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Biology

Pseudocapillaria प्रणालियों में Aeromonas hydrophila, माइकोबैक्टीरियम एसपीपी., और tomentosa Zebrafish की पर्यावरणीय स्क्रीनिंग

Published: December 8, 2017 doi: 10.3791/55306
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Biological Research Facility, The Francis Crick Institute

Summary

इस प्रोटोकॉल नाबदान झाड़ू और zebrafish प्रणालियों, जो प्रहरी के एकमात्र उपयोग की तुलना में वृद्धि का पता लगाने की ओर जाता है के उपयोग का वर्णन करने के लिए Aeromonas hydrophila, माइकोबैक्टीरियम एसपीपी., और के रूप में रोगजनकों का पता लगाने Pseudocapillaria tomentosa। संगरोध में पी. tomentosa अंडों की निगरानी के लिए एक प्रणाली भी प्रस्तावित है.

Abstract

स्वास्थ्य निगरानी प्रणाली विकसित और zebrafish अनुसंधान सुविधाओं में प्रयोग किया जाता है क्योंकि ढाणियो rerio के रोगजनकों जैसे Aeromonas hydrophila, माइकोबैक्टीरियम एसपीपी., और Pseudocapillaria tomentosa के लिए क्षमता है पशु कल्याण और अनुसंधान ख़राब । मछली आमतौर पर पोस्ट मार्टम विश्लेषण के लिए रोगाणुओं का पता लगा रहे हैं । प्रहरी के उपयोग के लिए निगरानी की संवेदनशीलता में सुधार और नमूने के लिए पशुओं की संख्या को कम करने के लिए एक तरीका सुझाया है । एक पूर्व निस्पंदन प्रहरी टैंक की स्थापना के बाहर एक परिसंचारी प्रणाली का वर्णन किया गया है । तकनीक के लिए जल प्रदूषण को रोकने और उंर, लिंग, और उपभेदों के एक सावधान चयन द्वारा मछली आबादी का प्रतिनिधित्व विकसित की है । आदेश में जानवरों की न्यूनतम संख्या का उपयोग करने के लिए, वातावरण को स्क्रीन करने के लिए तकनीक भी विस्तृत रहे हैं । पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) सतह नाबदान झाड़ू पर काफी कुछ प्रचलित और रोगजनक माइक्रोबैक्टीरियल प्रजातियों का पता लगाने में सुधार करने के लिए प्रयोग किया जाता है जैसे कि माइकोबैक्टीरियम fortuitum, माइकोबैक्टीरियम haemophilum, और माइकोबैक्टीरियम chelonae। एक और पर्यावरणीय विधि एक पकड़े टैंक या नाबदान के तल पर कीचड़ प्रसंस्करण के होते है tomentosa अंडे के लिए देखो । यह एक सस्ता और तेजी से तकनीक है कि संगरोध में लागू किया जा सकता है, जहां एक प्रजनन उपकरण आयातित पशुओं के जोत टैंक में जलमग्न है । अंत में, पीसीआर कीचड़ नमूना और ए hydrophila है नाबदान के नीचे और सतह पर पाया जाता है के लिए आवेदन किया है । आम तौर पर, इन पर्यावरणीय जांच इन विशिष्ट रोगजनकों के लिए लागू तकनीक पूर्व निस्पंदन प्रहरी के परीक्षण की तुलना में एक वृद्धि की संवेदनशीलता के लिए नेतृत्व किया है ।

Introduction

अनुसंधान और पशु कल्याण1,2की रक्षा के लिए, रोगजनकों की उपस्थिति पशु सुविधाओं के भीतर निगरानी की जाती है । zebrafish, स्वास्थ्य निगरानी के मामले में3,4,5,6,7,8,9,10,11 अक्सर जानवरों पर निर्भर करता है histopathology, वैक्टीरिया संस्कृति, या आणविक तरीकों द्वारा पोस्ट मार्टम का विश्लेषण किया । परीक्षण केवल कॉलोनी जानवरों मछली और संबंधित खर्च की संख्या है कि कम प्रसार के रोगजनकों का पता लगाने के लिए आवश्यक होगा की वजह से अनुशंसित विधि नहीं है । इसलिए, पसंदीदा विधि के लिए पशुओं के एक छोटे से समूह के एक उच्च लोड को उजागर करने के लिए है । इन मछलियों को पूर्व निस्पंदन प्रहरी कहा जाता है । यह जोखिम महीनों के लिए रहता है और यह पशु है देखभाल कार्यभार और/या कुछ उद्देश्य-इंजीनियरिंग समाधान का निर्माण में वृद्धि शामिल है । एक और चुनौती संगरोध में आयातित लाइनों की स्क्रीनिंग जहां उपजाऊ जानवरों को जिंदा रखा जा करने के लिए कर रहे हैं और इस लावे पर नियमित परख के साथ संगत नहीं है ।

हम यहां कुछ तरीकों का वर्णन कुछ zebrafish रोगजनकों (ए. hydrophila, माइकोबैक्टीरियम एसपीपी., और पी. tomentosa) का पता लगाने के लिए जलीय प्रणाली के वातावरण को परखने के द्वारा । उद्देश्य स्वास्थ्य की निगरानी के लिए इस्तेमाल किया मछली की संख्या को कम करने और कारोबार, लागत, और पता लगाने की संवेदनशीलता का अनुकूलन करने के लिए है । इस तरह के तरीकों जानवरों के उपयोग के लिए एक विकल्प है और कुछ तकनीक संगरोध में आयात स्क्रीनिंग के लिए लागू किया जा सकता है । उदाहरण के लिए, मोचो9 के बजाय zebrafish (प्रहरी सहित) पर नाबदान झाड़ू पर प्रदर्शन करके अधिक रोगजनक माइक्रोबैक्टीरियल प्रजातियों की पहचान करने में सक्षम था, और यह कम नमूनों के साथ प्राप्त किया गया था । इसी अध्ययन में, tomentosa अंडे और पीसीआर और histopathology द्वारा परीक्षण मछली के बजाय प्लवनशीलता और माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर टैंक कीचड़ स्क्रीनिंग द्वारा अधिक संवेदनशीलता के साथ पता लगाया गया ।

