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Medicine

हर्बल चिकित्सा की तैयारी: एर-जियान काढ़े और एर-जियान युक्त सीरम के लिए Published: May 31, 2017 doi: 10.3791/55654
Automatic Translation
1, 1, 1, 2, 1,2
1Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2The Academy of Integrative Medicine of Fudan University

Summary

यहाँ, हम चार चरणों में एक एर-एक्सयन काढ़े (एएनडीडी) की तैयारी प्रस्तुत करते हैं-भिगोने, काढ़े, निस्पंदन, और एकाग्रता- और चूहों को तैयार EXD युक्त सीरम के प्रशासन का प्रदर्शन करते हैं। ये विधियां विवो और पारंपरिक चीनी दवाओं जैसे हर्बल डकोचों के इन विट्रो अध्ययन में लागू होती हैं।

Abstract

पारंपरिक हर्बल दवाएं, नैदानिक ​​सेटिंग में एक वैकल्पिक चिकित्सा, हाल के वर्षों में बढ़ी हुई ध्यान प्राप्त हुई हैं। शरीर को प्रसव करने से पहले, सक्रिय निकासी को कच्ची जड़ी-बूटियों से जारी करने के लिए एक अतिरिक्त निकासी प्रक्रिया सामान्यतः आवश्यक होती है। जल का काढ़ा एक शास्त्रीय निष्कर्षण प्रक्रिया है जो अभी भी सामान्य रूप से नैदानिक ​​सेटिंग्स में उपयोग किया जाता है। यहां, हम प्रायोगिक अध्ययनों के लिए हर्बल डकोप्लों को लागू करने के लिए एर-एक्सयन डीकोक्शन (एक्सडी) के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल का प्रस्ताव करते हैं। पशु-उचित खुराक की गणना वर्णित है, साथ ही साथ EXD के चार मुख्य चरण: भिगोने, पानी का काढ़ा, निस्पंदन, और एकाग्रता। इसके अतिरिक्त, सीरम युक्त एक्सडी इन विट्रो सत्यापन में एक साधन के रूप में चूहों को पेश किया जाता है। यहां, चूहों को मौखिक रूप से तीन दिनों के लिए EXD का प्रबंध किया गया था तब रक्त के नमूनों को इकट्ठा, निष्क्रिय, केन्द्रित किया गया, और फ़िल्टर्ड किया गया। संस्कृति माध्यम से पतला सीरम, वी में कोशिकाओं या ऊतकों का इलाज करने के लिए उपयोग किया जा सकता हैइट्रो उदाहरण के लिए, EXD को विवो और इन विट्रो अध्ययन दोनों में लागू किया गया और यह दर्शाया गया कि EXD में ऑस्टोजेनेसिस को बढ़ाया जाता है इस प्रोटोकॉल को हर्बल दवाओं की तैयारी और आवेदन के संदर्भ के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

Introduction

परंपरागत हर्बल दवाओं के अध्ययन और आवेदन में रुचि वर्तमान में बढ़ रही है। आधुनिक दवाओं के विरोध में, जिसमें रासायनिक अवयव निश्चित होते हैं, हर्बल फ़ार्मुलों में कुछ अज्ञात तत्व होते हैं और उनके सक्रिय यौगिकों के वितरण को सक्षम करने के लिए निकासी प्रक्रिया की आवश्यकता होती है। हालांकि कई अध्ययन पूरे जड़ी बूटी या हर्बल फार्मूले के एक प्रतिनिधि के रूप में प्रसिद्ध संरचना के साथ एक छोटे से यौगिक चुनने की कोशिश करते हैं, न कि औषधीय व्यंजनों और न ही तंत्र को समतुल्य 1 , 2 माना जा सकता है। जबकि फिंगरप्रिंटिंग जटिल हर्बल फार्मूले के घटकों के विश्लेषण को सक्षम बनाता है, कुछ घटकों को अभी भी स्पष्ट रूप से विश्लेषण नहीं किया जाता है, जो एक चुनौती के लिए आगे बढ़ता है जब अध्ययन 3 के सभी अर्क सम्मिलित होते हैं। कई घटक / निष्कर्षों की बातचीत हर्बल दवाओं के चिकित्सीय प्रभावों की मध्यस्थता करते हैं। इस लाभ को बरकरार रखने के लिए, पारंपरिक निकालने के प्रपत्र- डांटआयन-अभी भी क्लिनिक में व्यापक रूप से प्रयोग किया जाता है। चूंकि निकालने की प्रक्रिया का चिकित्सीय प्रभावकारिता पर काफी प्रभाव पड़ता है, इसलिए परंपरागत जल काढ़े का एक मानक प्रोटोकॉल आवश्यक है, खासकर विवो अध्ययन 4 , 5 में ।

दूसरी ओर, औषधीय तंत्र की खोज करते समय, इन विट्रो या पूर्व विवो अध्ययन के दौरान हर्बल डकोक्शन का प्रशासन भी एक चुनौती है। एक दवा युक्त सीरम की अवधारणा को पहले 1988 में ताशिनो द्वारा प्रस्तावित किया गया था। तब से, शोधकर्ताओं की बढ़ती संख्या ने हर्बल औषधि 7 , 8 , 9 में इसे लागू किया है। यद्यपि दवा युक्त सीरम की विधि में कुछ सीमाएं हैं, जैसे कि सीरम के कुछ घटकों के प्रभाव, यह अभी भी ऐसी विधि माना जाता है जो निकट शारीरिक स्थितियों की नकल करता है

