Summary
כאן אנחנו מדגימים פרוטוקול לתקנן את תהליכי דגימה מודל חזירי הוקמה של אוטם שריר הלב חריפה על מנת להגדיל את ערכו translational בהבנת הפתופיזיולוגיה של שריר הלב איסכמיה/פגיעה reperfusion פציעה כדי לבחון מועמדים סמים הרומן.
Abstract
פגיעה reperfusion איסכמיה בשריר הלב (אני / R) פגיעה תורמת כמעט מחצית של האזור עם נמק לאחר אוטם שריר הלב. עד היום יש אין סמים שאושרו כדי למנוע או להפחית את שריר הלב אני / R פציעה. הלימוד והבנה של המנגנונים הקשורים pathophysiological של שריר הלב אני / R פציעה הוא חיוני לפתח טיפולים מוצלחים. ניסויים בבעלי חיים גדולים הם צעד חשוב בשיטות translational. הדגם חזירי של אוטם אקוטי הוקמה ותיאר את עצמנו ואחרים. אנחנו נועדו לשפר את הערך של המודל על-ידי התמקדות בפירוט הטכניקות דגימה לצורך שימוש בניסויים בעתיד. יתר על כן, אנו שמים דגש צעדים קטנים אך חשובים שיכולים להשפיע על איכות התוצאות הסופיות. כדי לחקות את המצב הקליני של שריר הלב אני / R פציעה, קטטר התערבות כלילית מלעורית (PCI) הוכנס לתוך השמאלי הקדמי היורד העורק הראשי (LAD) של חזיר anesthetized. ° ° ° זה מודל מחקה אוטם אקוטי וטיפול PCI בבני אדם עם אפשרות לקבוע באופן מדויק את האזור ב להסתכן כמו גם נמק-קיימא רקמות איסכמי. כאן הדגם שימש לחקור את השפעת מעכב פפטיד bicyclic של FXIIa. כן, ניתן לשנות את המודל כדי לאפשר זמנים ארוכים יותר פגיעה reperfusion לחקור תופעות מאוחרות יותר של אוטם שריר הלב.
Introduction
מחלת לב איסכמית, חריפה במיוחד אוטם שריר הלב (MI), הוא הגורם העיקרי של המוות בקרב המדינות המפותחות 1. כיום הטיפול הסטנדרטי של MI הוא התערבות כלילית מלעורית (PCI), הטיפול קטטר בלון. אחד הגורמים הקריטיים המשפיעה על איכות החיים, הפרוגנוזה של חולים לאחר שטופלו PCI MI חריפה הוא גודל אוטם. צמצום הגודל יכול לקבל השפעה רבה על הישרדות והפרוגנוזה החולה 2. איסכמיה/פגיעה reperfusion שריר הלב (אני / R) פציעה יש השפעה משמעותית על גודל אוטם כך שאחת המטרות העיקריות במחקר לב וכלי דם היא למנוע או להפחית את שריר הלב אני / R פציעה 3. המנגנון המדויק של אני / R פגיעה הם עדיין תחת חקירה 4. הפעלה של הפלזמה אשדים, תאי אנדותל חדישים אני / R פציעה 5. הפעלת במערכת קרישת הדם היא בבירור מעורב 6,7. לאחרונה, הוכח את התפקיד של FXII, כמו פפטיד במעלה מוקדם מעורב בשלב הקשר ההפעלה של המפל קרישת הדם, ב FXII תעלף עכברוש מודל של מוחי / R פציעה 8. אימות של תוצאות אלו במודל חזירי הוא שלב חשוב לתוך תרגום קליניים. לכן, אנחנו בודקים מעכב הרומן (80 פרוטאז kDa) bicyclic FXIIa בהקשר של שריר הלב אני / R פציעה על מחקר פיילוט.
מודלים בבעלי חיים, אשר לחקות את המצב הקליני של MI חריפה וטיפולי PCI, חיוניים לשיפור שלנו הבנה של הפתופיזיולוגיה של שריר הלב אני / R פציעה ולבדוק אפשרויות טיפול הרומן. חזירים מייצגים מודל בעלי חיים עבור קליניים שריר הלב אני / R פציעה. זה לא רק בגלל ליבם דומים מאוד לבבות אנושיים אנטומיה, זרימת הדם בעורק הכלילי, אבל הם גם מראים דומה pathophysiological תגובות שריר הלב איסכמיה, פגיעה reperfusion 9,10. דגמים אחרים כגון חולדות ועכברים לא עונים על דרישות אלו ולהראות בהבדלים ניכרים בהשוואה לבבות אדם 11,12, ואילו כלבים למשל, יש רבים הדם הכליליים יותר משני לעומת בני אדם 13.
המודל אוטם אקוטי חזירי כבר בשימוש נרחב במחקר לב וכלי דם לחקור מחלת לב איסכמית כולל שריר הלב אני / R פציעה 14,15,16,17. האחרון הוא מצב דלקתי, בגלל איזה צמצום תגובה דלקתית הקשורים sternotomy או ניקור חזה נעשה שימוש בניתוח פתוח-החזה הוא חיוני. המודל חזה סגור באמצעות C-arm מסתמים בקביעת קליני מתגבר על הבעיה הזו. יתר על כן, באחת הנקודות החשובות ביותר הוא פרוטוקול שלנו מספקת של הבחנה מדויקת בין איסכמי (אזור בסיכון, AAR) ושטחים שאינם-איסכמי של החדר השמאלי (אזור אינם נתונים בסיכון, ANR) כך גודל לאוטם (נמק איסכמי רקמות, ניט) יכול להיות נחוש באופן מדויק. המטרה שלנו בשביל הנייר הזה הוא להגדיר בבירור מתודולוגיה לשחזור של חזירי שריר הלב אני / דגם R פציעה, בפרט ביחס דגימה רקמת שריר הלב, אשר תאפשר ניתוח מדויק יותר של המנגנונים המולקולריים של אני / פציעה R ו- a תמונה ברורה של ההשפעות של טיפולים חדשניים תרופות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. בעלי חיים:
כל החיות טופלו בהתאם לקווים המנחים של דיני הלאומית השוויצרית. המחקר אושרה על ידי הוועדה המקומית לניסויים בבעלי חיים של קנטון ברן (הרשאה אין. להיות 25/16).