तालिका 1 प्रहरी कार्यक्रमों की विभिंन विशेषताओं3,4,5,6,7,8,9,10 संक्षेप । zebrafish सुविधाओं के एक नंबर के द्वारा प्रयोग किया जाता है । निस्पंदन प्रहरी के बाद एक ही तरीके से पानी प्राप्त किसी भी कॉलोनी मछली जबकि पूर्व निस्पंदन प्रहरी पानी प्राप्त एक बार यह कॉलोनी मछली टैंक के माध्यम से परिचालित है पहले । उदाहरण के लिए, पूर्व निस्पंदन प्रहरी लगातार नाबदान पानी प्राप्त करने से परिसंचारी प्रणाली पर स्थापित किया जा सकता है । यह एक विकल्प है जब एक कमरे में कई स्वतंत्र प्रणालियों रहे है नहीं हो सकता है । इस मामले में, पूर्व निस्पंदन प्रहरी के एक टैंक पूरे कमरे स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । प्रहरी एक स्थैतिक टैंक में हैं, परिसंचारी प्रणाली से बाहर है, और उनके पानी को नियमित रूप से बदल गया है, केवल पूर्व निस्पंदन पानी यानीका उपयोग कर, कमरे में सभी प्रणालियों से नाबदान पानी । इस तकनीक के नीचे पर्यावरण स्क्रीनिंग की प्रभावकारिता के साथ तुलना के लिए एक आधार रेखा के रूप में वर्णित है । प्रस्तावित सेट अप पीएच या एक नाइट्रोजन प्रदूषण की कमी जैसे पानी की गुणवत्ता के मुद्दों को नियंत्रित करने के लिए बनाया गया है ।

बैक्टीरियल पर्यावरण स्क्रीनिंग की अवधारणा परिकल्पना पर निर्भर करता है कि बैक्टीरिया इस तरह के रूप में है कि इस फिल्म में पानी की सतह पर नाबदान की दीवार पर या एक टैंक के नीचे कीचड़ में पाया detectable हैं । नाबदान एक परिसंचारी जलीय कृषि प्रणाली में एक आदर्श नमूना बिंदु लगता है क्योंकि यह अपशिष्ट एकत्र (पानी, मल, फ़ीड, और अंय कार्बनिक सामग्री) सभी टैंकों से पूर्व निस्पंदन । नाबदान की सतह अक्सर आसानी से पहुंच में है, swabbing तेजी से है, और यह aseptically प्रदर्शन किया जा सकता है पार से बचने के लिए नमूने के संदूषण (उदाहरण के लिए दस्ताने से) । अवधारणा zebrafish प्रणालियों में प्रचलित रोगजनक माइकोबैक्टीरियम एसपीपी.9,12की पहचान करने के लिए प्रयोग किया जाता है । तकनीक के नीचे वर्णित है और हम भी zebrafish नाबदान की सतह झाड़ू और कीचड़ में ए hydrophila का पता लगाने की रिपोर्ट कर रहे हैं ।

परजीवी अंडे के लिए पर्यावरणीय जांच मरे एट अल द्वारा पता लगाने पर आधारित है । 13 और प्लवनशीलता तकनीक parasitology और मल में परजीवी अंडे की सूक्ष्म जांच के लिए नियमित रूप से प्रयोग किया जाता है14। मोचो9 नमूना प्रक्रिया के लिए एक विकल्प का प्रस्ताव है और पता चला है कि तकनीक के लिए मछली biotope की अंय प्रजातियों का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । संक्रमित डी. rerio दर्रा पी. उनके मल के साथ tomentosa अंडे और परजीवी अंडे टैंक के नीचे, कीचड़ में रहते हैं । वे वहां उनके पानी की तुलना में अधिक घनत्व के कारण एकत्र किया जा सकता है । अंडे का घनत्व पर्यावरण नमूना भी प्रक्रिया करने के लिए प्रयोग किया जाता है । केंद्रापसारक के साथ एक पहली प्लवनशीलता भारी बात से पानी और प्रकाश मलबे अलग । एक दूसरे के केंद्रापसारक ( tomentosa अंडे के घनत्व से अधिक घनत्व के साथ) संतृप्त चीनी समाधान पर निर्भर करता है (परजीवी अंडे के लिए अनुमति देने के लिए ट्यूब की सतह पर उभरने के लिए ।

इस फिल्म में जीवाणुओं के लिए स्क्रीनिंग और टैंक के नीचे से पी tomentosa के लिए, पहले केंद्रापसारक के बाद प्राप्त कीचड़ नमूना तलछट पर इन सभी रोगजनकों के लिए पीसीआर प्रदर्शन करके जोड़ा जा सकता है । यह नमूना समय को ऑप्टिमाइज़ करता है । विधि नीचे वर्णित है । हम भी एक क्वारंटाइन संदर्भ में इन तकनीकों का उपयोग करने का प्रस्ताव है । आयातित वयस्क zebrafish कि जिंदा रखा जाना चाहिए स्क्रीन करने के लिए, एक प्रजनन उपकरण संगरोध टैंक के लिए डाला जाता है. एक सप्ताह के बाद, मल और प्रजनन उपकरण में अंय अपशिष्ट पदार्थों को एकत्र कर रहे है और माइक्रोस्कोपी या पीसीआर द्वारा जांच की । यह तकनीक नीचे बताई गई है और इस संदर्भ में माइक्रोस्कोप से कुछ tomentosa अंडों का पता लगाया गया ।

Protocol

1. एक पुनर्संचारी प्रणाली के बाहर पूर्व निस्पंदन प्रहरी के जोखिम

  1. एक साफ 8 एल टैंक एक परिसंचारी प्रणाली के बाहर सेट करें । यह नाबदान से आने वाले पानी के साथ भरें । सिस्टम से स्क्रीन पर 2 सिरेमिक मोतियों की माला या बायो-मीडिया के स्पंज क्यूब्स जोड़ें (चित्र 1) । जोड़ें 1- 2 D. rerio/L(यानी, 12 मछली) । सुविधा में प्रमुख आनुवंशिक पृष्ठभूमि के जंगली प्रकार मछली का प्रयोग करें, उदाहरण के लिए एबी ।
    1. इस प्रकार के रूप में का चयन करें 6 मछली कम से कम एक महिला और एक पुरुष की उंर के 6 महीने से नीचे, एक महिला और एक पुरुष के बीच 6 और 18 महीने, और एक महिला और एक पुरुष 18 से अधिक उंर के महीने ।
  2. दिन में एक बार खिलाओ । आहार में भिंनता (उदा, शुष्क आहार, नमकीन चिंराट) सुनिश्चित करने के लिए प्रहरी सभी zebrafish सुविधा में इस्तेमाल आहार के संपर्क में हैं । सोमवार, बुधवार, और शुक्रवार, यानी4 महीने के लिए सप्ताह में तीन बार पानी बदलें ।
    1. जल परिवर्तन का संचालन करने के लिए, एक अस्थाई टैंक में प्रहरी और जैव मीडिया स्थानांतरण । खाली पूरी तरह से प्रहरी टैंक और इसे साफ । नाबदान के पानी के साथ ही प्रहरी टैंक फिर से भरना । प्रहरी और जैव मीडिया को वापस रखो ।
  3. नाबदान के पानी के लिए 4 महीने के लिए प्रहरी बेनकाब । 2-phenoxyethanol (3 मिलीलीटर/L) के ओवरडोज़ समाधान में विसर्जन के रूप में एक अनुमोदित विधि द्वारा मछली Euthanize ।
  4. मौत की पुष्टि करने के लिए, opercula आंदोलन की समाप्ति के बाद 10 मिनट के लिए रुको ।
    1. संदंश के साथ शव हड़पने के लिए और यह पूरी तरह से पर-८० ° c एक पहचान कंटेनर में फ्रीज । इसमें पीसीआर12,15का इस्तेमाल किया जाएगा ।
    2. वैकल्पिक रूप से, tailat caudal डंठल में कटौती, पेट की दीवार निक, और 4% formalin में सेट ।
      चेतावनी: histopathology के लिए दस्ताने और धुएं कैबिनेट का प्रयोग करें । नमूना संग्राहक को लेबल करना ।

