2)의 4 % 혜택 그러나에만 효과적이다. 따라서, 선 재현성, 임상 적으로 중요한 동물 모델이 질환에 대한 잠재적 인 치료 전략 및 치료의 개발에 도움을 사용하는 것이 필수적이다. 체외에서 점에 유의하는 것이 중요하다 생체 내 모델은 필수적이다.
뇌졸중의 가장 흔한 유형은 전체 뇌졸중의 87 %를 차지 기원 허혈성입니다. 다른 스트로크 뇌출혈 (9 %) 및 지주막 하 출혈 (4 %)이며, 중간 대뇌 동맥 (MCA)에 색전에 의해 가장 자주 발생한다. 이 파괴 될 수있는 뇌를 입력 층류 혈액의 흐름을 발생 MCA의 루트에있는 눈에 띄는 곡선 때문이다. MCA는 가로 세로 홈을 따라 내 경동맥 (ICA) 및 경로에서 발생하는 곳 분기 프로젝트 기저핵 및 전두엽, 정수리 일차 운동 및 감각 피질 포함 측두엽의 측면. 윌리스의 원이되는 후부 대뇌 동맥에 의해 생성된다대뇌 동맥과 후부 통신 동맥에 연결.
MCAO의 관내 필라멘트 또는 봉합 모델은 가장 널리 스트로크 연구에서 사용 중 하나입니다. 그러나,이 모델의 다른 변형 몇 있으며, 이들은 미사 외부 경동맥에 삽입되는지 여부에 기반 3 (ECA를 상기 롱가 방법 지칭), 또는 그것은 (ICA에 삽입되어 있는지 고이즈미 지칭 방법) 4. 필라멘트는 CCA의 절개 출혈 방지하기 위해 제거되는 경우 롱가의 방법에서 영구적 5 연결되어야 ECA 인 반면 고이즈미 방법에있어서, 상기 수술 측의 경동맥 (CCA)을 영구적으로 연결되어야 . 우리는이 훨씬 우수하고 허혈성 뇌졸중의보다 임상 적으로 수술 모델 느낌으로 여기 론가 방법이 사용됩니다. 또한, 특히 롱가 법으로 규소로 만들어진 필라멘트의 사용은 매우 생산종종 불완전 흡장 및 / 또는 지주막 하 출혈 (6)을 생성 화염 무딘 모노 필라멘트, 반대로 재현 MCAO.
관내 필라멘트 방법은 영구적 또는 일시적인 흡장 4,6의 모델로서 사용될 수있다. 과도 모델을 수행하기 위해 필라멘트는 허혈 기간 후에 제거된다 (예를 들어, 30 분, 60 분, 2 시간), 재관류가 일어날 수있다. 이 모델은, 어느 정도는 인간에서 혈전 혈전을 용해시키기 위해 자연 또는 치료 개입 (예를 들어, tPA의 투여) 후 혈류의 복원을 시뮬레이션한다. 영구 모델 필라멘트 단순히 일정 기간 (예를 들면, 24 시간) 장소에 남아 있으므로 더 재관류가 발생하지 않는다. 관내 필라멘트 방법의 다른 장점은 개두술 두개골이 그대로 유지 될 수 있도록 두개 내 압력 및 온도의 변경을 방지하여, 수행되어야 할 필요가 없다는 점이다.
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Protocol
비디오에보고 된이 프로토콜과 실험은 LSUHSC-S 기관 동물 관리 및 사용위원회의 승인을 NIH의 지침을 준수 하였다.
주 : 남자가 C57BL / 6 마우스 25 중량 - 29g이 연구에 사용되었다. 쥐 개별적으로 환기 케이지에서 12 시간 빛 / 어둠 사이클에서 물을 무료로 이용할 수있는 표준 우 펠릿 다이어트를 유지 하였다. 과정은 무균 기법 (예, 멸균 장갑, 멸균 기기)를 사용하여 멸균 조건 하에서 수행한다.
