Abstract
어렵고 많은 시간이 소요 될 수 있습니다 매우 두꺼운 두개골이 물고기의 이석 (귀 뼈)을 추출. 제대로 수행되지 경우 이석이 손상 될 수 있습니다 손이나 전기 톱으로 두개골의 상단에 가로 세로 절개를 만드는 일반적인 방법. 철갑 상어 (Acipenseridae)는 매우 크고 두꺼운 두개골이 특히 한 가족입니다. 이석을 노출 물고기의 복부 측면으로부터 뇌 공동을 입력하는 새로운 실험 방법은하기 문헌에서 찾을 이석 다른 추출 방법보다 쉬웠다. 문헌 평가 방법 필드 설계된 신속 물고기 대량 처리를 더 효율적으로된다. 시간이 가압되지 않고, 각각의 시료로부터 성공적으로 추출이 중요한 경우에는,이 새로운 기술은 실험실 환경에 더 적합하도록 설계되었다. 발견하고이 기술을 사용하여 제거 이석의 성공은 매우 높고 (S)을 손상하지 않는다어떤 방식으로 tructure. 이 대안 기술은 이석을 추출하는 다른 유사한 물고기 종에 적용 할 수있다.
Introduction
전 세계적으로 철갑 상어 (Acipenseridae) 인구 인한 서식지 감소, 인구 조각을 포함 영향에 한 세기 이상 동안 감소하고, 많은 인구가 주 및 연방 법률 1, 2에 의해 보호되도록 남획되고있다. 미국과 전 세계에 걸쳐 관리 기관은 복원 및 복구 1 목표 종으로 철갑 상어를 확인했다. 대부분의 철갑 상어 인구의 인구 특성 (성장, 모집, 다이어트는) 더 기본적인 생물학 및 생명의 역사 특성 (1)을 이해하기 위해 연구되고있다. 대부분의 철갑 상어 개체군의 보호 상태로 인해, 연령 평가는 개인에게 어떤 희생이나 피해는 보증하지 않습니다 작은 위협 인구 어렵다.
나이 추정 및 성장 분석의 목적을 위해 뼈 구조의 추출은 스터 에이지를 결정 핀 선 부분의 일반적인 기술 3 국지적 이용했다에 실용적인 치명적 방법이되었다, 그러나 기술의 검증은 제한되어 있으며, 나이가 나이 개인 (> 15 년)에서 해독하기가 매우 어려울 수있다 4. 걸프 철갑 상어 (인 Acipenser oxyrinchus의 desoti) 5, 대서양 철갑 상어 (A. 오. oxyrinchus) 6, 화이트 철갑 상어 (A.의 transmontanus) 7, 호수 철갑 상어의 나이를 확인하는 자신의 사용을위한 철갑 상어의 여러 뼈 구조의 사용을 평가 연구원 8 첫 번째 한계 가슴 지느러미 광선이 가장 정확한 연령을 제공하지만, 더 큰 개인에게 해로운 일이 침략 절차를 종결 결론을 내렸다 (A.이 fluvescens). 현재 성공 (9)의 매우 높은 속도와 북아메리카 철갑 종 구별 이석 형상 측정을 사용하는 현상이있다. 두개골의 기지 등쪽 횡 절개 이석을 제거하는 공정에 대한 세부 사항은 공통 이석 여분 인ction 방법은 문헌에 걸쳐 발견하고 명확하게 Secor 등의 알에 의해 설명. (1991) 10. 그러나이 방법은 작고 섬세하고 휴식하는 경향 이석 매우 두꺼운 두개골이 철갑 상어에 구현하기가 어렵다. 문헌의 추가 검토가 철갑 상어의 이석 제거 프로세스의 다른 상세한 방법을 보여줍니다. 본 논문의 목적은 세부 사항에 복부 측면에서 뇌 캐비티를 입력하여 철갑 상어에서 이석을 추출하는 다른 방법이었다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
중요 참고 : 인해 미국에서 철갑 상어의 모든 종의 보호 상태, 취득 물고기가 실험실 절차에 앞서 얻었다 처리 할 수있게한다. 모든 표본으로 인해 자연적인 원인에 부검을 게시 부화장 소스로부터 획득 및 표준 절차에 따라 처리 하였다.
1. 표본 준비
- 어떤 절개는 철갑 상어 옆에 시체와 가장 가까운 1mm로 꼬리의 끝 부분에 주둥이에서 총 길이를 측정하기 위해 측정하는 테이프를 사용하여 배치하기 전에. (그림 1A)
- 가장 가까운 1g을 칭량 규모에 철갑 상어의 시체를 달아. 외부 태그 나 마크와 레코드의 시체를 평가합니다.
