Summary
A fim de compreender a patofisiologia de acidente vascular cerebral, é importante o uso de modelos fiáveis. Este documento descreve um dos modelos de AVC mais utilizados em camundongos, denominado o meio modelo de oclusão da artéria cerebral (MCAo) (também denominado o filamento intraluminal ou modelo de sutura) com a reperfusão.
Abstract
Acidente vascular cerebral é a principal causa de morte em todo o mundo e continua a ser uma das principais causas de deficiência adultos longo prazo. Cerca de 87% dos acidentes vasculares cerebrais são isquêmicos na origem e ocorrem no território da artéria cerebral média (MCA). Actualmente a única Food and Drug Administration (FDA) aprovou o medicamento para o tratamento desta doença devastadora é o activador do plasminogénio tissular (tPA). No entanto, o tPA tem uma pequena janela terapêutica para a administração (3-6 h), e só é eficaz em 4% dos pacientes que recebem efectivamente ele. A investigação actual centra-se na compreensão da fisiopatologia de acidente vascular cerebral, a fim de encontrar potenciais alvos terapêuticos. Assim, modelos fiáveis são cruciais, e o modelo de oclusão MCA (MCAo) (também denominado o modelo de filamento ou fio de sutura intraluminal) é considerado como sendo o modelo cirúrgico mais clinicamente relevante de acidente vascular cerebral isquémico e é relativamente não invasivo e facilmente reprodutível. Tipicamente, o modelo é utilizado MCAo com roedores, especialmente ratinhos com devidasa todas as variações genéticas disponíveis para esta espécie. Aqui nós descrevemos (e presente no vídeo) como executar com sucesso o modelo MCAo (com reperfusão) em ratinhos para gerar dados confiáveis e reprodutíveis.
Introduction
O AVC é a quinta maior causa de morte no mundo, com uma pessoa morrer da doença a cada 4 minutos. Mais de 800.000 americanos sofrem um AVC a cada ano, o que não só é devastador para o paciente, mas também para as suas famílias. O AVC é a principal causa de incapacidade em adultos ea despesa anual é estimada para ser da ordem de 36500000000 $ 1 apesar de muito poucas opções de tratamento que estão disponíveis.
ativador do plasminogênio tecidual (tPA) é o único Food and Drug Administration (FDA) licenciado droga para acidente vascular cerebral isquêmico. No entanto, isso só é eficaz se administrada a pacientes dentro de 3-6 horas desde o início do acidente vascular cerebral, e, nestes casos, ele beneficia apenas 4% dos pacientes 2. Portanto, é imperativo que reprodutíveis, modelos animais clinicamente relevantes de acidente vascular cerebral são utilizadas para auxiliar no desenvolvimento de estratégias terapêuticas potenciais e tratamentos para esta doença. É importante notar que, in vitro in vivo são essenciais.
O tipo mais comum de acidente vascular cerebral é origem isquêmica, sendo responsável por 87% dos acidentes vasculares cerebrais totais. Outros acidentes vasculares cerebrais são a hemorragia intracerebral (9%) e hemorragia subaracnóide (4%), e são causadas mais frequentemente por uma embolia para a artéria cerebral média (MCA). Isto é atribuível à curva proeminente na raiz da MCA, o que faz com que o fluxo sanguíneo laminar entrar no cérebro a tornar-se interrompida. O MCA surge da artéria carótida interna (ACI) e rotas ao longo do sulco lateral, onde se ramifica e projetos para os gânglios basais e as superfícies laterais do frontal, parietal e lobos temporais, incluindo o motor primário e córtex sensorial. O Círculo de Willis é criado por artérias cerebrais posteriores sendoligado às artérias cerebrais e as artérias comunicante posterior.
O modelo de filamento ou fio de sutura intraluminal de MCAo é um dos mais amplamente utilizado em pesquisa acidente vascular cerebral. No entanto, há um par de diferentes variações a este modelo, e estes são com base em se a filamentos é inserido na artéria carótida externa (ECA, o denominado método de Longa) 3, ou se for inserida na ICA (denominado a Koizumi método) 4. No método de Koizumi, a artéria carótida comum (ACC) no lado da cirurgia deve ser permanentemente presos se o filamento é removido para impedir o sangramento da incisão no CCA, enquanto no método de Longa é o CEA que tem de ser permanentemente presos 5 . Aqui, o método de Longa será usado como nós sentimos que este é um muito superior e um modelo cirúrgico clinicamente mais relevante do acidente vascular cerebral isquêmico. Além disso, a utilização de um monofilamento com ponta de silicone, especialmente com o método de Longa, produz muitoreprodutível MCAo em oposição aos monofilamentos embotados-chama, que frequentemente produzem oclusão incompleta e / ou hemorragia subaracnóide 6.