1. 수술 전 준비
- 케타민 (150 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (10 ㎎ / ㎏)의 조합을 사용하여 마취를 유도 복강 내 (IP)을 주입. 마취가 달성되면 5 분마다 10 분 - 처음 발 핀치 때마다 (3)에 의해 마취의 깊이를 모니터링합니다. 동물이 마취 동안, 건조를 방지하기 위해 살균 안 연고를 관리. 케타민의 초기 투여 량 / 자일 라진 보통 AB 지속30-40분 아웃. 발 핀치에 대한 동물의 반응에 의해 확인되는, 필요한 경우 추가의 투여 량으로 투여 될 수있다.
- 온도 조절 열 매트에 누운 위치에 마우스를 놓고 직장 프로브를 사용하여 검증 36.5 ± 0.1 ° C,에서 체온을 유지한다.
- 목 면도하고 70 %의 에틸 알코올로 피부를 소독.
MCA 2. 폐색 (그림 1)
- 아이리스 똑바로 위를 이용한 중심선 경부 절개를하고, 혈관이 노출되도록 연조직 (견인기를 사용하여) 후퇴.
- 미주 신경에 손상을주지 않고 뒤몽의 집게를 사용하여 주변 조직에서 CCA와 ECA를 해부하다.
- 6-0 실크를 사용하여 CCA 주위에 느슨한 매듭을 묶는에 의해 임시 봉합을합니다.
- ECA 주위에 영구 봉합 단단히 선박합니다 (CCA의 분기점에 말초)을 결찰하여로부터 연장 작은 혈관을합니다.
- 봉합 ARO 확인CCA의 분기점에 ECA의 근위 핀클.
- 내부 경동맥 (ICA)와 pterygopalatine 동맥 (PPA) 주변의 미세 혈관 클립을 배치합니다.
- 봄 가위를 해부 마이크로를 사용하여 ECA에 작은 절개를하고 180 μm의 실리콘 스쳐 모노 필라멘트를 삽입합니다. 필라멘트 쉽게 조작 가능한 영구 봉합에 상처가 근접합니다.
- 삽입 된 필라멘트와 ECA 주위에 임시 봉합을 강화하고 미세 혈관 클립을 제거합니다.
- 영구, 말초 봉합과 봄 가위를 해부 마이크로를 사용하여 필라멘트의 엔트리 포인트 사이의 ECA를 잘라.
- MCA에 -합니다 (CCA의 분기점을 넘어 10 μm의. 약 9) 저항이 느껴질 때까지 ICA를 통해 필라멘트를 안내합니다.
참고 : 필라멘트의 대부분이 여전히 표시되는 동안 너무 많은 저항이 느껴지는 경우는, 필라멘트는 PPA를 입력 할 수 있습니다. 이 경우, 부드럽게 고름, 분기점으로 다시 필라멘트를 당겨전방 ICA 사용 듀 핀셋으로 H이고, 그것이 ICA에서 가시화 될 수있을 때까지, 필라멘트를 전진.
3. 재관류
- 30 분 폐색 기간 후에 다시 부드럽게 당겨 듀 핀셋을 사용하여, 필라멘트를 분리하고 ECA의 개방 단부 주위에 봉합 고정.
- 조심스럽게 CCA를 통해 재개 뒤몽 포셉과 혈액 흐름을 사용하여 합자를 풀어 CCA 주위에 임시 봉합을 제거합니다.
- 연속 수술 봉합과 절개를 닫습니다. 피부의 폐쇄 중 연속적 또는 중단 봉합에 의해 달성 될 수있다. 스킨 스테이플은 허용 방법입니다.
- 볼륨 보충으로하고 진통제 카프로 펜과 염분 피하의 1 ml의 쥐를 주입 (5 밀리그램 / kg, 사우스 캐롤라이나) 수술, 추가로 통증이 다시 웅크 리고 앉게 등이 필요하다 표시 간판, ungroomed 코트에서 통증과 불편 완화를 위해, 감소 활동, 이상자세, 식욕 감소했다.
- 온도 컨트롤러를 사용 규제 열 램프를 사용하여 가열 된 30 ° C를 케이지에 마취에서 회복에 걸쳐 쥐를 관찰하고 식습관을 장려하기 위해 새장 바닥에 페트리 접시에 으깬 우를 배치합니다. 마우스는 재관류 기간 동안 케이지에 하나씩 보관됩니다.