, 10 , 11 , 12 , 13 । यह एप्लास्टिक एनीमिया 14 , रजोनिवृत्त ऑस्टियोपोरोसिस 15 , 16 , 17 , समयपूर्व डिम्बग्रंथि विफलता 18 , स्तन कैंसर 19 , डिम्बग्रंथि के कैंसर 20 और देयता में यौवन 21 के उपचार के लिए भी लागू किया गया है। यहां, हम एर-एक्सयन काढ़े (एएनडीडी) और इसकी दवा युक्त सीरम की तैयारी के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। इसके अलावा, हम एक्सरी और एक्सडी युक्त सीरम के मूविन रजोनिवृत्ति के ऑस्टियोपोरोसिस मॉडलों के बारे में बताते हैं।

एक EXD कर्क्यूलागो ऑर्किओइड गर्टन , हेर्बा एपिमाइडी के प्रत्येक 9 ग्राम से बना है रेडिक्स मोरिंडी एफ़ासिनालिस , और रेडिक्स एंजेलिका सीनेंसिस तथा प्रति ग्रेट प्रति कैंसर के प्रति वयस्क प्रोटेक्स फीलोडेंड्री और Rhizoma Anemarrhenae प्रत्येक रोगी प्रति दिन। निम्न समीकरण 22 : डीबी = डीए * आरबी / आरए * (डब्लूए / डब्ल्यूबी) 1/3 के आधार पर माउस के बराबर मात्रा 0.1418 एक्सडी / किग्रा / दिन है। डीए और डीबी क्रमशः मानव और माउस की मात्रा प्रति शरीर वजन (मिलीग्राम / किग्रा) का उल्लेख करते हैं। खुराक, मिलीग्राम / किग्रा में, एक्सडी / किग्रा की संख्या से प्रतिस्थापित किया जाता है आरए और आरबी क्रमशः मानव शरीर के कारक और माउस बॉडी फॅक्टर का प्रतिनिधित्व करते हैं, जो (शरीर की सतह क्षेत्र (एम 2 ) / शरीर के वजन (किग्रा)) के अनुपात में होते हैं। 2/3 ( तालिका 1 देखें)। डब्ल्यूए और डब्लू। बी। क्रमशः मानव और माउस के शरीर के वजन (किग्रा) को दर्शाता है।

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Protocol

प्रोटोकॉल शंघाई पारंपरिक चीनी चिकित्सा विश्वविद्यालय के पशु देखभाल दिशानिर्देशों का पालन करता है और पशु प्रयोग शंघाई पशु आचार समिति द्वारा अनुमोदित है।

