Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Регенеративной терапии аутотрансплантатом Suprachoroidal клеток в сухие возраста макулярной дегенерации: предварительный в Vivo доклад

doi: 10.3791/56469 Published: February 12, 2018

Summary

Цель этого исследования – оценить ли suprachoroidal трансплантат жировой производные стволовых клеток, включены в стромальные сосудистой фракции и тромбоцитов, производный от тромбоцитов богатые плазмы методом восстановления сетчатки Limoli может улучшить остроты и чувствительности сетчатки ответы в глазах пострадавших от сухие возраста макулярной дегенерации.

Abstract

Это исследование направлено на изучение ли suprachoroidal трансплантат аутологичных клеток может улучшить лучших исправлен остроты зрения (BCVA) и ответы на microperimetry (мои) в глазах пострадавших от сухой возрастной макулярной дегенерации (AMD) со временем через производство и секрецию факторов роста (GFs) на окружающие ткани. Пациентов были рандомизированы для каждой исследовательской группы. Все пациенты были диагностированы с сухой AMD и BCVA равным или больше чем 1 логарифм минимального угла резолюции (logMAR). Аутологичные трансплантата suprachoroidal Limoli сетчатки восстановление техника (LRRT) была проведена на группу, которая включала 11 глаз от 11 больных. Техника была выполнена путем имплантации адипоциты, жировой, полученных стволовых клеток, полученных из стромы сосудистой фракцию и тромбоцитов из тромбоцитов богатые плазмы в suprachoroidal пространстве. И наоборот Группа B, включая 14 глаза 14 пациентов, была использована как в контрольной группе. Для каждого пациента диагноз был verified by конфокальный сканирующий лазер офтальмоскоп и спектральные домена оптическая когерентная томография (SD-Октябрь). В группе А, BCVA способствовало 0.581 для 0,504 на 90 дней и 0,376 logMAR на 180 дней (+32.20%) после операции. Кроме того, мой тест увеличилась 11,44 дБ до 12,59 дБ на 180 дней. Различных типов клеток привитые позади сосудистое смогли обеспечить постоянное GF секреции в потоке хориоидеи. Следовательно, результаты показывают, что визуальные остроты (VA) в группе привитых может увеличить более чем в контрольной группе после шести месяцев.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Клеточная терапия, состоящий из системного или местные инъекции стволовых/прогениторных клеток в поврежденной области для лечения несколько хронических расстройств, привлекла пристальное внимание в последние десятилетия1. С 1990 года были изучены факторы роста (GFs) для их потенциально терапевтическую роль в атрофии сетчатки2. В самом деле многие человеческие клетки могут производить GFs, которые являются специфические белки, которые могут блокировать или замедлить апоптоза, т.е., запрограммированной смерти клеток3.

Известно, что сухие возраста макулярной дегенерации (AMD) является заболевание атрофический сетчатки, где постепенный и необратимый клеточной смерти включает травмы фоторецепторных слой и, следовательно, потери Центральной зрительной функции4. AMD является ведущей причиной слепоты среди людей старше 55 лет в развитых странах и приходится 80% всех макулярной дегенерации, которых не хватает эффективного лечения на сегодняшний день.

Несколько исследований показали, что существуют различные источники, из которых могут быть получены аутологичной СГФ. Они включают различных типов клеток, включая жировой стромальные клетки, полученные из орбитальной жира, тромбоцитов, полученных от богатых тромбоцитов плазмы (PRP) и жировая производные стволовых клеток (ADSCs) включены в стромальные сосудистой фракции (СФДВ) жировой ткани5 6, ,7. Текущий набор GF обеспечивает сетчатки neuroenhancement и исследования, проведенные Филатов, Meduri, Пелаэс, и Limoli показал, что аутологичной трансплантации жира (AFT) является эффективным8,9,10.

Кроме того предварительное исследование показало значительное улучшение в сравнительно (ЭРГ) данных, записал пост suprachoroidal аутологичные трансплантата, сухого глаза, пострадавших от AMD11. Хирургически привитые ткани в suprachoroidal пространстве модулированные паракринными секрецию клеток сетчатки, задерживая их апоптоз6,7,12. Учитывая Толщина внешнего слоя ядерных гистологическое исследование сетчатки морских свинок показал, что СГФ может иметь трофический эффект на сетчатке. Таким образом прямое или косвенное использование СГФ потенциально может принести терапевтические преимущества посредством сбалансированного отношения между молекулярной индукторов и ингибиторы6,7,12.

