Summary

Tørr Film Photoresist-baserte elektrokjemisk Microfluidic Biosensor plattform: Enheten fabrikasjon, på prosessoren analysen forberedelser og systemdriften

Published: September 19, 2017
doi:

Summary

En microfluidic biosensor plattform var designet og fabrikkert bruker rimelig tørr film photoresist teknologi for raskere og følsom kvantifisering av ulike analytter. Bruke én systemet tillater den elektrokjemiske avlesning av on-chip-immobilisert enzym knyttet analyser med stopp-flow teknikken.

Abstract

De siste årene ble biomarkør diagnostikk et uunnværlig verktøy for diagnostisering av menneskelig sykdom, spesielt for point-of-care diagnostikken. En lett-å-bruke og rimelig sensor plattform er svært ønskelig å måle ulike typer analytter (f.eks biomarkers, hormoner og narkotika) kvantitativt og spesielt. Derfor var tørr film photoresist teknologi – slik at billig, lettvinte og høy gjennomstrømming fabrikasjon – brukes til å produsere microfluidic biosensor presenteres her. Avhengig av bioassay brukes etterpå, er den allsidige plattformen stand til å oppdage ulike typer biomolecules. Fabrikasjon av enheten, er platina elektrodene strukturert på en fleksibel polyimid (pi) (PI) folie i bare ren-rom prosesstrinnet. PI folien fungerer som et substrat for elektrodene, som er isolert med en epoxy-baserte photoresist. Mikrovæskekanalen genereres senere utvikling og laminering av tørr filmen photoresist (DFR)-folier på PI kjeks. Ved hjelp av en hydrofobe stoppe barriere i kanalen, kanalen er delt i to spesielle områder: en immobilisering seksjon for enzym knyttet analysen og en elektrokjemisk målet cellen for amperometric signal avlesning.

På prosessoren bioassay immobilisering utføres av opptak av biomolecules til kanal overflaten. Glukose oksidase enzymet er brukt som en transducer for elektrokjemiske signal generasjon. I nærvær av underlaget, glukose, er hydrogenperoksid produsert, som er oppdaget på platina arbeider elektroden. Stopp-flow teknikken brukes for å få signalforsterkning med rask søking. Forskjellige biomolecules kan kvantitativt måles ved introdusert microfluidic system, som gir en indikasjon på ulike sykdommer, eller, i forhold til terapeutisk medikament overvåking, tilrettelegge en personlig terapi.

Introduction

De siste to tiårene, har diagnostiske programmer blitt elementære for grundige studier på utvikling av globale folkehelsen. Tradisjonelt brukes laboratorium diagnostiske verktøy for deteksjon av sykdommer. Selv om de fortsatt spiller en nøkkelrolle i diagnostisering av sykdommer, point-of-care testing (POCT) utføres i nærheten pasienten eller av pasienten selv har blitt mer og mer vanlig i de siste årene. Spesielt i slike saker som krever umiddelbar behandling, for eksempel hjerteinfarkt eller diabetes overvåking, er rask bekreftelse av et kliniske funn avgjørende. Derfor er det et økende behov for POCT enheter som kan betjenes av ikke-eksperter og som samtidig kan utføre presise i vitro diagnostiske tester i en kort tid1,2,3,4 .

Betydelige forbedringer har allerede oppnådd innen POCT. Men er det fortsatt mange utfordringer å overvinne5,6,7,8. For en POCT plattformen lanseres vellykket til markedet og være konkurransedyktig med laboratorium diagnostikk, enheten må strengt oppfylle følgende krav: (i) gir presis og kvantitativ testresultater som stemmer med laboratoriet funn; (ii) har kort prøve å resultatet ganger, slik at umiddelbar behandling av pasienten. (iii) har ukomplisert og enkel håndtering, selv når drives av utrente individer, og krever minimerte brukertilsyn; og (iv) består av en rimelig sensor utformet for engangs applikasjoner. Videre er utstyr-gratis diagnostikk gunstig, hovedsakelig i ressurs-fattig miljø3,4,6.

Disse alvorlige krav, har bare to POCT systemer basert på elektrokjemiske gjenkjenning (f.eks blod glukose teststrimler) og lateral flyt immunanalyser (f.eks graviditetstester) blitt med hell innlede på markedet så langt. Men begge systemer lider ulemper som dårlig ytelse (dvs. blod glukose overvåking har unøyaktig testresultater og lateral flyt analyser bare gi kvalitative (positiv eller negativ) måleresultatene)4, 6. Disse ulempene av konvensjonelle POCT har ført til en økt etterspørsel på å utforske nye teknologier som tilbyr raske, rimelige og kvantitative gjenkjenning på omsorg4,5.