משתמשים בחזירים לבן גדול לשני המינים (~ 30 ± 5 ק ג). לחלק את החיות בצורה עיוורת לשתי קבוצות, קבוצה אחת מקבלת מעכב (80 פרוטאז kDa) bicyclic של FXIIa או טיפול של ברירה והשני פקד לא פעיל.
2. ניתוח (איור 1)
- הרדמה והכנה של החיה:
- מהר החיות במשך 12 שעות לפני תחילת הניסוי.
- קדם טיפול תרופתי החיה עם 20 מ"ג/ק"ג קטמין ו- 2 מ"ג/ק"ג של חריגות השירותים הווטרינריים באמצעות זריקה תוך שרירית לתוך הצוואר, באמצעות מזרק 10 מ"ל. להקליט את משקל חיות וסקס.
- לגרום הרדמה על ידי הזרקת 0.5 מ"ג/ק"ג Midazolam ו 0.05 מ"ג/ק"ג Atropin לווריד אוריקולארית. לצנרר את החיה עם צינור אנדוטרכאליות.
- לשמור על ההרדמה על ידי אוורור מכני באמצעות מסכת חמצן (O2/air 1:3, Sevorane 1.5%), צינור הנשימה 7-8 מ מ והן מסנן. התאם את השבר של השראה חמצן (FiO2) ועד 35% בנפח של עד 6-10 מ"ל/ק"ג.
- עומק ההרדמה שקובעת נאותה גם בהעדר תגובות מוטוריות או אוטונומי צובט את האף. רפלקסים palpebral וגוון הלסת נוטרו באופן רציף גם פילוח הטון הרגוע הלסת ואת היעדר רפלקסים palpebral. טמפרטורת נוטרו באופן רציף, ומבטיחים תחזוקה של normothermia (38-38.5 ° C) היה עם חימום פסיבי (בידוד שמיכות ובקבוקים חמים).
- לנתח ללא תשלום, כפי שתואר על ידי Koudstaal את. צעדיו עמיתים 3-1 עד 3-318, עורק משני הצדדים, נקרר אותם עם נדן 7F. נקרר ומוחלף על שמאל עם נדן 7F דגימה דם ורידי.
- מחלקים מנה בולוס של שיכוך כאב פנטניל µg 250 דרך קו ורידי מרכזי ואחריו µg 250/h כמו תקינות תוך ורידי באמצעות משאבת אינפוזיה. לפקח על טמפרטורת הגוף, קצב הלב, קצב עם רל 3-עופרת (א), לחץ ורידי עורקי ומרכזי במהלך הניסוי כולו.
- באמצעות צינורות איסוף דם רגילה, למשוך את דגימות הדם הבסיסית הבאה משורת ורידים: פלזמה citrated מ ל ו- 2.9 מ ל פלסמה EDTA לתוך הצינורות המתאימים. צנטריפוגה מיד ב g x 2,000 למשך 15 דקות ב 4 º C. ניקח 2.9 מ ל דם לתוך צינור סרום ולאפשר מצב של קרישת חסר במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר לפני צריך שתוציאו כמתואר לעיל.
- Aliquot µL 200 של פלזמה או סרום לתוך 500 µL צינורות ולאחסן כל דוגמאות ב-80 מעלות צלזיוס לניתוח נוסף.
- למשוך 0.5 מ של דם העורק באמצעות שהניתוח גז דם מיוחד (הבי) מזרקים כדי למדוד ההלחמה לשימוש במכונה ההלחמה בהתאם להוראות היצרן.
- לסגת 0.5 מ של דם משורת ורידים בעזרת מזרק רגיל 2 מ"ל והעברתה מיד לתוך הדיו מעשה באמצעות מחט 30 גרם. הכנס את מיכל הדיו מלא לתוך המכונה חוק כדי למדוד זמן קרישת דם על פי הוראות היצרן. ראה איור 2 נקודות זמן.
- לנהל 5000 יחב unfractionated הפארין לתוך הקו ורידים באמצעות מזרק 2 מ"ל ולאפשר את החיה לייצב במשך 20 דקות לפני תחילת הניסוי MI.
- צג לפעול כל 30-45 דקות כאמור 2.1.11. להזריק לווריד הפארין 2500 IU unfractionated אם המעשה הוא s < 180.
- ניסוי אוטם שריר הלב
- השימוש בציוד fluoroscopy סטנדרטי של C הזרוע (coronary angiography התוכנית, זווית 0°, 12 מסגרות לכל השני, ~ 70 kV) - או לחלופין מערכת מסתמים ייעודי - לבצע התערבות כלילית.
- השתמש הדרכה fluoroscopic להכניס צנתר לחץ (5F, 120 ס מ) באמצעות נדן הקודם שמוקם בעורק השמאלי. לקדם אותו לתוך החדר השמאלי. לחבר את הצנתר לחץ מערכת רכישה להקליט השמאלי לחץ חדרית. רכישת המערכת צריכה לחשב ולהקליט קצב הלב, פיתח באופן רציף, לחץ, dP/dt המרבי (contractility של החדר השמאלי) ו dP/dt מינימלי (הרפיה של החדר השמאלי) במהלך הניסוי כולו. שיא ערכים של תוכנית בסיסית 10 דקות.
- הכנס של 6F (100 ס"מ, EB3.75) המנחה צנתר דרך נדן הקודם שמוקם לתוך עורק התרדמה הימני. עולה זה העורק השמאלי הראשי כדי להגיע השמאלי הקדמי היורד העורק הראשי (LAD) בהנחיית רנטגן. להזריק והחדות בינונית בעזרת מזרק 20 מ ל דרך הקטטר המנחה לבצע צילום אנגיוגרפיה כלילית בסיסית.
הערה: הזרקה של והחדות בינונית נעשה על ידי לחץ ידני אך מערכת מזרק כוח ייעודי יכול לשמש גם כן. - להעריך את הגודל של הנער על המסך רנטגן כדי לבחור את הגודל המתאים של הקטטר התערבות כלילית מלעורית (PCI). השתמש בלונים PCI באורך של 15-25 מ מ, קטרים בין 2 ל- 3.5 מ"מ בהתאם לגודל בחור. להרכיב קטטר PCI ו- guidewire כלילית (נ 014/J, 175 ס מ). לחבר את הצנתר PCI עם המכשיר האינפלציה מראש מלא והחדות בינונית.