Этот метод предназначен, оценить ли suprachoroidal трансплантат адипоциты, ADSCs в НВФ и ОТР может улучшить лучших исправлен остроты зрения (BCVA) и microperimetry (MY) ответы в сухих глаз, пострадавших от AMD. Это исследование призвана продемонстрировать терапевтический эффект аутотрансплантатом на основе его GF производства, по данным литературы6,7,12,13.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Протокол исследования был одобрен Комитетом по этике Low Vision Академии и все предметы подписали письменное согласие в соответствии с Хельсинкской декларации. Это исследование получил этическое одобрение от Лоуборо и Шеффилд университетов.

Примечание: Критерии включения и исключения сухие возраста макулярной дегенерации пациентов получать suprachoroidal аутологичные трансплантата Limoli сетчатки восстановление техника (LRRT) описаны в таблице 1.

1. Диагностика сухие возраста макулярной дегенерации пациентов

  1. Установите диагноз с конфокальный сканирующий лазер офтальмоскоп, SD-OCT и MY.
  2. Оценку каждой группы BCVA для дальнего и Ближнего расстояния. Мера ва вблизи видения (крупный план) в точках (Pts). Измерения BCVA в момент времени 0 (T0), 90 (T90), и 180 дней (T180) по сравнению с раннего лечения диабетической ретинопатии исследование диаграмм (EDTRS) на 4 метра в logMAR.
  3. Запись электрической scotopic, Сумеречное и фотопического клеточной активности или флэш-Эрг, согласно стандартов, установленных в 2009 году Международного общества клинической электрофизиологии видения (ISCEV)11.

2. анестезии

Примечание: Золотой стандарт в анестезии во время LRRT является местной анестезией, подкрепляется суб шип инфильтрации анестезии и седации. В конкретных случаях общей анестезии является предпочтительным.

  1. Получить роговицы и конъюнктивы анестезии, применяя актуальные местных анестетиков привили прикапывают 15-20 мин до операции с лидокаина на 4% и ропивакаина в 1%.
  2. Привнести анестезии, проникновение непосредственно в суб конъюнктивы и subtenon запрещено.
  3. Используйте местные инфильтрата в брюшной области, прежде чем добывается жировой ткани и в суб конъюнктивы и суб шип пространств, 12 мм от лимба. Принять местной анестезии carbocaine или Маркаин, смешанного с 1200 МЕ адреналина.
  4. Обеспечивают интраоперационной седации через анестетик, который может выполняться должным образом с помощью фентанила как наркотическое болеутоляющее через повторные небольшие боли. Доза обычно 0,025 мг фентанила с 1 мг мидазолама за болюса.

3. Limoli сетчатки восстановление техника подготовки

Примечание: Этот метод представляет собой вариант Пелаэс вмешательства, в которой орбитальный собственного жира трансплантированы в пространстве7,1,6,subscleral12. Хирургически привитые клетки могут производить много СГФ с нейротрофическими и angiotrophic свойства в окружающие ткани, сосудистой оболочки и сетчатки18,19,20,21,22 ,23,24,25. В LRRT расстояние между привитые аутологичные клетки и сосудистое уменьшается с помощью глубокая склерэктомия, и площадь контакта между стебля и сосудистое расширяется для содействия паракринными аутологичных клеток секрецию хориоидеи потока9, 10,14.

  1. Выполняйте надлежащее лечение каждого глаза перед операцией с клеточной трансплантации между сосудистое и склера, процедура называется Limoli сетчатки восстановление техника (LRRT)15,16,17.
  2. Графт ADSCs, полученные Колман et al. и Лоуренса техника (рис. 1) от брюшной жир, в СФДВ в sovrachoroidal пространстве15,16,17.
  3. Инфильтрат жировой ножке с тромбоцитов, производный от PRP гель, полученные через следующие шаги.
  4. Центрифуга крови6,12 и собирать тромбоцитов богатые плазмы (PRP). Стимулом для тромбоцитов дегрануляции вызывает GF релиз в жировой ножке6,12.

