Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Regenerativ terapi af Suprachoroidal celle Autograft i tørre aldersrelateret makuladegeneration: foreløbige In Vivo rapport

Published: February 12, 2018 doi: 10.3791/56469
Automatic Translation
1, 2, 1, 3, 4
1Low Vision Research Centre of Milan, 2Department of Ophthalmology, A. Fiorini Hospital, Sapienza University of Rome, 3Glaucoma and Low Vision Study Center, Department of General Surgery and Organ Transplants, University of Bologna, 4Department of Sense Organs, Faculty of Medicine and Odontology, Sapienza University of Rome

Summary

Målet med denne undersøgelse er at vurdere, om suprachoroidal graft fedtholdigt-afledte stamceller inkluderet i stromale vaskulære fraktion og trombocytter fremstillet af trombocyt-rich plasma ved Limoli Retinal restaurering teknik kan forbedre synsstyrke og retinal følsomhed reaktioner i øjnene påvirket af tørre aldersrelateret makuladegeneration.

Abstract

Denne undersøgelse har til formål at undersøge om en suprachoroidal graft af autologe celler kan forbedre bedst korrigerede synsstyrke (BCVA) og svar til microperimetry (MY) i øjne påvirket af tørre aldersrelateret Macula Degeneration (AMD) over tid gennem den produktion og sekretion af vækstfaktorer (GFs) på omkringliggende væv. Patienter blev randomiseret til hver gruppe. Alle patienter blev diagnosticeret med tør AMD og BCVA lig med eller større end 1 logaritme af den mindste vinkel af opløsning (logMAR). En suprachoroidal autologt transplantat af Limoli Retinal restaurering teknik (LRRT) blev udført på gruppe A, som omfattede 11 øjne fra 11 patienter. Teknikken blev udført af implanterer adipocytter, fedtholdigt-afledte stamceller udvundet stromale vaskulære fraktion, og blodplader fra trombocyt-rich plasma i suprachoroidal rum. Omvendt, gruppe B, herunder 14 øjne af 14 patienter, blev brugt som en kontrolgruppe. For hver patient, blev diagnosen bekræftet af Konfokal scanning laser oftalmoskop og spektral domæne-optisk kohærens tomografi (SD-OCT). I gruppe A, BCVA forbedret af 0.581 til 0.504 på 90 dage, og 0.376 logMAR på 180 dage (+32.20%) efter operationen. Desuden, min test steget med 11.44 dB til 12.59 dB på 180 dage. De forskellige celletyper indpodet bag choroidea var i stand til at sikre konstant GF sekretion i choroidal flow. Derfor resultaterne tyder på, at visuel skarphed (VA) i gruppen podede kan stige mere end i kontrolgruppen efter seks måneder.

Introduction

Celleterapi, bestående af systemiske eller lokale injektion af stem/stamceller i det skadede område at behandle flere kroniske lidelser, har henledt opmærksomhed i de sidste ti år1. Siden 1990 ' erne, er vækstfaktorer (GFs) blevet undersøgt for deres potentielt terapeutisk rolle i retinal atrofi2. I virkeligheden, kan mange menneskelige celler producere GFs, som er specifikke proteiner, der er i stand til at blokere eller sinke apoptose, dvs., de programmerede død af celler3.

Det er kendt, at tørre aldersrelateret Macula degeneration (AMD) er en atrofisk retinal sygdom hvor gradvis og uigenkaldeligt celledød involverer skade fotoreceptor laget og følgelig tab af centrale visuelle funktion4. AMD er den hyppigste årsag til blindhed i mennesker over 55 år i udviklede lande og tegner sig for 80% af alle Macula degenerations, som mangler en effektiv behandling til dato.

Flere undersøgelser har vist, at der er forskellige kilder, hvor der kan indhentes autolog GFs. Disse omfatter forskellige celletyper, herunder fedt stromale celler udvundet af orbital fedt, trombocytter fremstillet af trombocyt-rich plasma (PRP) og fedt-afledte stamceller (ADSCs) indgår i stromale vaskulære fraktion (SVF) af fedtvæv5 ,6,7. Det aktuelle GF sæt sikrer retinale neuroenhancement og forskning udført af Filatov, Meduri, Pelaez, og Limoli har vist, at autologt fedt transplantation (AFT) er effektiv8,9,10.