1. प्रोटोकॉल I: EXD की तैयारी

  1. गणना
    1. 10 छः महीने की महिला छिद्र नियंत्रण क्षेत्र (आईसीआर) चूहों (0.02 किग्रा / माउस), 12 सप्ताह के लिए प्रति सप्ताह 5 दिनों के उपचार समूह में EXD का प्रबंधन।
      नोट: 1.702 EXD की कुल आवश्यकता है। क्योंकि EXDs को पृथक वेतन वृद्धि में मापा जाता है, असली अभ्यास में, 2 EXDs का संचालन करें
    2. एक्सडी की मात्रा प्रति गणना करें ( यानी वी = (0.1418 एक्सडी / किग्रा दिन) * (0.02 किलो / माउस) * 50 एमएल / एक्सडी = 0.14 एमएल / माउस · दिन)।
  2. शोषण
    1. दो EXDs ( यानी, कर्क्यूलिकोगो ऑर्किओएड्स गेटन (18 ग्राम), हेर्बा एपिमाइडी (18 ग्राम), रेडिक्स मोरिन्देई अफैप्सिनालिस (18 ग्राम), आरएडीक्स एंजेलिका सीनेंसिस (18 ग्राम), कॉर्टेक्स फीलोडेंड्री (12 ग्राम), और राइज़ोमा अनेमरेनेए (12 ग्राम), कुल मिलाकर 96 ग्राम) एक कंटेनर में ढक्कन के साथ।
      नोट: एक सिरेमिक कंटेनर की सिफारिश की है।
    2. 1 घंटे के लिए आसुत जल के 500 मिलीलीटर के साथ कच्ची जड़ी बूटियों को मिलाएं; पानी के बारे में एक इंच के बारे में जड़ी बूटियों को कवर किया जाना चाहिए सभी जड़ी बूटियों को अच्छी तरह से सोखें
  3. पहले पानी का काढ़ा
    1. एक गैस कुकर या उच्च शक्ति पर एक प्रेरण कुकर का इस्तेमाल करते हुए जड़ी बूटियों को गर्म पानी तक उबलते हैं (5 - 10 मिनट; समय अवधि ताप बिजली, कंटेनर, और जड़ी बूटियों और पानी की मात्रा पर निर्भर करता है)। 2 घंटे के लिए एक कम उबाल के लिए बिजली नीचे बारी
  4. पहले निस्पंदन
    1. नियमित फिल्टर पेपर के साथ 500 एमएल कांच बीकर और धुंध और कपास के साथ कवर करें। ध्यान से फिल्टर के माध्यम से बीकर में काढ़ा बंद करो। कंटेनर में जड़ी बूटियों को छोड़ दें
    2. शेष हर्बल अवशेष ओ पर लौटेंकंटेनर को फ़िल्टर पेपर n
  5. दूसरा जल काढ़े
    1. जड़ी बूटियों के साथ डिस्टिल्ड वॉटर को कंटेनर में जोड़ें; इसे एक इंच के बारे में जड़ी बूटियों को कवर करने दें।
    2. चरण 1.3 दोहराएं
  6. दूसरा निस्पंदन
    1. 1.4.1 और 1.4.2 चरणों को दोहराएं।
    2. एक ही बीकर में दूसरा काढ़ा डालो पहले और दूसरे काढ़े को एक साथ मिलाएं।
  7. एकाग्रता
    1. बीकर को एक गैस कुकर पर रख दें, जिसमें एस्बेस्टस-फ्री वायर धुंध के साथ, कम उबाल का उपयोग करके काढ़े को गर्म करें, और धीरे-धीरे और लगातार एक ग्लास रॉड के साथ हलचल दें।
    2. जब काढ़े 200 एमएल तक कम होता है, तो उसे 500 एमएल बीकर में स्थानांतरित करें।
    3. दोहराएँ चरण 1.7.1 जब तक काढ़े 100 एमएल तक कम कर देता है।
  8. भंडारण और प्रशासन
    1. एक बाँझ कांच की बोतल के लिए केंद्रित काढ़े स्थानांतरण इसे कमरे के तापमान को ठंडा करने देंफिर (आरटी) 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें अगर एक सप्ताह के भीतर या लंबी-अवधि के भंडारण के लिए -70 डिग्री सेल्सियस पर का उपयोग कर।
    2. गेव्विज सुई का प्रयोग करना, प्रति दिन एक बार ओवरीटीक्माइज्ड (ओवीएक्स) चूहों के लिए काढ़े के 0.14 एमएल / माउस का प्रशासन करना, 12 सप्ताह के लिए सप्ताह में 5 दिन।