4. Технические спецификации и стратегия

Примечание: Жировой ткани собираются и очищаются от брюшной подкожного слоя пациентов, согласно Лоуренс и Колман техника17(Таблица материалов).

  1. Вручную урожай 10 мл жировой ткани из брюшной подкожного слоя каждого пациента, с использованием 3-мм тупой канюлей подключен к блокировки шприц, Лоуренс и Колман техника17 (цифры 2A/2B).
  2. Отделить чистый СФДВ жировой ткани от крови, жира, масла и жидкости центрифугированием на 5 мин на 1500 x g при 20 ° C (рис. 2C). СФДВ имеет очень богатые ADSCs17.
  3. Собирайте 8 мл периферической крови человека с иглой 22 G и в отдельные трубки для подготовки ОТР.
  4. Центрифуга собранной крови за 5 мин на 1500 x g при 20 ° C (рис. 2D). В LRRT, последующие изменения результат лучше выживания аутологичной жировой трансплантат, ADSC распространения, которая способствует увеличению хориоидеи перфузии, и более всеобъемлющего модуляции действие этих факторов, которые являются только выделяемый жировой7, 11,17.
  5. Построить suprachoroidal карманные (более подробная информация на шаге 4, в частности 4.4 и 4.5) для размещения трансплантата, полученные из орбитальной жира и насыщают остаточный объем этого карман со смесью ADSCs из SVF и ОТР, полученные согласно Лоуренс и Колман техника17.

5. Suprachoroidal аутотрансплантатом на LRRT (Limoli сетчатки восстановление техника): хирургическая процедура и технические детали

  1. Якорь склеры с 6-0 Шелковый шов, вблизи уступает височно лимба.
  2. Откройте Субконъюнктивальное и subtenonian пространства на 11 мм от лимба уступает височно, используя 5,5" Tenetomy Весткотт изогнутые ножницы.
  3. Вставьте Limoli-Базиле конъюнктивы втягивающего устройства в это пространство, чтобы сделать склеры операционного поля.
  4. Предварительно с помощью 5-мм серповидный нож под углом скоса, вырезать лоскут на стороне в склеры в 8 мм от лимба. Петель лоскут всегда радиальные и слева от хирурга.
  5. В нижней височной квадранте, на 8 мм от лимба откройте глубоко склеры дверь около 5 мм на стороне, радиальные петли с помощью серповидный нож, углом наклона вверх. Осуществляют склерэктомия адекватной глубины для просмотра шифера цвет сосудистое.
  6. Создайте разрыв путем удаления немного крышечки в дистальной части клапана, чтобы способствовать циркуляции крови в последующих suprachoroidal аутотрансплантатом.
  7. Выписка с офтальмологическим щипцами орбитальной жира из разрыв выше нижней косой мышцы. Убедитесь, что Откаченный жир достаточно васкуляризированной чтобы позволить ему выжить после его имплантации.
  8. Осторожно поместите аутологичной жировой лоскут на хориоидеи кровать и шовный материал с хориоидеи 6/0 полиглактин волокна на проксимальной краю двери.
  9. Шовные склеры лоскут, чтобы избежать сжатия на жир ножке или на его питательных судов.
  10. Проникнуть в строме жира ножке с 1 мл геля ОТР (полученные путем центрифугирования крови материала, разделение компонента и тромбоцитов дегрануляции26) с помощью канюли под углом (30 °) 30 G.
  11. Подготовьте стороны конъюнктивы шовный материал. Затем удалите конъюнктивы втягивающего устройства.
  12. Шовные конъюнктивы, используя 6/0 полиглактин волокна.
  13. Перед закрытием, оставьте место для вставки в subscleral пространство, между лоскут, сосудистое и хориоидеи аутотрансплантатом, небольшой гибкой пластиковой трубки с аутологичной жировой трансплантат.
  14. Насыщают остаточное пространство между аутологичной жировой трансплантат, сосудистое и склеры клапанами с 0,5 ЦК СФДВ (Рич ADSCs), ранее подготовленных в шаге 3.2, на небольшой гибкой пластиковой трубки, вставляется в анклаве склеры.
  15. После насыщения в остаточное пространство, закройте шов.
  16. После операции администрировать три дня антибактериальной терапии с 500 мг азитромицина. Кроме того предоставляют терапии глаз капли с антибиотиком и стероидных комбинация клавиш, например хлорамфеникола и бетаметазон, около 15-20 дней.
    Примечание: Аутотрансплантатом из жировых клеток, ADSCs из СФДВ и ОТР теперь было получено26. Уменьшите расстояние между привитые аутологичные клетки и сосудистое, глубокая склерэктомия стимулировать секрецию паракринными аутологичных клеток в хориоидеи поток. Для той же цели разверните область контакта между стебля и сосудистое.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

