यहां वर्णित orthotopic डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण प्रोटोकॉल प्राप्तकर्ता माउस के फिजियोलॉजी पर डिंबग्रंथि के प्रभाव को संशोधित करने के लिए कर रहे हैं । इस शल्य प्रक्रिया डिम्बग्रंथि प्रभाव के विभिन्न प्रकार के लिए महिला चूहों को बेनकाब करने के लिए प्रयोग किया जाता है और heterochronic प्रत्यारोपण और अंडाशय के प्रत्यारोपण कि विभिन्न पूर्व vivo उपचार आया है शामिल हो सकते हैं ।
डिंबग्रंथि प्रत्यारोपण पहले १९६३ में यूटा राज्य विश्वविद्यालय में आयोजित किया गया था । अधिक हाल के काम में, स्तनधारी अंडाशय के heterochronic ट्रांसप्लांटेशन युवा महिलाओं में युवा अंडाशय के स्वास्थ्य सुरक्षात्मक प्रभाव की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है । वर्तमान प्रक्रियाओं एक orthotopic ट्रांसप्लांटेशन विधि, जहां allogenic अंडाशय डिंबग्रंथि बर्सा में अपने मूल स्थिति में वापस प्रत्यारोपित कर रहे है रोजगार । यह अंडाशय/डिम्बग्रंथि ऊतक के अधिक सामांयतः इस्तेमाल heterotopic प्रत्यारोपण के विपरीत है या गुर्दे कैप्सूल के नीचे । सभी तीन स्थानों पर प्रत्यारोपण ऊतकों के कुशल revascularization प्रदान करते हैं । हालांकि, orthotopic ट्रांसप्लांटेशन सबसे प्राकृतिक संकेत पर्यावरण के साथ अंडाशय प्रदान करता है और केवल प्रक्रिया है कि पशु के लिए अवसर प्रदान करता है स्वाभाविक रूप से बाद में प्रतिलिपि है । एक ovariectomy प्रक्रिया के दौरान सभी अंतर्जात डिम्बग्रंथि ऊतक को दूर करने के लिए ध्यान रखना चाहिए । यदि किसी भी अंतर्जात ऊतक रहता है या केवल एक अंडाशय हटा दिया जाता है, तो प्रत्यारोपण ऊतक मौजूदा ऊतक वृद्ध होनेवाला हो जाता है जब तक निष्क्रिय बना रहेगा । प्रत्यारोपित अंडाशय के revascularization बहुत जल्दी होता है, जबकि प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ता एक नया हाइपोथैलेमस के लिए अनुकूल करने के लिए समय की एक काफी राशि ले जा सकते हैं/पिट्यूटरी/जननांगों (HPG) एक्सिस रोपाई से जुड़े शासन संकेत ऊतक. यह आम तौर पर माउस में लगभग १०० दिन लगते हैं । इसलिए, ट्रांसप्लांटेशन प्रयोगों इस अनुकूलन अवधि को समायोजित करने के लिए डिज़ाइन किया जाना चाहिए । डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण के साथ विशिष्ट परिणामों में प्राप्तकर्ता के स्वास्थ्य में परिवर्तन शामिल होंगे जो प्रत्यारोपित अंडाशय की आयु को प्रतिबिंबित करते हैं, न कि प्राप्तकर्ता की कालानुक्रमिक आयु के बजाय ।