2. प्रोटोकॉल II: EXD युक्त सीरम की तैयारी

  1. गणना
    1. प्रत्येक चूहे के शरीर का वजन (1 महीने पुराना) के रूप में 0.15 किग्रा का उपयोग करते हुए चूहे-समतुल्य मात्रा (लाल) की गणना करें: डीबी = (1/60) * (90/100) * (60 / 0.15) 1/3 = 0.111 EXD / किलोग्राम / दिन।
      नोट: 100 मिलीलीटर संस्कृति माध्यम (10% EXD युक्त सीरम) तैयार करने के लिए कुल 10 एमएल एक्स्ट युक्त सीरम की आवश्यकता है। प्रत्येक चूहे से सीरम के 2 एमएल उपलब्ध होने की उम्मीद है। इस प्रकार, 6 दिन पहले (एक 20% हानि को ध्यान में रखा जाता है) तीन दिनों के लिए एक दिन में एक्द प्रशासन के लिए आवश्यक है। EXD की संख्या है: (0.111 EXD / किग्रा दिन) * (0.15 किलो / चूहा) * (6 चूहे) * (3 दिन) = 0.300 EXD। दोबारा, क्योंकि EXDs को पृथक वेतन वृद्धि में मापा जाता है,1 EXD का उपयोग करें
    2. EXD लागू प्रति चूहा ( यानी, वी = (0.111 EXD / किग्रा दिन) * (0.15 किलो / चूहा) * (50 एमएल / EXD) = 0.83 एमएल / चूहा • दिन) की मात्रा की गणना करें।
  2. शोषण
    1. ढक्कन के साथ एक कंटेनर में 1 एक्सड के लिए कच्चे माल डालें 1 घंटे के लिए आसुत जल में कच्चे जड़ी बूटियों को मक़रा देना; पानी के बारे में एक इंच के बारे में जड़ी बूटियों को कवर किया जाना चाहिए सभी जड़ी बूटियों को अच्छी तरह से सोखें
  3. पहले पानी का काढ़ा
    1. जड़ी बूटी जड़ी बूटियों को ऊष्मा शक्ति पर जब तक पानी उबाल नहीं आती है (लगभग 5-10 मिनट; समय अवधि गर्मी शक्ति, कंटेनर, और जड़ी बूटियों और पानी की मात्रा पर निर्भर करता है)। 2 घंटे के लिए कम उबाल के लिए बिजली नीचे चालू करें
  4. पहले निस्पंदन
    1. नियमित फिल्टर पेपर के साथ 500 एमएल कांच बीकर और धुंध और कपास के साथ कवर करें। ध्यान से फिल्टर के माध्यम से बीकर में काढ़ा बंद करो। कंटेनर में जड़ी बूटियों को छोड़ दें
  5. दूसरा जल काढ़े
    1. जड़ी बूटियों के साथ डिस्टिल्ड वॉटर को कंटेनर में जोड़ें; इसे एक इंच के बारे में जड़ी बूटियों को कवर करने दें।
    2. चरण 2.4 को दोहराएं।
  6. दूसरा निस्पंदन
    1. दोहराएं चरण 2.5.1 और 2.5.2।
    2. चरण 2.4.1 के रूप में एक ही बीकर में दूसरा काढ़ा डालो और पहले और दूसरे काढ़े को एक साथ मिलाएं।
  7. एकाग्रता
    1. एक गैस कुकर पर एस्बेस्टस से मुक्त तार धुंध के साथ बीकर रखो, कम उबाल का उपयोग करके काढ़े को गर्म करें, और धीरे-धीरे और लगातार एक ग्लास रॉड के साथ हलचल दें
    2. जब काढ़े 100 एमएल तक कम होता है, तो इसे 100 एमएल बीकर में स्थानांतरित करें।
    3. चरण 2.7.1 दोहराएँ जब तक काढ़े 50 एमएल तक कम हो जाता है।
  8. भंडारण और प्रशासन
    1. एक स्टेर में केंद्रित काढ़े स्थानांतरणआईल कांच की बोतल इसे आरटी को शांत करने दें 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें अगर एक सप्ताह के भीतर या लंबी-अवधि के भंडारण के लिए -70 डिग्री सेल्सियस पर का उपयोग कर।
    2. 3 दिनों के लिए प्रति दिन एक बार प्रति दिन 0.83 एमएल / चूहे का इंट्राग्रेटिक रूप से प्रशासन करें।
  9. EXD युक्त सीरम तैयारी
    1. एक्सडी के अंतिम प्रशासन के बाद 1 घंटे में 80 मिलीग्राम / किग्रा केटामाइन और 10 मिलीग्राम / किलोग्राम में 300 एमएल / 100 ग्राम इंजेक्शन लगाने से चूहों को एनेस्थेटेट करें। पैर की अंगुली चुटकी द्वारा उचित संज्ञाहरण की पुष्टि करें
    2. एक स्केलपेल (या सीधी ऑपरेटिंग कैंची) का उपयोग करके छाती के नीचे तक पेट से पेट और ऊतक का आवरण छेड़ें। क्रमशः लगभग 5 सेमी और 0.5 सेमी की लंबाई और गहराई का चीरा बनाएं। टिशू पेपर का उपयोग करके पेट को विसरा ले जाएं।
    3. टिशू पेपर का प्रयोग करके पोत को स्पष्ट रूप से उजागर करने के लिए पेट की महाधमनी के संयोजी ऊतक को हटा दें।
    4. 10 एमएल, 22-गेज सिरिंज का प्रयोग करके पेट की महाधमनी से धीरे-धीरे खूनें। इसे स्थानांतरित करने के लिएसुई हटाने के बाद एक 15 एमएल बाँझ ट्यूब; एक चूहे 8-10 एमएल रक्त पैदा कर सकता है
      नोट: चूहे ड्राइंग पूर्ण होने के बाद रक्त आरेख और मृतकों की शुरुआत करते समय चूहे को जीवित होना चाहिए ( यानी, पेट महाधमनी स्पंदन के साथ)।
    5. कमरे के आरटी पर 30 से 60 मिनट के लिए एक ईमानदार स्थिति में खून का खंभा 20 मिनट के लिए 500-600 xg पर अपकेंद्रित्र ध्यान से सभी सतह पर तैरने वाले (सीरम) को एक 50 एमएल बाँझ ट्यूब में रखें और सभी सीरम (अलग-अलग जानवरों से) को एक साथ मिलाएं।
    6. 30 मिनट के लिए 56 डिग्री सेल्सियस पानी के नहाने में सीरम को मिलाकर गर्म गर्मी निष्क्रिय करें एक सिरिंज फिल्टर का उपयोग कर 0.22-माइक्रोन बंदर के आकार के हाइड्रोफिलिक पॉलीथर्सअल्फोन झिल्ली के साथ सीरम फ़िल्टर करें। सीरम ताज़ा का उपयोग करें या इसे -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें
  10. नियंत्रित दवा युक्त सीरम तैयारी (नियंत्रण समूह में प्रयुक्त)
    1. प्रत्येक चूहा को एक ही मात्रा में खारा (0.83 एमएल) प्रति दिन एक दिन में 3 दिनों के लिए प्रशासित करें। दूसरे चरण चरण 2.9 के समान हैं।
  11. आवेदन
    1. प्रत्येक 100 एमएल मध्यम, प्लस 1% पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन (पीएस) 23 में एक्सएम युक्त सीरम या दवा युक्त सीरम के 10 एमएल जोड़ें।

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Representative Results

OVX चूहों की हड्डी घनत्व पर EXD का प्रभाव

काठ का कवच अनुभाग के हेमटॉक्सिलिन और ईसिन (एच एंड ई) धुंधला ओवीएक्स समूह ( चित्रा 1 ए , बाएं पैनल) के साथ तुलना में विवो में एक्सडी उपचार ( चित्रा 1 ए , दाएं पैनल) के बाद हड्डियों को बढ़ाता है। चित्रा 1 बी OVX चूहों ( चित्रा 1 बी , बाएं पैनल) और OVX चूहों के साथ एक्स सप्ताह के लिए 12 सप्ताह ( चित्रा 1 बी , दाएं पैनल) में 4 वें काठ के प्रतिनिधि μCT चित्र दिखाता है। नियंत्रण के लिए OVX चूहों के मुकाबले EXD- उपचार वाले चूहों के कांच का कशेरुकाओं के भीतर अधिक ट्रबीक्यूलर हड्डियां दिखाई देती हैं। ΜCT इमेजिंग के आंकड़े में वृद्धि हुई हड्डी की मात्रा / ऊतक मात्रा (बीवी / टीवी), ट्रबीक्यूलर संख्या (टीबी। एन), और ट्रबीक्यूलर मोटाई (टीबी।) का संकेत मिलता है और 4 वें काठ का ट्रोबिक्यूलर रिक्ति (टीबी) EXD चूहों में ( चित्रा 1 सी )

ओवीएक्स चूहों से अस्थि मेसेनचिमल स्टेम सेल (बीएमएससी) के ओस्टोजेनेसिस पर एक्सड का प्रभाव

चित्रा 2 बीएमएससी की ओस्टोजेनिक क्षमता का प्रतिनिधित्व करती है वेट बूंदों (तारांकन, एक लिपिड छोटी बूंद का अनियमित आकार) स्वचालित रूप से बनते हैं जब ओएमएस चूहों के बीएमएससी 7 दिनों के लिए सुसंस्कृत होते हैं ( चित्रा 2 ए , बाएं पैनल)। EXD- उपचार वाले चूहों में, मोटी छोटी बूंद ( चित्रा 2 बी , दाएं पैनल) के बजाय हड्डी नोड्यूल (तीर) का निर्माण होता है। एल्कालाइन फोस्फाटेस (एएलपी) परख यह दर्शाता है कि एक्सीड-बीएमएससी ( चित्रा 2 बी , दाएं पैनल) में अधिक एएलपी पॉजिटिव कोशिकाओं (बैंगनी) का पता लगाया जा सकता है, जो नियंत्रण ओवीएक्स चूहों ( चित्रा 2 बी , बाएं पैनल) से बीएमएससी में मौजूद हैं।

ओवीएक्स और एक्सडी चूहों के बीच जीन की अभिव्यक्ति में परिवर्तनरों = "xref"> 24

श्रेणीबद्ध क्लस्टरिंग से पता चलता है कि बीएमएससी में माइक्रोएरे से पता चला 389 जीनों की अभिव्यक्ति ओवीएक्स और एक्सडी-युक्त चूहों में विवो (कुल: 26,991 जीन) ( चित्रा 3 ) के बीच में बदल गई (> 1.5, गैर-ओवीएक्स चूहों द्वारा सामान्यीकृत) बदल दिया गया था। ग्रीन इंगित करता है कि अभिव्यक्ति को अपग्रेड किया गया था, जबकि लाल इंगित करता है कि अभिव्यक्ति को डाउनिग्यूड किया गया था। एक ही समूह के तीन नमूनों को एक साथ पहले एकत्रित किया जाता है, जो प्रोफाइल के विश्वसनीय गुणों को दर्शाता है। चित्रा 4 चित्रा 4 विवो और इन विट्रो दोनों में , EXD द्वारा लक्षित ओवरलैप्ड सिग्नलिंग मार्ग को दर्शाता है।

आकृति 1
चित्रा 1: बोन मोर्फोलॉजी पर EXD का प्रभाव
( ए ) ओवीएक्स और एक्सडी-च्राई के कंबल के 4 वें खंड के एच एंड ई स्टैनिंग। ( चौथा ट्राइबिकुलर हड्डी की त्रि-आयामी μCT पुनर्निर्माण छवियां। ( सी ) μCT की मात्रा बीवी: हड्डी की मात्रा, टी वी: ऊतक मात्रा, टीबी। एन: ट्राइब्युलर संख्या, टीबी। टी: ट्राबीक्यूलर मोटाई, और टीबी एसपी: ट्राबेक्यूलर रिक्ति कॉलम अर्थ ± एसई का प्रतिनिधित्व करते हैं एन = 6 प्रति समूह * पी <0.05, ** p <0.01 EXD बनाम ओवीएक्स (छात्र का टी-परीक्षण)। ( एसी ) Shufen लियू एट अल से संशोधित किया गया है 24. कृपया इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2: बीएमएससी विभेद पर EXD का प्रभाव
( ए ) बीएमएससी की छवियों के लिए सुसंस्कृत 7 दिनों बीआई के बादओवीएक्स या एक्सडी-च्राई चूहों के फीमर से पृथक एनजी। * एक मोटी छोटी बूंद इंगित करता है एक तीर एक हड्डी की नोडल दर्शाता है। ( बी ) ओवीएक्स और एक्सडी-बीएमएससी के एएलपी धुंधला 7 दिनों के लिए सुसंस्कृत (बैंगनी एएलपी पॉजिटिव का प्रतिनिधित्व करता है)। ( सी ) की मात्रा ( बी ) कॉलम प्रति समूह तीन व्यंजन (छः चूहों) से मतलब ± एस का प्रतिनिधित्व करते हैं। ** पी <0.01 EXD बनाम ओवीएक्स (छात्र का टी-परीक्षण)। ( एसी ) Shufen लियू एट अल से संशोधित किया गया है 24. कृपया इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3: जीन एक्सप्रेशन प्रोफाइल पर EXD का प्रभाव।
OVX और EXD बीएमएससी में 38 9 जीनों की अभिव्यक्ति के पदानुक्रमिक क्लस्टरिंग का हीटमैप 7 वें दिन पोस्ट-डिसोसिएशन पर काटा गया पैमाने (छोटी छवि) गैर-ओवीएक्स बीएमएससी द्वारा सामान्यीकृत गुना परिवर्तन को इंगित करता है। अनुपूरक फाइल 1 में जीन की सूची प्रदान की जाती है यह आंकड़ा शूफ़ें लियू एट अल से संशोधित किया गया है 24. कृपया इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4: विवो में और विट्रो प्रयोगों में दोनों में ओवरलैप किए गए सिग्नलिंग मार्ग पर EXD का प्रभाव।
पहले 10 ओवरलैप्ड सिग्नलिंग मार्ग जो कि विएवो और एक्सडी युक्त सीरम के द्वारा केएजीजी मार्ग पर आधारित इन विट्रो में उलट रहे हैं। मार्ग से संबंधित जीन को पूरक फाइल 2 में दिखाया गया है/files/ftp_upload/55654/55654fig4large.jpg "target =" _ blank "> कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