С помощью процедуры, представленные здесь, две группы сухой пациентов, пострадавших от AMD, с BCVA равным или больше чем 1 логарифм минимального угла резолюции (logMAR), были зачислены в исследовании. Группа A, включая 11 глаз 11 больных, получил suprachoroidal аутологичные трансплантата метод реставрации Limoli сетчатки (LRRT), тогда как группы B, в том числе 14 глаза 14 пациентов, был использован в качестве контрольной группы.

T критерия Стьюдента и тест квадратный чи были использованы для сравнения, соответственно, средний возраст и пол распределение между двумя кружки (Таблица 2). Статистический анализ и визуализация данных проводились до и после операции LRRT.

Вилкоксон-Манна-Уитни знаком ранга испытание было проведено для определения, были ли значительные различия до и после лечения. Для сравнения двух зависимых выборок, когда предполагается, что население не может быть нормально распределены, как в данном случае был применен этот тест непараметрические статистические гипотезы. ВА значения измерялись на каждом этапе анализа. Статистическая значимость была установлена в значение p <0,05.

В этом исследовании были рассмотрены одиннадцать глазами (6 право и 5 левый) 11 пациентов (7 мужчин и 4 женщин) с клиническим диагнозом сухой AMD. Возраст пациента, варьировались от 62 до 84 лет, средний возраст 71,5 лет (SD ± 3.8).

Таблице 2 приводится обзор клинических профили пациентов с LRRT, и средние значения, записанная на 0 (T0), 90 (T90) и 180 (T180) дней после операции. Неблагоприятные эффекты сообщалось всегда гарантировать максимальную безопасность. Средние значения внутриглазного давления записаны в 0 (T0), 90 (T90) и 180 дней (T180) после операции не записывать любые существенные изменения.

Результаты после хирургии LRRT были следующие:
В группе А, BCVA изменилась от 0.581 (T0) preoperatively 0,504 на 90 дней (T90), а также 0,376 logMAR на 180 дней (T180) со значительным увеличением 35,20% (p < 0.01). В управление группы B, в том числе 14 глаза 14 больных, 7 мужчин и 7 женщин, средний возраст 80.4 лет, SD ± 2.3, BCVA, изменилось от 0,573 (T0) до 0.587 (T90) и чтобы 0.601 logMAR (T180) с незначительным означает уменьшение 4,72% (Таблица 2) (рис. 3 ). В группе А, мой тест увеличилось значительно от 11,44 дБ (T0) до 12,59 dB (T180) (+9.58%) (Рис. 4), в то время как там было никакого существенного улучшения в послеоперационном периоде значения в группе B.