2. 이석 추출
- 몸 (그림 1B)에서 머리를 분리하기 위해 몸을 통해 두개골의베이스와 첫 번째 지느러미 방패 꼴의 뼈 조각 사이에 큰 필렛 나이프와 수직 절개를합니다. 머리, TU를 제거한 후머리 RN 그래서 입 (그림 1C)를 직면하고있다.
- 두개골 (그림 1D)의 복부 측면을 따라 잘라 필렛 나이프를 사용하여 부드러운 입의 조직과 아가미를 제거합니다. 완전히 머리 (그림 1E)를 양분하는 두개골의 바닥에 주둥이의 끝에서 전기 뼈 톱으로 절개를합니다. 뇌 캐비티 (그림 2A)을 노출 손으로 두 부분을 분리합니다.
- 제거하고 뇌 캐비티 (그림 2B) 내에서 반원의 운하를 볼 수있는 집게로 뇌 물질 (빨간색 상자 왼쪽) (빨간색 상자 오른쪽)을 폐기합니다.
- 집게 (그림 2C)와 뇌 캐비티에서 반원형 운하 연골을 제거합니다. 조심스럽게 집게의 끝 반원형 운하 연골에 구멍 (그림 2D)를 이석을 제거합니다. 반원형 운하 연골에서 집게로 이석 (연골 내부 하드 뼈 구조)를 제거합니다 (그림 2E)
- 두개골의 나머지 절반에서 이석을 제거하는 2.4 - 반복 2.3 단계를 반복합니다.
- 어떤 연골을 제거하기 위해 5 초 동안 92 %의 에탄올의 이석을 찍어. 오픈 25 ML의 섬광 유리 병에 배치 이석은 24 시간 동안 건조합니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
전세계 철갑 상어의 성인 크기는 매우 다양하지만 이석의 위치가 일치한다. 날카로운 필렛 나이프의 사용은 용이도 1d에 도시 된 구강 연조직을 제거하는 것으로 밝혀졌다. 전기 뼈 톱 그림 1E의 뇌 구멍을 노출하는 횡 절개를 선호 도구입니다. 그러나, 두개골의 정중선을 이등분하는 관심 그렇지 이석이 과정에서 분쇄 할 수있다 필요하다. 이 프로세스는 다음 정확히 수행되면 뇌 공동은도 2a에 도시 된 바와 같이, 이석 손상 없음에 고르게 노출된다. 뇌 물질 용이도 2b 및도 2c에 도시 된 바와 같이 쉽게 뇌 공동의베이스에서 발견되는 이석 포함 된 반원형 운하 연골을 찾는 등의 집게를 사용하여 제거된다. 반원형 운하에서 발견 된 연골은 EAS이다ILY 그림 차원에서 볼 때 집게 한 쌍으로 이석 제거.
이 절차는 성공적으로 철갑 상어 이석의 제거를 보여주고 물고기의 생활사에 대한보다 정량 분석의 예비 단계입니다. 결과의 성공은 구조를 깨지 않고 이석의 제거에 의해 계측 할 수있다. 나이 결정 성장 속도는 이석 제거를 이용하여 평가 될 수있는 두 가지 측정 항목이다. 종 분화 형상 분석은 이석에서 개발 될 수있는 다른 측정 메트릭이다.
이석 제거를위한 철갑 상어 시체 그림 1. 배치. 측정 및 무게에 대한 (A) 철갑 상어 시체 측면보기, (B) 수직 절개는 보에서 철갑 상어의 머리를 분리합니다 DY, (C) 머리의 입과 복부 측면, (D) 해골의 복부 측면, (E) 둥이의 두개골의 자료에 대한 팁에서 횡 절개를 노출하기 위해 제거 연조직보기 헤드 플립 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오 이 그림의.
헤드 후 노출 된 뇌 구멍 2. 내부 심사는 이석을 제거하는 그림. (A) 뇌 구멍이, (B) 뇌 물질이 반원형 운하를 노출하기 위해 제거로 구분된다 (C) 반원형 운하 연골 제거 된, (D)는 이석 조회 및 삭제 반원형 운하 연골, (E) Shortnose 철갑 상어 이석에서54316 / 54316fig2large.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
철갑 상어의 시체에서 이석을 추출하는 다른 방법의 개요를 설명하고있다. 특별한주의가 해부하는 동안 이석에 전혀 해를 끼치 없도록 균일하게 두개골을 양분하기 위해 두개골의 중간 선에 횡 절개 배치에 필요한 것이 중요합니다. 절개 완전히 두개골을 이등분 깊이만큼없는 경우, 이석의 위치가 분명하게 보이는 곳은 뇌 캐비티를 노출하는 것은 매우 어려울 것이다. 경험을 통해, 전체 기술은 비교적 간단하고 그대로 발견중인 이석 높은 비율로 이끈다. 이 새로운 방법은 연구를 표준 이석 추출 방법을 사용하여 어려울 수있다 철갑 상어가 아닌 다른 종의 이석을 추출 할 수있는 다른 방법을 제공합니다.
이 방법에 제한 필드 사용하지 설정 실험실에 적용됩니다. 카 커스의 제조에 필요한 시간은 수집 된 샘플에 도움 아니다적시의 필드이다. 또 다른 문제는 일반적으로 인한 인구 감소로 주 또는 연방 법에 따라 보호되는 철갑 상어 종에 사용하는 것입니다.
이 생존 개체수를 유지하기 위해 필요한 개인 희생 희생 평가 이러한 유형을 수행 할 허가를 구하는 것은 매우 어렵다. 그러나 죽은 표본은 자연적인 원인을 통해 사용할 수있는 경우이 기술은 다른 사용할 수있는 것보다 더 많은 정보를 수집하는 유용한 방법을 제공합니다.
성공적으로 다른 방법을 사용하여 철갑 상어에서 이석을 제거하기 위해이 기술의 중요성을 주목하는 것이 중요하다. 머리의 등 영역에서 이석을 제거하는 기존의 기술은 여전히 유용하고 유익하지만 철갑 상어에 적용되지 않습니다. 뇌 캐비티를 노출하기 위해 새로운 기술을 사용하면 다른 지역 신경 기능과 뇌의 형태에 대한 접근과 적용 성을 제공합니다. 이 새로운 기술에 도움이 될 수 있습니다매우 두꺼운 스컬 벽이나 이석 여기서 추출에 사용하는 물고기의 제한된 양이 존재 물고기의 다른 종에 사용한다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
세인트 레지스 모 호크 환경 부문, Welaka 국립 물고기 부화장, 미국 야생 동물 서비스 연구 단위, 서던 일리노이 대학, 미국 야생 동물 서비스 동북아 수산 센터, 스털링 캐비어, 캘리포니아 - 데이비스 대학, 개리슨 댐 국립 생선 특별 감사 이 프로젝트에 철갑 상어를 공급 그들의 도움을 부화장, 곰 블러 프 국립 물고기 부화장, 미국 야생 동물 서비스 파나마 시티 수산 자원 사무실.이 문서에서는 USGS 대호 과학 센터의 공헌 2013 년.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Measuring Board | Metric meter stick is preferred | ||
| Weighing scale | |||
| Filleting Knife | |||
| Scalpel | |||
| Forceps | |||
| Sample vials | 25 ml scintillation vials work well |
References
- Auer, N. A. Conservation. Sturgeons and Paddlefish of North America. LeBreton, G. T. O., Beamish, F. W. H., McKinley, R. S. 27, Kluwer Academic Publishers. 252-276 (2004).
- Sturgeon Specialists Group, sturgeon conservation. IUCN (International Union for the Conservation of Nature). , Source: www.iucn.org (2008).
- Campana, S. E. Accuracy, precision and quality control in age determination, including a review of the use and abuse of age validation methods). Journal of Fish Biology. 59, 197-242 (2001).
- Bruch, R. M., Campana, S. E., Davis-Foust, S. L., Hansen, M. J., Janssen, J. Lake Sturgeon age validation using bomb radiocarbon and known-age fish. Transactions of the American Fisheries Society. 138, 361-372 (2009).
- Baremore, I. E., Rosati, J. D. A validated, minimally deleterious method for ageing sturgeon. Fishery Bulletin. 112, 274-282 (2014).
- Stevensen, J. T., Secor, D. H. Age determination and growth of Hudson River Atlantic sturgeon, Acipenser oxyrhynchus. Fishery Bulletin. 97, 153-166 (1999).
- Brennan, J. S., Cailliet, G. M. Comparative age-determination techniques for white sturgeon in California. Transactions of the American Fishery Society. 118, 296-310 (1989).
- Rossiter, A., Noakes, D. L. G., Beamish, F. W. H. Validation of age estimation for the lake sturgeon. Transactions of the American Fisheries Society. 124, 777-781 (1995).
- Chalupnicki, M. A., Dittman, D. E. North American Sturgeon Otolith Morphology. Copeia. , 260-266 (2016).
- Secor, D. H., Dean, J. M., Laban, E. H. Manual for otolith removal and preparation for microstructural examination. , Barach Press. Columbia, South Carolina. (1991).