Desuden en forudgående undersøgelse viste signifikante forbedringer i electroretinogram (ERG) data, registreres indlæg suprachoroidal autologt transplantat, i tørre AMD-ramte øjne11. Den kirurgisk podede væv i suprachoroidal rum moduleret paracrine sekretion af retinale celler, at forskyde deres apoptose6,7,12. Overvejer ydre nukleare lagtykkelse, den histologiske undersøgelse af nethinden i marsvin har vist at GFs kunne have en trofiske virkning på nethinden. Derfor, den direkte eller indirekte brug af GFs kan potentielt bringe terapeutiske fordele gennem et afbalanceret forhold mellem molekylære induktorer og hæmmere6,7,12.

Formålet med denne metode er at vurdere, om suprachoroidal graft af adipocytter, ADSCs i SVF og PRP kan forbedre bedst korrigerede synsstyrke (BCVA) og microperimetry (MY) svar i tørre AMD-ramte øjne. Denne undersøgelse har til formål at demonstrere det terapeutiske effekt af autograft på grundlag af dens GF produktion i henhold til den citerede litteratur6,7,12,13.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Undersøgelse-protokollen blev godkendt af den etiske komité i lav Vision Academy og alle fag underskrevet et skriftligt samtykke i overensstemmelse med Helsinki-erklæringen. Denne undersøgelse har fået etiske godkendelse fra både Loughborough og Sheffield universiteter.

Bemærk: De medtagelse og udelukkelse kriterier af tørre aldersrelateret makuladegeneration patienter til at modtage suprachoroidal autologt transplantat af Limoli Retinal restaurering teknik (LRRT) er beskrevet i tabel 1.

1. diagnosticering af tørre aldersrelateret makuladegeneration patienter

  1. Fastslå diagnosen med Konfokal scanning laser oftalmoskop, SD-OCT og min.
  2. Evaluere hver gruppe BCVA for langt og nær afstand. Foranstaltning VA for i nærheden af vision (close-up) i punkter (Pts). Måle BCVA ved tid 0 (T0), 90 (T90), og 180 dage (T180) sammenlignet med tidlig behandling diabetisk retinopati undersøgelse (EDTRS) diagrammer på 4 meter i logMAR.
  3. Optage elektriske scotopic, mesopic, og Fotopisk celleaktivitet eller flash ERG, ifølge de standarder fastsat i 2009 af det internationale samfund for kliniske Elektrofysiologi af Vision (ISCEV)11.

2. anesthetization

Bemærk: Guldstandarden i anæstesi under LRRT er aktuel anæstesi, forstærket af sub-tenon's infiltration af anæstesi og sedation. I særlige tilfælde foretrækkes generel anæstesi.

  1. Få cornea og konjunktival anæstesi ved at anvende aktuelle lokalanalgetika indpodet dråbevis 15-20 min før operation med lidokain på 4% og ropivacaine på 1%.
  2. Injicere anæstesi af infiltration direkte ind i sub-konjunktival og subtenon's mellemrum.
  3. Bruge lokale infiltration i bughulen, før fedtvæv er udvundet, såvel i sub-konjunktival og sub-tenon's mellemrum, 12 mm fra limbus. Vedtage lokalbedøvelse af carbocaine eller marcain blandet med 1.200 IU adrenalin.
  4. Give intraoperativ sedation gennem narkose, som kan udføres korrekt ved hjælp af fentanyl som et narkotiske smertestillende gennem gentagne små boli. Doseringen er generelt 0,025 mg af fentanyl med 1 mg af midazolam pr. bolus.

3. Limoli Retinal restaurering teknik forberedelse

Bemærk: Denne teknik repræsenterer en variant af Pelaez's intervention som orbital autologt fedt er transplanteret i subscleral plads1,6,7,12. Kirurgisk podede celler kan producere mange GFs med neurotrope og angiotrophic egenskaber i det omgivende væv, årehinden og nethinden18,19,20,21,22 ,23,24,25. I LRRT, afstanden mellem podede autologe celler og årehinden reduceres ved hjælp af dybe sclerectomy, og at kontaktområdet mellem stilk og årehinden er udvidet til at fremme paracrine autologe celle sekretion i choroidal flow9, 10,14.

