Summary

Utilizzando il t-labirinto modificate per valutare i risultati funzionali di memoria dopo arresto cardiaco

Published: January 05, 2018
doi:

Summary

Questo protocollo descrive l’uso di un t-labirinto modificato per valutare l’apprendimento/memoria funzionale nell’ischemia cerebrale indotta da arresto cardiaco di asfissia.

Abstract

Priorità bassa: Valutazione da lieve a moderata danno conoscitivo in un modello di ischemia cerebrale globale (cioè arresto cardiaco) può essere difficile dovuto povera locomozione dopo la chirurgia. Ad esempio, ratti che subiscono le procedure chirurgiche e sono sottoposti a labirinto dell’acqua di Morris non possono essere in grado di nuotare, quindi invalidare l’esperimento.

Nuovo metodo: Abbiamo stabilito un test t-labirinto di alternanza spontanea del comportamento modificato. Il principale vantaggio del protocollo t-labirinto modificato è il suo design relativamente semplice che è abbastanza potente per valutare la memoria/apprendimento funzionale dopo ischemia. Inoltre, l’analisi dei dati è semplice e lineare. Abbiamo usato il t-labirinto per determinare i deficit di memoria e apprendimento dei ratti sia in presenza o assenza di lieve a moderata (6 min) arresto cardiaco asphyxial (ACA). Ratti hanno una naturale tendenza per esplorazione ed esploreranno le braccia alternative in t-il labirinto, mentre ratti hippocampal-lesi tendono ad adottare un lato-preferenza con conseguente rapporti di alternanza spontanea in diminuzione, rivelando il hippocampal-correlate memoria/apprendimento funzionale in presenza o assenza di ACA.

Risultati: ACA gruppi hanno maggiori rapporti di preferenza di lato e alternanze inferiore rispetto al controllo.

Confronto con metodi esistenti: The Morris acqua e labirinto di Barnes sono più prominenti per valutare le funzioni di memoria e apprendimento. Tuttavia, il labirinto di acqua di Morris è più stressante di altri labirinti. Il labirinto di Barnes è ampiamente usato per misurare la memoria di riferimento (lungo termine), mentre i deficit neurocognitivi ACA-indotta sono più strettamente connesse all’utilizzo di memoria (a breve termine).

CONCLUSIONI: Abbiamo sviluppato una strategia semplice, ma efficace per delineare la memoria (a breve termine) tramite il t-labirinto di lavoro nel nostro modello di ischemia cerebrale globale (ACA).

Introduction

Secondo l’American Heart Association (2017), arresto cardiaco (CA)-indotto mortalità si verifica ogni quattro minuti e colpisce oltre 400.000 persone all’anno in Stati Uniti d’America1. È ben documentato che CA può causare lesioni di un neurone del cervello a seguito di sangue insufficiente perfusione2,3,4. Lesione cerebrale indotta da CA si verifica nella regione CA1 ischemia-sensibile del ippocampo5,6,7, che interessa i neuroni che sono fondamentali per apprendimento e memoria8,9, 10,11,12. Inoltre, la perdita di densità di spine dendritiche, in condizioni ischemiche nell’ippocampo (cioè neuroni CA1), svolge un ruolo critico nella memoria spaziale danno13,14,15. A causa di queste alterazioni patologiche dopo CA, disturbi comportamentali come: ansia, depressione, disturbo post-traumatico da stress e perdita di memoria sono più prevalenti. Anche se ci sono stati progressi nella tecnologia medica (cioè efficiente servizio ambulatoriale) che correlano con i tassi di sopravvivenza migliorati di CA, la maggior parte dei trattamenti neuroprotettivi (ad eccezione di ipotermia) non riescono a migliorare i risultati funzionali dopo CA16 ,17. Superstiti di CA in genere hanno una scarsa qualità di vita e sono gravati con incrementale medical spendendo16.