הערה: הקוטר LAD ניתן למדוד ישירות על צג מכויל בעזרת סרגל, גודל הבלון PCI ואז נבחר בהתאם. - להוסיף את המערכת שהורכב 2.2.4 לתוך לומן של הקטטר המנחה. לקדם את guidewire אל הנער עד שהוא מגיע מעבר הענף באלכסון השני של הנער.
- השתמש fluoroscopic הדרכה כדי לקדם את הצנתר PCI עד שהוא מגיע בערך באמצע של הנער. בחר האתר החוסמים בחורי בהתאם האנטומיה של התקפי, בדרך כלל לאחר הטיפול השני, לפעמים אחרי הסניף אלכסוני הראשון (איור 3) כדי שיהיה דומה אחוזי AAR של החדר השמאלי (LV).
הערה: הבחירה של חסימת האתר תלוי אורך הענפים אלכסוני ולכן האזור של רקמה אשר מסופק על-ידי הדם דרך הסניף בהתאמה. במקרה של רב, ענף מתפצל לשניים הראשון אלכסוני חסימת האתר יהיה רק אחרי זה. במקרה של ענף אלכסוני הראשון קצר יותר, חסימת נעשית לאחר האלכסון השני. - הסר את guidewire, ואז להגדיל את הלחץ בתוך המכשיר האינפלציה 7-10 בר לנפח את הבלון של הקטטר PCI, זירוז איסכמיה בשריר הלב עבור ה 1 להגדיל בהדרגה את FiO2 ל- 50-60% בין 15 ל-40 דקות של איסכמיה. לשמור על נפח 6-10 מ"ל/ק"ג.
הערה: הליך זה להפחית את המופע של extrasystoles ולהקטין את התדירות של חדרים fibrillations. - שיא 5-10 s רצף וידאו תוך כדי הזרקת והחדות בינונית דרך הקטטר המנחה שיהיה כיף של הבלון של הקטטר PCI במקום רק לאחר הפעלת איסכמיה; חזור לאחר 10 דקות של איסכמיה כדי לוודא סגר מוחלט של הנער דיסטלי לבלון של הקטטר PCI.
- לפקח על החיה מקרוב כדי לזהות ולטפל באופן מיידי (2.2.10) והפרעות בקצב הלב. Extrasystoles בדרך כלל להתרחש ומגבירים בתדירותו (> 3 כל דקות) בין 20 ל-40 דקות לאחר אינדוקציה של איסכמיה בשריר הלב. אם הדבר יתרחש, לעסות בעדינות את הצוואר משני הצדדים מתחת הלחי. ברוב המקרים זה יהיה מספיק ליצור מחדש דופק סדיר, כנראה על ידי גירוי של baroreceptors העצב vagal ממוקם על עורק תרדמני.
- אם הפרעות בקצב הלב התקדמות לתוך פרפור חדרים, להשתמש בשוקר חיצוני, להקים מחדש את קצב סינוס. החל 5-10 בעיסויים באמצעות הידיות דפיברילטור מיד לפני החלת ההלם על מנת למלא את התקפי עם דם מחומצן, לזעזע אז 150 J (לבעלי 30 ק ג).
- אני חוזר במידת הצורך ולהגביר האנרגיה 175 J לאחר 3rd ההלם. השתמש בהגדרות אנרגיה גבוהות יותר לבעלי כבד יותר.
- חמש דקות לפני תום זמן איסכמיה חזור על דגימה דם שצוין ב- 2.1.8-2.1.13. להזריק את החומר הבדיקה (גם bicyclic FXIIa המדכא או שליטה 4 מ"ג/ק"ג, לעשות את זה זה בצורה עיוורת) דרך הווריד באמצעות עירוי ורידי סומק השורה עם 20 מ ל תמיסת מלח.
- לסגת דוגמא אחת של ציטראט פלזמה (כאמור 2.1.8 תגובה על ו 2.1.9) 4 דקות לאחר הזרקת החומר ב- 2.2.12.
- לבצע an הצנתר (2.2.3) לאשר נער סגר, ואז השטחת קצה הבלון של הקטטר PCI ולהסיר קטטר זה מן המנחה הקטטר. לאשר זלוף של הנער דיסטלי לאתר סגר על ידי אנגיוגרפיה מיד לאחר דפלציה והסרה של הבלון של הקטטר PCI, 10 דקות לאחר מכן, בכל פעם סימני איסכמיה בשריר הלב היו גלוי מאת א עבור יותר מ 5 דקות, מיד לפני סגר מחדש של הנער.
- לאפשר פגיעה reperfusion של שריר הלב איסכמי כבר שעתיים. לקחת דגימות פלסמה וסרום ב דקה 10, 30, 60 ו- 115 של פגיעה reperfusion (2.1.8 תגובה על ו 2.1.9). צג ההלחמה ב דקה 60 ו- 115 (2.1.10).
- הכנס מחדש את הצנתר PCI יחד עם guidewire בדיוק לאותו מיקום המשמשים עבור איסכמיה. לנפח את הבלון של הקטטר PCI כמו בעבר ואשר LAD סגר על ידי אנגיוגרפיה (2.2.3). הסר את הצנתר לחץ של החדר השמאלי, לעצור את ההקלטה.
- להזריק 100 מ ל 2% buffered כחול אוונס פוספט תמיסת מלח (PBS, pH 7.4) אל תוך ורידית (הקו המרכזי). כ-30 s מאוחר יותר, כאשר כל החיות הופך כחול, להזריק 40 מ ל 20% אשלגן כלורי כדי להרדימו. מוות אושר ע י העדר של אק ג אותות וגלים דופק.
3. דגימה טכניקות
-
חילוץ, לנתח ולדגום את הלב (איור 4)
- לבצע sternotomy לחשוף את הלב. לפי התקנון שתואר קודם לכן על ידי Koudstaal, עמיתים, צעדים 8-2, 8-318. לחתוך את קרום הלב תוך פיקוח על חריגות, אשר ייתכן נובעות קודמות דלקת כרום הלב, והוא לא לכלול את החיה הערכה נוספת.
- השטחת קצה והסרה של PCI, כמו גם את הצנתר המנחה. לסלק את הלב לצורך ניתוח נוסף. לחתוך את הווריד הנבוב ולהסיר דם באמצעות משאבה שאיבה, ולאחר מכן לחתוך את כל כלי גדול חיבור הלב עם הגוף.
- יש לשטוף את הלב מבפנים ומבחוץ בתמיסת בטמפרטורת החדר. שוקלים את כל הלב.