स्वास्थ्य और जीवन काल पर प्रजनन के प्रभाव अक्सर गलती के रूप में केवल प्रजनन क्षमता को शामिल अवधि के लिए प्रतिबंधित के बारे में सोचा है । जीवन काल के पुनर्उत्पादकतापूर्ण सक्षम चरण से जुड़ी जीवनशैली और phenotypes, जबकि जीवन काल के सभी चरणों में प्रजनन स्थिति स्वास्थ्य को प्रभावित करती है, पूर्व और postreproductive चरणों से आसानी से विभेदित होती है । प्रजनन क्षमता की अवधि अक्सर प्रजनन जीवन अवधि के रूप में जाना जाता है, कालानुक्रमिक जीवन काल से ही फर्क । यह शब्दावली ही दो जीवन अवधि के पदनाम के एक कृत्रिम जुदाई को उधार देता है जब वास्तविकता में, दोनों बारीकी से एक को प्रभावित करने की घटनाओं के साथ एक दूसरे से बंधे हैं, अधिक से अधिक बार नहीं, अंय के रूप में अच्छी तरह से प्रभावित ।
पिछले एक दशक से अधिक सबूत इंगित करता है कि एक व्यक्ति की प्रजनन स्थिति क्रोनिक स्वास्थ्य शर्तों के विकास का एक बढ़ा जोखिम के साथ जुड़ा हुआ है1. एक अध्ययन कम जीवन spans और पुरुषों के एक पलटन के लिए प्रजनन विफलता के बीच एक संघ के दस्तावेज2। एसोसिएशन महिलाओं में और भी अधिक हड़ताली है । हृदय रोग पूर्व3महिलाओं में दुर्लभ है, लेकिन डिम्बग्रंथि विफलता रजोनिवृत्ति4 और समयपूर्व डिम्बग्रंथि विफलता के साथ युवा महिलाओं में तेजी से हृदय रोग बढ़ जाती है5. इंसुलिन प्रतिरोध6 और रजोनिवृत्ति पर हड्डी हानि वृद्धि7 और अल्जाइमर रोग के साथ अमेरिकियों के लगभग दो तिहाई महिलाओं8कर रहे हैं. डिम्बग्रंथि संकेत में अच्छी तरह से परिभाषित परिवर्तन एक रजोनिवृत्ति, रोग प्रतिरोधी राज्य से संक्रमण के निशान, एक रजोनिवृत्ति के लिए, रोग-बोझ राज्य । इस स्थिर संक्रमण, एक के लिए तंत्र की पहचान है कि उंर बढ़ने में रोग जोखिम में तेजी लाने का अवसर प्रस्तुत करता है ।
हाल ही में, cryopreserved डिम्बग्रंथि ऊतक के प्रत्यारोपण के लिए महिलाओं है कि चिकित्सा प्रक्रियाओं है जो इस तरह कीमोथेरेपी के रूप में रोगाणु लाइन कोशिकाओं, खतरे में पड़ सकता है गुजर में प्रजनन क्षमता बहाल किया गया है । डिम्बग्रंथि ऊतक प्रत्यारोपण भी ट्रांसजेनिक चूहों9सहित गैर डिम्बग्रंथि आधारित बांझपन के साथ पशुओं में व्यवहार्य वंश का उत्पादन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । डिम्बग्रंथि प्रत्यारोपण एक कुशल विधि से प्रजनन समारोह या प्रजनन उंर बढ़ने के प्रभाव से अलग करना कालानुक्रमिक बुढ़ापे से प्रति ।
महिला स्वास्थ्य के कई पहलुओं में डिम्बग्रंथि हार्मोन के लिए अच्छी तरह से स्थापित सहायक भूमिका रजोनिवृत्ति में वृद्धि हुई रोग जोखिम के प्रमुख कारण के रूप में सक्रिय रूप से साइकिल रोगाणु कोशिकाओं से हार्मोन उत्पादन के नुकसान को फंसाती है । जबकि महिला स्वास्थ्य में डिंबग्रंथि हार्मोन का मूल्य संदिग्ध है, पेरि में इन हार्मोन की जगह-और रजोनिवृत्ति उपरांत महिलाओं के स्वास्थ्य लाभ की बहाली में अविश्वसनीय किया गया है युवा अंडाशय के साथ युवा महिलाओं द्वारा मज़ा आया । इन स्वास्थ्य लाभ मज़बूती से postreproductive महिला चूहों के लिए युवा अंडाशय के heterochronic प्रत्यारोपण द्वारा बहाल कर रहे हैं10,11,12,13,14.