Figure 1
Рисунок 1 : Представление аутологичной трансплантата suprachoroidal. Факторы роста (GFs) производства жировых клеток, тромбоцитов богатые плазмы (PRP), и жировой производные стволовых клеток (ADSCs) достигают хориоидеи и сетчатки тканей через пигментный эпителий сетчатки (ПЭС). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 2
Рисунок 2 : Техническая процедура. Канюли и последующего вывода жировой ткани из области живота (группа A). Канюля перемещает подкожного жира с мягким стремление аспирационных жировых клеток в свой просвет (группа B). После центрифугирования, есть три слои жировой ткани: нефти (высокий уровень), однородной жира (промежуточного слоя) и кровь жидкость (нижний слой) (группа C). Наблюдать за трубу с крови сразу же после центрифугирования. Существует три слоя: тромбоциты бедных плазмы (ППС), тромбоциты богатой плазмы (PRP) и эритроцитах (группа D). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 3
Рисунок 3 : Лучший исправить остроты зрения (BCVA) в сухие возраста макулярной дегенерации (AMD). Изменения в группе А после аутологичной трансплантата suprachoroidal Limoli сетчатки восстановление техника (LRRT) и в контрольной группе (проверить), измеренный при 0 (T0), 90 (T90) и 180 (T180) дней. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 4
Рисунок 4 : Microperimetry (MY) у пациентов группы а. Сухие возраста макулярной дегенерации (AMD) шесть месяцев после Limoli сетчатки восстановление техника (LRRT). Мой рост от 11,44 дБ (T0) до 12,59 дБ (T180) (+9.58%). Цветовая шкала от 0 до 36 дБ. Фиксация стабильность: стабильная, относительно нестабильной, нестабильной. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Критерии включения Критерии исключения
Кавказской темы Аномалии рефракции с сферически эквивалент > 6 D
Хорошо питающихся участников Признаки экссудативного AMD SD-OCT и фа
Диагноз SD-OCT, AFI, и ОС Глазные заболевания: CT, GL, ON, MP, VM, CRD, и т.д.
Измеримые ва Глазной травмы
BCVA ≥1 logMAR Системные заболевания: МС; PD; ДМ; RD; HD; васкулит
Нормального ВГД Гипертония, рак и другие системные заболевания
Хороший экстрафовеальную хранилищ
LogMAR: логарифм минимального угла резолюции; SD-Окт: спектральный домена оптическая когерентная томография; AFI: аутофлюоресценция изображений; FA: fluorescein ангиография; VA: остроты зрения; IOP: внутриглазного давления; D: диоптрий; CT: катаракта; GL: глаукома; ON: неврит зрительного нерва; Депутат: Эпиретинальная Мембрана; VM: неоваскулярной мембраны; CRD: хориоретинальной болезнь; MS: рассеянный склероз; PD: Болезнь Паркинсона; DM: сахарный диабет; RD: заболевания почек; HD: печеночных заболеваний.

Таблица 1: Критерии включения и исключения для пациентов сухие возраста макулярной дегенерации (AMD).

ПАРАМЕТРЫ LRRT (n = 11) Управления (n = 14)
Возраст (в среднем) 71,5 ±3.8SD 80.4 ±2.3SD
Возраст (диапазон) 62 - 84 73 - 79
Секс F:4 M:7 F:7 M:7
T0, BCVA 0,581 logMAR 0,573 logMAR
(в среднем)
BCVA T0 (диапазон) 0.301 - 1.0 0.0 - 1.0
BCVA T90 (средний) 0,504 logMAR 0,587 logMAR
BCVA T90 (диапазон) 0,222 - 1 0.0 - 1
BCVA T180 (средняя) 0,376 logMAR 0.601 logMAR
BCVA T180 (диапазон) 0,046 - 0,699 0.0 - 1.0
Процент 35,19 4.72
изменить
значение p < 0.01 > 0.5
Возраст в годах; n = пациентов и контроля; SD = стандартное отклонение; F = Женский; M = мужской; BCVA = лучших исправлен остроты в logMAR; T0 = базовых до хирургии аутотрансплантатом; T90 = 90 дней после хирургической аутотрансплантатом; T180 = 180 дней после хирургической аутотрансплантатом.

Таблица 2: профили клинических больных, рассмотрены в исследовании. Средние значения, записанные до (T0), 90 (T90) и 180 дней (T180) после аутотрансплантатом на Limoli сетчатки восстановление техника (LRRT) клеток у всех больных.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Основная цель этого исследования заключалась в оценке ли suprachoroidal трансплантат адипоциты, ADSCs в СФДВ и ОТР может улучшить ва и чувствительности сетчатки в сухих глаз, пострадавших от AMD с течением времени. Другая основная цель было продемонстрировать возможные терапевтические эффекты этих клеток, основанный на последних литературы, так как несколько доклинические исследования показали, что на основе GF терапии может быть полезным для ухода за пациентами в нескольких заболеваний.

В самом деле, некоторые исследования показали, что аутологичной человеческое индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSC) может представлять сотовой источник для трансплантата, направленных на регенерации сетчатки пигментного эпителия (ПЭС) в ткани заместительной терапии для AMD18, 19. Эти листы ячейки создаются как монослоя может выразить типичные НПП маркеры и выставку поляризованных секрецию GF, показ phagocytotic способность, а также выражение гена моделей аналогичны родной НПП18,19 . После трансплантации аутологичные нечеловеческих приматов iPSC НПП ячеек листов показал ни иммунной отказ ни опухоли формирования18,19.