For å møte disse utfordringene POCT enheter, har DFR teknologi vært nylig ansatt fabrikasjon av disponibel og rimelig biosensors9,10,11,12, 13 , 14. sammenlignet med myk og flytende litografisk materialer, for eksempel PDMS eller SU-8, DFRs presenterer mange fordeler: de (i) er tilgjengelige i en rekke komposisjoner og tykkelser (fra noen få mikroner til flere millimeter); (ii) har en svært grov areal som forenkler vedheft til ulike materialer; (iii) funksjonen utmerket tykkelse ensartethet; (iv) tilby billig, lettvinte og høy gjennomstrømming fabrikasjon for masseproduksjon; (v) er enkle å klippe med ulike rimelige verktøy, som et enkelt par saks; og (vi) tillate etablering av tre-dimensjonale strukturer, for eksempel microfluidic kanaler, ved stabling flere DFR lag oppå hverandre.

På den annen side, har DFRs generelt en relativt dårlig oppløsning sammenlignet med flytende photoresists, som er hovedsakelig forårsaket av filmen tykkelsen og økte avstanden mellom masken og DFR på grunn av beskyttende folie, som i tillegg gjør lys spredning. Likevel, for produksjon av integrerte microfluidic biosensors, DFRs er velegnet for rimelige masseproduksjon.

Derfor jobber vi i dette fabrikasjon og anvendelse av en DFR-baserte elektrokjemisk microfluidic biosensor. Protokollen som detaljert beskriver fremgangsmåten produksjon av biosensor plattformen, på prosessoren immobilisering av en DNA-basert modell analysen og den elektrokjemiske avlesning med stopp-flow teknikk. Denne universelle plattformen gjør det mulig for gjenkjenning av mange typer biomolecules, bruke forskjellige analysen teknologier (f.eks genomics, cellomics og Proteomikk) eller analysen formater (f.eks konkurransedyktig, sandwich eller direkte). Basert på slik DFR plattform, vist vår gruppe tidligere den raskere og følsom kvantifiseringen av forskjellige analytter, inkludert antibiotika13,15,16 (tetracycline, pristinamycin, og ß-Laktam antibiotika), troponin jeg17, og substans P18.

Protocol

1. fabrikasjon av Microfluidic Biosensor bruker DFR teknologi utarbeidelse av PI wafere. Kutt en PI underlaget i 6 – i runde wafere. Satt PI kjeks i en ovn ved 120 ° C i ca 1 time for en dehydrering bake. Klima og jordsmonn steg for lift-off prosessen. Programmet spin-coater til en 30-s spinning tid på 3000 rpm, med en akselerasjon av 2000 rpm/s. sted PI kjeks på spin-coater og fikse det, bruke et vakuum. Dispensere 2 mL en motstå, ak…

Representative Results

Design og fabrikasjon av Microfluidic Biosensor plattform: Fabrikasjon av microfluidic biosensor chips er realisert på wafer-nivå av standard photolithographic teknikk ansette flere DFR lag. Denne fabrikasjon strategien er avhengig av laminering utviklet lag av DFRs på en platinum-mønstret PI substratet microfluidic kanalene. Sammendrag viser forskjellige fabrikasjon trinnene er gitt i figur 1. En …

Discussion

Protokollen presenteres her til fabrikasjon av et microfluidic elektrokjemisk biosensor gjør at utviklingen av en rimelig, kompakt og lett-å-bruke plattform for gjenkjenning av biomolecules. Avhengig av analysen brukt etterpå på biosensor, kan flere forskjellige biomarkers oppdages. Dette gjør plattformen svært allsidig og gir bred tilgang til ulike felt av programmer, fra standard diagnostiske tester (f.eks bestemme tilstedeværelsen av spesifikke sykdommer på legekontoret) til point-of-care programmer (…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Forfatterne vil gjerne takke tysk Research Foundation (DFG) for delvis finansiering dette arbeidet under Grant tall UR 70/10-01 og UR 70/12-01.

Materials

Material
Pyralux DuPont AP8525R Used as polyimide substrate
MA-N 1420 Micro Resist Technology MA-N1420 Lift-off resit to define the platinum depostion
Ma-D 533s Micro Resist Technology MaD533S Developer for MA-N1420
Platinum Electrode and contact pad material
Ma-R 404s Micro Resist Technology MaR404S Remover for MA-N1420
SU-8 3005 MicroChem Corp. SU-8-3005 Photoresist to define the electrode area and as insulation
1-methoxy-2-propanol acetate Sigma-Aldrich 108-65-6 Developer for SU-8 3005
2-Propanol VWR 8.18766.2500 Removing of the SU-8 developer
1020R Ultron Systems Inc. 1020R UV sensitive adhesive tape for protection of contact pads
Arguna S Degussa 1935 For Silver depostion on reference electrode
KCl Methrom 62308.020 For chloridation of the silver reference electrode
Pyralux DuPont PC1025 Dry film photoresist
Sodium carbonat Fluka 71352 Developer for Pyralux PC1025
Hydrogen chloride Sigma-Aldrich 30720 To top the development of the DFR
Teflon AF 1600 DuPont AF1600 For employing the stopping barrier
Name Company Catalog Number Comments
Equipment
PA104 Mega Electronics Bubble etch tank
FED 53 Binder 9010-0018 Oven
SPIN150 APT Spin coater
Präzitherm Harry Gestigkeit GmbH PZ 28-2 Hot plate
Hellas Bungard Elektronik 40000 Exposure unit
Tetra30-LF-PC Diener Plasma unit
Univex 500 Leybold Physical vapor deposition unit
Shaker S4 ELMI Orbital shaker
Sonorex Super 10 P Bandelin 783 Sonic bath
6221 DC and AC Keithley Current source
HRL 350 Ozatec Laminator unit
Vaccum pen EFD Vacuum pen