  1. Udføre korrekt desinfektion af hvert øje før operation med cellulære podning mellem årehinden og sclera, en procedure kaldet Limoli Retinal restaurering teknik (LRRT)15,16,17.
  2. Pode ADSCs, fremstillet af Coleman et al. og Lawrences teknik (figur 1) fra abdominalt fedt, i SVF i sovrachoroidal plads15,16,17.
  3. Infiltrere adipøst pedicle med blodplader afledt af PRP gel opnået gennem følgende trin.
  4. Centrifugeres blod6,12 og indsamle trombocyt-rich plasma (PRP). Stimulus til trombocyt degranulering forårsager GF udgivelse i adipøst pedicle6,12.

4. tekniske specifikationer og strategi

Bemærk: Fedtvæv er indsamlet og renset fra den abdominale subkutane lag af patienterne, ifølge Lawrence og Coleman teknik17(Tabel af materialer).

  1. Manuelt høste 10 mL af fedtvæv fra den abdominale subkutane lag af hver patient, ved hjælp af en 3-mm stump kanyle tilsluttet en låsning sprøjte, ifølge Lawrence og Coleman teknik17 (tal 2A/2B).
  2. Adskille ren SVF af fedtvæv fra blod, fedt, olie og væske ved centrifugering i 5 min på 1.500 x g ved 20 ° C (figur 2C). SVF er meget rig på ADSCs17.
  3. Saml 8 mL af humant perifert blod, med en 22 G kanyle og i en separat tube for PRP forberedelse.
  4. Der centrifugeres den indsamlede blod i 5 min på 1.500 x g ved 20 ° C (figur 2D). I LRRT, den efterfølgende ændringer medfører bedre overlevelse af autologt fedt graften, ADSC spredning, som favoriserer øgede choroidal perfusion, og en mere omfattende graduering af virkningen af de faktorer, som er udskilles kun af fedt7, 11,17.
  5. Opbygge suprachoroidal lomme (flere oplysninger i trin 4, i bestemt 4.4 og 4.5) for at rumme graften fremstillet af orbital fedt og mætte residualvolumen af denne lomme med en blanding af ADSCs fra SVF og PRP, fremstillet af Lawrence og Coleman teknik17.

5. Suprachoroidal Autograft af LRRT (Limoli Retinal restaurering teknik): kirurgisk Procedure og tekniske detaljer

  1. Anker sclera med 6-0 silke sutur, nær den ringere-temporale limbus.
  2. Åbn subconjunctival og subtenonian rum på 11 mm fra den ringere-temporale limbus, ved hjælp af 5,5" Westcott Tenetomy buet saks.
  3. Indsæt Limoli-Basile konjunktival retractor i denne plads til at gøre en scleral kirurgiske felt.
  4. Ved hjælp af en 5-mm Halvmåne kniv vinklet facet op, skære pre en flap på side i sclera på 8 mm, fra limbus. Klap hængsel er altid radiale og til venstre for kirurgen.
  5. I den ringere-temporale kvadrant, 8 mm fra limbus, åbne en dyb scleral dør ca. 5 mm på siden af radial hængsel ved hjælp af en halvmåne kniv, vinklet facet op. Udføre sclerectomy på en tilstrækkelig dybde til at se den skifer farve af årehinden.
  6. Oprette et hul ved at fjerne en lille laag i den distale del af klap, for at fremme blodcirkulationen i de efterfølgende suprachoroidal autograft.
  7. Uddrag med oftalmologisk pincet orbital fedt fra en bro over den ringere skrå muskler. Sørg for at det ekstraherede fedt er tilstrækkelig vaskulariserede for at gøre det muligt at overleve efter sin implantation.
  8. Anbring forsigtigt autologt fedt flappen på choroidal seng og sutur med choroidal 6/0 polyglactin fiber på den proksimale kanten af døren.
  9. Sutur scleral flap at undgå komprimering på fedt pedicle eller på sin næringsstof fartøjer.
  10. Infiltrere fedt pedicle stroma med 1 mL af PRP gel (fremstillet ved centrifugering af blod materiale, adskillelse af komponenter og trombocyttal degranulering26) ved hjælp af en 30 G vinklet (30 °) kanyle.
  11. Forberede sutur sider af conjunctiva. Fjern derefter den konjunktival retractor.
  12. Sutur conjunctiva, ved hjælp af 6/0 polyglactin fiber.
  13. Efterlad et mellemrum for at indsætte i subscleral rum mellem flappen, årehinden og choroidal autograft, en lille fleksibel plast rør med autologt fedt graften før lukketid.
  14. Mætte det tilbageværende rum mellem autologt fedt transplantat, årehinden og sclera klap med 0,5 cc af SVF (rich af ADSCs), tidligere fremstilles i trin 3.2, af en lille fleksibel plast rør, indsættes i sclera lommen.
  15. Efter mætte den resterende plads, lukke sutur.
  16. Efter kirurgi, administrere tre dages antibiotikabehandling med 500 mg azithromycin. Desuden levere eye-drop terapi med en antibiotisk og steroid kombination, såsom Chloramphenicol og betamethason, for omkring 15-20 dage.
    Bemærk: En autograft, der består af fedtceller, ADSCs fra SVF og PRP har nu opnået26. Reducere afstanden mellem podede autologe celler og choroidea af dybe sclerectomy at stimulere paracrine sekretion af autologe celler i choroidal flow. Til samme formål, udvide kontakt mellem stilk og årehinden.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Ved hjælp af den procedure, der præsenteres her, blev to grupper af tør AMD-ramte patienter med BCVA lig med eller større end 1 logaritme af den mindste vinkel af opløsning (logMAR), indskrevet i undersøgelsen. Gruppe A, herunder 11 øjne af 11 patienter, modtagne suprachoroidal autologt transplantat af Limoli Retinal restaurering teknik (LRRT), mens gruppe B, herunder 14 øjne af 14 patienter, blev brugt som en kontrolgruppe.