2. नाबदान झाड़ू

  1. एक प्लास्टिक शाफ्ट के साथ बाँझ सूखी झाड़ू का प्रयोग करें । दस्ताने पहनें । झाड़ू की सतह का पता लगाएं (पानी की सतह पर नाबदान दीवार) और किसी भी सतह के लिए आसान पहुंच को रोकने के आइटम को हटा दें । कम प्रवाह के साथ एक नाबदान की सतह चुनें ।
  2. बाहरी पैकेजिंग को हटाने और हवा के लिए बाँझ कपास टिप बेनकाब द्वारा झाड़ू खोल । परवाह नहीं untested सतहों को छूने के द्वारा झाड़ू के पार संदूषण से बचें ।
    1. झाड़ू 5-10 सेमी से अधिक नाबदान की दीवार पर पानी और नाबदान के पानी की सतह के स्तर पर फिल्म को अवशोषित ।
    2. झाड़ू वापस म्यान या एक बाँझ केंद्रापसारक ट्यूब में टिप तोड़ । नमूना लेबल और पीसीआर परीक्षण के लिए भेज या-८० डिग्री सेल्सियस पर फ्रीज ।

3. एक टैंक के तल पर पी tomentosa अंडे का पता लगाने

  1. कीचड़ विश्लेषण द्वारा माइक्रोस्कोपी
    1. का प्रयोग करें ६० मिलीलीटर9 सिरिंज के लिए एक नाबदान या किसी भी प्रहरी सहित मछली पकड़े टैंक के तल पर कीचड़ महाप्राण । 15 मिलीलीटर ट्यूबों में नमूना विभाजित । उनके पेंच में सबसे ऊपर है और ट्यूब लेबल के साथ ट्यूबों बंद करो ।
    2. एक चुंबकीय सरगर्मी14के साथ गर्म पानी के १७७ मिलीलीटर में दानेदार चीनी के २२७ ग्राम मिश्रण से चीनी संतृप्त समाधान (विशिष्ट गुरुत्व = १.२७) तैयार करें ।
    3. १७५-२५० x जी में 10 मिनट के लिए स्विंग बाल्टी के साथ एक केंद्रापसारक में 15 मिलीलीटर ट्यूबों केंद्रापसारक । ट्यूबों को खिचड़ी भाषा और उनके ट्यूब में तलछट रखना ।
    4. भर ट्यूबों आधे रास्ते चीनी के साथ हल संतृप्त । उनके पेंच शीर्ष के साथ ट्यूबों को बंद करें और अच्छी तरह से समाधान के साथ तलछट मिश्रण ।
    5. जगह में ट्यूबों के केंद्रापसारक स्विंग बाल्टी और उंहें भरने के ऊपर चीनी के साथ समाधान संतृप्त । प्रत्येक ट्यूब के शीर्ष पर धीरे से एक कवर गिलास सेट और चीनी के साथ संपर्क में संतृप्त समाधान ।
    6. 10 मिनट के लिए १७५-२५० x g पर केंद्रापसारक । ध्यान दें कि कुछ कवर गिलास गिर सकता है और केंद्रापसारक के दौरान तोड़ इसलिए वहां प्रत्येक ६० मिलीलीटर नमूना के लिए 4 ट्यूबों रहे हैं । कवर गिलास उठा और यह एक गिलास स्लाइड पर सेट । स्लाइड को पेंसिल या मार्कर पेन से लेबल करना ।
      1. मामले में बहुत सारे कवर ग्लास फोड़ होते हैं, को भरने के साथ ट्यूब के अधिकांश चीनी संतृप्त समाधान, १७५ पर केंद्रापसारक-२५० एक्स जी 10 मिनट के लिए, ऊपर भरने के लिए चीनी के साथ संतृप्त समाधान, फिर धीरे से कवर गिलास सेट. 30 मिनट के लिए रुको ।
    7. 13 माइक्रोस्कोप के साथ पी. tomentosa अंडे के लिए देखो (चित्रा 2 और वीडियो 1) । 6आवर्धन 400X पर द्विध्रुवी प्लग की पहचान करें ।
      नोट: अंडे का आकार ५७-७८ µm लंबी और 27-39 µmव्यास16, 17 है । ध्यान दें कि एक सकारात्मक स्लाइड ६० एमएल नमूने सकारात्मक घोषित किया जा करने के लिए पर्याप्त है ।
  2. पी tomentosa अंडे के लिए संगरोध में आयातित पशु स्क्रीनिंग
    1. एक टैंक में नर और मादा डी. rerio सेट करें । टैंक में जोड़ें एक उपकरण आम तौर पर फसल के लिए इस्तेमाल किया और अंडे की रक्षा, लेकिन यह मल इकट्ठा करने के लिए यहां का उपयोग करें (चित्रा 3) ।
      नोट: उदाहरण के लिए, एक पूर्ण 1 एल प्रजनन टैंक (बाहरी टैंक और कद्दूकस किया हुआ नीचे के साथ भीतरी टैंक) पूरी तरह से एक 13 एल टैंक में जलमग्न है, मछली में और प्रजनन उपकरण के बाहर स्थानांतरित करने के लिए मुफ्त का उपयोग की अनुमति ।
    2. एक सप्ताह के बाद प्रजनन उपकरण निकालें और प्रजनन उपकरण में एकत्र कीचड़ फसल के रूप में ३.१ कदम में वर्णित है "माइक्रोस्कोपी द्वारा कीचड़ विश्लेषण."