O método filamento intraluminal pode ser utilizado como um modelo de 4,6 oclusão permanente ou transitória. Para executar o modelo transiente, o filamento é removido após um período de isquémia (por exemplo, 30 min, 60 min, ou 2 horas), e reperfusão é permitido que aconteça. Este modelo, em certa medida, simula o restabelecimento do fluxo sanguíneo após a intervenção espontânea ou terapêutico (por exemplo, a administração de tPA) para lisar um coágulo tromboembólico em humanos. Para o modelo de permanente, o filamento é simplesmente deixada no local por um período de tempo (por exemplo, 24 horas), de modo que não ocorre reperfusão. Outra vantagem do método de filamento intraluminal é o facto de uma craniotomia não necessita de ser executada, permitindo que o crânio para ser deixado intacto e evitando qualquer alteração na pressão intracraniana e da temperatura.
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Protocol
Este protocolo e os experimentos relatados no vídeo foram aprovados pela Comissão de LSUHSC-S Institutional Animal Care e Use e estão em conformidade com as diretrizes do NIH.
NOTA: ratos machos C57BL / 6 ratos pesando 25-29 g foram utilizados neste estudo. Os ratos foram mantidos com uma dieta padrão de comida pellet com livre acesso à água, sob um 12 hr ciclo claro / escuro em gaiolas ventiladas individualmente. O processo será realizado sob condições estéreis, utilizando técnicas de estéril (por exemplo, luvas estéreis, os instrumentos esterilizados).
Preparativos 1. Pré-cirúrgicos
- Induzir a anestesia utilizando uma combinação de cetamina (150 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg) por via intraperitoneal (ip). Monitorizar a profundidade de anestesia por pitada pé inicialmente a cada 3-5 minutos e a cada 10 min uma vez que a anestesia é alcançado. Enquanto o animal está sob anestesia, administrar uma pomada ocular estéril para evitar a secura. A dose inicial de cetamina / xilazina geralmente dura aba 30-40 minutos. Uma dose adicional possa ser administrada, se necessário, o que é verificado pela resposta do animal a uma pitada pé.
- Coloque os ratos em decúbito dorsal em uma esteira de calor temperatura regulada e manter a temperatura corporal a 36,5 ± 0,1 ° C, o que é verificado através de uma sonda retal.
- Raspar o pescoço e desinfectar a pele com álcool etílico a 70%.
2. A oclusão da MCA (Figura 1)
- Faça uma incisão na linha média do pescoço usando Iris tesoura reta e retrair (com afastadores) os tecidos moles para expor os vasos.
- Dissecar o CCA ea ECA do tecido circundante usando uma pinça Dumont sem danificar o nervo vago.
- Faça uma sutura temporária por amarrar um nó frouxo em torno do CCA usando seda 6-0.
- Faça uma sutura permanente em torno do TCE e as embarcações mais pequenas que se estendem a partir dele por força ligadura dos vasos (distais à bifurcação da CCA).
- Fazer um aro de suturaund proximal ECA à bifurcação CCA.
- Coloque um clipe de microvasos em torno da artéria carótida interna (ICA) e da artéria pterigopalatina (PPA).
- Fazer uma pequena incisão na ECA utilizando micro dissecando tesoura primavera e inserir um monofilamento com ponta de silício de 180 mm. Fazer o corte o mais próximo da sutura permanente quanto possível para uma manipulação mais fácil do filamento.
- Apertar a sutura temporário em torno da ECA com o filamento inserido e remover o clipe de microvasos.
- Corte o ECA entre a sutura permanente, distal e o ponto de entrada do filamento utilizando micro dissecando tesoura primavera.
- Orientar o filamento através do ICA até sentir resistência (aprox. 9 - 10 mm para além da bifurcação da CCA) na ACM.