References

  1. Spindel, S., Sapsford, K. E. Evaluation of optical detection platforms for multiplexed detection of proteins and the need for point-of-care biosensors for clinical use. Sensors (Basel). 14 (12), 22313-22341 (2014).
  2. Luppa, P. B., Bietenbeck, A., Beaudoin, C., Giannetti, A. Clinically relevant analytical techniques, organizational concepts for application and future perspectives of point-of-care testing. Biotechnol Adv. 34 (3), 139-160 (2016).
  3. Gauglitz, G. Point-of-Care Platforms. Annu Rev Anal Chem. 7 (1), 297-315 (2014).
  4. Jung, W., Han, J., Choi, J. W., Ahn, C. H. Point-of-care testing (POCT) diagnostic systems using microfluidic lab-on-a-chip technologies. Microelectron Eng. 132, 46-57 (2014).
  5. Yager, P., et al. Microfluidic diagnostic technologies for global public health. Nature. 442 (7101), 412-418 (2006).
  6. Fu, E., Yager, P., Floriano, P. N., Christodoulides, N., McDevitt, J. T. Perspective on diagnostics for global health. IEEE Pulse. 2 (6), 40-50 (2011).
  7. Yager, P., Domingo, G. J., Gerdes, J. Point-of-care diagnostics for global health. Ann Rev Biomed Eng. 10, 107-144 (2008).
  8. Dincer, C., Bruch, R., Kling, A., Dittrich, P. S., Urban, G. A. Multiplexed point-of-care testing – xPOCT. Trends Biotechnol. 35, (2017).
  9. Horak, J., Dincer, C., Bakirci, H., Urban, G. A disposable dry film photoresist-based microcapillary immunosensor chip for rapid detection of Epstein-Barr virus infection. Sens Actuators B Chem. 191, 813-820 (2014).
  10. Jobst, G., Gamp, T. Method for the fabrication of a "lab on chip" from photoresist material for medical diagnostic applications. US patent. , (2010).
  11. Kling, A., Dincer, C., Armbrecht, L., Horak, J., Kieninger, J., Urban, G. Electrochemical microfluidic platform for simultaneous multi-analyte detection. Procedia Eng. 120, 916-919 (2015).
  12. Armbrecht, L., Dincer, C., Kling, A., Horak, J., Kieninger, J., Urban, G. Self-assembled magnetic bead chains for sensitivity enhancement of microfluidic electrochemical biosensor platforms. Lab Chip. 15, 4314-4321 (2015).
  13. Dincer, C., et al. Designed miniaturization of microfluidic biosensor platforms using the stop-flow technique. Analyst. 141, 6073-6079 (2016).
  14. Weltin, A., Kieninger, J., Enderle, B., Gellner, A. K., Fritsch, B., Urban, G. A. Polymer-based, flexible glutamate and lactate microsensors for in vivo applications. Biosens Bioelectron. 61, 192-199 (2014).
  15. Kling, A., et al. Multianalyte Antibiotic Detection on an Electrochemical Microfluidic Platform. Anal Chem. 88 (20), 10036-10043 (2016).
  16. Bruch, R., et al. Clinical on-site monitoring of ß-lactam antibiotics for a personalized antibiotherapy. Sci Rep. , (2017).
  17. Horak, J., Dincer, C., Qelibari, E., Bakirci, H., Urban, G. Polymer-modified microfluidic immunochip for enhanced electrochemical detection of troponin i. Sens Actuators B Chem. 209, 478-485 (2015).
  18. Horak, J., Dincer, C., Bakirci, H., Urban, G. Sensitive, rapid and quantitative detection of substance P in serum samples using an integrated microfluidic immunochip. Biosens Bioelectron. 58, 186-192 (2014).
  19. Mattox, D. M. . Handbook of Physical Vapor Deposition (PVD) Processing. , (2010).

Play Video

Cite This Article
Bruch, R., Kling, A., Urban, G. A., Dincer, C. Dry Film Photoresist-based Electrochemical Microfluidic Biosensor Platform: Device Fabrication, On-chip Assay Preparation, and System Operation. J. Vis. Exp. (127), e56105, doi:10.3791/56105 (2017).

View Video