4. कीचड़ तलछट पर पीसीआर

  1. महाप्राण एक टैंक या नाबदान के तल पर एक ६० एमएल सिरिंज9 के साथ कीचड़ और एक ६० मिलीलीटर ट्यूब के लिए नमूना हस्तांतरण । अपने पेंच शीर्ष के साथ ट्यूब बंद करो और ट्यूब लेबल । सिरिंज के निपटान ।
  2. ६० मिलीलीटर ट्यूब शेक और 15 मिलीलीटर एक 15 मिलीलीटर ट्यूब स्थानांतरण । अपने पेंच शीर्ष के साथ ट्यूब बंद करो और ट्यूब लेबल ।
  3. १७५-२५० x जी में 10 मिनट के लिए स्विंग बाल्टी के साथ एक केंद्रापसारक में 15 एमएल ट्यूब के केंद्रापसारक । ट्यूबों और ट्यूब में तलछट रखने के लिए खिचड़ी भाषा ।
  4. बाहरी पैकेजिंग को हटाने और हवा के लिए बाँझ कपास टिप बेनकाब द्वारा एक झाड़ू खोल । परवाह नहीं untested सतहों को छूने के द्वारा झाड़ू के पार संदूषण से बचें ।
    1. 15 एस के लिए ट्यूब में तलछट झाड़ू ।
    2. झाड़ू वापस म्यान या एक बाँझ केंद्रापसारक ट्यूब में टिप तोड़ । नमूना लेबल, पर फ्रीज-८० ° c और पीसीआर परीक्षण के लिए भेजें ।
      नोट: ४५ एमएल में ६० एमएल ट्यूब रहते हैं । इस के रूप में ३.१ कदम में वर्णित सूक्ष्म द्वारा कीचड़ विश्लेषण द्वारा tomentosa अंडे का पता लगाने के लिए रखा जा सकता है, उदाहरण के लिए, पीसीआर परिणाम की पुष्टि करने के लिए । कीचड़ में पीसीआर कदम ३.२ के बाद आयातित पशुओं स्क्रीनिंग के लिए प्रयास किया जा सकता है ।

Representative Results

नाबदान झाड़ू का लाभ प्रचलित माइकोबैक्टीरियम एसपीपी की पहचान करने के लिए । मछली के नमूनों की तुलना में चित्रा 4में परिणाम द्वारा समर्थित हैं । ११५ मछली का परीक्षण किया, एम. chelonae और एम. haemophilum 5% और नमूनों की 3%, क्रमशः में पता लगाया गया । कोई अंय रोगजनक माइक्रोबैक्टीरियल प्रजातियों की पहचान की गई । एक ही सिस्टम से, ४९ नाबदान झाड़ू 5 माइक्रोबैक्टीरियल प्रजातियों की उपस्थिति से पता चला । बाधाओं अनुपात परिकल्पना है कि एम. chelonae और एम. fortuitum अधिक बार की सतह नाबदान झाड़ू में से मछली के नमूने में पीसीआर द्वारा पता लगाया है के साथ गणना कर रहे हैं । यह 11 (९५% CI: 4 से 29 के संबंधित बाधाओं अनुपात के साथ सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण है; p < 0.0001) और ३०६ (९५% CI: 18 से ५२०८; p = ०.०००१) । परिणाम बताते है कि सतह नाबदान झाड़ू तकनीक प्रहरी के एकमात्र उपयोग के लिए एक मूल्यवान विकल्प को माइकोबैक्टीरियम एसपीपी के लिए zebrafish सुविधा स्क्रीन है । पर्यावरण के नमूनों में भी ए. hydrophilaके लिए स्क्रीन का इस्तेमाल किया गया था । इन बैक्टीरिया मछली, कीचड़, और सतह के नमूनों में पाया गया (चित्रा 4). यह भी प्रस्तावित तकनीक के लिए मछली biotope स्क्रीन की क्षमता का समर्थन करता है ।

पी tomentosa अंडे का पता लगाने के लिए कीचड़ विश्लेषण के बारे में, मोचो9 पीसीआर और histopathology द्वारा मछली के नमूनों की 27% में परजीवी का पता लगाया जबकि अंडे एक ही सिस्टम से विश्लेषण कीचड़ के ९३% में पाए गए । यहां, तकनीक संगरोध स्क्रीनिंग को पुन: पेश करने के लिए चुनौती दी थी । इस संदर्भ में, आयातित जानवरों का नमूना नहीं किया जा सकता है, और एक समय पर तरीके से उनके स्वास्थ्य की स्थिति का आकलन करने के लिए एक साथ मदद करता है, सुरक्षा प्रबंधन । एक tomentosa सकारात्मक सुविधा से अज्ञात स्वास्थ्य की स्थिति के मछली प्रजनन उपकरणों के साथ 8 टैंकों में स्थापित किया गया: 16 मछली/13 एल टैंक, 7 ट्रांसजेनिक और 1 जंगली प्रकार लाइन, मिश्रित लिंग, 4-24 महीने की आयु वर्ग के अधिकतम । एक सप्ताह के बाद उपकरणों से कीचड़ काटा गया और माइक्रोस्कोप से विश्लेषण किया गया । 7 (८८%) नमूनों में tomentosa अंडे देखे गए । अंत में, परजीवी की पीसीआर जांच नाबदान झाड़ू और कीचड़ तलछट पर परीक्षण किया गया था । 6 में से 4 कीचड़ के नमूने थे पीसीआर पॉजीटिव और सभी परिणाम सतह झाड़ू के लिए नकारात्मक थे । कीचड़ स्क्रीनिंग के बाद से यह आश्चर्य की बात नहीं है अंडे की क्षमता टैंक के नीचे करने के लिए गिर करने के लिए पर निर्भर करता है । यह पता चलता है कि कीचड़ विश्लेषण तकनीकों पी tomentosa संक्रमण के लिए rerio aquaria स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और कि तरीकों आयातित पशुओं की स्क्रीनिंग के लिए अनुकूलित किया जा सकता है ।

Figure 1
चित्रा 1: परिसंचारी प्रणाली के बाहर पूर्व निस्पंदन प्रहरी टैंक । एक 8 एल टैंक पानी और प्रणालियों के नाबदानों से जैव मीडिया के लिए स्क्रीन के साथ भरा है । दो सफेद सिरेमिक जैव मीडिया मोती (चित्र के बीच में) टैंक के तल पर बैठते हैं । 12 मछली उनकी उंर, तनाव, और लिंग के अनुसार चुना जाता है, और वे प्रहरी टैंक में जोड़ा जाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्रा 2: tomentosa अंडा माइक्रोस्कोप द्वारा कीचड़ विश्लेषण के दौरान पाया गया । आवर्धन प्रयुक्त 400X था । तीर द्विध्रुवी प्लग संकेत मिलता है । स्केल बार = ५० µm. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: प्रजनन उपकरण विश्लेषण के लिए कीचड़ इकट्ठा करने के लिए एक मछली पकड़ टैंक में जलमग्न । इस टैंक तस्वीर के प्रयोजन के लिए एक बेंच पर सेट है; यह अंयथा परिसंचारी प्रणाली में स्थापित है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्रा 4: माइकोबैक्टीरियम एसपीपी., ए. hydrophila, और मछली, सतह नाबदान झाड़ू, और नाबदान कीचड़ पर पीसीआर द्वारा पी tomentosa की पहचान का प्रतिशत । प्रतिशत परीक्षण नमूनों की संख्या से प्रत्येक रोगज़नक़ प्रजातियों के लिए सकारात्मक परिणामों की संख्या विभाजित करके प्राप्त की है । सकारात्मक परिणामों का प्रतिशत मछली, सतह, या कीचड़ के रूप में नमूना प्रकार द्वारा दिया जाता है, और बैक्टीरिया के नाम के बाद संकेत । ११५ मछली और ४९ सतह नाबदान झाड़ू माइकोबैक्टीरियम एसपीपी की पहचान के लिए पीसीआर द्वारा परीक्षण किया गया । डेटा है मोचो के9 परिणामों के साथ संकलित के बाद से यह इस अध्ययन का एक विस्तार है । मछली मुख्य रूप से पूर्व प्रोटोकॉल अनुभाग 1 के अनुसार निस्पंदन प्रहरी हैं । शायद ही कभी, जब प्रहरी उपलब्ध नहीं थे, बच और पुरानी कॉलोनी मछली (> 18 महीने) का नमूना लिया गया । सभी परीक्षण प्रणालियों के लिए माइकोबैक्टीरियम एसपीपी. मछली और नाबदान झाड़ू पर परीक्षण किया गया । बाधाओं अनुपात परिकल्पना है कि एम. chelonae और एम. fortuitum अधिक बार की सतह नाबदान झाड़ू में से मछली के नमूने में पीसीआर द्वारा पता लगाया है के साथ गणना कर रहे हैं । यह 11 (९५% CI: 4 से 29 के संबंधित बाधाओं अनुपात के साथ सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण है; p < 0.0001) और ३०६ (९५% CI: 18 से ५२०८; p = ०.०००१) । माइकोबैक्टीरियम marinum पीसीआर सभी नमूनों के लिए नकारात्मक था और यह इसलिए इन सुविधाओं से अनुपस्थित समझा जाता है और विश्लेषण में शामिल नहीं है । 12 मछली, 14 सतह नाबदान झाड़ू, और 6 नाबदान कीचड़ पीसीआर द्वारा ए. hydrophilaकी उपस्थिति के लिए परीक्षण किया गया । ६ नाबदान की सतह पर और कीचड़ में पी tomentosa की उपस्थिति के लिए परीक्षण किया गया. पीसीआर = पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन । CI = विश्वास अंतराल । * और * * सांख्यिकीय महत्व का संकेत; अंय तुलना सांख्यिकीय महत्वपूर्ण नहीं थे । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Video 1
वीडियो 1: के एक अंडे के लिए स्कैनिंग माइक्रोस्कोप के साथ पी. tomentosa . चरण ३.१ में बताए अनुसार कीचड़ विश्लेषण से स्लाइड प्राप्त की है । P. tomentosaके एक अंडे का पता लगाने के लिए फ़ील्ड स्कैन की गई है । एक बार एक संरचना मांयता प्राप्त है, यह उच्च संकल्प पर पहचान की पुष्टि करने में तेजी से बढ़ी है । इस वीडियो को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें । (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)

लेखकों जोखिम की शुरुआत में आयु जोखिम की लंबाई नमूना आयु प्री या पोस्ट
निस्पंदन		 लिंग तनाव (ओं)
बार्टन एट अल. 3 4 महीने 6 महीने 10 महीने पूर्व निस्पंदन N/A N/A
Borges एट अल. 4 6 महीने 6 महीने 12 महीने पूर्व निस्पंदन N/A अब जंगली प्रकार
Collymore एट अल. 5 यथासंभव युवा 3 महीने < 6 महीने पूर्व निस्पंदन N/A N/A
Geisler एट अल. ६ 4 महीने 4 महीने 8 महीने प्री और पोस्ट
निस्पंदन		 N/A अब जंगली प्रकार
लियू एट अल. 7 3 महीने 1-6 महीने 4-9 महीने प्री और पोस्ट
निस्पंदन		 N/A जंगली प्रकार
Martins एट अल. 8 3 महीने 3 महीने 6 महीने पूर्व निस्पंदन N/A जंगली प्रकार
मोचो9 < 6 महीने,
6-12 महीने,
> 18 महीने		 4 महीने 7-24 महीने पूर्व निस्पंदन 1 महिला और
के 1 नर
प्रत्येक आयु समूह		 अब जंगली प्रकार
मरे एट अल । 10 3-4 महीने 3 महीने, 6 महीने, 1 साल 7, 10, और 16
महीने		 प्री और पोस्ट
निस्पंदन		 N/A अब जंगली प्रकार

तालिका 1: zebrafish सुविधाओं में प्रहरी सेटिंग्स की तुलना । प्रहरी मछली उनकी उंर, लिंग, या तनाव के अनुसार चुना जा सकता है । वे एक निर्धारित अवधि के लिए उजागर कर रहे है और वे पूर्व या बाद छानने का सिस्टम पानी प्राप्त करते हैं । डेटा Zebrafish जर्नल3,4,5,6,7,8,9, के स्वास्थ्य पर २०१६ विशेष अंक से संकलित हैं 10.

Discussion

तकनीकों, महत्वपूर्ण चरणों और समस्या निवारण की सीमाएं:

आयु, लिंग, तनाव, और प्रहरी के जोखिम की लंबाई मानकीकृत नहीं कर रहे हैं । यह तालिका 1में दिखाया गया है । वहां बहुत कम उंर के 6 महीने, या वृद्ध मछली के नीचे मछली की स्क्रीनिंग है । वहां कुछ रोगजनकों कि युवा मछली को प्रभावित हो सकता है के रूप में वहां कुछ रोगजनकों कि अधिक पुरानी आबादी10,18,19,20में प्रचलित हैं । इसी तरह, लिंग कुछ प्रहरी समूहों के चयन में कुछ रिपोर्ट के बावजूद नहीं माना जाता है कि वहां कुछ रोगजनकों के लिए एक लैंगिक पूर्वाग्रह है21। प्रस्तावित तकनीक इन मुद्दों को हल करने की कोशिश करता है, हालांकि तनाव का चुनाव एक विशिष्ट रोगज़नक़ के अनुसार किया जा सकता है पर नजर रखने के लिए । उदाहरण के लिए, TU माइकोबैक्टीरियम एसपीपी.12,22का पता लगाने के साथ मदद कर सकता है, लेकिन एक खतरा यह है कि प्रहरी तो एक जलाशय या प्रदर्शन नैदानिक संकेत के रूप में कार्य करेंगे । जोखिम की लंबाई के बारे में, Zebrafish अंतर्राष्ट्रीय संसाधन केंद्र10 के दृष्टिकोण के लिए रोगजनकों कि एक अपर्याप्त संदूषण अवधि के साथ याद किया जा सकता है पता लगाने की संभावना बढ़ जाती है । लंबे समय तक जोखिम के लिए की जरूरत का तात्पर्य है कि प्रहरी आसानी से उपलब्ध नहीं हैं । पर्यावरण के नमूनों के अलावा कुछ लचीलापन और स्क्रीनिंग घटनाओं के गुणन की अनुमति देता है । उदाहरण के लिए, नमूना हर दूसरे महीने जगह प्रत्येक स्क्रीनिंग विधि के बीच एक 4 महीने के अंतराल के साथ ले जा सकते हैं । यह एक नए शुरू रोगज़नक़ का पता चला है पहले समय की चूक को कम कर सकते हैं ।

पर्यावरण जांच तकनीक पर्यावरण में रोगजनकों का पता लगाने पर भरोसा करते हैं । रोगजनकों मछली द्वारा बहाया और इसलिए प्रणाली पानी में पतला कर रहे हैं । जल निस्23 द्वारा रोगजनकों पर कब्जा करने की संभावना का पता नहीं लगाया गया । तरीकों का वर्णन हम केवल प्रभावी अगर रोगजनकों पर्याप्त समय के लिए मछली और फिल्म में गुणा दिया जाता है पता लगाने की अनुमति संदूषण की दहलीज तक पहुंच रहे हैं । इस तकनीक की कमी नमूना साइटों की एक महत्वपूर्ण चयन से कम है: टैंक में कीचड़ नाबदान कीचड़ के बजाय नमूना है, और पानी और फिल्म नाबदान की सतह पर नमूने के बजाय एक टैंक या छानने का स्थान में नमूना लिया जाता है... । इसके बावजूद एक ही सिस्टम से सभी नमूनों को समान परिणाम देने की संभावना नहीं है. tomentosa के लिए सकारात्मक परिणाम एक और परख (histopathology, पीसीआर, या कीचड़ विश्लेषण) का उपयोग करके पुष्टि की जा सकती है । माइक्रोबैक्टीरियल पीसीआर सकारात्मक परिणाम संस्कृति या किसी अंय नैदानिक प्रयोगशाला द्वारा पुष्टि की जा सकती है । हालांकि, जब एक स्वास्थ्य की स्थिति की स्थापना, और नमूनों के लिए किसी भी पर्यावरण जांच तकनीक से नकारात्मक परिणामों की पुष्टि की सिफारिश कर रहे हैं ।

मौजूदा/वैकल्पिक तरीकों के संबंध में तकनीक का महत्व:

माइकोबैक्टीरियम एसपीपी वातावरण में आम है और नाबदान में उनकी उपस्थिति की भविष्यवाणी नहीं करता है उनके pathogenicity12। मोचो9 से पता चला है कि निगरानी मृत्यु दर स्वास्थ्य के मुद्दों के विकास के सर्वेक्षण के लिए महत्वपूर्ण है । पशु नमूनों का उपयोग किसी भी पशु चिकित्सा जांच के लिए आवश्यक रहता है । स्वास्थ्य निगरानी एक सुविधा में सभी प्रचलित रोगजनकों का पता लगाने का तात्पर्य है और यह पर्यावरण जांच तकनीक के एकमात्र उपयोग के साथ प्राप्त नहीं किया जा सकता है । फिर भी, निदान उपकरण की संवेदनशीलता की कमी में देरी या स्वास्थ्य की स्थिति का एक सटीक विवरण को रोकने कर सकते हैं । जबकि प्रहरी के उपयोग के लिए जनसंख्या में एक प्रचलित सूक्ष्म का पता लगाने के लिए आवश्यक मछली की संख्या कम कर देता है, संवेदनशीलता की कमी को पर्यावरण स्क्रीनिंग5,23सहित विधियों का एक संयोजन का उपयोग करने के लिए वजन कहते हैं । वास्तव में विशिष्ट रोगज़नक़ मुक्त स्थिति आमतौर पर इस तरह की सुविधा है कि पर्यावरण और पशु नमूने नकारात्मक24,25परीक्षण करना चाहिए में एक प्रजाति के अभाव के रूप में परिभाषित किया गया है ।

नाबदान झाड़ू को माइकोबैक्टीरियम एसपीपी. show की पहचान करने के लिए परिणाम है कि मछली के नमूनों पर भरोसा एक झूठी नकारात्मक स्वास्थ्य स्थिति के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । 6 परीक्षण माइक्रोबैक्टीरियल प्रजातियों में रोगजनक या संभावित रोगजनक के रूप में वर्णित है zebrafish15 और कुछ के रूप में नियमित रूप से संगरोध में प्रदर्शन किया क्लोरीन26 के साथ अंडा सतह के संक्रमण से समाप्त नहीं किया जाएगा । इसलिए, झूठी नकारात्मक सहयोगियों जो लाइनों को आयात करने के लिए कुछ परिणाम हो सकता है । उदाहरण के लिए, एम. fortuitum मछली के नमूने पर पीसीआर से चूक गया था लेकिन नाबदान झाड़ू पीसीआर के आधे से अधिक यह पता चला । यह देखते हुए कि इन आइसोलेटों अधिक दूसरों की तुलना में क्लोरीन के लिए प्रतिरोधी रहे है और उनके पानी प्रणालियों में वृद्धि करने की क्षमता27, यह गैर दूषित आयात सुविधा के लिए एक जोखिम है । लाइनों के आयात की अनुमति के लिए, प्रबंधकों पर भरोसा है और उनकी तुलना के साथ निर्यात की सुविधा के स्वास्थ्य रिपोर्टों की जरूरत है । ICLAS प्रदर्शन मूल्यांकन प्रोग्राम28 उस प्रक्रिया को कुतर में कुंजी है । regordonae नेटवर्क फ्रेंच डी. rerio11में एम. और एम. mucogenicum का पता लगाने की रिपोर्ट । इन आइसोलेटों का उपयोग हम वाणिज्यिक प्रयोगशालाओं के पैनलों में प्रस्तावित नहीं कर रहे हैं । यह ICLAS कार्यक्रम का विस्तार करने के लिए और नैदानिक परख अनुरूप के रूप में के रूप में अच्छी तरह से रोगजनक प्रजातियों की सूची29उपयोगी होगा ।

ए. hydrophila भी एक रोगज़नक़ कि क्षमता है जब पशुओं के आयात करने के लिए पेश किया है, हालांकि अपनी क्लोरीन30 अपने उंमूलन अधिक दिनचर्या अंडा सतह के संक्रमण के दौरान होने की संभावना बनाता है । नाबदान, झाड़ू, और कीचड़ परिणाम बताते है कि पर्यावरण जांच के लिए इस रोगज़नक़ का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । पीसीआर23द्वारा कीचड़ में माइकोबैक्टीरियम एसपीपी जैसे अन्य बैक्टीरिया का पता लगाया गया है । नमूना के इस प्रकार विशेष रूप से प्रासंगिक है क्योंकि यह शेड रोगजनकों का पता लगाने की अनुमति देता है । उदाहरण के लिए, एक और नया आवेदन tomentosaके लिए संगरोध में आयातित मछली स्क्रीन करने के लिए कीचड़ विश्लेषण है. परजीवी पशु के स्वास्थ्य13 और neoplasia मॉडल16के लिए एक खतरा है । इसके अलावा, नियमित zebrafish अंडे की सतह के संक्रमण में इस्तेमाल क्लोरीन सांद्रता31कुशल नहीं हैं । इसलिए, एक सप्ताह के कारोबार के साथ और किसी भी मछली इच्छामृत्यु के बिना आयातित जानवरों को स्क्रीन करने की क्षमता बहुत आकर्षक लगता है । इस तकनीक के आयात के एक triage की अनुमति से संगरोध और सुरक्षा नियमों को प्रभावित कर सकते हैं । एक निर्णय प्रक्रिया तो निर्यात सुविधा में प्रचलित रोगजनकों के अनुसार बनाया गया है, आयातित मछली से नमूनों में पाया रोगजनकों, और आयात सुविधा के स्वास्थ्य की स्थिति से समझौता करने का खतरा10।

भविष्य अनुप्रयोगों या इन तकनीकों माहिर के बाद निर्देश:

यहां तक कि अगर नियमित संगरोध उपचार चुना विकल्प है, ऐसी दवा की प्रभावकारिता३२,३३,३४,३५,३६ प्रजनन डिवाइस कीचड़ विश्लेषण के साथ मूल्यांकन किया जा सकता है । अधिक सामांयतः, पर्यावरणीय स्क्रीनिंग मछली biotope में शामिल बैक्टीरिया और परजीवी उंमूलन के खिलाफ यौगिकों का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । पर्यावरण जांच के एक अंय आला आवेदन के लिए जीना फ़ीड३७,३८में रोगज़नक़ आबादी की निगरानी है । हालांकि इन तकनीकों के मुख्य आवेदन zebrafish सुविधाओं में स्वास्थ्य की निगरानी के लिए निदान toolbox के लिए एक मूल्यवान इसके अतिरिक्त के रूप में है । एक और अधिक सटीक, लागत और स्वास्थ्य की स्थिति के समय कुशल परिभाषा के लिए धंयवाद, नाबदान झाड़ू और कीचड़ विश्लेषण प्रहरी निगरानी और दिनचर्या संगरोध अभ्यास के पूरक हैं । दरअसल, इन तकनीकों का भविष्य किसी भी जलीय प्रयोगशाला स्वास्थ्य रिपोर्ट का नियमित हिस्सा होना है.

Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

लेखक अपनी तकनीकी मदद और अहम इनपुट के लिए फ्रांसिस क्रिकेटरों संस्थान की BRF तैराकी टीम का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । यह काम फ्रांसिस क्रिकेटरों संस्थान जो कैंसर रिसर्च यूके (FC001999), ब्रिटेन के चिकित्सा अनुसंधान परिषद (FC001999), और वेलकम ट्रस्ट (FC001999) से अपने मूल धन प्राप्त करता है द्वारा समर्थित किया गया ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Aqua-Sed 250 mL Vetark 2-phenoxyethanol
Tubed Sterile Dryswab Tip mwe MW100 Sump surface
BD Plastipak Disposable Syringe 50mL Eccentric Becton
Dickinson		 300866 They are actually
graduated to 60 ml
Centrifuge tube 15 mL Corning Corning 430766
Centaur 2 benchtop centrifuge with 4 x 200 mL Swing–Out Rotor (unsealed) Sanyo MSB020.CX1.5
Cover Glass 22 mm x22 mm Menzel-Glaser MNJ-350-020H
Plain Swab Sterile Plastic Applicator Rayon Tipped White Cap Sterilin Ltd Thermo Fisher Scientific F155CA Swab sediment from sludge
50 mL Self-Standing Centrifuge Tube CentriStar Cap Corning 430921
In-Tank Spawning Tray Set MBK Installations Ltd

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References

  1. Schroeder, P., Mocho, J. P. A veterinary perspective on laboratory zebrafish welfare. Fish Veterinary Journal. 14, 37-46 (2014).
  2. Mason, T., et al. Strategies to Mitigate a Mycobacterium marinum Outbreak in a Zebrafish Research Facility. Zebrafish. 13, Suppl 1. 77-87 (2016).
  3. Barton, C. L., Johnson, E. W., Tanguay, R. L. Facility Design and Health Management Program at the Sinnhuber Aquatic Research Laboratory. Zebrafish. 13, Suppl 1. 39-43 (2016).
  4. Borges, A. C., et al. Implementation of a Zebrafish Health Program in a Research Facility: A 4-Year Retrospective Study. Zebrafish. 13, Suppl 1. 115-126 (2016).
  5. Collymore, C., Crim, M. J., Lieggi, C. Recommendations for Health Monitoring and Reporting for Zebrafish Research Facilities. Zebrafish. 13, Suppl 1. 138-148 (2016).
  6. Geisler, R., Borel, N., Ferg, M., Maier, J. V., Strähle, U. Maintenance of Zebrafish Lines at the European Zebrafish Resource Center. Zebrafish. 13, Suppl 1. 19-23 (2016).
  7. Liu, L., Pan, L., Li, K., Zhang, Y., Zhu, Z., Sun, Y. Zebrafish Health Conditions in the China Zebrafish Resource Center and 20 Major Chinese Zebrafish Laboratories. Zebrafish. 13, Suppl 1. 8-18 (2016).
  8. Martins, S., Monteiro, J. F., Vito, M., Weintraub, D., Almeida, J., Certal, A. C. Toward an Integrated Zebrafish Health Management Program Supporting Cancer and Neuroscience Research. Zebrafish. 13, Suppl 1. 47-55 (2016).
  9. Mocho, J. -P. Three-Dimensional Screen: A Comprehensive Approach to the Health Monitoring of Zebrafish. Zebrafish. 13, Suppl 1. 132-137 (2016).
  10. Murray, K. N., Varga, Z. M., Kent, M. L. Biosecurity and Health Monitoring at the Zebrafish International Resource Center. Zebrafish. 13, Suppl 1. 30-38 (2016).
  11. Legendre, L., et al. RESAMA: A Network for Monitoring Health and Husbandry Practices in Aquatic Research Facilities. Zebrafish. 13, Suppl 1. 56-65 (2016).
  12. Whipps, C. M., Matthews, J. L., Kent, M. L. Distribution and genetic characterization of Mycobacterium chelonae in laboratory zebrafish Danio rerio. Dis Aquat Organ. 82 (1), 45-54 (2008).
  13. Murray, K. N., Peterson, T. S. Pathology in practice. P. tomentosa infection in zebrafish. J Am Vet Med Assoc. 246 (2), 201-203 (2015).
  14. Foreyt, W. J. Veterinary Parasitology Reference Manual. , 5th Edition, Wiley-Blackwell. Ames, IA. (2001).
  15. Whipps, C. M., Lieggi, C., Wagner, R. Mycobacteriosis in zebrafish colonies. ILAR J. 53 (2), 95-105 (2012).
  16. Kent, M. L., Bishop-Stewart, J. K., Matthews, J. L., Spitsbergen, J. M. Pseudocapillaria tomentosa, a nematode pathogen, and associated neoplasms of zebrafish (Danio rerio) kept in research colonies. Comp Med. 52 (4), 354-358 (2002).
  17. Moravec, F. Observations on the bionomy of the nematode Pseudocapillaria brevispicula (Linstow, 1873). Folia Parasitol. 30, 229-241 (1983).
  18. Ramsay, J. M., Watral, V., Schreck, C. B., Kent, M. L. Pseudoloma neurophilia infections in zebrafish Danio rerio: effects of stress on survival, growth, and reproduction. Dis Aquat Organ. 88 (1), 69-84 (2009).
  19. Watral, V., Kent, M. L. Pathogenesis of Mycobacterium spp. in zebrafish (Danio rerio) from research facilities. Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 145, 55-60 (2007).
  20. Whipps, C. M., Dougan, S. T., Kent, M. L. Mycobacterium haemophilum infections of zebrafish (Danio rerio) in research facilities. FEMS Microbiol Lett. 270, 21-26 (2007).
  21. Chow, F. W., Xue, L., Kent, M. L. Retrospective study of the prevalence of Pseudoloma neurophilia shows male sex bias in zebrafish Danio rerio (Hamilton-Buchanan). J Fish Dis. 39 (3), 367-370 (2016).
  22. Murray, K. N., Bauer, J., Tallen, A., Matthews, J. L., Westerfield, M., Varga, Z. M. Characterization and management of asymptomatic Mycobacterium infections at the Zebrafish International Resource Center. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 675-679 (2011).
  23. Crim, M. J., Lawrence, C., Livingston, R. S., Rakitin, A., Hurley, S. J., Riley, L. K. Comparison of Antemortem and Environmental Samples for Zebrafish Health Monitoring and Quarantine. J Am Assoc Lab Anim Sci. , (2017).
  24. Jensen, E. S., Allen, K. P., Henderson, K. S., Szabo, A., Thulin, J. D. PCR testing of a ventilated caging system to detect murine fur mites. J Am Assoc Lab Anim Sci. 52 (1), 28-33 (2013).
  25. Commission Regulation (EC) No 1168/2006 of 31 July 2006 implementing Regulation (EC) No 2160/2003 as regards a Community target for the reduction of the prevalence of certain salmonella serotypes in laying hens of Gallus gallus and amending Regulation (EC) No 1003/2005 (Text with EEA relevance). OJ. L. 211, 4-8 (2006).
  26. Chang, C. T., Colicino, E. G., DiPaola, E. J., Al-Hasnawi, H. J., Whipps, C. M. Evaluating the effectiveness of common disinfectants at preventing the propagation of Mycobacterium spp. isolated from zebrafish. Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 178, 45-50 (2015).
  27. Le Dantec, C., Duguet, J. P., Montiel, A., Dumoutier, N., Dubrou, S., Vincent, V. Chlorine disinfection of atypical mycobacteria isolated from a water distribution system. Appl Environ Microbiol. 68 (3), 1025-1032 (2002).
  28. Goto, K., Hayashimoto, N., Ishida, T., Takakura, A., Kagiyama, N. First trial in the developmental phase of the "performance evaluation program" based on the ICLAS animal quality network program: self-assessment of microbiological monitoring methods using test samples supplied by ICLAS. Exp Anim. 58 (1), 47-52 (2009).
  29. Nogueira, C. L., et al. Mycobacterium saopaulense sp. nov., a rapidly growing mycobacterium closely related to members of the Mycobacterium chelonae--Mycobacterium abscessus group. Int J Syst Evol Microbiol. 65 (12), 4403-4409 (2015).
  30. Massa, S., Armuzzi, R., Tosques, M., Canganella, F., Trovatelli, L. D. Note: susceptibility to chlorine of Aeromonas hydrophila strains. J Appl Microbiol. 86 (1), 168-173 (1999).
  31. Martins, M. L., Watral, V., Rodrigues-Soares, J. P., Kent, M. L. A method for collecting eggs of Pseudocapillaria tomentosa (Nematoda: Capillariidae) from zebrafish Danio rerio and efficacy of heat and chlorine for killing the nematode's eggs. J Fish Dis. 40 (2), 169-182 (2017).
  32. Maley, D., Laird, A. S., Rinkwitz, S., Becker, T. S. A simple and efficient protocol for the treatment of zebrafish colonies infected with parasitic nematodes. Zebrafish. 10 (3), 447-450 (2013).
  33. Samaee, S. M. Experimental Assessment of the Efficacy of Five Veterinary Broad-Spectrum Anthelmintics to Control the Intestinal Capillariasis in Zebrafish (Danio rerio). Zebrafish. 12 (3), 255-267 (2015).
  34. Collymore, C., et al. Tolerance and Efficacy of Emamectin Benzoate and Ivermectin for the Treatment of Pseudocapillaria tomentosa in Laboratory Zebrafish (Danio rerio). Zebrafish. 11 (5), 490-497 (2014).
  35. Chang, C. T., Whipps, C. M. Activity of Antibiotics against Mycobacterium Species Commonly Found in Laboratory Zebrafish. Journal of Aquatic Animal Health. 27 (2), 88-95 (2015).
  36. Chang, C. T., Doerr, K. M., Whipps, C. M. Antibiotic treatment of zebrafish mycobacteriosis: tolerance and efficacy of treatments with tigecycline and clarithromycin. J Fish Dis. , (2017).
  37. Peterson, T. S., Ferguson, J. A., Watral, V. G., Mutoji, K. N., Ennis, D. G., Kent, M. L. Paramecium caudatum enhances transmission and infectivity of Mycobacterium marinum and M. chelonae in zebrafish Danio rerio. Dis Aquat Organ. 106 (3), 229-239 (2013).
  38. Watts, S. A., Lawrence, C., Powell, M., D'Abramo, L. R. The Vital Relationship Between Nutrition and Health in Zebrafish. Zebrafish. 13, Suppl 1. 72-76 (2016).

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माइक्रोबायोलॉजी अंक १३० पर्यावरण जांच Aeromonas hydrophila माइकोबैक्टीरियम एसपीपी. Pseudocapillaria tomentosa zebrafish ढाणियो rerio स्वास्थ्य निगरानी फिल्म कीचड़ संगरोध मछली पानी माइक्रोबायोलॉजी
Pseudocapillaria प्रणालियों में <em>Aeromonas hydrophila</em>, <em>माइकोबैक्टीरियम</em> एसपीपी., और <em>tomentosa Zebrafish</em> की पर्यावरणीय स्क्रीनिंग
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Mocho, J. P., Martin, D. J.,… More

Mocho, J. P., Martin, D. J., Millington, M. E., Saavedra Torres, Y. Environmental Screening of Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp., and Pseudocapillaria tomentosa in Zebrafish Systems. J. Vis. Exp. (130), e55306, doi:10.3791/55306 (2017).

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