दाता और प्राप्तकर्ता चूहों दोनों की प्रजनन स्थिति से पहले और प्रत्यारोपण या ovariectomy प्रक्रियाओं के बाद निर्धारित किया जाना चाहिए । प्रकल्पित postreproductive चूहों कि 12 महीने की उंर में सर्जरी से पहले जननांगों इनपुट के लक्षण प्रदर्शित इन प्रयोगों से बाहर रखा गया है । जननांगों इनपुट योनि cytology द्वारा निर्धारित किया जाता है । योनि cytology पर डेटा को प्राप्तकर्ता चूहों में एक postreproductive राज्य और दाता चूहों में सक्रिय रूप से साइकिलिंग अंडाशय सुनिश्चित करने के लिए कम से कम 10 दिन पूर्व सर्जरी के लिए एकत्र कर रहे हैं । एक मद चक्र की अवधि के रूप में परिभाषित किया गया है दिन nucleated उपकला कोशिकाओं पहले दिखाई देते हैं (यानी, proestrus) योनि धब्बा में nucleated उपकला कोशिकाओं के अगले उपस्थिति के पूर्ववर्ती दिन, बशर्ते कि वहाँ leukocytic की अवधि है उपस्थिति (यानी, diestrus) बीच में । मद के साथ या बिना नाभिक बड़े, स्क्वैमस उपकला कोशिकाओं की उपस्थिति से निर्धारित होता है. चूहों कि एक 10 दिन की अवधि के लिए कोई चक्रीय गतिविधि से पहले और/या सर्जरी के बाद प्रदर्शित अवधि के लिए कोई जननांगों इनपुट है निर्धारित कर रहे हैं । चूहों कि पहले और/या सर्जरी के बाद एक 10 दिन की अवधि में कम से एक पूर्ण मद चक्र प्रदर्शन के लिए कहा अवधि के लिए जननांगों इनपुट है निर्धारित कर रहे हैं । मादा चूहों पुरुष चूहों की उपस्थिति में घर या एक पुरुष के पिंजरे से मिट्टी का बिस्तर उजागर करने के लिए चक्र उत्प्रेरण उत्तेजनाओं के अनुरूप प्रदर्शन सुनिश्चित किया जाना चाहिए ।
इन प्रत्यारोपण प्रक्रियाओं सबसे कुशलतापूर्वक दो दाता और प्राप्तकर्ता चूहों पर एक साथ काम कर सर्जन के साथ पूरा कर रहे हैं । हालांकि, प्रक्रियाओं को आसानी से एक सर्जन द्वारा पूरा कर रहे हैं, दाता अंडाशय के साथ सबसे अधिक बार प्राप्तकर्ता माउस पर ovariectomy प्रक्रिया शुरू करने से पहले बरामद किया । यह प्रोटोकॉल एकल सर्जन के लिए प्रक्रिया का वर्णन करता है । प्रजनन मार्ग और साइट के बंद होने के जोखिम आम तौर पर एक खुर्दबीन के बिना किया जाता है, जबकि हटाने और अंडाशय के प्रतिस्थापन एक खुर्दबीन के नीचे किया जाता है । किसी भी शल्य प्रक्रिया सीखने के साथ के रूप में, चीरा साइटों बड़ा हो सकता है और सर्जरी समय पहले प्रक्रिया सीखने और आम तौर पर अनुभव के साथ कम हो जाएगा ले सकते हैं ।
Ovariectomy और प्रत्यारोपण बरकरार और रोगाणु कोशिका समाप्त अंडाशय के 21 दिन से 18 महीने की उंर के लिए लेकर चूहों में आयोजित किया गया है । जब एक ovariectomy जहां यह डिंबग्रंथि बर्सा बरकरार बनाए रखने के लिए वांछनीय है प्रदर…
The authors have nothing to disclose.
अनुसंधान इस प्रकाशन में रिपोर्ट उंर बढ़ने पर राष्ट्रीय संस्थान से 14 महीने की वृद्ध महिला CBA चूहों के एक उदार उपहार द्वारा समर्थित किया गया था, वृद्ध कुतर कॉलोनी (नैंसी नादौन) और यूटा राज्य विश्वविद्यालय, पशु चिकित्सा, पशु विभाग, डेयरी के स्कूल द्वारा और पशु चिकित्सा विज्ञान ।
Dissecting microscope | Any dissecting scope with an adjustable working distance. | ||
Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field. | Stryker/Gaymar | TP700 | Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields. |
Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure. | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
Suture material for abdominal wall | eSutures | G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18" HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED | |
Suture material for ovarian bursa | eSutures | 2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 TAPER | 10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field. |
Absorbable gelatin sponge | PFIZER. | Gelfoam- PFIZER 09-0315-08. | cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions. |
Staples for skin closure | Becton Dickinson | MikRon Autoclip 9mm (BD 427631) | |
Eye ointment. | MWI Veterinary Supply Co. | Puralube sterile opthalmic ointment | |
Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine | MWI Veterinary Supply Co. | BD 305536 | 27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml |
Syringes for saline. | MWI Veterinary Supply Co. | BD 309657. | 3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle |
Clippers/blade | Andis | Super AGR+™ Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge® #40 blade. | Any clippers with a fine blade. |
Ethanol | University chemical supply | dilute to 70% for use. | |
Betadine solution | MWI Veterinary Supply Co. | 003233 | |
2×2 gauze pads | MWI Veterinary Supply Co. | 003073 | autoclaved with surgery packs |
Borosilicate glass beads | Sigma-Aldrich Co. | Z273619 | Autoclave in sintilation vials |
4-vinylcyclohexene diepoxide | Sigma-Aldrich Co. | 94956 | |
Sesame oil | Sigma-Aldrich Co. | S3547 |