जाति माउस चूहा गिनी पिग खरगोश बिल्ली बंदर कुत्ता मानव
आर 59 90 99 93 82 111 104 100

तालिका 1: विभिन्न प्रजातियों में आर-कारक।
8 प्रजातियों में आर-कारक जिनका सामान्यतः औषधीय अनुसंधान में उपयोग किया जाता है आर-कारक आनुपातिक है: (शरीर की सतह क्षेत्र (एम 2 ) / बीओय वजन (किग्रा)) 2/3

पूरक फ़ाइल 1
38 9 जीन के बारे में जानकारी, जो अपरिवेटेड या डाउनिगेटेड हैं, जो कि 1.5 गुना है, लेकिन इन्हें विवो में एक्सडी द्वारा बचाया गया है। कृपया इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

पूरक फ़ाइल 2
सिग्नलिंग मार्ग (केएजीजी मार्ग पर आधारित) और विवो और इन विट्रो प्रयोगों में दोनों में संबंधित जीन। कृपया इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

हाल के वर्षों में, हर्बल दवाइयों को अधिक ध्यान दिया गया है, एक प्रकार की वैकल्पिक चिकित्सा जिसे पूर्वी दुनिया में क्लिनिकल सेटिंग में हजारों सालों से लागू किया गया है। आधुनिक चिकित्सा के "बेंच से बिस्तर" पैटर्न में से अलग, परंपरागत हर्बल दवाओं को पहले उनके तंत्र को समझाने के लिए "बेड टू बेंच" पैटर्न की आवश्यकता होती है इसे नए अनुकूलित दवाओं के विकास के लिए पीठ चरण में प्रसंस्करण और प्रसंस्करण के बाद किया जा सकता है। अब तक, कई निष्कर्षण विधियां हैं जो पूरे सूत्रों या जड़ी-बूटियों से रिलीज सक्रिय घटकों के लिए रिपोर्ट की गई हैं। उनमें से, पानी की निकासी सबसे मोटे तौर पर इस्तेमाल किया जाता है।