Настоящее исследование представляет некоторые различные характеристики. Мы проанализировали непосредственно в сухие AMD-пострадавших человеческого глаза ли suprachoroidal аутотрансплантатом клеток может улучшить визуальное представление.

Кроме того sovrachoroidal трансплантат аутологичных клеток согласно LRRT всегда оказалась безопасной. Мы никогда не зарегистрировали югу сетчатки неоваскуляризация, макулярного отека, отслойка сетчатки или других сетчатки проблемы в первый год должность вмешательства. С другой стороны неуместным хирургических процедур может теоретически привести к перфорации сосудистое с последующим кровотечением, но в наших исследованиях не глаз был поврежден. Однако это возможно иметь суб конъюнктивы кровоизлияния, который обычно реабсорбируется в течение нескольких дней и не представляют снова как осложнение.

Недавние исследования предоставили многочисленные свидетельства значительного увеличения значения scotopic Эрг, BCVA и мой, 90 и 180 дней после аутологичной трансплантата. Однако рост был более, если толщина сетчатки средняя (RTA) записаны SD-Окт была выше11,26. Считается, что хирургическим привитые клетки могут производить СГФ в окружающие ткани, сосудистой оболочки и сетчатки, и что они имеют нейротрофическими и angiotrophic свойства, такие как основные фибробластический фактор роста (bFGF), Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) , пигмента эпителия, полученных фактор (PEDF), интерлейкина (IL), макрофагальный колониестимулирующий фактор (M-CSF), гранулоцитарно макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ) и плацентарный фактор роста (PlGF), в то время как тромбоциты производят тромбоцитарный расти фактор (PDGF), тромбоцитарный фактор ангиогенеза (PDAF), и т.д.6,7,12,13,21

Считается, что трансплантат размещение вблизи сосудистое разрешить производимых СГФ войти хориоидеи потока, чтобы достичь эндотелиальных клеток рецепторов, RPEs, Мюллер клетки, фоторецепторов и, наконец, взаимодействовать с ними. В LRRT, аутологичные привитые элементы являются полезными, каждый по-своему, для регенерации. Жировые клетки производят bFGF, эпидермального фактора роста (EGF), инсулина подобный фактор роста-1 (ИФР-1), IL, преобразовывая роста коэффициент β (TGF-β), PEDF и адипонектина21. ADSCs производят bFGF, VEGF, M-CSF, ГМ-КСФ, PlGF, TGF-β, фактора роста гепатоцитов (HGF), IGF-1, IL и Ангиогенин6,7. Тромбоциты производят PDGF, IGF-1, TGF-β, VEGF, bFGF, EGF, PDAF и тромбоспондин (TSP)6,12.

Некоторые факторы способствуют регенерации эндотелия сосудов, и некоторые стимулировать распространение ADSC, таким образом в пользу собственного жира и Адипоцит выживания, в то время как другие подавляют неоваскулярной процессы22,23,24. PEDF и bFGF пользу фоторецепторных выживания, в то время как EGF оказывает свое действие на клетки Мюллер, вызывая эндогенного bFGF транскрипции и стимулирования ADSCs увеличить их секреторную активность25,27. Хотя СГФ обычно выделяемый RPEs, это не происходит в атрофический Макулопатия результате комплекс Хориокапилляров ПЭС. GF паракринными секреции клетками трансплантата способствует пользу фоторецептор и Хориокапилляров выживания28. Кроме того M-CSF, ГМ-КСФ и IL оказывают противовоспалительное и эозинофилов воздействие на макрофаги, которые участвуют в ликвидации мусора Интраретинальные клеток, функция, которая физиологически осуществляется RPEs29,30.