NOTA: No caso de muita resistência é sentida enquanto a maioria do filamento é ainda visível, o filamento pode ter entrado no PPA. Se isso acontecer, puxe o fio de volta para a bifurcação, delicadamente push em frente para os ICA usando uma pinça Dumont, e fazer avançar o filamento até que possa ser visualizado na ICA.
3. A reperfusão
- Depois de um período de oclusão de 30 minutos, remover o filamento puxando-o suavemente para trás usando fórceps Dumont e seguro o fio de sutura em volta da extremidade aberta do TCE.
- Retirar a sutura temporário em torno da CCA, soltando cuidadosamente a ligadura usando Dumont fórceps e fluxo sanguíneo é retomado através do CCA.
- Fechar a incisão com uma sutura cirúrgica contínua. Encerramento da pele pode ser conseguida, quer por suturas contínuas ou interrompidas. grampos de pele são também um método aceitável.
- Injetar ratos com 1 ml de subcutaneamente solução salina como reposição de volume e com os carprofeno analgésicos (5 mg / Kg, sc) para alívio da dor e desconforto do procedimento cirúrgico, sinais que indicam o alívio da dor adicional é necessária incluem corcunda, casaco ungroomed, diminuição da actividade, anormalpostura e diminuição do apetite.
- Observar ratinhos toda a recuperação da anestesia numa gaiola 30 ° C aquecida utilizando uma lâmpada de aquecimento regulada usando um controlador de temperatura e colocar Chow triturada numa placa de Petri sobre o chão da gaiola para encorajar a alimentação. Os ratos serão alojados um por gaiola durante o período de reperfusão.
4. Cirurgia Sham
- ratos sujeitos ao mesmo procedimento sem a inserção de monofilamento.
5. pós-operatórias neurológicos Scores (Tabela 1; Figura 2)
- Neurologicamente avaliar ratos após o período de reperfusão adequado utilizando um sistema de pontuação de 18 pontos avaliando-Geral; Motor; Sensorial; Propriocepção. A pontuação neurológica maior corresponde à diminuição da função neurológica.
NOTA: Os ratos que são julgados insensível e incapaz de andar serão sacrificados. Outros critérios para a eutanásia humanizado incluirá uma perda de peso superior a 20%, di respiratóriastress, e infecção ao redor da área cirúrgica. Uma câmara de CO 2 vai ser utilizado para a eutanásia e o método físico para confirmar a morte será deslocamento cervical ou toracotomia.
6. Medição do volume do enfarte cerebral (Figura 3)
- Induzir a anestesia utilizando uma combinação de cetamina (150 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg) injectado IP Monitor profundidade de anestesia por pitada pé inicialmente a cada 3-5 minutos e a cada 10 min uma vez que a anestesia é alcançado.
- Coloque os ratos em decúbito dorsal e cortar a pele do abdômen ao pescoço seguida do peritônio usando iris tesoura reta.
- Levante-se o esterno usando uma pinça Dumont e cortar as costelas para expor o coração.
- Abra o esquerdo e o lado direito do peito usando dois pares de pinças hemostáticas, expor o coração.
- Inserir uma agulha de 26 G ligada a uma seringa de 5 ml para o ventrículo esquerdo e cortar o átrio direito. Perfundir com temperatura ambiente soro fisiológico ou fosfate solução salina tamponada (PBS) até que o líquido torna-se clara (normalmente 3-5 minutos).
- Remover cuidadosamente o crânio longe do cérebro utilizando íris tesouras e pinças Dumont rectas.
- Cortar os bulbos olfativos e do cerebelo usando uma lâmina de barbear para que o cérebro vai caber na matriz. Use esta matriz para cortar o cérebro em até segmentos. Relaxar a matriz antes do uso para manter o tecido fresco. Coloque o cérebro na matriz e defini-lo no gelo.
- Cortar o cérebro em segmentos coronais 2 mm utilizando duas lâminas de barbear. Faça o primeiro corte utilizando uma lâmina de barbear começando 2 mm a partir do topo e deixar esta lâmina de barbear no lugar. Fazer mais 2 mm corte atrás da primeira. Remover a primeira lâmina de barbear com o tecido ligado. Repita este processo até que todo o tecido foi cortado.