- בתוך 30-40 דקות, חותכים את הלב לפרוסות של-3-5 מ"מ מהקודקוד עד Chordae tendinae של המסתם, בניצב לציר הארוך בעזרת סכין חדה.
- יש להיזהר תמיד מקום הלב באותו הכיוון עם הצד הבטני פונה כלפי מעלה על מנת לשמור על הכיוון של הדגימות לחתוך (איור 5).
- לצלם את הפרוסות של הלב באמצעות מצלמת רפלקס דיגיטלית עדשה בודדת.
- גזור משם החדר הימני (ביטול לפי הצורך לא). לצלם את הפרוסות החדר השמאלי, לשקול את כל הפרוסות על המשקל הכולל של החדר השמאלי.
- להבדיל בין אוונס כחול חיובי לבין כחול אוונס שלילי רקמה בכל המדורים. לנתח את הפרוסות כדי להפריד את איסכמי (אוונס כחול שלילי) הרקמה הלא-איסכמי (כחול אוונס חיובי) באמצעות אזמל.
- לנתח תחילה הסעיפים שלילי כחול אוונס (האזור איסכמי בסיכון, AAR). שוקל את כולם ולשים אותם הכל לתוך מיכל פלסטיק.
- לכסות את פרוסות לגמרי עם פתרון כלוריד tetrazolium של 100-150 מ"ל (לפי גודל הלב) triphenyl (דור 2 TTC, 16 גרם לתוספי, משקל מולקולרי 48000-90000, ב- 200 מ ל PBS, טריה) כך החתיכות הלב יכול לנוע בחופשיות בתוך הפתרון. מכסה המכולה, תקופת דגירה של 20 דקות ב 37 מעלות צלזיוס תוך מנענע בעדינות.
- במהלך זה 20 דקות הדגירה זמן שוקלים הכחול של אוונס חלקים חיוביים (אזור אינם נתונים בסיכון, ANR), לקחת דגימות רקמות-Tek להטבעה (לבחור ביותר בלונדיניות מהפציעה) ולאחסן ב-80 מעלות צלזיוס לצורך ניתוח נוסף. להעביר את השאר לתוך 4% פורמלדהיד פתרון ולאחסן בטמפרטורת החדר במשך היסטולוגיה מקטעים.
- הסר את פיסות AAR הפתרון TTC. הרקמה מוכתם אדום הוא רקמה איסכמי קיימא (VIT) והוא הרקמה שאינו מוכתם רקמת נמק איסכמי (יחידה). לחתוך חתיכות קטנות 2 (בלוקים של 2-3 מ מ) מ הן בין ניט ויט, להטביע אותם לתוך רקמות - Tek ולאחסן ב-80 מעלות צלזיוס לצורך ניתוח נוסף. דגימות אלה צריכים להיות באותו המשקל.
- לתקן את שאר החלקים (כל הפרוסות נגזר על AAR) על-ידי הגדרת אותם במיכל קלקר וכיסוי לחלוטין עם 4% פורמלדהיד פתרון 24 שעות בטמפרטורת החדר בשכונה fume. החלקים צריך להישאר שטוח בתיעוד צילומי בשלב הבא.
- למחרת לצלם שני הצדדים של החלקים עם מצלמה ברזולוציה גבוהה עם אותה הגדרה זום, מרחק של הרקמה (הגדלה אותו). להוסיף סרגלי קנה מידה אוטומטי כל התמונות. כל קווי צריך להיות באותו האורך.
הערה: המצלמה ברזולוציה גבוהה צריך להיות מחוברים לתוכנה מוסיף באופן אוטומטי את סרגל קנה מידה לכל תמונה.
-
חישוב של AAR ואת גודל לאוטם
- % AAR של החדר השמאלי = (המשקל של ארה ב g / משקל של החדר השמאלי ב- g) * 100.
- להשתמש בתוכנה ImageJ כדי לחשב את פני השטח הכולל של AAR והן ניט (משני הצדדים כל פיסת) מבוסס על הצילומים.
- להתאים את סרגל קנה מידה על-ידי בחירת אורך בר בקנה מידה באמצעות קו ישר מן הכלי זווית. בחרו ' מתפריט ' נתח > הגדר בקנה מידה ולהוסיף את מרחק ידוע ויחידת של סרגל קנה מידה. לבחור "גלובל" אז באותו הסולם יוחלו על כל התמונות.
- סמן את כל פני השטח של הרקמה באמצעות הכלי בחירה יד חופשית כדי לחשב AAR. יש להיזהר לא כוללים את הצד (גובה) של הרקמה ו/או רקמת שומן (איור 6-C).
- להגדיר את המדידה על-ידי בחירת "אזור" ו- "הצג תווית" של נתח > תפריט הגדרת המידות. למדוד את פני השטח של נתח > מדד.
- חזור על שלב 3.2.5 מודדים ניט (סימן רק הרקמה שאינו מוכתם). הערה: אל תכלול רקמת שומן (איור 6-D) בחישוב ניט. חזור על השלב בצד השני של הרקמה.
- לחשב את ממוצע AAR ניט עבור כל פיסת רקמה.
- להשתמש בערכים המתקבל 3.2.7 כדי לחשב את ניט כאחוז ניט AAR:% של AAR = (סיגמא הממוצע שטח הפנים של ניט ס מ2/ סיגמא ממוצע של שטח הפנים של ארה ב ס מ2) * 100.
- שני חוקרים שונים צריך לחזור על השיטה לעיל. מהשוליים מקובל של ההבדל הוא < 10%.
-
סמני איסכמיה
- השתמש הדגימות פלזמה EDTA, אשר אוחסנו בעבר ב-80 מעלות צלזיוס (2.1.9) כדי למדוד את רמת טרופונין הלב-שימוש assay Luminex-סוג של יחיד-פלקס כאמור שתיארתי 19.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
חיה אחת נפטר בטרם עת לפני ניהול של פפטיד מעכב או פקד FXIIa עקב תקלה טכנית (צניחה פתאומית בלחץ הדם בזמן איסכמיה, לפני חיבור של חומר המבחן). חיה אחת הוצאה מהכלל מקבוצת מעכבי FXIIa כי אין פגיעה איסכמיה/פגיעה reperfusion נצפתה עקב אנטומיה חריגה של העורק יורד הקדמי השמאלי (LAD). חלק גדול של החדר השמאלי, כולל השיא, היה perfused על ידי העורק וכלילי של חיה זו. החיות כללו שבניתוח סופי היו n = 2 בקבוצה bicyclic FXIIa פפטיד מעכב (מתכוון המשקל של 27.5 ± 2.5 ק ג) ו- n = 3 קבלת פפטיד של שליטה bicyclic לא פעיל (כלומר המשקל של 29 ± 0.8 ק ג).