Типы клеток, привитые позади сосудистое может обеспечить постоянный GF секреции в потоке хориоидеи. СГФ может прибыть из сосудистое в клетки сетчатки, взаимодействуют с их мембранных рецепторов и наконец активировать внутриклеточных путь. Представленные данные свидетельствуют, что LRRT может увеличить хориоидеи перфузии и фоторецепторных трофики не только через bFGF рецептор взаимодействия, но и путем стимуляции клеток Мюллер, RPEs и фоторецепторов сетчатки. В результате изменения выражения гена и окончательный антиапоптотических эффект может объяснить neuroenhancement. Этот механизм клеточного лежит способность увеличить визуальную производительность, как подчеркивается в клинические результаты в группе привитых. Таким образом LRRT может быть полезным для сохранения зрительной функции сухой AMD-пострадавших пациентов в долгосрочной перспективе.

Однако как мы показали в предыдущих исследованиях, Эрг конус род и род Эрг показывают весьма значительную корреляцию с РТС, хотя это не касается конуса Эрг. Это можно объяснить тот факт, что функция фовеа, похоже, быть нарушена, хотя макулы томов в сухой AMD продолжает быть регулярно, по крайней мере на начальных этапах26. При этой патологии остаточные сетчатки трофики, измеряется RTA может быть прогностического критерия для лечения LRRT, так как лучшие результаты у пациентов с RTA равным или больше чем 250 мкм26чаще. Набор доступных GF может привести к neuroenhancement, масштабы которого пропорциональна наличие площадей с большей клеточности, как записано в электрической активности26. На более позднем этапе клеточности бедных ткани не даст терапевтический эффект, который испрашивается после с процедурой, из-за скудных GF-мембранных рецепторов взаимодействия.

Следующие шаги этого исследования потребуют найма большего числа субъектов с большей ва и центральной фиксации статистически оценки всех незаменимым тесты, необходимые для подтверждения, что метод является допустимым и изучить биохимический эффекты. Можно утверждать, что увеличение трофику клеток отражается в визуальные активности клеток, объективно определяется Эрг, BCVA и мой11. На основе GF терапия может обеспечить современной, селективный, безопасного и разумного обращения в офтальмологических заболеваний.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Представлен на Арво 2015, 3-7 мая-Денвер, CO - США.