NOTA: Não deve haver 4 - 5 segmentos quando terminar. - Colocar os segmentos em placa de 24 poços contendo 2% de cloreto de 2,3,5-triphenyltetrazalium (TTC), a qual é então colocada num banho de água superficial umt 37 ° C durante 20 min. Colocar cada segmento em um poço individual ajuda a mantê-los na ordem em que foram cortadas. Assegure-se que a solução de TTC cobre completamente os segmentos de tecido. Após 10 min transformar todas as fatias mais.
- Colocar uma pequena quantidade de formalina a 10% para os poços de uma nova placa de 24 poços e transferir os segmentos a esta placa na ordem em que foram cortadas.
- Digitalizar os segmentos para o computador e analisar o tamanho do enfarte em percentagem de toda a fatia de cérebro 6 usando software de análise de ImageJ (NIH Imagem 1,57 Software) 6.
- Delinear a área infartada para gerar uma medição da área. Em seguida medir todo o hemisfério contralateral para determinar a área. Dividir a área de enfarte pela área do hemisfério contralateral e multiplicar por 100 para determinar o volume do enfarte.
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Representative Results
Os ratinhos foram submetidos a 30 min de isquemia cerebral induzida por MCAo (Figura 1), seguido por um período de reperfusão (24 horas e 1 semana são apresentados aqui, mas o comprimento da reperfusão pode ser variada). A mortalidade durante MCAo foi mínimo (aproximadamente 2%). Pós isquemia, a taxa de mortalidade (nas primeiras 24 horas) foi de cerca de 26%.
Laser Doppler fluxometria foi usada para confirmar a perfusão do fluxo sanguíneo no território MCA antes e depois MCAo / reperfusão. A Figura 4 demonstra claramente que quando o laço temporária CCA é libertado após 30 min de isquemia para a remoção do filamento e reperfusão a ocorrer, há um aumento em perfusão, que atingiu <100% de perfusão de base (ou seja, antes da cirurgia) em 5 min de reperfusão.
24 horas após o início do acidente vascular cerebral (antes da medição do volume do enfarte) Neurolpontuações ogical relativos à geral, sensorial, motor e déficits proprioceptivos foram avaliadas (Tabela 1). Este sistema de pontuação é destinado a fornecer critérios para a avaliação objetiva ( "sim ou não"). A Figura 2 mostra que a pontuação para ratos (n = 27) às 24 horas foi de 12,56 ± 0,7, e manteve-se elevada 1 semana mais tarde (11,50 ± 1,5 ). A pontuação neurológica maior corresponde à diminuição da função neurológica.
Volumes de infarto espelhado padrões semelhantes à pontuação neurológica às 24 horas, ou seja, maior do que os animais sham. 24 horas após a MCAo, ratinhos tinham grandes volumes de enfarte (Figura 3: 15,9 ± 2,6%), que foram aumentados de 1 semana após acidente vascular cerebral (28,5 ± 1,9%).
Figura 1: Diagrama esquemático mostrando a localização da oclusão da artéria cerebral média(MCAo) Cirurgia e Vasculature grandes vasos da circulação cerebral. A. MCAo cirúrgico é feito através de inserção de um filamento na artéria carótida externa e, em seguida, na artéria carótida média proximal. BG. Passos para induzir MCAo. artéria de comunicação anterior (ACA); artéria cerebral média (ACM); posterior da artéria de comunicação (PcomA); artéria cerebral posterior (APC); artéria basilar (BA); artéria carótida interna (ACI); artéria carótida externa (ECA); artéria pterigopalatina (PPA); artéria carótida interna (ACI). (Modificado com a permissão de Smith et al., A referência # 5.) Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2:. O curso Score de 18 pontos Este comprehensive pontuação acidente vascular cerebral avalia melhorias funcionais em geral e sensorial, motora e aspectos proprioceptivos de comportamento do mouse na sequência de um acidente vascular cerebral. Os dados são média ± SEM. * P <0,05. n = 3 ratos / grupo. Os dados foram analisados por análise de variância, mais um teste post hoc de Bonferroni. (Modificado com a permissão de Smith et al., A referência # 5.) Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3:. Volumes de Enfarte de ratinhos C57BL / 6 24 h após MCAO Os ratinhos foram submetidos a 30 min e 24 h MCAo ou 1 semana) cérebros de reperfusão A foram removidos, seccionados e corados com 2% 2,3,5. cloreto de trifeniltetrazólio (TTC). Em tecidos vivos, desidrogenases enzimaticamente reduzir TTC para 1,3,5-triphenylformazaon (TPF), o que é uma cor vermelha, mas no tecido isquémico a enzima não é funcional, de modo que o tecido permanece branca. B) O gráfico mostra um aumento no volume de enfarte em ratinhos tendo tido um acidente vascular cerebral. Os dados são média ± SEM. ** P <0,002, **** P <0,0001 contra sham; n = 4 ratinhos / grupo. Os dados foram analisados por análise de variância, mais um teste post hoc de Bonferroni. Barra de escala = 1 cm (modificado com permissão de Smith et al., A referência # 5.) Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4:. Perfusão do MCA território Ao longo MCAo e reperfusão Os ratinhos foram submetidos a 30 min MCAo, e <5 min de reperfusão. As linhas de base foram normalizados para 100%. como expeCTED, 5 min de perfusão para o período de reperfusão foi superior a MCAo, isto é, quando nenhum de perfusão do tecido ocorreu. Os dados são média ± SEM. * P <0,05. n = 3 ratos / grupo. Os dados foram analisados por análise de variância, mais um teste post hoc de Bonferroni. (Modificado com a permissão de Smith et al., A referência # 5.) Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Tabela 1: Neurological Scoring System Um ponto dado para uma resposta sim a cada um dos testes.. Marcas de 18 7,8.
| Teste | Breve descrição | O que é testar? | Referências |
| Morris labirinto de água | Um procedimento de water-maze-campo aberto, onde roedores aprender a escapar de água sobre uma plataforma escondida | memória espacial, controle de movimento e mapeamento cognitivo | 19 |
| rotarod | Uma haste de rotação horizontal, onde roedores deve andar para a frente de modo a não cair | coordenação motora, equilíbrio e força de preensão | 20 |
| Pólo | Roedores colocados em um poste e observados para deslizar ou cair como eles fazem seu caminho para dentro de uma gaiola | distúrbios do movimento causado por um dano cortical | 21, 22 |
| A análise da marcha | Como roedores atravessar uma placa de vidro suas pegadas são capturadas para analisar seus movimentos | padrões pé (pressão pata, comprimento do passo, largura e frequência, toe spread, ângulo de marcha e rotação do corpo)e coordenação motora | 23, 24 |
| Teste de etiqueta adesiva | Tiras de fita aplicados à parte calva da pata dos roedores para gravar tempo para entrar em contato com cada pata, ordem de contato, tempo de afastamento, e da ordem de afastamento | déficits de sensibilidade das patas dianteiras e sensório-motoras | 25, 26 |
| Canto | Roedores colocados entre duas placas que formam um ângulo de 30 °; ao entrar profundamente no canto ambos os lados do vibrissae são estimulados e as traseiras de roedores e volta a enfrentar a extremidade aberta | desordens do desenvolvimento neurológico e comportamentos repetitivos (monitoramento transforma em uma direção em relação ao sentido oposto) | 27, 28 |
| Cilindro | Os roedores são colocados num cilindro de vidro com a actividade do membro anterior, enquanto a criação contra a da parede é gravado | assimetria locomotora e avaliar Poststruso do membro oke | 28 |
| Escadaria | Roedores colocados em uma plataforma em uma caixa com uma escada dupla com isca; roedores são restrição alimentar para promover o movimento até as escadas para recolher a isca | Alcançar as habilidades de cada membro anterior que requerem independentemente capacidades sensoriais, destreza e coordenação motora | 25, 29 |
| Escada | Roedores atravessar uma escada horizontal para alcançar sua gaiola; pé desliza enquanto passeia a escada são registrados | falhas pé durante a locomoção; membro anterior e função dos membros posteriores e coordenação | 30 |
Tabela 2: Exemplos de testes comportamentais murinos.
| Sugestão para GLP é a seguinte: |
| - Os detalhes específicos de qual modelo de acidente vascular cerebral foi escolhido (por exemplo, Longa vs. Koizumi) e da estirpe, idade, sexo, peso relatado com clareza. |
| - Estudos realizados de forma duplo-cego. |
| - Análise de energia informada. |
| - Critérios de inclusão e exclusão no estudo decidiu antes do estudo, e relatados. |
| - Animais monitorados diariamente (aparência básica, peso corporal e comportamento) para detectar quaisquer sinais de angústia, dor ou doença. |
| - Relato de animais excluídos do estudo. |
| - A randomização de animais em grupos. |
| - & #160; Relatórios de resultados negativos e positivos. |
| - Relato de duração da cirurgia, anestesia, temperatura corporal e gases sanguíneos. |
| - Relato de enriquecimento ambiental utilizado, se houver. |
Tabela 3: Sugestões para boas práticas de laboratório.