רנטגן הדמיה וידאו / צילום אנגיוגרפיה כלילית הלב החזיר משמש כדי להמחיש את המיקום של הקטטר לחץ וכדי להחליט היכן לחסום את הנער (איור 3 א). איור 3B מציג את מיקום הצנתר, חוסם את זרימת הדם דיסטלי אל הענף השני באלכסון. השוואה של איור 3A ו- 3B גם מאפשר הערכה אשר חלק לשריר שסופק על-ידי בחור יהיה איסכמי. בסוף התקופה פגיעה reperfusion 2 h הצנתר PCI מופיעה שוב, מנופח במיקום זהה, כפי שהיה במהלך איסכמיה. אוונס כחול אז מוזרק לווריד כדי לקבוע באופן מדויק את AAR (איור 5A). לאחר כריתה של הלב, החדר השמאלי הוא חתוכים למקטעים בעובי 3-5 מ מ מהקודקוד עד המסתם, בניצב לציר הארוך. AAR ו- ANR הם בבירור התחום אוונס כחול מכתים על הפרוסות. דגימה AAR ו- ANR אזורים מוצגים באיור 5B.
AAR, המבוטא באחוזים של בעירוי, מראה אין הבדלים משמעותיים סטטיסטית בין הקבוצה FXIIa התייחסו קבוצת הביקורת (איור 6A). גודל לאוטם (ניט/AAR) מציג גם אין הבדלים בין הקבוצות (באמצעות מאן-פרמטרית-ויטני לבחון, 0.05 > p, איור 6B). נתונים אלו מראים כי מעכבי FXIIa לבד, הריכוז בשימוש והמשך של יישום, יכול לא להגן על הלב מפני שריר הלב אני / R פגיעה. איור 6C ו- 6 D להראות כיצד לסמן גבולות AAR, ניט כדי למדוד במדויק, reproducibly פני שטחים המתאימים.
האסטרטגיה דיגום הדם מאפשרת המהדורה של טרופונין הלב הנזק סמן שריר הלב-אני כדי להיות במעקב לאורך זמן. יש כמעט אין הבדל לאחר שעה אחת של איסכמיה לקו הבסיס בזמן לאחר פגיעה reperfusion שם הוא עלייה מתמדת לאורך זמן, כפי שמוצג באיור 7. עבור טרופונין-אני, הבדלים קבוצתיים גם לא היו משמעותיים בניסויים אלה.
איור 1 . מבט כולל על ציר הזמן ניסיוני. ציר סכמטי עבור הצעדים החשובים במודל פציעה איסכמיה/פגיעה reperfusion שריר הלב. ויזואליזציה כלילית בסיסית, זמן של איסכמיה ההתחלה, ניטור הפרעות בקצב הלב, הזרקת החומר מבחן הם צעדים חשובים לניסוי. השימוש בתזמון מדויק בניסויים כל מבטיח הפארמצבטית. המתות חסד את החיה ואת כריתה של הלב צריך להיעשות תוך 15-20 דקות לאחר סיום השלב פגיעה reperfusion 2h. אשלגן: אשלגן כלורי. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2 . ציר הזמן של דם דיגום וניתוח. נקודות זמן על לקיחת דמים מצוינים יחד עם סוג של קרישה בשימוש. דוגמאות נוספות ניתן לקחת על פי ניסוי analytes שברצונך למדוד. מעשה: מופעל זמן, ההלחמה הקרישה: דם בדיקות גזים, RT: בטמפרטורת החדר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3 . צילום אנגיוגרפיה כלילית. תצוגה fluoroscopic של (א) התקפי שמאלה בנקודת ההתחלה, בחצים צהובים הצבע הראשון, הענפים השני באלכסון, לבן מצביע החץ אל השיא הלב (ב) הנער occluded מציג את האזור אין זרימה של החדר השמאלי (LV), מצביע החץ האדום למחשב האישי אני קטטר (ג) מחדש מעגל של הנער בסוף פגיעה reperfusion עם הבלון של הקטטר PCI מחדש שנוספו לאתר אותו הנער במהלך איסכמיה. CX: וכלילי עורקים, בחור: עזב הקדמי היורד עורקים, MC: צנתור מילאר, הוכנס החדר השמאלי. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 4 . תרשים סכמטי של רקמות דגימה. העיתוי המדויק של ניתוח לב, דגימה של אזורים שונים לצורך ניתוח נוסף. ציר הזמן מתחיל ב- 205 דקות לאחר תחילתה של איסכמיה, 20 דקות לאחר סיום הניסוי בבעלי חיים. חשוב דגירה בסעיפים רקמות TTC תוך 40 דקות לכל היותר לאחר המתות חסד החיה. דגימה של ANR, ויט. ניט מסומן כריבועים לבנים. המקננת את ארה ב 4% פורמלדהיד מאפשרת אבחנה ברורה בין ניט ויט לקביעת מדויק של גודל לאוטם. AAR: אזור בסיכון, ANR: אזור אינם נתונים בסיכון, LV: החדר השמאלי, ניט: רקמת נמק איסכמי, OTC: רקמות-Tek, RV: החדר הימני, TTC: triphenyl tetrazolium כלוריד, ויט: רקמת איסכמי קיימא. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 5 . מקומיים בידול בין אזור בסיכון (AAR) ואזור לא בסיכון ANR. (א) תמונה ייצוגית בלב שלם רק לאחר sternotomy בסוף הניסוי. (ב) נציג תמונה המציגה מ מ 3-5 פרוסות עבות החדר השמאלי לאחר ניתוח. AAR ו- ANR בבירור מוגדרים, המסומנים על ידי חצים צהובים, ומציג החץ הלבן אזור הדגימה ANR. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 6 . איסכמיה וגודל לאוטם. (א) המשקל באחוזים AAR של החדר השמאלי (LV). (ב) אחוז שטח יחידה של ארה. (ג) תמונה ייצוגית של החישוב AAR. (ד) תמונה ייצוגית של חישוב ניט. החץ הלבן מציג אזור הדגימה VIT ומראה החץ השחור באזור הדגימה ניט. הנתונים חושבו באמצעות תוכנת ImageJ. ערכים מוצגות כפי נקודות עבור כל אדם להתנסות עם אינדיקציה ±± כלומר קבוצת הביקורת SD., n = 3 ו- FXIIa קבוצת מעכבי מטופלים, n = 2. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 7 . סמן נזק שריר הלב. הלב טרופונין-אני ריכוז לאורך זמן ב- pg/ml של שליטה והן FXIIa מעכב התייחסו בקבוצה. דם נאסף מן ומוחלף על תוך צינורות פלזמה EDTA בסיסית, סופו של איסכמיה ו מספר נקודות זמן במהלך פגיעה reperfusion, הלב טרופונין-אני נמדדה על ידי מערך המתלים יחיד-פלקס (ביו-פלקס). הנתונים מוצגים כפי נקודות עבור כל אדם להתנסות עם אינדיקציה ±± כלומר קבוצת הביקורת SD., n = 3 וקבוצת FXIIa מטופלים, n = 2. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
שריר הלב אני / R פציעה יש השפעה משמעותית על הגודל הסופי לאוטם אשר מתורגם ישירות להפרוגנוזה של החולה לאחר אוטם אקוטי3. הבנת הפתופיזיולוגיה של שריר הלב אני / R פציעה הוא הצעד הראשון כדי להקטין או למנוע את זה. שריר הלב אני / R פציעה הוא מצב אקוטי המתרחשת ישירות לאחר פגיעה reperfusion של כלי occluded. אני / R פציעה מובילה להפעלה של מערכת החיסון המולדת, נזק תאי מתרחש באתר של פגיעה reperfusion, לרקמות שמסביב20. מחקר שנערך לאחרונה הראה שיפור בתוצאה נוירולוגיות במודל של עכברים של המוח אני / R פציעה בעת טיפול עם מעכבי FXIIa8. עם זאת, במחקר פיילוט הנוכחי מצאנו אין השפעה של המדכא FXIIa bicyclic על שריר הלב אני / R פציעה. החומר המדכא FXIIa בשימוש הרומן, שלה פרמקוקינטיקה חזירים לא ידועים עדיין. לכן, העדר נצפתה השפעה עלולות להיגרם על ידי מינון לא הולם או יישום. זה צריך להיות נדונה מחקרי מעקב.
האחדת במודל חיה היא חיונית כדי לחקור לעומק הפתופיזיולוגיה של שריר הלב אני / R פציעה ולהביא פתרונות מתאימים לתוך מרפאות. חוקרים הפתופיזיולוגיה של שריר הלב אני / R פציעה דורש דגימה טובה והייצוגיות כדי לחקור את המנגנונים התאיים שבבסיס. התיבה סגור חזירי שריר הלב אני / R פציעה המודל מספק שיטה ישימה, אשר הוא קרוב המצב הקליני, ושימושי לעזור הבנת המנגנונים התאיים של מבחן הריפוי חדש. וריאציות של הדגם הנוכחי תוארו לפני עבור מטרות14,17,18שהוזכרו לעיל.
פרוטוקול שלנו של אוטם אקוטי חזירים לא צריך טיפול קדם עם אמיודארון כפי שתואר לעיל18,21. השתמשנו סינוס עורק הצוואר עיסוי כדי להפחית הפרעות בקצב הלב ואת בשוקר עבור cardioconversion במקרה של פרפור חדרים. השימוש של סינוס עורק הצוואר עיסוי קלינית ידוע להשפיע על פרפור פרוזדורים22, אך עד כה לא הוכח כדי למנוע או לעכב את התחלתה של פרפור חדרים ב- MI, אצל בני אדם או במודלים של חזיר. יתר על כן, השימוש sevoflurane מסייע להפחתת להפרעה, כמו גם שיעורי התמותה במודל חזירי של אוטם אקוטי23.
כדי להבטיח הפארמצבטית ולצמצם את הסיכון לפקקת במהלך הניסוי, מנות מרובות של הפארין הוזרקו המבוססת על המידה חוזרות ונשנות של חוק, במקום שימוש קבוע מינונים הפארין כמתואר לדוגמה על-ידי Koudstaal et al18. כמות מבוקרת של הפארין המינהל מסייע לחקור את המפל קרישה בהקשר של אני / R פציעה. אוונס כחול מאפשר קביעה מדויקת של AAR/LV. תוך ורידיות אוונס כחול אחרי סגר מחדש של הנער במיקום המדויק במהלך איסכמיה אינדוקציה בהנחיית fluoroscopic שמוביל צביעת התכלת של החזיר שלם כולל החלק הלא-איסכמי של הלב עם השפעה מינימלית על ANR שריר הלב, להערכת. כחול אוונס הוא חומר ציטוטוקסיות הידוע24. בניסויים הנוכחי זה היה חיוני כדי לשמור על הכדאיות של שכבת אנדותל תאים ב- ANR להערכת הלב כדי להשתמש זה כפרט "אינטרה" לשלוט אז 100 מל אוונס היה מוזרק מערכתית וכחול מדולל עם הפחתת דם שלו רעילות. בעבר, באווירה דומה, 50 מ ל 2% כחול אוונס היה מוזרק ישירות לתוך התקפי המגבירות את הסיכון שלה cytotoxicity אל לב תאים25. השלב החשוב הבא היה לנתח את הלב ישירות לפרוסות 3-5 מ מ מהקודקוד עד את המסתם (המיקום המדויק בכל בעל חיים) ובשיטה זו לבצע חישוב מדויק של AAR כאחוז של החדר השמאלי.
בתיאור השיטה הנוכחית מספק פרטים עדינה אשר קודם לכן לא תוארו. המקננת TTC צבעונית בסעיף 4% פורמלדהיד למשך 24 שעות מספקת הבחנה ברורה בין קיימא (אדום) ורקמות נמק (לבן), אשר לבסוף מגדילה את הפארמצבטית בסיום הדיגום עבור בהמשך המולקולרי מכתים. האסטרטגיה דגימה דם מעל 2 h של פגיעה reperfusion מאפשר הזיהוי של מולקולות לאחרונה ביטוי בשלבים (10 עד 30 דקות) מוקדם מאוד של פגיעה reperfusion, כמו גם מאוחר יותר (60 ל-120 דקות). הדם הנכון, דגימה רקמה ואחסון מכריעים גם לניתוח של פלזמה סמני בהתאם להירארכיית הקשרים כגון הביטוי של חלבוני המשלים, קרישת הדם.