Acknowledgments

Авторы имеют без подтверждений.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Blunt cannula, 3 mm.  Mentor, Santa Barbara, CA.
Luer-LokTM syringe.  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
Regen-BCT tube.  RegenKit; RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
Centrifuge  RegenPRP Centri. RegenLab, Le Mont-sur-Lausanne, CH.
BD Venflon Pro Safety 22G x 1.00 inch (0.9 mm x 25 mm).  BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ.
SPSS Statistics Version 19.0 IBM Corp., Armonk, NY, USA.
Confocal scanning laser ophthalmoscope  Nidek Inc, Fremont, CA Nidek F10 
Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography Carl Zeiss Meditec AG, Jena, Germany  SD-OCT 
Maia 100809 Microperimetry  CenterVue S.p.A., Padua, Italy
Ocular electrophysiology electromedical system, C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy  Retimax for ERG 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Daftarian, N., Kiani, S., Zahabi, A. Regenerative therapy for retinal disorders. J. Ophthalmic Vis. Res. 5, 250-264 (2010).
  2. Thanos, C., Emerich, D. Delivery of neurotrophic factors and therapeutic proteins for retinal diseases. Expert. Opin. Biol. Ther. 5, 1443-1452 (2005).
  3. Cao, W., et al. In vivo protection of photoreceptors from light damage by pigment epithelium-derived factor. Inv. Ophthalmol. Vis. Sci. 42, 1646-1652 (2001).
  4. Bhutto, I., Lutty, G. Understanding age-related macular degeneration (AMD): Relationships between the photoreceptor/retinal pigment epithelium/Bruch's membrane/choriocapillaris complex. Mol. Aspects Med. 33, (4), 295-317 (2012).
  5. McHarg, S., Brace, N., Bishop, P. N., Clark, S. J. Enrichment of Bruch's membrane from human donor eyes. J. Vis. Exp. (105), (2015).
  6. Kevy, S. V., et al. Preparation of growth factor enriched autologous platelet gel. Transactions of the Society for Biomaterials 27th Annual Meeting. St. Paul, Minnesota, USA. April 24-29 (2001).
  7. Schaffler, A., Buchler, C. Concise review: adipose tissue-derived stromal cells-basic and clinical implications for novel cell-based therapies. Stem Cells. 25, 818-882 (2007).
  8. Filatov, V. P. Tissue therapy. Med. Gen. Fr. 11, 3-5 (1951).
  9. Pelaez, O. Retinitis pigmentosa. Cuban experience. Editorial Cientifico Técnica. La Habana, Cuba. (1997).
  10. Meduri, R., et al. Effect of basic fibroblast growth factor on the retinal degeneration of B6(A)- Rperd12/J (retinitis pigmentosa) mouse: a morphologic and ultrastructure study. ARVO 2007 Annual Meeting. Fort Lauderdale. May 6-10 (2007).
  11. Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Morales, M. U., Nebbioso, M., Limoli, C. Preliminary Study on Electrophysiological Changes After Cellular Autograft in Age-Related Macular Degeneration. Medicine. 93, (29), 355 (2014).
  12. Tischler, M. Platelet rich plasma: The use of autologous growth factors to enhance bone and soft tissue grafts. N. Y. State Dent. J. 68, 22 (2002).
  13. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, (12), 4279-4295 (2002).
  14. Lin, K. J., et al. Topical administration of orbital fat-derived stem cells promotes corneal tissue regeneration. Stem Cell Res. Ther. 4, (3), 72 (2013).
  15. Limoli, P. The retinal cell-neurorigeneration. Principles, applications and perspectives. The growth factors. FGE Reg. Canelli (AT). 159-206 (2014).
  16. Coleman, W. P., et al. Guidelines of care for liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 45, 438-447 (2001).
  17. Lawrence, N., Coleman, W. P. Liposuction. J. Am. Acad. Dermatol. 47, 105-108 (2002).
  18. Kamao, H., et al. Characterization of human induced pluripotent stem cell-derived retinal pigment epithelium cell sheets aiming for clinical application. Stem Cell Reports. 23, (2), 205-218 (2014).
  19. Dang, Y., Zhang, C., Zhu, Y. Stem cell therapies for age-related macular degeneration: the past, present, and future. Clin. Interv. Aging. 10, 255-264 (2015).
  20. Nebbioso, M., Livani, M. L., Steigerwalt, R. D., Panetta, V., Rispoli, E. Retina in rheumatic diseases: Standard full field and multifocal electroretinography in hydroxychloroquine. Clin. Exp. Optom. 94, (3), 276-283 (2011).
  21. Wang, P., Mariman, E., Renes, J., Keijer, J. The secretory function of adipocytes in the physiology of white adipose tissue. J. Cell. Physiol. 216, 3-13 (2008).
  22. Chen, G., et al. VEGF-Mediated Proliferation of Human Adipose Tissue-Derived Stem Cells. PloS One. 8, 73673 (2013).
  23. Bagchi, M., et al. Vascular endothelial growth factor is important for brown adipose tissue development and maintenance. FASEB J. 27, 3257-3271 (2013).
  24. Carron, J. A., et al. Cultured human retinal pigment epithelial cells differentially express thrombospondin-1, -2, -3,and -4. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 32, 1137-1142 (2000).
  25. Kim, S. Y., et al. Expression of pigment epithelium-derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in sickle cell retina and choroid. Exp. Eye Res. 77, 433-445 (2003).
  26. Limoli, P. G., Limoli, C., Vingolo, E. M., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Cell surgery and growth factors in dry age-related macular degeneration: visual prognosis and morphological study. Oncotarget. 7, (30), 46913-46923 (2016).
  27. Ueki, Y., Reh, T. A. EGF stimulates Müller glial proliferation via a BMP-dependent mechanism. Glia. 61, 778-789 (2013).
  28. Kozlowski, M. R. RPE cell senescence: A key contributor to age-related macular degeneration. Med. Hypotheses. 78, 505-510 (2012).
  29. Schneider, A., et al. The hematopoietic factor G-CSF is a neuronal ligand that counteracts programmed cell death and drives neurogenesis. J. Clin. Invest. 115, 2083-2098 (2015).
  30. Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat. Neurosci. 9, 843-852 (2006).
Регенеративной терапии аутотрансплантатом Suprachoroidal клеток в сухие возраста макулярной дегенерации: предварительный <em>в Vivo</em> доклад
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).More

Limoli, P. G., Vingolo, E. M., Limoli, C., Scalinci, S. Z., Nebbioso, M. Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report. J. Vis. Exp. (132), e56469, doi:10.3791/56469 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter