Abstract
الهجرة خلية / اصابة الفحص هو الطريقة المستخدمة عادة لدراسة الهجرة الخلية والعمليات الحيوية الأخرى، مثل الأوعية الدموية والانبثاث ورم. في هذا الاختبار، تزرع الخلايا لتشكيل أحادي الطبقة متموجة ويتم إنشاء الجرح الميكانيكية بواسطة خدش مع الجهاز. ثم يمكن رصدها معدل الهجرة من الخلايا باتجاه منطقة الجرداء بواسطة التصوير. تم تصميم wounder الميكانيكية 8 قنوات لمعالجة معظم المشاكل المرتبطة فحص الهجرة الخلية. أولا، wounder لدينا يمكن تعقيمها بسهولة عن طريق التعقيم أو مع المطهرات الشائعة. ثانيا، دبابيس قابل للتعديل الفردية تسمح الاتصال حتى مع لوحة الثقافة الخلية بحيث يمكن إنشاء الجروح الحادة وقابلة للتكرار. ثالثا، قضبان توجيه على كلا الجانبين من wounder ضمان موقف جرح ثابت في كل بئر. استخدام المتاح نصائح ماصة بلاستيكية للإصابة يمكن أن يزيد من توفير معالجة أفضل للwounder وكذلك لتقليل عبر contaminatأيون. في الختام، يمكن لنا wounder خلية توفر الباحثين مع جهاز سهل الاستخدام وقابلة للتكرار لأداء الفحص الهجرة الخلية باستخدام معيار لوحة ثقافة 96-جيدا.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 96-well cell culture plate | Nunc | 167008 | Other brands of 96-well cell culture plate can also be used |
| P10 pipette tips | Axygen | 301-03-051 | Short P10 pipette tip is more easy to create a clear wound |
| Wounder | R&P Technology Limited | ||
| Medium 199 | Sigma | M2520-1L | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Fetal bovine serum | Gibco | 26140079 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140122 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma | H3393 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Gelatin from bovine skin | Sigma | G9391 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
References
- Friedl, P., Wolf, K. Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms. Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).
- Friedl, P. Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration. Curr Opin Cell Biol. 16 (1), 14-23 (2004).
- Lampugnani, M. G. Cell migration into a wounded area in vitro. Methods Mol Biol. 96, 177-182 (1999).
- Sholley, M. M., Gimbrone, M. A. Jr, Cotran, R. S. Cellular migration and replication in endothelial regeneration: a study using irradiated endothelial cultures. Lab Invest. 36 (1), 18-25 (1977).
- Gotlieb, A. I., Spector, W. Migration into an in vitro experimental wound: a comparison of porcine aortic endothelial and smooth muscle cells and the effect of culture irradiation. Am J Pathol. 103 (2), 271-282 (1981).
- Chen, Y. C., et al. Single-cell migration chip for chemotaxis-based microfluidic selection of heterogeneous cell populations. Sci Rep. 18 (5), 9980 (2015).
- Yarrow, J. C., Periman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparsion of image-based readout methods. BMC Biotechnol. 4, 21 (2004).
- Lauder, H., Frost, E. E., Hiley, C. R., Fan, T. P. Quantification of the repair process involved in the repair of a cell monolayer using an in vitro model of mechanical injury. Angiogenesis. 2 (1), 67-80 (1998).
- Yue, P. Y. K., Leung, E. P. Y., Mak, N. K., Wong, R. N. S. A simplified method for quantifying cell migration/ wound healing in 96-well plates. J. Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).
- Yue, P. Y., et al. Elucidation of the mechanisms underlying the angiogenic effects of ginsenoside Rg(1) in vivo and in vitro. Angiogenesis. 8 (3), 205-216 (2005).
- Kwok, H. H., Chan, L. S., Poon, P. Y., Yue, P. Y., Wong, R. N. Ginsenoside-Rg1 induces angiogenesis by the inverse regulation of MET tyrosine kinase receptor expression through miR-23a. Toxicol Appl Pharmacol. 287 (3), 276-283 (2015).