4. 위장 수술
- 모노 필라멘트의 삽입없이 동일한 방법에 따라 마우스.
5. 수술 후 신경 학적 점수 (표 1, 그림 2)
- 일반 신경 학적 평가를 18 점의 점수 시스템을 사용하여 적절한 재관류 기간 후에 마우스를 평가; 모터; 감각; 감수. 높은 신경 학적 점수는 신경 기능 저하에 대응한다.
참고 : 걸을 응답과없는 판단 마우스는 안락사됩니다. 인간 안락사 다른 기준보다 큰 20 %의 중량 손실을 포함 호흡 디수술 주변 스트레스, 감염. 공동이 챔버를 경추 탈구 또는 개흉술 것 죽음을 확인 안락사 물리적 방법에 사용된다.
측정 뇌 경색 볼륨 6. (그림 3)
- 마취가 달성되면, 5 분 및 10 분마다 - 케타민 (150 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (10 밀리그램 / kg) 초기 발 핀치마다 (3)에 의해 마취 IP 모니터 깊이 주입의 조합을 사용하여 마취를 유도한다.
- 부정사 위치에 마우스를 놓고 조리개를 바로 가위를 사용하여 복막 뒤에 목에 복부의 피부를 잘라.
- 뒤몽의 집게를 사용하여 흉골을 들어 올려 가슴을 노출 갈비뼈를 잘라.
- 심장을 노출 좌측 및 지혈 두 쌍을 이용하여 상자의 오른쪽을 연다.
- 좌심실에 5 ML의 주사기에 부착 된 26 G 바늘을 삽입하고 우심방를 잘라. 실온 생리 식염수 또는 포스으로 관류TE 완충 식염수 (PBS) 유체가 클리어 될 때까지 (일반적으로 3-5 분).
- 아이리스에게 바로 위 및 뒤몽의 집게를 사용하여 조심스럽게 뇌에서 두개골을 제거합니다.
- 후각 전구 및 뇌 행렬에 맞도록 면도날을 사용하여 소뇌를 잘라. 심지어 세그먼트로 뇌를 슬라이스이 행렬을 사용합니다. 멋진 조직을 유지하기 위해 사용하기 전에 행렬을 진정. 매트릭스로 뇌를 놓고 얼음에 설정합니다.
- 두 개의 면도날을 사용하여 2mm 관상 세그먼트로 뇌를 슬라이스. 위로부터 2mm 시작 면도날을 사용하여 상기 제 절단하고 대신이 면도날을 떠난다. 제 뒤에 잘라 다른 2mm를 확인합니다. 부착 된 조직과 첫 번째 면도날을 제거합니다. 모든 조직이 분리 될 때까지이 과정을 반복합니다.
참고 : 4가 있어야합니다 - 완료되면 5 세그먼트. - 다음 얕은 물 목욕 (A)에 배치되어 2 % 2,3,5- triphenyltetrazalium 클로라이드 (TTC)를 포함하는 24 웰 플레이트에 세그먼트를 배치20 분 동안 t 37 ° C를. 개별 웰에 각각의 세그먼트를 배치하는 것은 그들이 절단 된 순서에 유지하도록 돕는다. TTC의 솔루션은 완전히 조직 세그먼트를 커버 있는지 확인합니다. 10 분 모든 조각을 넘겨 후.
- 새로운 24- 웰 플레이트의 웰에 10 % 포르말린 소량을 배치하고 절단 된 순서로이 플레이트 세그먼트를 전송.
- (1.57 NIH 이미지 소프트웨어) 6 컴퓨터로 세그먼트를 스캔 ImageJ에 분석 소프트웨어를 이용하여 전체 뇌 조각 (6)의 비율로 경색 크기 분석.
- 면적 측정을 생성하기 위해 경색 영역을 설명합니다. 다음 지역을 결정하기 위해 전체 반대쪽 반구를 측정한다. 반대쪽 반구의 경색 면적의 영역을 분할하고, 경색 량을 결정하기 위해 100을 곱한다.
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Representative Results
마우스는 재관류의 기간 다음에 30 분 MCAO에 의한 뇌 허혈 (그림 1) 시행 (24 시간 및 1 주당 여기에 제시,하지만 재관류의 길이는 변화 될 수있다). MCAO 동안 사망률 (약 2 %)을 최소화했다. 포스트 허혈 (제 24 시간 이내) 사망률은 약 26 %였다.
레이저 도플러 flowmetry는 전 MCAO / 재관류 후 MCA 영토에 혈액의 흐름 관류를 확인하기 위해 사용되었다. (4) 임시 CCA 넥타이는 필라멘트 제거 및 발생하는 재관류에 대한 국소 빈혈의 30 분 이후에 출시 될 때, 서지가 있음을 분명히 보여줍니다 그림 <기준 관류 (즉, 이전 수술) 재관류에 5 분의 100 %에 도달 관류,있다.
뇌졸중 발병 (이전 경색 량의 측정에) neurol 후 24 시간일반적으로, 감각, 모터 및 고유 수용성 적자에 관한 ogical 점수는 (표 1)을 평가 하였다. 이 평가 시스템은 목적 ( '예, 아니오') 평가를위한 기준을 제공하기위한 것입니다.이 그림은 11.50 ± 1.5 (24 시간에서 마우스에 대한 점수 (N = 27)이 12.56 ± 0.7이었고, 1 주일 후 높은 남아 있음을 보여줍니다 ). 높은 신경 학적 점수는 신경 기능 저하에 대응한다.
경색 볼륨은 가짜 동물보다 큰 24 시간, 즉,의 신경 학적 점수 유사한 패턴을 반영. 1 주 후 뇌졸중 (28.5 ± 1.9 %)을 높게했다 : 24 시간 MCAO 후, 마우스는 큰 경색 볼륨 (15.9 ± 2.6 % 그림 3)이 있었다.
그림 1 : 중간 대뇌 동맥 폐색의 위치를 보여주는 회로도(MCAO) 수술과 뇌 순환의 큰 혈관의 혈관이. A. 수술 MCAO 외부 경동맥에 다음 근위 중간 경동맥에 필라멘트의 삽입을 통해 달성된다. BG. MCAO을 유도하는 단계. 앞쪽에 통신 동맥 (ACA); 중간 대뇌 동맥 (MCA); 통신 동맥 (PcomA)를 후부; 뇌동맥 (PCA)를 후부; 기저 동맥 (BA); 경동맥 (ICA); 외부 경동맥 (ECA); pterygopalatine 동맥 (PPA); 내부 경동맥 (ICA). (스미스 등. 허가를 수정, 참조 # 5.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2 :. 18 점 스트로크 점수이 comprehensi적이 스트로크 점수는 일반적으로, 감각, 모터 및 뇌졸중 다음 마우스 동작의 고유 수용성 측면에서 기능 개선을 평가합니다. 데이터는 ± SEM 평균입니다. * P <0.05. N = / 그룹 3 마우스. 데이터는 ANOVA를 이용하여 분석 플러스 페로 니 사후 테스트했다. (스미스 등. 허가를 수정, 참조 # 5.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3 :.. MCAO 마우스 후 C57BL / 6 마우스 24 시간의 경색 볼륨 제거 단면 2 %로 염색 한 30 분 MCAO 및 24 시간 또는 재관류 A) 두뇌의 1 주령에 실시 하였다 2,3,5- 트리 페닐 테트라 졸륨 클로라이드 (TTC). 조직 생활에서 탈수소 효소는 효소 1,3,5- 여행에 TTC를 감소적색이지만, 허혈성 조직의 효소 작용 아니므 조직 흰색 남아있다. B)의 그래프는 뇌졸중 갖는 마우스에서 경색 량의 증가를 나타낸다 henylformazaon (TPF). 데이터는 ± SEM 평균입니다. ** P <0.002, **** P <가짜 대 0.0001; N = / 그룹 4 쥐. 데이터는 ANOVA를 이용하여 분석 플러스 페로 니 사후 테스트했다. 스케일 바 = 1cm (스미스 등. 허가를 수정, 참조 # 5.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4 :. 관류 MCAO 및 재관류 마우스 전반에 걸쳐 MCA 영토의 30 분 MCAO을 실시하고, <5 분 재관류. 기준선은 100 %로 표준화 하였다. expe의로조직 관류는 전혀 발생하지 않을 때 cted, 재관류 기간, 재관류 5 분, 즉 MCAO,보다 높았다. 데이터는 ± SEM 평균입니다. * P <0.05. N = / 그룹 3 마우스. 데이터는 ANOVA를 이용하여 분석 플러스 페로 니 사후 테스트했다. (스미스 등. 허가를 수정, 참조 # 5.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
표 1 : 신경 학적 채점 시스템 테스트 각각에 대한 예에 답변을 제공 한 점.. (18) 7,8 중 마크.
| 테스트 | 간단한 설명 | 그것은 무엇을 테스트합니까? | 참조 |
| 모리스 물 미로 | 설치류는 숨겨진 플랫폼에 물에서 탈출하는 법을 배워야 오픈 필드 물 미로 절차 | 공간 기억, 이동 제어,인지지도 | (19) |
| 로타로드 (rotarod) | 설치류 앞으로 걸어 가야 수평 회전로드되도록 떨어지지 않도록 | 모터 조정, 밸런스, 그립 강도 | (20) |
| 폴 | 설치류가 새장 아래로 자신의 길을 만들어으로 슬라이딩 또는 하강의 기둥에 넣고 관찰 | 피질골의 손상으로 인한 운동 장애 | 21 22 |
| 보행 분석 | 설치류는 유리판을 통과 그들의 발 인쇄는 움직임을 검사 캡처 | 걷기 패턴 (발 압력, 보폭 길이, 폭, 주파수, 발가락 확산, 보행 각도, 신체 회전)모터 조정 | 23 24 |
| 스티커 라벨 테스트 | 설치류의 앞발의 털이 부분에 적용되는 테이프의 스트립 제거 각각의 발, 접촉의 순서, 제거의 시간 및 순서를 연락하는 시간을 기록합니다 | 앞발 감성과 감각 적자 | 25 26 |
| 모서리 | 30 ° 각도를 형성하는 두 기판 사이에 위치 설치류; 코털 (vibrissae)의 양측 자극 코너와 설치류의 배후에 깊은 입력하고 다시 켤 때 열린 끝을 얼굴 | 신경 발달 장애 및 반복적 인 행동 (감시 반대 방향에 비해 한 방향으로 회전) | 27 28 |
| 실린더 | 벽에 대해 양육하여 기록하면서 설치류는 앞다리 활성을 갖는 유리 실린더에 배치 | 전위의 비대칭과 poststr 평가두면 사지 사용 | (28) |
| 계단 | 유혹 더블 계단 상자에 플랫폼에 배치 설치류; 설치류는 식품 계단 미끼를 수집하기까지의 이동을 촉진하기 위해 제한 | 독립적으로 감각 능력을 필요로하는 각각의 앞다리에 대한 능력에 도달, 손재주, 모터 조정 | 25, 29 |
| 사닥다리 | 설치류는 케이지에 도달하는 수평 사다리를 건너 도보; 기록 사다리를 가로 질러 걷는 동안 발은 미끄러 져 | 운동 중 발 결함; 앞다리와 뒷다리 기능 코디 | (30) |
표 2 : 쥐 행동 테스트의 예.
| 다음과 같이 GLP에 대한 제안은 다음과 같습니다 |
| - 행정의 모델이 선정 된의 구체적인 내용 (예를 들어, 고이즈미 대 롱가), 명확하게보고 변형, 연령, 성별, 체중. |
| - 이중 맹검 방식으로 수행 연구. |
| - 전력 분석이 보도했다. |
| - 연구에 포함 및 제외 기준은 이전 연구하기로 결정하고,보고했다. |
| - 고통, 통증이나 질병의 징후 매일 (기본 외관, 체중과 행동) 모니터링 동물. |
| - 연구에서 제외 동물의보고. |
| - 그룹으로 동물의 무작위. |
| - & #(160); 부정과 긍정적 인 결과의보고. |
| - 수술, 마취, 체온 및 혈액 가스 길이보고. |
| - 어떤 경우에, 사용 환경 농축의보고. |
표 3 : 좋은 실험실 연습을위한 제안.