ניתן לשנות את הפרוטוקול הנוכחי יש זמן פגיעה reperfusion ארוך יותר, של כמה שעות עד ימים. דבר זה מאפשר החוקר לחקור את ההשלכות מאוחר יותר אני / R פציעה על הלב וגם מאפשר בדיקה של תרופות חדישות והערכת ההשפעות שלהם. המגבלה של הפרוטוקול הנוכחי היא השימוש צנתר לחץ-טיפ למדידת תפקוד הלב. ניתן לקבל מידע אמין יותר על תפקוד הלב על ידי שימוש מערכת מדידה בנפח לחץ לולאה. לסיכום השיטה הנוכחית מספקת נתונים היסטוריים צעדים חשובים הדרושים כדי להגדיל את הפארמצבטית החזה סגור חזירי שריר הלב אני / מודל פציעה R כאשר המלצותיה משתמש של המודל הוא ללמוד את השינויים תאית ומולקולרית בהקשר של לימוד שריר הלב אני / R פציעה פתופסיולוגיה או לימוד חדשניים אפשרויות טיפוליות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים מצהירים ללא ניגוד אינטרסים.
Acknowledgments
המחברים רוצים להכיר פרופסור כריסטיאן Heinis למתן את המדכא FXIIa ואת הפקד בהתאמה. אנו להכיר בהכרת תודה גם Olgica Beslac, ד ר דניאל מאטלר, קיי Nettelbeck של יחידת ניתוח ניסיוני, המחלקה למחקר ביורפואי, אוניברסיטת ברן לקבלת תמיכה טכנית. סלין Guillod מתיאס ראש מהמחלקה אבחון, Interventional, Pediatric Radiology, בית החולים האוניברסיטאי ברן, Inselspital מסופקים תמיכה עם טכניקות וציוד צילום רנטגן. הפרויקט מומן על ידי שוויצרי הקרן הלאומית למדע, פרויקט מס 320030_156193. אנחנו גם רוצה להודות מר ריטו Haenni של תקשורת ושיווק, בית החולים האוניברסיטאי ברן, Inselspital עבור ההקלטה הניסוי שלנו.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ABL 90 Flex, blood gas analyser | Radiometer | - | Blood gas analysis (BGA) |
| ACT Plus | Medtronic | - | Activated clotting time |
| Atropin | Sintetica | - | Atropinum Sulfas, 0,5mg/ml |
| Balance (20-500 Kg) | NAGATA Scale, Tiwan | HTB/HTR | Alternative products can be used |
| Balance (21-4200 g) | Mettler toledo, Switzerland | MS4002SDR | Alternative products can be used |
| Blood collection tubes: EDTA, citrate and serum | S-Monovette, Nuembrecht, Germany | 05.1167.001, 05.1071.001 and 05.1557.001 respectively |
Alternative products can be used |
| BV Pulsera mobile C-arm | Philips | - | Alternative products can be used |
| Centrifuge | Labcare, UK | ALC PK120R | Alternative products can be used |
| Defibrillator Lifepak 12 | Medtronic | - | Alternative products can be used |
| Dextran from Leuconostoc mesenteroides | Sigma-Aldrich, Germany | D3759 | Average M.wt 48000-90000 |
| Digital single lens reflex camera | Sony, Thailand | DSLR-A500/A550 | Alternative products can be used |
| Dissecting forceps | Alternative products can be used | ||
| EMPIRA RX PCI dilatation catheter | Cordis, Johnson&Johnson, USA | 85R15300S | Diameter 3 mm, length 15 mm, Alternative products can be used |
| EMPIRA RX PCI dilatation catheter | Cordis, Johnson&Johnson, USA | 85R15350S | Diameter 3.5 mm, length 15 mm, Alternative products can be used |
| Evans Blue | Sigma-Aldrich, Germany | E2129 | Toxic |
| Fabius GS premium respirator | Dräger, Lübeck, Germany | - | Anesthesia work station, Alternative products can be used |
| Fentanyl | Inselspital ISPI | - | Fentanyl 2500mcg/50ml |
| Formaldehyde | Pathology Institute, Bern University | SI148701 | Alternative products can be used |
| FXIIa inhibitor | Provided by Prof. Christian Heinis' laboratory in EPFL | Novel bicyclic peptide | |
| Galeo, coronary guidewire | Biotronik, Germany | 125497 | Alternative products can be used |
| Guidance catheter | Boston Scientific, Florida, USA | 34356-06 | 6F (100 cm, EB3.75). Alternative products can be used |
| Heparin Sodium | Drossapharm, Basel, Switzerland | - | Liquemin, 25000 U.I./5 ml |
| High end electrosurgery | BOWA, Germany | ARC 400 | Electrical source for blood suction. Alternative products can be used |
| Hydro-Guardmini breathing filter | Intersurgical, Lithuania | 1745000 | Filters |
| Image J | National Institute of Health, USA | 1.47v | Alternative products can be used |
| Inflation device, Atrion QL2530 | Atrion medical product, Alabama, USA | 96402 | Alternative products can be used |
| IntelliVue MP 70 | Philips, Boeblingen, Germany | - | Monitor (ECG, heart rate, blood presure and body temperature). Alternative products can be used |
| KCl | Sintetica SA | - | Potassium chloride 15% |
| Ketamine | Vetoquinol | - | Narketan, 1ml/100mg |
| LR-ACT | Medtronic | 402-01 | ACT special syringes |
| Midazolam | Roche | - | Dormicum, 5mg/ml |
| Monopolar scalpel | Alternative products can be used | ||
| Needle holder | Alternative products can be used | ||
| High resolution camera, PathStand Macro Imaging Stand for Grossing | Spotimaging, USA | 1080 p HD resolution. Alternative products can be used | |
| PBS | In-house preparation | - | Alternative products can be used |
| Peripheral venous cannula, 18 G | Alternative products can be used | ||
| PowerLab 4/35 data acquisition system | Adinstruments, Spechbach, Germany | - | |
| Rotamax120T | Heidolph, Germany | 544-41200-00 | Shaker. Alternative can be used |
| Rüschelit-Super Safety Clear Tube | Teleflex, Dublin, Irland | 112480 | Air way tubing, Alternative products can be used |
| Safe Pico Aspirator Syringes | Radiometer | 956-622 | BGA special syringes |
| Saline | Sintetica Bioren | - | NaCl 0,9%. Alternative products can be used |
| Sevorane 1.5% | AbbVie AG | - | Sevorane 250ml 100% |
| Sheath | Cordis, Johnson&Johnson, USA | 504-607 A | AVANTI + / 7 F, Alternative products can be used |
| Space infusion pump | B.Braun Medical AG, Germany | - | For infusion of fentanyl. Alternative products can be used |
| SPR-350 (Millar catheter) | Adinstruments, Texas, USA | 840-8166 | MIKRO-TIP, 5F, 120 cm |
| Sternotomy saw | Alternative products can be used | ||
| Sutures | ETHICON, Johnson&Johnson, USA | Y3110H | Monocryl 3-0 SH-1 Plus. Alternative products can be used |
| Syringes (20, 10 and 5 mL) | CODAN,Baar, Switzerland | 62.7602, 62.6616, 62.5607 respectively |
Used to inject anesthetic materials intramuscularly or directly into the central venous line. Also to inject heparin or FXIIa or the respective control. Alternative products can be used |
| Thorax spreader | Alternative products can be used | ||
| Tissue-tek | SAKURA, Netherlands | 4583 | O.C.T. compound |
| Vascular forceps | Alternative products can be used | ||
| Xenetix 300 contrast media | Guerbet, Zürich, Switzerland | - | Lobitridol, 300 mg iodide/ml |
| Xylazine | Vetoquinol | - | Xylapan, 20mg/1 mL |
| 2,3,5-Triphenyltetrazolium choride | Sigma-Aldrich, Austria | T8877 | |
| 500 μL tubes (eppendorf) | Trefflab, Switzerland | 96.08185.9.03 | Alternative products can be used |
References
- Mozaffarian, D., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update. Circulation. 133, e338-e360 (2016).