Le valutazioni dello stato cognitivo per ischemia cerebrale tramite test comportamentali sono importanti per determinare sia l’efficacia dei farmaci e infine sviluppare un successo clinico. Nel 1940, Edward Tolman progettato la prima prova di comportamento per studiare la memoria spaziale ippocampo-based18. Successivamente, sono stati sviluppati diversi labirinti (cioè Morris acqua labirinto, labirinto radiale, T – o Y-labirinto e labirinto di Barnes) per valutare l’apprendimento spaziale basato su hippocampal e memoria in ratti19,20,21,22 ,23. Uno dei test comportamentali più ampiamente usato è il labirinto di acqua di Morris, che esamina l’apprendimento spaziale e memoria nel ratto modelli24. Tuttavia, il labirinto di Morris acqua richiede il ratto di nuotare e di esercitare controllo e funzione integrale del motore. Per esperimenti di ischemia come il modello di asphyxial arresto cardiaco (ACA, un modello del ratto di CA), incannulazione della vena/arteria femorale sono necessaria per ottenere la pressione del sangue vitale, di gas del sangue e introduzione di varie droghe. Poiché l’incannulamento dell’arteria femorale/vena può inibire la mobilità gamba rendering capacità del ratto di nuotare correttamente, il labirinto di Morris acqua non può essere la più appropriata verificare i danni conoscitivi sotto ACA.

Il labirinto di Barnes è l’altro test comportamento ampiamente usato per esaminare l’apprendimento spaziale e memoria nei modelli del roditore. Il labirinto di Barnes non richiede l’esercizio della funzione integrale del motore e controllo e quindi meno stressante che il labirinto dell’acqua di Morris. In passato, abbiamo effettuato esperimenti utilizzando il labirinto di Barnes per determinare se si verificano differenze di memoria/apprendimento funzionale tra controllo o della falsità contro i ratti ACA-indotta. I dati ottenuti per il labirinto di Barnes non ha avuto la risoluzione per verificare i danni conoscitivi, seguito da lieve a moderata ACA dovuta al fatto che il labirinto di Barnes è ampiamente usato per misurare il riferimento (lungo termine) memoria25,26, mentre Deficit neurocognitive ACA-indotta più strettamente correlati al lavoro (a breve termine) memoria27,28,29,30 suggerendo che il labirinto di Barnes è meno praticabile per la valutazione della funzione di memoria nel nostro ACA modello.

Abbiamo così sviluppato un t-labirinto modificato utilizzando alternanza spontanea test per valutare la memoria (a breve termine) di lavoro dopo ACA. Il vantaggio principale di test modificato per la spontanea alternanza t-labirinto è sua semplicità e il minimo stress sui ratti rispetto ad altre prove del comportamento dovuto al fatto che il t-labirinto modificata non richiede precedente formazione animale, come ben pesante computazionale analisi o sub-routines (cioè dei video imaging del ratto) come richiesto dal labirinto dell’acqua di Morris e labirinto di Barnes. Qui indichiamo che il test di alternanza spontanea t-labirinto modificato è un paradigma di prova del comportamento semplice e ancora altamente efficiente che può offrire una risoluzione sufficiente per accuratamente rilevare e valutare la funzione hippocampal nelle malattie che causano perdita di memoria a breve termine (cioè ACA).

Protocol

Tutte le procedure sperimentali sono state condotte in conformità con le linee guida del National Institutes of Health e approvate dal comitato di uso (LSU Health Sciences Center-Shreveport) e istituzionali Animal Care per l’utilizzo del maschio (di ratti Sprague Dawley 300-350 g, 9-10 settimane). Ratti sono stati tenuti a digiuno durante la notte prima dell’intervento ACA. 1. t-labirinto apparato design e ambiente Nota: Basare la progettazione di t-labirinto il diac…

Representative Results

ACA (ischemia cerebrale globale) provoca soprattutto lavorando (a breve termine) memoria deficit28,29. Per valutare la funzione di apprendimento e memoria dopo ACA, abbiamo usato il test modificate alternanza spontanea per valutare lavorando (a breve termine) memoria30. I risultati di test di alternanza spontanea suggeriscono che il tasso di alternanza da tre giorni consecutivi nel gruppo ACA (26,19 ± 4,96…

Discussion

Nello studio presente rispetto al diacono e ‘Rawlins protocollo31sono state apportate modifiche. La stampante 3D è stata utilizzata per costruire il t-labirinto. La stampa 3D fornisce alternative economica e remunerativa per commercializzato t-labirinto. Per ridurre l’ansia dei ratti durante la prova, il t-labirinto è stato effettuato in camera oscura con illuminazione minima. Una volta che il topo inserito uno dei bracci di obiettivo, abbiamo bloccato delicatamente il braccio opposto. Questo ev…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato supportato dall’istituti di salute nazionale Istituto nazionale di disturbi neurologici e colpo concedere 1R01NS096225-01A1, l’American Heart Association concede AHA-13SDG1395001413, 17GRNT33660336 AHA, AHA-17POST33660174, il Louisiana State University Grant nel Consiglio di ricerca di aiuto, la compagnia ricerca cardiovascolare Malcolm Feist ed Evelyn F. McKnight Brain Institute.