Student's t-test og chi firkantede test blev brugt til at sammenligne henholdsvis gennemsnitlige alder og køn fordeling mellem de to undersøgelse grupper (tabel 2). Statistiske analyser og visualisering af data blev udført før og efter LRRT operation.

En Wilcoxon-Mann-Whitney underskrevet rank test blev udført for at afgøre, om de før og efter behandling forskelle var betydelig. Denne ikke-parametrisk statistiske hypotese test blev anvendt til at sammenligne to afhængige stikprøver, når befolkningen ikke kan antages at være normalt fordeles, som i dette tilfælde. VA værdier blev målt på hvert trin i analysen. Statistisk signifikans blev sat på en p -værdi <0,05.

Elleve øjne (6 rigtige og 5 venstre øjne) af 11 patienter (7 mænd og 4 kvinder) med den kliniske diagnose af tør AMD blev undersøgt i denne undersøgelse. Patienternes alder varierede fra 62 til 84 år, med en gennemsnitlig alder på 71.5 år (± 3.8 SD).

Tabel 2 indeholder en oversigt over de kliniske profiler af patienter behandlet med LRRT, og de gennemsnitlige værdier registreres på 0 (T0), 90 (T90) og 180 (T180) dage efter operationen. Bivirkninger blev altid rapporteret at garantere maksimal sikkerhed. Middelværdier af intraokulært tryk registreres på 0 (T0), 90 (T90) og 180 (T180) dage efter operationen ikke optage enhver betydelig ændring.

Resultaterne efter LRRT operation var som følger:
I gruppe A, BCVA ændret fra 0.581 (T0) præoperativt til 0.504 på 90 dage (T90), og til 0.376 logMAR på 180 dage (T180) med en betydelig stigning på 35.20% (p < 0,01). Kontrol gruppe B, herunder 14 øjne af 14 patienter, 7 mænd og 7 kvinder, med en gennemsnitlig alder på 80,4 år, SD ± 2.3, BCVA ændret fra 0.573 (T0) til 0.587 (T90), og at 0.601 logMAR (T180) med en ikke-væsentlig betyde fald 4.72% (tabel 2) (figur 3 ). I gruppe A, min test steg betydeligt fra 11.44 dB (T0) til 12.59 dB (T180) (+9.58%) (Figur 4), mens der var ingen signifikant forbedring i postoperative værdierne i gruppe B.