हर्बल दवाओं के जल निकासी के चार बुनियादी चरण हैं पहला कदम भिगोने वाला है। एक जटिल हर्बल दवा समय के लिए पानी में बरबाद होती है, आमतौर पर 0.5 से 1 घंटे तक। भिगोने के लिए समय अवधि कच्ची जड़ी बूटियों की मात्रा और संपत्ति पर निर्भर करता है। सेवा मेरेसुनिश्चित करें कि कच्ची जड़ी बूटियों को अच्छी तरह से भिगोए जाते हैं, हर टुकड़ा या ब्लॉक का केंद्र ढोना होना चाहिए पानी की मात्रा जड़ी बूटियों की कुल मात्रा पर निर्भर करती है। कभी कभी, जड़ी बूटियों का भार यह निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है कि भिगोने के लिए कितना पानी चाहिए। हालांकि, जड़ी बूटी घनत्व व्यापक रूप से भिन्न होते हैं। चूंकि भिगोने के उद्देश्य से सभी जड़ी-बूटियों को ढंकना है, निम्न चरणों के दौरान सक्रिय घटकों के रिलीज की सुविधा के लिए, जड़ी बूटियों का मात्रा पानी के मात्रा के संदर्भ संदर्भ के रूप में प्रयोग के लिए पसंद किया जाता है। दूसरा कदम खाना पकाना है हजारों सालों से उबलते और उकसाने वाली प्रक्रियाएं विकसित की गई हैं खाना पकाने के समय में भिन्नता उनके विभिन्न भौतिक, रासायनिक और औषधीय विशेषताओं के कारण अधिकतर जड़ी-बूटियों पर निर्भर करती है। डाइफोरेक्टिक्स को कम समय के लिए पकाने का सुझाव दिया जाता है, आमतौर पर 20 मिनट से कम समय तक, जबकि अरोमाटिक को वाष्पशील प्रतिक्रियाओं से बचने के लिए पहले उबलने के कुछ ही मिनट पहले जोड़ा जाना चाहिए। एफया टॉनिक जड़ी-बूटियों, उनके चिकित्सीय घटकों को बाहर निकालने के लिए समय की एक लंबी अवधि की आवश्यकता होती है। इस मामले में, EXD का उपयोग दशकों से पोस्टमेनोपाउस ऑस्टियोपोरोसिस के इलाज के लिए किया जाता है। पारंपरिक चीनी चिकित्सा सिद्धांत में, इस सिंड्रोम को गुर्दा से संबंधित कमी के कारण माना जाता है। एडीडी मुख्य रूप से गुर्दे की पहचान करने के लिए डिज़ाइन किया गया है इसलिए, EXD को 2-3 घंटे के लिए पकाया गया था जिससे EXD अपने विरोधी ऑस्टियोपोरोसिटिक प्रभाव 15 को लागू कर सके। तीसरा चरण निस्पंदन है निस्पंदन गाव सुई को हर्बल ग्रैन्यूलस से भरा होने से रोकने में मदद करता है। चौथा चरण एकाग्रता है। गाव प्रशासन की मात्रा को ध्यान से माना जाना चाहिए। यह बताया गया है कि बड़ी मात्रा में, जैसे कि 10 एमएल / किग्रा या उससे अधिक, मौखिक गाव द्वारा नियंत्रित किया जा सकता है, अवशोषण से संबंधित कई समस्याएं हो सकती हैं, जिसमें यौगिकों के द्रव में तेजी से छिद्रण या एस्पिरेशन निमोनिया शामिल है जो निष्क्रिय रिफ्लेक्स से जुड़े हैं मटेरियाअन्नप्रणाली 25 में एल इस प्रकार, चूहों और चूहों के लिए चुना जाने वाला संस्करण अनुक्रमे 7.5 एमएल / किग्रा और 5.5 एमएल / किग्रा था।

यह पुष्टि करना महत्वपूर्ण है कि क्या रक्त में पचा और चयापचय EXD के प्रभावी घटक कच्चे अर्क के समान हैं या नहीं। EXD जैव-पक्षिता के मामले में, वू एट अल कुत्ते के प्लाज्मा में 7 घटकों के निर्धारण के बारे में बताया गया है: एपिमिडिन ए, एपीमीडेन बी, एपिएमडीन सी, आईसीरियिन, एसएजीटेटोसैड बी, 2 "-ओ-रमनोसिल आईकेराइसाइड II, और बाहुओसाइड आई 26 । हू एट अल मौखिक प्रशासन 27 के बाद चूहा प्लाज्मा में 21 यौगिक पाए गए अब तक, EXD से कच्चे निकालने की सूचना नहीं मिली है। हालांकि, कुछ प्रभावी खून में परीक्षण किया गया घटक, जैसे कि आईसीरिन और बेर्बेरीन, सीधे तुलनात्मक अवलोकन 28 के लिए जानवरों पर लागू होते रहे हैं।

पशु जैव की गणना करने के लिए कई दृष्टिकोण हैंक्वालिटल डोस शरीर की मात्रा (मिलीग्राम / किग्रा) पर आधारित पारंपरिक विधि उपयुक्त नहीं है क्योंकि फार्माकोकाइनेटिक्स विभिन्न प्रजातियों में भिन्न-भिन्न हैं। शरीर की सतह क्षेत्र (मिलीग्राम / एम 2 ) के आधार पर गणना, जिसमें चयापचय दर व्यक्तिगत जानवरों के आकार से संबंधित होती है, अक्सर 2 9 का उपयोग किया जाता है। यहां लागू समीकरण शरीर के क्षेत्रफल और शरीर के वजन को ध्यान में रखते हैं और आमतौर पर पारंपरिक चीनी औषधि 30 में इसका उपयोग किया जाता है।