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Discussion
전에 20 년의 개념 때문에, 필라멘트의 삽입을 포함하는 인간의 뇌졸중에 대한 MCAO 모델은 연구의 거대한 숫자에 사용되어왔다. 이는 그 스트로크 (즉, 뇌졸중)의 가장 일반적인 형태로 임상 적으로 일어나는 모방한다는 사실에 주로있다. 선조체는 대뇌 피질의 허혈보다 더 민감하고, 같은 허혈성 시간의 길이는 선조체 및 배면 측면 피질 모두 영향하거나 선조체할지 여부로 번역된다. 두 경색 재관류 시간은 적절히 변경 될 수 있으며, 이는 본 연구자에게 더 큰 경색에 일과성 뇌허혈증 (TIAS)과 관련된 병리학 적 효과를 연구 할 수있는 능력을 제공한다.
수년 동안 변형 및 MCAO의 필라멘트에있어서의 문제는 절차의 중요성은 감염 9의 위험을 피하기 위해 무균 조건에서 수행되는 것을 도시하고있다. 결과는 다를 수 있습니다설치류 종 사이에, 스트레인 10, 11, 무게, 마취제 사용 (해부학 적 변화가 나타났다),하지만 여기에 제시된 결과의 경향은 MCAO이 수행되는 다른 실험실에 반영 될 가능성이 높다. 고려해야 할 다른 중요한 단계는 체온, 혈압, 혈액 가스이다. 잘 저체온증 12 심한 결핍과 연관된 작은 병변 고열증 13로 표시되면서 체온, 신경 손상에 영향을 미치는 것으로 설정된다. 36.5 ℃의 체온을 유지하기 위해 예로서, 온도, 열 패드를 동물의 온도 조절기의 사용을 통해, 예를 들면, 측정 제어되어야한다. 볼륨 보충과 케이지의 바닥에 연화 우를 배치하여 식사의 격려도 관찰 할 추가 요소입니다. 혈압과 가스 6,14 모두 용이하게 측정 될 수 COMMERC에서 쉽게 구할 장치를 이용하여 모니터링IAL 공급 업체.
MCAO 기술의 한계 적절히 손상없이 동맥에서 미주 신경 해부 효과적으로 뇌졸중을 유도 할 수있는 능력뿐만 아니라, 마우스의 생존율뿐만 영향을 미칠 수있는 PPA로 필라멘트를 전진 회피 포함한다. 여기에 설명 된 롱가 법을 이용하는 경우 생체 MCAO 방법의 대안에 대하여 가장 중요한 의의 생존율이다. 우리는 또한이 모델 번 마스터, 뇌졸중의 치료에 잠재적 인 치료 대상 연구를위한 훌륭한 도구을 증가 백혈구 - 내피 세포 상호 작용을 증가 경색 볼륨에 해당하는 것으로 나타났습니다.
우리는 어떤 여기에보고되지 않았지만, 행동 검사의 수는 (표 참조 이러한 모리스 물 미로, 로타로드 (rotarod), 극 테스트, 보행 분석, 스티커 라벨 시험, 코너 테스트, 실린더 테스트, 계단 테스트 및 사다리 시험으로 수행 할 수 있습니다자세한 내용 및 참조) 2. 가짜 동물이 행동 테스트를 완료 아무런 문제가 없다; 그러나, 뇌졸중 동물은 훨씬 덜 성공적으로 테스트를 수행합니다. 이것에 이어, 토론의 한 영역은 환경 농축하지 만 MCAO 모델의 재현성에 영향을 미치는지 여부뿐만 아니라, 그 행동 검사 (15)의 결과에 영향을 줄 것인지 여부이다. 이 불분명하지만, 실험실 내에서이 표준화 가치 및 연구 내내.
스트로크의 결과를 측정 할 수 다른 테스트의 과다가 있습니다. 우리는 혈류 측정에 대한 심층적 인 18 점 신경 학적 평가 점수에 대한 레이저 도플러의 고용을 제시하고, 또한 볼륨 측정 경색있다. 그러나, 추가 옵션은 영상으로도 유용하다. 우리는 일상적으로 세르 내 (염증 반응의 특성) 세포의 상호 작용을 연구하는 생체 내에 형광 현미경의 사용 6을 사용마취 된 동물 5,6,16에서 실시간으로 bral 미세. MCAO 및 재관류는 가짜 동물 5,6,16 대 고조 뇌 염증 반응을 생산하고 있습니다. 그들은 임상 적 관련성 연구 길이의 기회를 제공하는 등의 자기 공명 영상 (17)과 양전자 방출 단층 촬영 (18)와 같은 다른 영상 방식도 사용될 수있다.
