وقد تم تطوير هذا البروتوكول لتحديد كميا مكونات المكروية الورم في ريسيكلتيونس المريض ورم أروميوجيستوك باستخدام الكيمياء المناعية و إيماجيج.
مع الاهتمام المتزايد في المكروية الورم، وضعنا إلى وضع طريقة لتحديد على وجه التحديد مكونات المكروية داخل عينات المريض من أرومة دبقية، والأكثر دموية والأكثر سرطان الدماغ الغازية. ليس فقط الطرق الكمية المفيدة لوصف الأنسجة المريضة بدقة، فإنها يمكن أيضا أن تسهم في تشخيص أكثر دقة، والتشخيص، وتطوير النظم التي تعمل على الأنسجة الأنسجة والاستبدالات. في الخلايا الدبقية، الخلايا الدبقية، مثل الخلايا الدبقية الصغيرة و الخلايا النجمية، وقد ارتبطت بشكل مستقل مع سوء التشخيص على أساس الدرجات علم الأمراض. ومع ذلك، فإن حالة هذه الخلايا وغيرها من مكونات الخلية الدبقية لم يتم وصفها بشكل جيد كميا. هذا يمكن أن يكون صعبا بسبب العمليات الكبيرة التي تميز هذه الخلايا الدبقية. وعلاوة على ذلك، فإن معظم التحليلات النسيجية تركز على عينة الأنسجة الشاملة أو فقط في الجزء الأكبر من الورم، بدلا من تحديد الكميات على أساس المناطق الطرافةهين الأنسجة غير متجانسة للغاية. هنا، نحن تصف طريقة لتحديد وتحليل كميا من السكان من الخلايا الدبقية داخل الورم السائبة والمناطق المجاورة من استئصال الورم من مرضى أرومة دبقية. استخدمنا المناعية اللوني لتحديد السكان الخلية الدبقية في استئصال الورم المريض و إيماجيج لتحليل التغطية في المئة من تلطيخ لكل السكان الدبقية. مع هذه التقنيات ونحن قادرون على وصف أفضل الخلايا الدبقية في جميع أنحاء المناطق المكروية الورم الدبقية.
ورم أرومي دبقي (غم)، وسرطان الدماغ الأكثر شيوعا والخبيثة، وتتميز غزو منتشر للغاية من السائبة الورم الرئيسي في محيط حمة صحية المحيطة 1 ، 2 . هذا الغزو منتشر يجعل الورم من الصعب بشكل خاص على استئصال تماما، والخلايا السرطانية الغازية التي تبقى بعد العلاج هو السبب الأكثر شيوعا لتكرار لا مفر منه 2 ، 3 ، 4 . في السابق، وجدنا تثبيط غزو خلية دبقية منتشر ليكون مفيدا علاجيا 5 ، ولكن لا يعرف سوى القليل عن الآليات المعقدة المساهمة في غم غزو. وقد تورط المكروية الورم، أو الأنسجة المحيطة بالسرطان، في تطور الأورام في سرطانات متعددة 6 ، 7 . ورم أرومي غليوبلاستوما المكروية، في صالمفصلي، هو نسبيا أقل من وصفها، وهي معقدة بشكل فريد، وتتألف من الخلايا الدبقية متعددة، مثل الخلايا النجمية، الدبقية الصغيرة، و أوليغوديندروسيتس، فضلا عن مصفوفة خارج الخلية، والعوامل القابلة للذوبان، والعوامل الفيزيائية الحيوية. من الناحية التجريبية، وقد أظهرت الخلايا النجمية والدبقية الصغيرة لزيادة تطور الورم والغزو 8 ، 9 ، 10 ، ولكن تكوين جميع الخلايا الدبقية في المكروية الدماغ البشري الأصلي غير معروف.
لقد أظهرنا في السابق أن مكونات المكروية يمكن أن تتنبأ بقاء المريض عن طريق التحليل الكمي للمكونات الخلوية للمكروية الدبقية ودمج تحليلاتنا في نموذج المخاطر النسبية 11 . هنا، نحن تصف طريقة التحليل الكمي لتحديد السكان من الخلايا الدبقية داخل الورم السائبة والمناطق المجاورة من استئصال الورم من مريض أرومي دبقيالصورة. استخدمنا المناعية اللوني لتحديد السكان الخلايا الدبقية و إيماجيج لتحليل التغطية في المئة من تلطيخ لكل السكان الدبقية. تقييم نسبة التغطية يخلق قياس بسيط لتحديد الاختلافات المورفولوجية للخلايا، وخاصة تلك المتضررة من التفاعلات مع الخلايا السرطانية. الدراسات السابقة لقياس كميا تلطيخ الأنسجة استخدام تلطيخ القياسية مثل الهيماتوكسيلين ويوزين 12 أو ثلاثي الألوان ماسون في 13 ، والتي لا تستفيد من خصوصية تلطيخ المناعية القائمة على الأجسام المضادة. وقد تم تطوير أسلوبنا لتحديد كمية السكان الدبقية مباشرة داخل الورم الأرومي الدبقي استئصال الورم المريض، والتي نهدف إلى استخدامها لتوضيح المكروية الدبقية المعقدة.
طريقة لدينا المقترحة هنا هو النهج الكمي لتحليل العينات النسيجية الملون باستخدام المناعية التقليدية اللونية. المنهجية الحالية لهذا النوع من التحليل تشمل بروتوكولات تلطيخ مماثلة تليها الدرجات من قبل علماء الأمراض مستقل. وكانت هذه الطريقة موثوق بها، ولكن بالنسبة لعد…
The authors have nothing to disclose.
المؤلفين أشكر درس. فهد بفاكيه وجيم مانديل لاقتناء وتحديد عينات المرضى، غاريت بيغلي للمساعدة في المناعية، ومرفق البحوث البيولوجية والأنسجة، ومركز بحوث القلب والأوعية الدموية الأساسية الأنسجة، ومرفق التحليل الجزيئي البيولوجي في جامعة فيرجينيا للحصول على مساعدة مع اكتساب العينة، المناعية، والتصوير.
Xylene | Fisher Chemical | X3P | |
Ethanol | |||
High pH antigen unmasking solution | Vector Labs | H-3301 | |
TBS | |||
Triton-X | Amresco | 9002-93-1 | |
Horse serum | |||
Anti-ALDH1L1 | abcam | ab56777 | |
Anti-Iba1 | abcam | ab5076 | |
Anti-Oligodendrocyte Specific Protein1 | abcam | ab53041 | |
ImmPRESS anti-goat | Vector Labs | MP-7405 | |
ImmPRESS Universal (anti-mouse/rabbit) | Vector Labs | MP-7500 | |
Hydrogen peroxide | Sigma Aldrich | 216763 | |
ImmPACT DAB substrate | Vector Labs | SK-4105 | |
Hematoxylin counterstain | ThermoScientific | 72404 | |
Histochoice Mounting Media | Amresco | H157-475 | |
Aperio Scanscope | Leica Biosystems | ||
Image Scanscope | Leica Biosystems | ||
Super HT PAP Pen | Research Products International | 195506 |