Figure 1
Figur 1 : Repræsentation af suprachoroidal autologt transplantat. Vækstfaktorer (GFs) produceret af fedt celler, trombocyt-rich plasma (PRP), og fedt-afledte stamceller (ADSCs) nå choroidal og retinal væv gennem den retinale pigment epitel (ÅV). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2 : Teknisk Procedure. Kanyle og efterfølgende inddragelse af fedtvæv fra maveregionen (Panel A). Kanylen flytter spæk med mild aspiration af sugning fedt celler ind i sin egen lumen (Panel B). Efter centrifugering, er der tre-lag af fedtvæv: olie (høj lag), homogen fedt (mellemlag) og blod væske (nederste lag) (Panel C). Observere tube med blod umiddelbart efter centrifugering. Der er tre lag: blodplader fattige plasma (PPP), blodplader rige plasma (PRP) og erythrocytter (Panel D). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3 : Bedste korrigerede synsstyrke (BCVA) i tørre aldersrelateret Macula degeneration (AMD). Ændre i gruppe A efter suprachoroidal autologt transplantat af Limoli Retinal restaurering teknik (LRRT) og i kontrolgruppen (Check), målt ved tid 0 (T0), 90 (T90) og 180 (T180) dage. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 4
Figur 4 : Microperimetry (MY) hos en patient i gruppe A. Tørre aldersrelateret makuladegeneration (AMD) seks måneder efter Limoli Retinal restaurering teknik (LRRT). MIN øget fra 11.44 dB (T0) til 12.59 dB (T180) (+9.58%). Farveskala fra 0 til 36 i dB. Fiksering stabilitet: stabil, relativt ustabile, ustabil. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Inklusionskriterierne Udelukkelseskriterier
Kaukasisk emner Brydningsindeks fejl med sfæriske tilsvarende > 6 D
Godt ernæret deltagere Tegn på exudativ AMD af SD-OCT og FA
Diagnose af SD-OLT, AFI og FA Okulær sygdomme: CT, GL, ON, MP, VM, CRD, osv.
Målelige VA Okulær traumer
BCVA ≥ 1 logMAR Systemiske sygdomme: MS; PD; DM; RD; HD; vaskulitis
Normal IOP Forhøjet blodtryk, kræft og andre systemiske sygdomme
God opbevaring extrafoveal områder
LogMAR: logaritme af den mindste vinkel af opløsning; SD-okt: spektrale domæne-optisk kohærens tomografi; AFI: autofluorescence imaging; FA: fluorescein angiografi; VA: synsstyrken; IOP: intraokulært tryk; D: dioptrier; CT: cataract; GL: glaukom; TIL: optisk neuritis; MP: makulært rynke; VM: neovaskulær membraner; CRD: chorioretinal sygdom; MS: multipel sklerose; PD: Parkinsons sygdom; DM: diabetes mellitus; RD: nefrologi; HD: hepatisk sygdomme.

Tabel 1: Medtagelse og udelukkelse kriterier for tør aldersrelateret Macula degeneration (AMD) patienter.

PARAMETRE LRRT (n = 11) Kontrol (n = 14)
Alder (gennemsnit) 71.5 ±3.8SD 80,4 ±2.3SD
Alder (interval) 62 - 84 73 - 79
Køn F:4 M:7 F:7 M:7
BCVA T0 0.581 logMAR 0.573 logMAR
(gennemsnit)
BCVA T0 (udvalg) 0.301 - 1,0 0.0 - 1.0
BCVA T90 (gennemsnit) 0.504 logMAR 0.587 logMAR
BCVA T90 (udvalg) 0.222 - 1 0,0 - 1
BCVA T180 (gennemsnit) 0.376 logMAR 0.601 logMAR
BCVA T180 (udvalg) 0.046 - 0.699 0.0 - 1.0
Procentdel 35.19 4.72
ændre
p-værdi < 0,01 > 0,5
Alder i år; n = patienter og kontrol; SD = standardafvigelse; F = kvinde; M = mand; BCVA = bedst korrigerede synsstyrke i logMAR; T0 = baseline før kirurgi autograft; T90 = 90 dage post kirurgisk autograft; T180 = 180 dage post kirurgisk autograft.

Tabel 2: kliniske profiler af patienter undersøgt i undersøgelsen. Gennemsnit værdier indspillet før (T0), 90 (T90) og 180 (T180) dage efter celle autograft af Limoli Retinal restaurering teknik (LRRT) hos alle patienter.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Det primære formål med denne undersøgelse var at vurdere, om suprachoroidal graft af adipocytter, ADSCs i SVF og PRP kunne forbedre VA og retinal følsomhed i tørre AMD-ramte øjne over tid. Et andet hovedformål var at vise mulige terapeutiske virkninger af disse celler, baseret på den seneste litteratur, da flere prækliniske undersøgelser har antydet, at GF-baseret terapi kan være nyttigt for patientpleje i flere sygdomme.