कई प्रकार के जानवरों, जैसे कि खरगोश, गिनी सूअर, चूहों, और चूहों, को दवा युक्त सीरम तैयारी के लिए चुना जा सकता है। इन विट्रो- रेटेड कोशिकाओं की तरह ही प्रजाति को पसंद किया जाता है। इस अध्ययन में, चूहों को चुना गया क्योंकि वे चूहों की तुलना में अधिक सीरम प्रदान करते हैं और अन्य जानवरों की तुलना में प्रजातियों के संदर्भ में चूहों के करीब हैं। इसके अलावा, विवो या क्लिनिक उपयोग में इसके बराबर की सिफारिश की जाती है, क्योंकि इन विट्रो प्रोटोकॉल में दिखाया गया था। पतलासीरम का आयन (1:10 अनुशंसित है) को ध्यान में नहीं रखा जाता है; यह है, समतुल्य खुराक का 10 गुना उपचार कोशिकाओं या अंगों की वजह से संभावित विषाक्त प्रतिक्रिया के कारण सीरम से प्रदत्त जानवरों के लिए लागू नहीं है 31 । दवा प्रशासन की आवृत्ति दिन में एक बार से 3 से 14 दिन प्रतिदिन दो बार होती है (प्रत्येक प्रशासन में 2 घंटे) 7 , 8 , 32 संग्रह के समय आमतौर पर अंतिम प्रशासन 33 , 34 के बाद घंटे 1 और 2 (घंटे 6 से पहले) के बीच होता है इसका लक्ष्य है कि रक्त में दवा की एकाग्रता को अपेक्षाकृत स्थिर रखना और नमूने 35 इकट्ठा किए जाने पर इसके चरम स्तर पर रखें। प्रशासन के तरीके में इंजेक्शन, त्वचा प्रशासन या साँस लेना शामिल हो सकते हैं, जो कि विवो प्रशासन के दिनचर्या के अनुसार।

दवा की निष्क्रियता-सीरम युक्त अभी भी विवादास्पद है समर्थकों का मानना ​​है कि कई सक्रिय घटकों, जैसे कि हार्मोन, एंजाइम, एंटीबॉडी, और सीरम में पूरक होने की उपस्थिति के परिणामस्वरूप अप्रत्याशित प्रतिक्रियाएं परिणाम 36 को प्रभावित कर सकती हैं। विपक्ष का मानना ​​है कि दवाओं द्वारा उत्पादित सक्रिय घटकों को भी निष्क्रियता प्रक्रिया 37 द्वारा हटाया जा सकता है। इसका संतुलन रखने के लिए, लोग नियंत्रण समूह को डिज़ाइन करते हैं जैसे खारा-इलाज वाले जानवरों के सीरम का उपयोग किया जाता है।

प्रोटोकॉल के लिए कुछ सीमाएँ हैं विवो और इन विट्रो प्रयोग से शुरू करने से पहले निकालने की गुणवत्ता का मूल्यांकन नहीं किया जाता है। दूसरा, एंटीबायोटिक दवाओं का उपयोग संस्कृति के माध्यम में किया जाता है, जो कि जड़ी बूटी-दवा के संपर्क का कारण हो सकता है और इसके लिए आगे के परीक्षण की आवश्यकता होती है। तीसरा, क्लिनिकल अभ्यास और पशु प्रयोग से जुड़ी अनुभव के आधार पर भिगोने और उबाल समय निर्धारित किया जाता है। समय की अधिक अवधि को चुना जा सकता हैया तुलना विभिन्न हर्बल फ़ार्मुलों के लिए भिगोने और उबाल बार संशोधित किया जा सकता है। जानवर प्रशासन के लिए काढ़ा मात्रा प्रजातियों और जानवरों की उम्र और वजन के अनुसार संशोधित किया जा सकता है। दवा से युक्त सीरम की तैयारी के लिए चुना जाने वाला जानवर और प्रशासन के लिए दिनचर्या को बदला जा सकता है, जैसा कि ऊपर चर्चा की गई है।

एक साथ ले लिया, प्रोटोकॉल और परिणाम विवो और इन विट्रो अध्ययन में हर्बल काढ़े की तैयारी और आवेदन के लिए एक उदाहरण प्रदान करते हैं। विभिन्न मामलों में, हर्बल विशेषताओं के आधार पर इलाज के कुछ समय, प्रजाति, और प्रशासन के दिनचर्या सहित कुछ विवरणों को अनुकूलित किया जाना चाहिए।

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Disclosures

लेखकों ने घोषणा की कि उनके पास कोई प्रतिस्पर्धात्मक वित्तीय हित नहीं है

Acknowledgments

यह काम चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (815739 9 2) द्वारा समर्थित था। हम अपनी भाषा संपादन सहायता के लिए एमिली के लो और कैथलीन डायनापोल का धन्यवाद करते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Cortex Phellodendri (6 g), and Rhizoma Anemarrhenae (6 g) Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN) 160922 EXD components
Filter paper GElifesciences 99-103-952 Filter EXD decoction before concentration
Imprinting Control Region (ICR) mice Shanghai Laboratory Animal Center SCXK 2007-0005 In vivo study
Sprague Dawley rats Shanghai Laboratory Animal Center SCXK 2007-0005 EXD-containing serum preparation
Syringe filter Millipore SLGP033RB 0.22 µm
gavage needles (10 ml) Shanghai BO Ge trade sales department 59104274 Adminstration of EXD
Ketamine (80 mg/kg)  Fujian Gutian Pharma Co. Ltd H35020148 Anesthesia
Xylazine (10 mg/kg) Sunway Pharma Co. Ltd CB07591 Anesthesia
Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco (DMEM) culture medium Gibco 12800-116 DMEM with 2 mM L-glutamine and without ribonucleosides and ribonucleotides
Streptomycin Sigma 1277 100 µg / ml
Penicillin Sigma 4687 100 µg / ml

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Liu, S., Sun, Y., Li, J., Dong, J., Bian, Q. Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments. J. Vis. Exp. (123), e55654, doi:10.3791/55654 (2017).

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