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Discussion
Desde a sua concepção, há 20 anos, o modelo de acidente vascular cerebral humano MCAo envolvendo a inserção de um filamento foi usado em um grande número de estudos. Isto é principalmente devido ao fato de que ela imita o que acontece clinicamente sob a forma mais comum de acidente vascular cerebral (isto é, acidente vascular cerebral isquémico). O corpo estriado é mais sensível do que a isquemia cerebral, o córtex, e, como tal, o comprimento de tempo de isquemia vai traduzir-se em se tanto o corpo estriado e o córtex dorsolateral será afectada, ou apenas o corpo estriado. Ambos os enfarte e reperfusão vezes pode variar em conformidade, e este oferece o investigador a capacidade de ser capaz de estudar os efeitos patológicos associados com ataques isquémicos transitórios (AIT) para enfartes muito maiores.
Ao longo dos anos modificações e solução de problemas do método de filamentos de MCAo mostrou a importância do procedimento a ser realizado em condições estéreis para evitar o risco de infecção 9. Os resultados podem variarentre as espécies de roedores, de deformação (anatômica variações foram mostrados) 10,11, peso e anestésicos utilizados, mas as tendências nos resultados aqui apresentados são susceptíveis de ser refletida em outros laboratórios onde MCAo é realizada. Outros passos críticos a ter em conta são a temperatura corporal, pressão arterial e gases sanguíneos. Está bem estabelecido que a temperatura do corpo afeta dano neurológico, com lesões menores associados à hipotermia 12 e déficits mais graves sendo apresentadas de hipertermia 13. Como tal, a temperatura deve ser medida e controlada, por exemplo, através da utilização de controladores de temperatura animal com uma almofada de calor, de modo a manter a temperatura corporal a 36,5 ° C. reposição de volume e o incentivo de comer, colocando comida amolecer na parte inferior da gaiola também são fatores adicionais para observar. Pressão arterial e gases sanguíneos 6,14 tanto pode ser facilmente medidos e monitorados usando o equipamento prontamente disponível a partir commercfornecedores ial.
Limitações da técnica MCAo incluem dissecando adequadamente o nervo vago a partir das artérias sem danos e evitar o avanço do filamento para o PPA, o que pode afetar não só a capacidade de induzir curso de forma eficaz, mas também a taxa de sobrevivência do mouse. O significado mais importante com relação a métodos alternativos in MCAO Vivo é a taxa de sobrevivência quando se utiliza o método de Longa descrito aqui. Temos também encontrado que isto corresponde a um aumento das interacções de leucócitos-células endoteliais e aumento do volume de enfarte, que tornam este modelo, uma vez que domina, uma excelente ferramenta para o estudo de potenciais alvos terapêuticos para o tratamento de acidente vascular cerebral.
Embora não se tenha relatado qualquer aqui, uma série de testes comportamentais também pode ser realizada tal como labirinto aquático de Morris, Rotarod, teste de pólo, a análise da marcha, teste etiqueta adesiva, teste de canto, teste do cilindro, teste em escada, e teste de escada (ver Tabela2 para detalhes e referências). animais Sham não têm problemas com a conclusão destes testes comportamentais; No entanto, animais de acidente vascular cerebral realizar estes testes muito menos êxito. Na sequência desta, uma área de debate é se enriquecimento ambiental afeta não só a reprodutibilidade do modelo MCAo, mas também se ele pode afetar o resultado de testes comportamentais 15. Este não é clara, mas vale a pena padronizar esta dentro do laboratório, e ao longo do estudo.