I virkeligheden, nogle undersøgelser har vist, at autologe humane inducerede pluripotente stamceller (iPSC) kunne repræsentere en cellulær kilde for graft, sigter retinale pigment epitel (ÅV) regenerering i væv substitutionsterapi for AMD18, 19. disse celle plader er genereret som en éncellelag, der kunne udtrykke typisk ÅV markører og udstille polariseret GF sekretion, viser phagocytotic evne, samt genekspression mønstre ligner dem af indfødte ÅV18,19 . Efter transplantation, autolog primat iPSC-ÅV celle ark viste hverken immun afvisning eller svulst dannelse18,19.

Den nuværende undersøgelse præsenterer nogle forskellige kendetegn. Vi analyseret direkte i tørre AMD-ramte menneskers øjne om suprachoroidal autograft celle kan forbedre visuel ydeevne.

Desuden har sovrachoroidal graft af autologe celler ifølge LRRT altid vist sig for at være sikker. Vi har aldrig registreret sub retinal neovascularization, makulært ødem, nethindeløsning eller andre retinal problemer i de første år post intervention. På den anden side uhensigtsmæssigt kirurgiske procedurer kan teoretisk set føre til perforering af årehinden med efterfølgende blødning, men i vores forskning ingen øje blev beskadiget. Det er dog muligt at have sub-konjunktival blødning, der normalt reabsorberes inden for et par dage og fremstiller ikke igen som en komplikation.

Nylige undersøgelser har givet rigelig vidnesbyrd om en betydelig stigning i scotopic ERG værdier, BCVA og MY, 90 og 180 dage post autologt transplantat. Stigningen var imidlertid større, hvis den retinale tykkelse gennemsnitlige (RTA) indspillet af SD-okt var højere11,26. Det menes, at kirurgisk podede cellerne kan producere GFs i det omkringliggende væv, årehinden og nethinden, og at de har neurotrope og angiotrophic egenskaber, såsom basic fibroblast vækstfaktor (bFGF), vaskulær endotel vækstfaktor (VEGF) , pigment epitel-afledt faktor (PEDF), interleukin (IL), makrofag koloni-stimulerende faktor (M-CSF), granulocyt-makrofag koloni-stimulerende faktor (GM-CSF) og placenta vækstfaktor (PlGF), mens blodplader producere Trombocyt-afledt vokse faktor (PDGF), Trombocyt-afledt angiogenese faktor (PDAF), etc.6,7,12,13,21

Graft placering i nærheden af årehinden menes at give de producerede GFs at indtaste den choroidal flow, for at nå i endothelial celle receptorer, RPEs, Muller celler, fotoreceptorer, og endelig til at interagere med dem. I LRRT, de autologe podede elementer er nyttige, hver på deres egen måde, for regenerering. Fedtceller producerer bFGF, epidermal vækstfaktor (EGF), insulin-lignende vækstfaktor-1 (IGF-1), IL, omdanne vækst faktor β (TGF-β), PEDF og adiponectin21. ADSCs producerer bFGF, VEGF, M-CSF, GM-CSF, PlGF, TGF-β, hepatocyt vækstfaktor (HGF), IGF-1, IL og angiogenin6,7. Blodpladerne producere PDGF, IGF-1, TGF-β, VEGF, bFGF, EGF, PDAF og thrombospondin (TSP)6,12.

Nogle faktorer fremmer endotel regenerering, og nogle stimulere ADSC spredning, således begunstige både autologt fedt og adipocyt overlevelse, mens andre hæmmer neovaskulær processer22,23,24. PEDF og bFGF fordel fotoreceptor overlevelse, mens EGF udøver sin indsats på Müller celler ved udløsning endogene bFGF transskription og stimulere ADSCs for at øge deres sekretoriske aktivitet25,27. Selvom GFs er normalt udskilles af RPEs, forekommer dette ikke i atrofisk maculopathy som følge af ÅV/choriocapillaris kompleks. Paracrine GF sekretion af transplantat celler bidrager til at favorisere fotoreceptor og choriocapillaris overlevelse28. Derudover M-CSF, GM-CSF, og IL har anti-inflammatoriske og kemotaktisk effekter på makrofager, der er involveret i fjernelsen af intraretinal celle debris, en funktion, der udføres fysiologisk RPEs29,30.