Materials

3D Printer MakerBot Replicator Fifth generation
3D Printer Filament Hatchbox PLA, 1.75 mm filament diameter
200 Proof Pure Ethanol Koptec V1005SG
Sani-Chips PJ Murphy-Forest Products Size: 8 to 20 mesh; 2.2 cubic foot/package; autoclavable bags
Rat Charles River Laboratories Sprague-Dawley
Vecuronium bromide Sun Pharmaceutical 47335-931-40 10 mg
Epinephrine Par Pharmaceutical 42023-103-01 Adrenalin Chloride Solution 1 mg/mL, 1:1000
Buprenorphine Hydrochloride Injection Pfizer 00409-2012-32 0.3mg/mL
SketchUp Trimble Inc. 3D modeling software
VentElite Small Animal Ventilator Harvard Apparatus 55-7040 Animals raging in size from mouse to guinea pig (10g to 1kg)
PowerLab 8/35 Adinstruments PL3508 8 analog input channels – 4 of which can be used in differential mode.
Bio Amps Adinstruments FE132 The Bio Amp is a galvanically isolated, high-performance differential bio amplifier optimized for the measurement of a wide variety of biological signals such as ECG, EMG and EEG recordings.
Quad Bridge Amp Adinstruments FE224 A four-channel, non-isolated bridge amplifier designed to allow the PowerLab to connect to most DC bridge transducers.
LabChart 8 Adinstruments
ABL80 FLEX CO-OX blood gas analyzer Radiometer pH / p CO2 / p O2
SURFLO Teflon I.V. Catheter Terumo sc-361556 Only use the flexible thin wall catheter (49-mm long)
Pipet/Infusion Needle Hamilton 7748-03 17-gauge; 93-mm long; 10-degree angle
Classic T3 Vaporizer SurgiVet VCT302 Classic T3 Isoflurane Funnel Fill
ENVIRO-PURE Charcoal Canister SurgiVet 32373B10 Designed to absorb waste anesthetic gas
O2 single flowmeter SurgiVet 32375B1 0-1000 mL
N2O Flowmeter VetEquip 401721 0-4LPM
Clay Adams Intramedic Luer-Stub Adapter (Sterile) Becton Dickinson 427565 23 gauge
Micro Forceps Black and Black surgical B3FRC-18 RM-8 7 1/4" (18 cm), 8mm RH, counterweight w/ guide pin 2mm, platform 6 x .3 mm, curved.
Halstead Mosquito Forceps Roboz RS-7111 Curved; 5" Length, 1.3 mm tip diameter, 2.1 mm jaw width
Mixter Forceps Roboz RS-7291 5.25" Curved Extra Delicate, 1.1 mm tips
Castroviejo Micro Dissecting Spring Scissors Roboz RS-5650 Straight, Sharp Points; 9 mm Cutting Edge; 0.15 mm Tip Width; 3 1/2" Overall Length
Mayo-Stille Scissors Roboz RS-6891 5.5" Round Curved
Dumont #5 Forceps Roboz RS-5058 45 Deg Dumoxel Tip Size .10 x .06 mm
Olsen-Hegar Combination Scissor And Needle Holder Roboz RS-7884 Cross Serration Tip; 5.5" Length
Moloney Forceps Roboz RS-8254 Serrated; Slight Curve; 4.5" Length

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Wu, C. Y. C., Lerner, F. M., Couto e Silva, A., Possoit, H. E., Hsieh, T., Neumann, J. T., Minagar, A., Lin, H. W., Lee, R. H. C. Utilizing the Modified T-Maze to Assess Functional Memory Outcomes After Cardiac Arrest. J. Vis. Exp. (131), e56694, doi:10.3791/56694 (2018).

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