Usando Canais Linear de agarose para o Estudo Drosophila Comportamento larval Crawling

Summary

A larva Drosophila é um sistema poderoso modelo para estudar o controle neural do comportamento. Esta publicação descreve o uso de canais de agarose lineares para provocar surtos sustentados de rastreamento e métodos linear para quantificar a dinâmica das estruturas de larvas durante o comportamento rastejando repetitivo.

Abstract

Drosophila rastreamento larval está emergindo como um modelo poderoso para estudar controle neural do comportamento sensório-motor. No entanto, comportamento de rastreamento larval em superfícies planas e abertas é complexo, incluindo: pausa, girando, e sinuoso. Esta complexidade no repertório do movimento dificulta uma análise detalhada dos eventos que ocorrem durante um único ciclo de rastreamento passo. Para superar esse obstáculo, os canais de agarose lineares foram feitas, que restringem o comportamento das larvas para, sustentada, rastreamento rítmica reta. Em princípio, pois os canais de agarose e o corpo de larvas de Drosophila são ambos opticamente clara, o movimento das estruturas de larvas rotulados por sondas fluorescentes geneticamente codificados podem ser monitorizadas em larvas intacta, livremente em movimento. No passado, as larvas foram colocados em canais lineares e rastejando ao nível do organismo inteiro, segmento, e músculo foram analisados ^1. No futuro, as larvas rastejar nos canais podem ser usados ​​para imagiologia de cálcio para monitorar neuroatividade nal. Além disso, estes métodos podem ser utilizados com larvas de qualquer genótipo e com qualquer canal concebido-investigador. Assim, o protocolo apresentado abaixo é amplamente aplicável para estudos utilizando a larva de Drosophila como um modelo para compreender o controlo do motor.

Introduction

O objetivo geral deste método é estudar Drosophila rastreamento larval em detalhe. Experimentos em locomoção têm desempenhado um papel importante no desenvolvimento e teste de teorias sobre o controle motor ^2. Tradicionalmente locomoção foi estudado em animais aquáticos (por exemplo, sanguessuga, lampreia, girino) ^3. A natureza repetitiva de locomoção nestes animais foi permitido para o estudo de rhythmogenesis, para análise dos eventos biofísicas locomoção de condução, e para monitorizar os padrões de disparo neurais que acompanham a locomoção.

O uso de larvas de Drosophila para estudos de....

Protocol

1. Preparação de larvas

1. Uma semana antes de gravar comportamento, configurar uma cruz (mínimo de 25 virgens e 5 machos). Manter todos os cruzamentos e filhos a 25 ° C.
   NOTA: A temperatura de condições de cultura pode ser alterado, mas a linha de tempo descrito abaixo iria necessitar de ser ajustada para considerar as alterações na velocidade de desenvolvimento.
2. 5 dias antes da gravação, a primeira coisa na parte da manhã, colocar a cruz em uma gaiola coleção com uma tampa de agar / suco e um dab (0,5-1 ml) de pasta de levedura no centro da tampa agar / suco.
   1. Para fazer uma gaiola de recolha, criar buracos em um 6 oz. polietileno q....

Results

Este artigo descreve um método para guiar o comportamento da larva de Drosophila usando canais de agarose e para medir a dinâmica das estruturas larvais ao longo de um ciclo de rastreamento. Larvas em canais lineares executar ataques sustentados de rastreamento rítmica (Figura 3). Uma vez que tanto as larvas e os canais são opticamente transparentes, os canais podem ser usados ​​com larvas expressando sondas fluorescentes expressas em qualquer estrutura de inter.......

Discussion

Um dispositivo de microfluidos foi construído para fazer canais de agarose lineares que podem acomodar as larvas de Drosophila (Figura 1). Quando as larvas de Drosophila são colocados nestes canais de agarose lineares seu repertório comportamental é limitada para o rastreamento, o qual permite a observação detalhada da dinâmica de estruturas larvais ao longo do ciclo de rastreio.

Uma gravação bem sucedida quando ocorre uma larva de executar uma série de pas.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Garrafa quadrada de Drosophila de 6 onças	Scimart	DR-103
ágar	sigma	A1296
sacarose	sigma	S9378
suco			de maçã não concentrado
Tegosept	Fisher	T2300	metil-p-hidroxibenzoato
35 x 10 mm placa de Petri redonda	Fisher	351008
fermento
PDMS molde de fundição	FlowJem		pode ser solicitado aos autores
Álcool isopropílico	Toalhetes de laboratório Fisher	A417-1
	Fisher	06-666-11
ar enlatado	Fisher	18-431
Placa de Petri de 10 cm	BioPioneer	GS82-1473-001
agarose	Fisher	50-444-176
lâmina de barbear	Fisher	12-640
fórceps	FST	11241-40
22 x 40 vidro de cobertura, #1.5	Fisher	50-365-605
Fiji (versão 1.51d)	NIH		fiji.sc
Excel 2016	Microsoft		www.microsoftstore.com
MATLAB R2016	Mathworks		www.mathworks.com