- Miller, T. D., et al. Infarct size after acute myocardial infarction measured by quantitative tomographic 99mTc sestamibi imaging predicts subsequent mortality. Circulation. 92, 334-341 (1995).
- Ovize, M., et al. Postconditioning and protection from reperfusion injury: where do we stand? Position Paper from the Working Group of Cellular Biology of the Heart of the European Society of Cardiology. Cardiovasc Res. 87, 406-423 (2010).
- Neri, M., Riezzo, I., Pascale, N., Pomara, C., Turillazzi, E. Ischemia/Reperfusion Injury following Acute Myocardial Infarction: A Critical Issue for Clinicians and Forensic Pathologists. Mediators Inflamm. 2017, 1-14 (2017).
- Yang, Q., He, G. -W., Underwood, M. J., Yu, C. -M. Cellular and molecular mechanisms of endothelial ischemia/reperfusion injury: perspectives and implications for postischemic myocardial protection. Am J Transl Res. 8, 765-777 (2016).
- Massberg, S., et al. Platelet-Endothelial Cell Interactions During Ischemia/Reperfusion: The Role of P-Selectin. Blood. 92, 507-515 (1998).
- Wang, J., et al. Antithrombin is protective against myocardial ischemia and reperfusion injury. J Thromb and Haemost. 11, 1020-1028 (2013).
- Hopp, S., et al. Targeting coagulation factor XII as a novel therapeutic option in brain trauma. Ann Neurol. 79, 970-982 (2016).
- Crick, S. J., Sheppard, M. N., Ho, S. Y., Gebstein, L., Anderson, R. H. Anatomy of the pig heart: comparisons with normal human cardiac structure. J Anat. 193 (Pt 1), 105-119 (1998).
- Heusch, G., Skyschally, A., Schulz, R. The in-situ pig heart with regional ischemia/reperfusion - ready for translation. J Mol Cell Cardiol. 50, 951-963 (2011).
- Poirier, P. Exercise, heart rate variability, and longevity: the cocoon mystery? Circulation. , 2085-2087 (2014).
- Milani-Nejad, N., Janssen, P. M. L. Small and large animal models in cardiac contraction research: advantages and disadvantages. Pharmacol Ther. 141, 235-249 (2014).
- Bloor, C. M., White, F. C. Functional development of the coronary collateral circulation during coronary artery occlusion in the conscious dog. Am J Pathol. 67, 483-500 (1972).
- Banz, Y. Locally targeted cytoprotection with dextran sulfate attenuates experimental porcine myocardial ischaemia/reperfusion injury. Eur Heart J. 26, 2334-2343 (2005).
- Krombach, G. A., Kinzel, S., Mahnken, A. H., Günther, R. W., Buecker, A. Minimally Invasive Close-Chest Method for Creating Reperfused or Occlusive Myocardial Infarction in Swine. Invest Radiol. 40, 14 (2005).
- Suzuki, Y., Lyons, J. K., Yeung, A. C., Ikeno, F. In vivo porcine model of reperfused myocardial infarction: in situ double staining to measure precise infarct area/area at risk. Catheter Cardiovasc Interv. 71, 100-107 (2008).
- McCall, F. C., et al. Myocardial infarction and intramyocardial injection models in swine. Nat Protoc. 7, 1479-1496 (2012).
- Koudstaal, S., et al. Myocardial infarction and functional outcome assessment in pigs. J Vis Exp. , e51269 (2014).
- Kamat, P., et al. Dexrazoxane Shows No Protective Effect in the Acute Phase of Reperfusion during Myocardial Infarction in Pigs. PLoS One. 11, e0168541 (2016).
- Carden, D. L., Granger, D. N. Pathophysiology of ischaemia-reperfusion injury. J Pathol. 190, 255-266 (2000).
- Pérez de Prado, A., et al. Closed-chest experimental porcine model of acute myocardial infarction-reperfusion. J Pharmacol Toxicol Methods. 60, 301-306 (2009).
- Lown, B., Levine, S. A. The carotid sinus. Clinical value of its stimulation. Circulation. 23, 766-789 (1961).
- Regueiro-Purriños, M., et al. Ventricular Arrhythmias and Mortality Associated with Isoflurane and Sevoflurane in a Porcine Model of Myocardial Infarction. J Am Assoc Lab Anim Sci. , (2011).
- Roberts, L. N. Evans blue toxicity. Can Med Assoc J. 71, 489-491 (1954).
- Ellenbroek, G. H. J. M., et al. Primary Outcome Assessment in a Pig Model of Acute Myocardial Infarction. J Vis Exp. , e54021 (2016).