Celletyper indpodet bag choroidea kan sikre konstant GF sekretion i choroidal flow. GFs kan ankomme fra choroidea at de retinale celler, interagere med deres membranreceptorer og endelig aktivere en intracellulær pathway. De præsenterede data tyder på, at LRRT kan øge choroidal perfusion og fotoreceptor trophism ikke kun gennem bFGF-receptor interaktion, men også gennem stimulering af Müller celler, RPEs, og retinal fotoreceptorer. Som et resultat, kunne gene expression ændringer og den endelige antiapoptotic virkning forklare neuroenhancement. Denne cellulære mekanisme ligger til grund for evnen til at øge visuel ydeevne, som understreget i de kliniske fund i gruppen podede. I Resumé, kunne LRRT være nyttigt at bevare de visuelle funktion af tør AMD-ramte patienter på lang sigt.

Men som vi har påvist i tidligere undersøgelser, kegle-stang ERG og stang ERG viser en meget markant sammenhæng med RTA, mens dette ikke er tilfældet med kegle ERG. Dette kan forklares ved, at fovea funktion synes at blive kompromitteret, selv om de makulært diskenheder i tør AMD fortsætter med at være regelmæssig, i det mindste i startfasen26. I denne patologi, kan resterende retinale trophism målt ved RTA være en prognostiske kriterium for LRRT behandling, da bedre resultater er hyppigere hos patienter med RTA lig med eller større end 250 µm26. De tilgængelige GF sæt kunne resultere i neuroenhancement, omfanget er proportional med tilstedeværelsen af områder med større celleforandringer, som er registreret af elektriske aktivitet26. På et senere tidspunkt, ville dårlig væv celleforandringer ikke give den terapeutiske effekt, der er eftertragtede med proceduren, på grund af de knappe GF-membran receptor interaktioner.

De næste trin i denne forskning vil kræve ansættelse af et større antal emner med større VA og centrale fiksering af statistisk vurdering af alle de uundværlige test for at bekræfte, at teknikken er gyldigt og til at studere de biokemiske effekter. Det kan hævdes, at stigningen i celle trophism er afspejlet i den visuelle celleaktivitet, måles objektivt af ERG, BCVA og min11. GF-baseret terapi kunne give en up-to-date, selektiv, sikker og rimelig behandling i oftalmologisk sygdomme.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Præsenteret på ARVO 2015, maj 3-7-Denver, CO - USA.