Há uma infinidade de diferentes testes disponíveis para a medição de resultados acidente vascular cerebral. Nós apresentamos o emprego de laser Doppler para medições de fluxo de sangue, uma de 18 pontos pontuação avaliação neurológica em profundidade, e também de infarto medições de volume. No entanto, as opções adicionais são também úteis, tais como a imagem latente. Empregamos rotineiramente o uso de microscopia de fluorescência intravital para estudar as interacções celulares (característico de uma resposta inflamatória) 6 dentro da ceremicrocirculação bral em tempo real, em animais anestesiados 5,6,16. MCAo e reperfusão produz uma resposta inflamatória cerebral intensificada contra animais sham 5,6,16. Outras modalidades de imagem, como ressonância magnética 17 e tomografia por emissão de positrões 18 também pode ser utilizado, uma vez que proporcionam a oportunidade para estudos longitudinais que são clinicamente relevante.
A análise histológica de tecido cerebral, as amostras de plasma e soro deve ser realizada rotineiramente uma vez que permitem uma melhor caracterização das respostas fisiopatológicos para acidente vascular cerebral e os mecanismos envolvidos, mas também, e talvez mais importante, eles permitem que os investigadores a estudar os efeitos dos compostos sobre o resultado de acidente vascular cerebral, fornecendo assim dados importantes para os potenciais alvos terapêuticos para esta doença debilitante e devastador. Por fim, acreditamos que é altamente aconselhável para os investigadores a considerar não apenas as ba modelo acidente vascular cerebral mais adequadassed sobre os requisitos para o seu estudo, mas também que o GLP ( "boas práticas de laboratório") é tornada obrigatória. Consulte a Tabela 3 para sugestões BPL.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Male C57BL/6 mice | Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME | #000664 | |
| Ketamine Hydrochloride | Morris & Dickson, Shreveport, LA | 67457-108-10 | |
| Xylazine | Akorn, Inc, Lake Forest, IL | NADA# 139-236 | |
| DC temperature control system | FHC, Bowdoin, ME | 40-90-8D | |
| Mini rectal thermistor probe | FHC, Bowdoin, ME | 40-80-5D-02 | |
| Heating pad | FHC, Bowdoin, ME | 40-90-2-06 | |
| Clippers | Amazon, Bellevue, WA | #64800 | |
| 70% ethanol | Worldwide Medical Products, Bristol, PA | #51011023 | |
| Dissecting microscope | Olympus, Center Valley, PA | SZ40 | |
| Iris scissors (straight) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 11251-20 | |
| Dumont forceps (45° bent tip) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 11297-00 | |
| Micro vessel clip | Fine Science Tools, Foster City, CA | 18055-05 | |
| Micro dissecting spring scissors (straight) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 14088-10 | |
| Retractors (blunt) | Fine Science Tools, Foster City, CA | 18200-11 (Helen used 17022-13) | |
| Cotton tipped applicators | Fisher Scientific, Waltham, MA | 23-400-100 | |
| Gauze sponges | Covidien, Mansfield, MA | #9023 | |
| 7-0 silk braided surgical suture | Braintree Scientific, Braintree, MA | SUT-S103 | |
| 0.9% sodium chloride | Morris & Dickson, Lake Forest, IL | 0409-4888-20 | |
| 6-0 medium MCAO suture (silicon rubber coated monofilament) | Doccol Corporation, Sharon, MA | 6023PKRe | |
| Sofsilk 6-0 silicone coated braided silk | Covidien, Mansfield, MA | SUT-14-1 | |
| Carprofen | Pfizer, New York, NY | NADA# 141-199 | |
| Puralube | Dechra, Norwich, UK | NDC 17033-211-38 | |
| Physitemp temperature controller | Harvard Apparatus, Holliston, MA | TCAT-2AC | |
| Heat lamp | Harvard Apparatus, Holliston, MA | HL-1 | |
| Laser doppler probe | AD Instruments, Colorado Springs, CO | MSP100XP | |
| 24-well plates | Fisher Scientific, Waltham, MA | #353226 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Life Technologies, Carlsbad, CA | 20012-050 | |
| Single edge razor blades | Fisher Scientific, Waltham, MA | 12-640 | |
| 2,3,5-triphenyltetrazalium chloride (TTC) | Sigma Aldrich, St. Louis, MO | T8877-50G | |
| Mouse brain matrix slicer | Braintree Scientific, Braintree, MA | BS-A 5000C | |
| Water bath | VWR, Radnor, PA | #182 | |
| 10% formalin | Sigma Aldrich, St. Louis, MO | HT501128-4L | |
| ImageJ analysis software | NIH, Bethesda, MD | free download | |
| Retractor | Medical Device Purchase, Newcastle, CA | MP-740 |
References
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