뇌 조직의 조직 학적 분석, 플라즈마 혈청 샘플을 주기적들은 뇌졸중의 병태 생리 학적 반응의 추가 특성화를 허용으로 수행하는 메커니즘이 관여 할뿐만 아니라, 아마도 더 중요한 것은 연구자 결과에서 화합물의 효과를 연구 할 수 있도록해야 뇌졸중, 따라서이 쇠약과 파괴적인 질환의 잠재적 인 치료 목표에 대한 중요한 데이터를 제공한다. 마지막으로, 우리는 연구자뿐만 아니라 가장 적절한 스트로크 모델 바을 고려하는 것이 매우 좋습니다 생각그들의 연구에 대한 요구 사항에 나오지도하지만, 또한 GLP ( "좋은 실험실 연습") 강제한다. GLP 제안은 표 3을 참조하십시오.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Male C57BL/6 mice | Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME | #000664 | |
| Ketamine Hydrochloride | Morris & Dickson, Shreveport, LA | 67457-108-10 | |
| Xylazine | Akorn, Inc, Lake Forest, IL | NADA# 139-236 | |
| DC temperature control system | FHC, Bowdoin, ME | 40-90-8D | |
| Mini rectal thermistor probe | FHC, Bowdoin, ME | 40-80-5D-02 | |
| Heating pad | FHC, Bowdoin, ME | 40-90-2-06 | |
| Clippers | Amazon, Bellevue, WA | #64800 | |
| 70% ethanol | Worldwide Medical Products, Bristol, PA | #51011023 | |
| Dissecting microscope | Olympus, Center Valley, PA | SZ40 | |
| Iris scissors (straight) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 11251-20 | |
| Dumont forceps (45° bent tip) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 11297-00 | |
| Micro vessel clip | Fine Science Tools, Foster City, CA | 18055-05 | |
| Micro dissecting spring scissors (straight) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 14088-10 | |
| Retractors (blunt) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 18200-11 (Helen used 17022-13) | |
| Cotton tipped applicators | Fisher Scientific, Waltham, MA | 23-400-100 | |
| Gauze sponges | Covidien, Mansfield, MA | #9023 | |
| 7-0 silk braided surgical suture | Braintree Scientific, Braintree, MA | SUT-S103 | |
| 0.9% sodium chloride | Morris & Dickson, Lake Forest, IL | 0409-4888-20 | |
| 6-0 medium MCAO suture (silicon rubber coated monofilament) | Doccol Corporation, Sharon, MA | 6023PKRe | |
| Sofsilk 6-0 silicone coated braided silk | Covidien, Mansfield, MA | SUT-14-1 | |
| Carprofen | Pfizer, New York, NY | NADA# 141-199 | |
| Puralube | Dechra, Norwich, UK | NDC 17033-211-38 | |
| Physitemp temperature controller | Harvard Apparatus, Holliston, MA | TCAT-2AC | |
| Heat lamp | Harvard Apparatus, Holliston, MA | HL-1 | |
| Laser doppler probe | AD Instruments, Colorado Springs, CO | MSP100XP | |
| 24-well plates | Fisher Scientific, Waltham, MA | #353226 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Life Technologies, Carlsbad, CA | 20012-050 | |
| Single edge razor blades | Fisher Scientific, Waltham, MA | 12-640 | |
| 2,3,5-triphenyltetrazalium chloride (TTC) | Sigma Aldrich, St. Louis, MO | T8877-50G | |
| Mouse brain matrix slicer | Braintree Scientific, Braintree, MA | BS-A 5000C | |
| Water bath | VWR, Radnor, PA | #182 | |
| 10% formalin | Sigma Aldrich, St. Louis, MO | HT501128-4L | |
| ImageJ analysis software | NIH, Bethesda, MD | free download | |
| Retractor | Medical Device Purchase, Newcastle, CA | MP-740 |
References
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