Acknowledgments

Forfatterne har ingen anerkendelser.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Blunt cannula, 3 mm.  Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.  RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge  RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0 IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope  Nidek Inc, Fremont, CA Nidek F10 
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany  SD-OCT 
Maia 100809 Microperimetry  CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system, C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy  Retimax for ERG 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Daftarian, N., Kiani, S., Zahabi, A. Regenerative therapy for retinal disorders. J. Ophthalmic Vis. Res. 5, 250-264 (2010).
  2. Thanos, C., Emerich, D. Delivery of neurotrophic factors and therapeutic proteins for retinal diseases. Expert. Opin. Biol. Ther. 5, 1443-1452 (2005).
  3. Cao, W., et al. In vivo protection of photoreceptors from light damage by pigment epithelium-derived factor. Inv. Ophthalmol. Vis. Sci. 42, 1646-1652 (2001).
  4. Bhutto, I., Lutty, G. Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex. Mol. Aspects Med. 33 (4), 295-317 (2012).
  5. McHarg, S., Brace, N., Bishop, P. N., Clark, S. J. Enrichment of Bruch's membrane from human donor eyes. J. Vis. Exp. (105), (2015).
  6. Kevy, S. V., et al. Preparation of growth factor enriched autologous platelet gel. Transactions of the Society for Biomaterials 27th Annual Meeting. , St. Paul, Minnesota, USA. April 24-29 (2001).
  7. Schaffler, A., Buchler, C. Concise review: adipose tissue-derived stromal cells-basic and clinical implications for novel cell-based therapies. Stem Cells. 25, 818-882 (2007).
  8. Filatov, V. P. Tissue therapy. Med. Gen. Fr. 11, 3-5 (1951).
  9. Pelaez, O. Retinitis pigmentosa. Cuban experience. , Editorial Cientifico Técnica. La Habana, Cuba. (1997).
  10. Meduri, R., et al. Effect of basic fibroblast growth factor on the retinal degeneration of B6(A)- Rperd12/J (retinitis pigmentosa) mouse: a morphologic and ultrastructure study. ARVO 2007 Annual Meeting. , Fort Lauderdale. May 6-10 (2007).
  11. Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Morales, M. U., Nebbioso, M., Limoli, C. Preliminary Study on Electrophysiological Changes After Cellular Autograft in Age-Related Macular Degeneration. Medicine. 93 (29), 355 (2014).
  12. Tischler, M. Platelet rich plasma: The use of autologous growth factors to enhance bone and soft tissue grafts. N. Y. State Dent. J. 68, 22 (2002).
  13. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).
  14. Lin, K. J., et al. Topical administration of orbital fat-derived stem cells promotes corneal tissue regeneration. Stem Cell Res. Ther. 4 (3), 72 (2013).
  15. Limoli, P. The retinal cell-neurorigeneration. Principles, applications and perspectives. The growth factors. , FGE Reg. Canelli (AT). 159-206 (2014).
  16. Coleman, W. P., et al. Guidelines of care for liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 45, 438-447 (2001).
  17. Lawrence, N., Coleman, W. P. Liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 47, 105-108 (2002).
  18. Kamao, H., et al. Characterization of human induced pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelium cell sheets aiming for clinical application. Stem Cell Reports. 23 (2), 205-218 (2014).
  19. Dang, Y., Zhang, C., Zhu, Y. Stem cell therapies for age-related macular degeneration: the past, present, and future. Clin. Interv. Aging. 10, 255-264 (2015).
  20. Nebbioso, M., Livani, M. L., Steigerwalt, R. D., Panetta, V., Rispoli, E. Retina in rheumatic diseases: Standard full field and multifocal electroretinography in hydroxychloroquine. Clin. Exp. Optom. 94 (3), 276-283 (2011).
  21. Wang, P., Mariman, E., Renes, J., Keijer, J. The secretory function of adipocytes in the physiology of white adipose tissue. J. Cell. Physiol. 216, 3-13 (2008).
  22. Chen, G., et al. VEGF-Mediated Proliferation of Human Adipose Tissue-Derived Stem Cells. PloS One. 8, 73673 (2013).
  23. Bagchi, M., et al. Vascular endothelial growth factor is important for brown adipose tissue development and maintenance. FASEB J. 27, 3257-3271 (2013).
  24. Carron, J. A., et al. Cultured human retinal pigment epithelial cells differentially express thrombospondin-1, -2, -3,and -4. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 32, 1137-1142 (2000).
  25. Kim, S. Y., et al. Expression of pigment epithelium-derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in sickle cell retina and choroid. Exp. Eye Res. 77, 433-445 (2003).
  26. Limoli, P. G., Limoli, C., Vingolo, E. M., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Cell surgery and growth factors in dry age-related macular degeneration: visual prognosis and morphological study. Oncotarget. 7 (30), 46913-46923 (2016).
  27. Ueki, Y., Reh, T. A. EGF stimulates Müller glial proliferation via a BMP-dependent mechanism. Glia. 61, 778-789 (2013).
  28. Kozlowski, M. R. RPE cell senescence: A key contributor to age-related macular degeneration. Med. Hypotheses. 78, 505-510 (2012).
  29. Schneider, A., et al. The hematopoietic factor G-CSF is a neuronal ligand that counteracts programmed cell death and drives neurogenesis. J. Clin. Invest. 115, 2083-2098 (2015).
  30. Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat. Neurosci. 9, 843-852 (2006).

Tags

Medicin sag 132 aldersrelateret makuladegeneration bedste korrigerede synsstyrke (BCVA) autolog celle pode Electroretinogram vækstfaktor (GF) Limoli Retinal restaurering teknik (LRRT) Microperimetry Regenerative terapi Suprachoroidal autograft
Regenerativ terapi af Suprachoroidal celle Autograft i tørre aldersrelateret makuladegeneration: foreløbige <em>In Vivo</em> rapport
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Limoli, P. G., Vingolo, E. M.,… More

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter